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1、(10)申请公布号 CN 102302529 A (43)申请公布日 2012.01.04 CN 102302529 A *CN102302529A* (21)申请号 201110258467.2 (22)申请日 2011.09.02 A61K 36/258(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 39/00(2006.01) (71)申请人 吉林省白山市皇封参业有限公司 地址 130000 吉林省通化市靖宇县花园镇巴 里村 (72)发明人 郑毅男 李永娟 孙晓波 刘伟杰 (74)专利代理机构 吉林长春新纪元专利代理有 限责任公。
2、司 22100 代理人 陈宏伟 (54) 发明名称 越橘发酵法制备的紫红参及其在医药中的用 途 (57) 摘要 本发明提供了一种越橘发酵法制备的紫红参 及其在医药中的用途， 采用越橘发酵液发酵制备 的紫红参， 不仅含有人参稀有皂苷组分还含有花 色苷类物， 可用于制备治疗胃癌、 肺癌、 肝癌药物 和治疗因抗生素类药物造成的心肌损伤及其提高 机体耐缺氧能力。 本发明发酵工艺操作方便简单， 发酵过程中加入了保加利亚菌， 大大缩短了发酵 液制备的时间， 提高发酵效率， 稀有皂苷 Rg5 含量 较高， 适用于大批量的工业生产。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专。
3、利申请 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 2 页 CN 102302530 A1/1 页 2 1. 一种越橘发酵法制备紫红参的制备工艺， 包括以下步骤 ： 1） 越橘发酵液 将越橘清洗、 捣碎、 灭菌处理后， 按体积比将越橘 ： 白砂糖 : 保加利亚菌 =（1 10） :1 ： （0.20.5） 混合 , 其中， 保加利亚菌液浓度为 6108个 /ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度 为 20 30， 发酵时间为 5-6 天， 发酵原液制备好后加 110 倍体积的水， 调配成越橘发酵 液 ； 2） 发酵熟化 将清洗干净的人参放入步骤1） 的发酵液中， 投放比例为发酵液/人参= (110。
4、)L / kg， 发酵罐中 30 70的条件下发酵时间为 24108h ； 3） 蒸熟熟化 发酵熟化后， 通入热风温度 105， 每次 15min， 搅拌， 保持湿度 3060%， 熟化时间为 24108h ； 4） 低温熟化 保持温度在 2050， 进行低温熟化 24108h ； 即得干燥的发酵紫红参。 2. 根据权利要求 1 所述制备工艺制备的紫红参。 3. 权利要求 2 所述的紫红参在制备治疗胃癌、 肺癌、 肝癌药物中的应用。 4. 权利要求 2 所述的紫红参在制备治疗因抗生素类药物造成的心肌损伤药物中的应 用。 5. 权利要求 1 所述的紫红参在制备因缺氧而引起疾病的药物中的应用。 权。
5、 利 要 求 书 CN 102302529 A CN 102302530 A1/9 页 3 越橘发酵法制备的紫红参及其在医药中的用途 技术领域 0001 本发明涉及一种紫红参制作工艺的改进， 具体的说是提供了一种越橘发酵法制备 的紫红参， 同时还公开了紫红参在抗肿瘤、 心肌保护和因缺氧而引起的疾病等方面的医用 用途， 属于中医药学技术领域。 背景技术 0002 紫红参也称黑参是人参更深层次加工产品， 其稀有皂苷成分人参皂苷 Rh2， 人参皂 苷Rg3含量较红参更高， 且紫红参中含有丰富人参皂苷Rk1， 人参皂苷Rg5， 这些成分在红参 和白参中几乎不存在， 药理学研究发现， 人参皂苷 Rg5 。
6、比人参皂苷 Rg3 抗肿瘤活性更强。目 前出现在韩国专利上的黑参加工方法主要是九蒸九曝法。 由于九蒸九曝法在反复高温蒸炙 下可能生成致癌物质苯并芘类化合物， 且时间较长， 工艺繁琐。 Yoon-Jung Hwan等人使用日 本杏发酵液进行制备黑参， 此法很少产生致癌物质苯并芘类化合物， 但是发酵制备时间较 长 （1-6 个月） ， 且该专利中没有说明稀有人参皂苷 Rg5 的含量增加。 0003 越橘果是杜鹃花科 （Ericaceae） 越橘属 （Vaccinium.spp） 植物越橘的成熟果实， 东北地区产量可占全国的90%， 年产量在十万吨至百万吨左右。 越橘果实中含有丰富的花色 苷类物质，。
7、 这类物质具有显著的抗癌、 抗氧化、 抗衰老等多种功效。 0004 目前对采用发酵法制备紫红参的加工工艺及其医疗活性研究较少， 因此本发明公 开了一种采用越橘发酵液制备紫红参的加工工艺及其提取物在抗肿瘤、 心肌保护和耐缺氧 上的应用。 发明内容 0005 本发明公开了一种越橘发酵法制备的紫红参， 不仅含有大量人参稀有皂苷组分还 含有少量的花色苷类物质。 0006 本发明还公开了上述紫红参的制备工艺， 发酵制备时间大大缩短， 并含有较高的 人参稀有皂苷 Rg5。 0007 本发明进一步公开了紫红参的医用用途。 0008 本发明公开的越橘发酵法制备的紫红参， 是通过以下方法制备的 ： 1） 越橘发。
8、酵液 将越橘清洗、 捣碎、 灭菌处理后， 按体积比将越橘 ： 白砂糖 : 保加利亚菌 =（1 10） :1 ： （0.20.5） 混合， 其中， 保加利亚菌菌液浓度为 6108个 /ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度 为 20 30， 发酵时间为 5-6 天， 发酵原液制备好后加 110 倍体积的水， 调配成越橘发酵 液 ； 2） 发酵熟化 将清洗干净的人参放入步骤1） 的发酵液中， 投放比例为发酵液/人参= (110)L / kg， 发酵罐中 30 70的条件下发酵时间为 24108h ； 3） 蒸熟熟化 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A2/9 页 4。
9、 发酵熟化后， 通入热风温度 105， 每次 15min， 搅拌， 保持湿度 3060%， 熟化时间为 24108h ； 4） 低温熟化 保持温度在 2050， 进行低温熟化 24108h ； 即得干燥的发酵紫红参。 0009 本发明所述的紫红参在制备治疗胃癌、 肺癌、 肝癌药物中的应用。 0010 本发明所述的紫红参在制备治疗因阿霉素类药物造成的心肌损伤药物中的应用。 0011 本发明所述的紫红参在制备治疗因缺氧而引起的疾病药物中的应用。 0012 本发明与现有紫红参制备工艺相比其积极效果在于 ： 采用越橘发酵液发酵制备的紫红参， 不仅含有人参稀有皂苷组分还含有花色苷类物， 可用于制备治疗胃。
10、癌、 肺癌、 肝癌药物和治疗因抗生素类药物造成的心肌损伤及其提高机 体耐缺氧能力。 本发明发酵工艺操作方便简单， 发酵过程中加入了保加利亚菌， 大大缩短了 发酵液制备的时间， 提高发酵效率， 稀有皂苷 Rg5 含量较高， 适用于大批量的工业生产。 0013 为了进一步说明本发明工艺所制备的紫红参中含有大量稀有人参皂苷及花色苷， 以下采用高效液相法对紫红参进行质量评定 ： 实验例 1 本发明工艺制备紫红参中人参皂苷的分析 1.1 实验材料和方法 1.1.1 实验材料 紫红参 ： 本发明工艺制作 ； 色谱甲醇和色谱乙腈 ： 美国 Tedia ； 其他常规化学试剂 （分析 纯） ： 北京化工厂。 0。
11、014 1.1.2 实验方法 1.1.2.1 HPLC-MS 分析条件 仪器设备 ： Agilent 1100 series, LC/MS， G1946D ； 干燥气流速度 ： 12L/min ； 雾化气压 力 ： 50psi ； 锥孔电压 ： 1V ； 毛细管电压 ： 3KV ； 流速 ： 1.0ml/min， 分流 ： 08+0.2（分） 千分之五 ； 色谱柱 ： 色谱柱 ： 大连江申 C18 column (150 mm 6.0 mm, 5m) ； 柱温 ： 30 ； 流动相 ： 乙腈和甲酸铵水溶液梯度洗脱， 洗脱条件 见为 0-15min 20%-40% 乙腈 ； 15-55min 4。
12、0%-80% 乙腈 ； 55-65min 80%-100% 乙腈。 0015 1.1.2.2 测试样品的制备 将本发明紫红参粉碎， 过 200-300 目筛， 精确称取 1.000g 放入索氏提取器中加入 50ml 分析甲醇， 80水浴加热提取10h。 完成以后将甲醇真空浓缩， 用色谱甲醇定容于25ml的容 量瓶中 , 取样 0.22m 过滤待 HPLC-MS 测定。 0016 1.2 HPLC-MS 分析结果 紫红参提取物中 35.531min 化合物， M-H- 为 766， 推测 M 为 767， 结合文献考证推测 此化合物为人参皂苷 Rg5（质谱图见附图 4） 。 0017 紫红参提取。
13、物中 34.651min 化合物， M-H- 为 766， 推测 M 为 767， 结合文献考证 推测此化合物为人参皂苷 Rk1。 0018 紫红参提取物中 26.945min 化合物， M-H- 为 784， 推测 M 为 785， 结合文献考证 推测此化合物为人参皂苷 Rg3。 0019 紫红参提取物中 25.384min 化合物， M-H- 为 619， 推测 M 为 620， 结合文献考证 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A3/9 页 5 推测此化合物为人参皂苷 Rh4。 0020 紫红参提取物中 24.388min 化合物， M-H- 为 619，。
14、 推测 M 为 620， 结合文献考证 推测此化合物为人参皂苷 Rk3。 0021 紫红参提取物中 23.657min 化合物， M-H- 为 765， 推测 M 为 766， 结合文献考证 推测此化合物为人参皂苷 Rg4 或 F4。 0022 从紫红参的提取液中我们可以看出， 人参皂苷 Rg1、 Re、 Rf、 Rb1、 Rb2、 Rb3、 Rc、 Rd 等 几乎不能检测出来， 大量稀有皂苷如 Rk1、 Rg4、 Rg5、 Rh4、 Rk3 等出现， 其中以人参皂苷 Rg5 含量最高。 0023 从紫红参 HPLC（见附图 1） 、 HPLC-MS Neg（见附图 2） 和 HPLC-DAD。
15、 谱图中 （见附图 3） 我们可以看到常规皂苷基本消失， 大量稀有皂苷如人参皂苷 Rg3、 Rg5、 Rh4、 Rk1、 F4、 Rk3 等出现， 其中含量最高的是人参皂苷 Rg5， 其次是人参皂苷 Rg3、 Rk3、 Rh4， 因此将人参加工 成紫红参可以获得高活性人参加工产品。从发酵紫红参 HPLC-MS TIC 图谱我们可以看出人 参皂苷 20 位糖基优先脱除， 3 位或 6 位所连接的糖基很难脱除， 这就导致 Rg3 等生成， 而很 少有 Rh2、 Rh1 的生成， 其次是 20 位叔羟基的脱水反应， 从而得到 Rk1、 Rk3、 Rh4、 Rg5 的生成， 最后是 3 位末端糖的乙酰。
16、化， 如 Rs4、 Rs5、 Rs6 的生成。 0024 本实验例采用乙醇、 氯仿、 乙酸乙酯三种试剂结合索氏提取， 所得结果经分析与甲 醇相似。 0025 实验例 2 本发明工艺制备紫红参中稀有皂苷含量的检测 2.1 实验材料和方法 2.1.1 实验材料 本发明工艺制备紫红参 ； 高丽红参 ： 皇封参业有限公司提供 ； 色谱乙腈 ： 美国 Tedia ； 纯水 ： 杭州哇哈哈有限公司 ； 色谱甲醇 ： 美国 Tedia。 0026 Rg1、 Re、 Rg2、 Rb1、 Rb2、 Rd、 S-Rg3、 R-Rg3、 S-Rh2、 R-Rh2、 Rg5、 S-PPt、 S-PPd、 C-K、 R。
17、h1 标准品 ： 均有是实验室自制 （HPLC 检测含量 98%） 。 0027 2.1.2 实验方法 2.1.2.1 标准品溶液的配制 将 Rg1、 Re、 Rg2、 Rb1、 Rb2、 Rd、 S-Rg3、 R-Rg3、 S-Rh2、 R-Rh2、 Rg5、 S-PPt、 S-PPd、 C-K、 Rh1 标准品分别配制成 1.000mg/ml 的标准品溶液。 0028 2.1.2.2 待测试样品的制备 将本发明制备的紫红参及高丽红参分别粉碎， 过 200-300 目筛， 精确称取 1.000g 放入 索氏提取器中加入50ml分析甲醇， 80水浴加热提取10h。 完成以后将甲醇真空浓缩， 用。
18、色 谱甲醇定容于 25ml， 取样 0.23m 过滤， 待 HPLC-UV 测定。 0029 2.1.2.3 HPLC 分析条件的建立 色谱柱 ： 大连江申 C18 column (150 mm 6.0 mm, 5m) ； 岛津 2010 系列高效液 相 色 谱 仪 （SPD-20A UV/VIS Detector ,LC-20AT Prominence Liquid chromatograph, 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A4/9 页 6 DGU-20A5 Proninence Degasser, CTU-10ASVP column oven， LC。
19、-solution 工作站） 。柱 温 ： 30 ； 流速 ： 1.0ml/min ； 检测波长 ： 203nm ； 流动相 ： 乙腈和水梯度洗脱， 梯度洗脱条件 为 0-25min 乙腈 19-20% ； 25-35min 乙腈 20-31% ； 35-60min 乙腈 31-40% ； 60-90min 乙腈 40-80% ； 90-120min 乙腈 80-100% ； 2.1.2.4 标准曲线的绘制 分别将上述标准品溶液稀释至 1.000mg、 0.500mg/m、 l0.250mg/ml、 0.1mg/m、 0.050mg/ ml、 0.010mg/ml。分别按照 4.1.2.3 分。
20、析条件进针 20l。以浓度为横坐标 X， 以峰面积为 纵坐标 Y。线性回归得标准曲线。 0030 2.1.2.5 黑参 HPLC-UV 比较分析 将 4.1.2.2 配制好的样品溶液分别按照 4.1.2.3 分析条件进针 20l， 计算各峰面积， 用标准曲线计算出样品中各物质含量。 0031 2.2 实验结果 分析结果见表 2-1 ； 本发明所制备的紫红参中人参皂苷稀有皂苷的含量明显增加， 尤 其是人参皂苷 Rg5 的含量增加的最为明显， 而相关专利中却没有人参皂苷 Rg5 含量增加的 报道。 0032 表 2-1 本发明紫红参及高丽红参 HPLC-UV 比较分析结果 （%） 人参皂苷 本发明。
21、所制备紫红参高丽红参 Rg1N.D.0.41 ReN.D.0.14 Rg2N.D.0.0093 Rb1N.D.0.50 RcN.D.0.40 Rb2N.D.0.21 RdN.D.0.043 S-Rg30.440.061 R-Rg30.310.020 S-Rh20.00490.046 R-Rh20.0180.076 Rg51.930.0036 S-PPt0.0039N.D. S-PPd0.0051N.D. C-KN.D.N.D. Rh1N.D.0.14 注 ： N.D. ： 未检测到。 0033 实验例 3 本发明工艺制备紫红参中花色苷的检测 3.1 实验材料及仪器 紫红参 （本发明工艺所制） 。
22、； 按韩国学者 Yoon-Jung Hwan 等人发表专利中所制备出的黑 参 ； 花色素标品由日本东京都文京区本郎株式会社提供， 包括 ： 杨梅素和槲皮素 ； Agilent 1100高效液相色谱仪;Agilent 1100 series四元泵;VWD检测器;在线脱气机， 柱温箱， 化 学工作站 (chemstation system) 均为美国 Agilent 公司 ； SHZ 一 B88 型循环水式多用真空 泵 郑州长城仪器厂 ;UV-120 型紫外可见光光度计 ； 日本岛津 ； MA260s 电子天平 上海 第二天平仪器厂 ； 色谱甲醇 美国 Tedia ； 纯水 杭州娃哈哈纯净水 ； 。
23、其他常规化学试剂 （分 析纯） ： 北京化工厂。 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A5/9 页 7 0034 3.2 检测方法 3.2.1 对照品溶液的制备 取花色素标准品， 真空干燥 48h 以上， 分别精密称量如下质量 : 杨梅素 0.03g， 槲皮素 0.03g ； 分别用 0.1%HCI 的甲醇溶液溶解并定容在 5mL 容量瓶中作为对照液。 0035 3.2.2 供试品溶液的制备 精密称取本发明所制备出的紫红参及按韩国学者 Yoon-Jung Hwan 等人发表专利中所 制备出的黑参各 8g， 破碎后用 0.1%HCI 的甲醇溶液 10mL 浸泡过夜。
24、， 60水浴 2h， 抽滤 ; 未 滤过物再次以 0.1%HCI 的甲醇溶液 8mL 浸泡于 60水浴 2h， 抽滤， 合并滤过液， 用 0.1%HCI 的甲醇溶液定容在25mL的容量瓶中作为供试原液。 进样前取供试原液5mL， 水稀释， 定容至 25.00mL, 摇匀， 过 0.22m 微孔膜， 作为供试品溶液。 0036 3.2.3 色谱条件 分析柱 ： Zorbax SB C18(150mm4.6mm 5m) ； 柱温 ： 25 ； 检测波长 ： 525nm （由紫外可见分光光度计扫描获得） ； 流速 :0.5mL/min; 流动相为 ： 甲醇 - 甲醇水溶液二 元梯度洗脱， A:10%。
25、 甲酸溶液 B ： 甲醇 ； 梯度洗脱条件 :0-20min 10%-60% B;20-25min 60%-100%;25-30min 100% B。供试品溶液与对照品溶液均为 20L。 0037 3.3 结果 根据高效液相图谱对照品杨梅素与槲皮素的峰面积， 计算出本发明所制备出的紫 红参中所含杨梅素与槲皮素的含量分别为 :0.005% 与 0.01% ； 而韩国学者 Yoon-Jung Hwan 等人发表专利中所制备出的黑参中则检测不出杨梅素与斛皮素。 0038 本发明公开了以紫红参为主要成分的药物在抗癌及心肌保护作用方面的医疗应 用。为了进一步说明紫红参抗癌及对心肌保护作用的药理活性， 下。
26、面通过体外实验进行说 明 ： 实验例 4 本发明工艺制备紫红参在抗肿瘤及心肌保护的作用 4.1 实验材料及仪器 紫红参提取物 （本发明工艺所制备的紫红参 ； 本发明所用紫红参提取物是甲醇结合 索氏提取方法提取所得） ； 阿霉素 ； DMEM 培养基， 美国 sigma 公司 ； DMSO、 胰蛋白酶、 美国 Amresco 公司 ； 胎牛血清， 杭州四季青生物工程材料有限公司 ； 其他试剂均为分析纯， 北京 化工厂。DMIL HC 倒置相差显微镜， 德国 Leica 公司 ； UV-2000 型紫外可见分光光度计， 尤 尼柯 （上海） 仪器有限公司。96 孔细胞培养板、 无菌超净操作台、 细胞。
27、培养瓶、 HEPG2、 BGC、 A549、 H9C2 4.2 试验方法 ： 4.2.1 药品配制 药品称好后按等剂量折算， 用无血清培基按一定浓度配制， 0.22m 微 孔滤膜过滤， 储存于四度中备用。药物浓度为 ： 紫红参提取物 300g/mL、 150g/mL、 75g/ mL、 37.5g/mL、 18.8g/mL、 9.4g/mL ； 阿霉素药物浓度为 3M。 0039 4.2.2 肿瘤细胞用含 15胎牛血清的培养基进行培养， 长满之后点于 96 孔板， 每 孔 100L， 细胞密度为 3*104。细胞孵箱中 37、 5%CO2 培养 36h， 吸去上清培基， 加药每孔 100L， 。
28、然后继续孵箱中培养 48h 后进行 MTT 检测。H9C2 细胞点板密度为 1*105， 培养 48h 后， 药物预孵育 12h， 弃去药物加阿霉素作用 36h 测 MTT。 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A6/9 页 8 0040 4.2.3 MTT 检测细胞存活率 药物作用后， 弃上清液， 每孔加 100l 的无血清 DMEM 培养液和 20L 5mg/ml 的 MTT， 37、 5%CO2 培养箱培养 4h， 弃上清液， 加入 DMSO 150l， 振荡 10min， 在 570nm 酶标仪下检测各孔的吸收度值 （A） 。按下式求得心肌细胞的 存活率。
29、 ： 存活率 =( 各组细胞 A/ 正常组细胞 A)100% 4.2.4 数据统计 4.3 试验结果 ： 表 4-1 本发明制备紫红参对三种肿瘤细胞的抑制作用 注 ： # P0.01 给药组和正常组比较 表 4-2 本发明制备紫红参对正常 H9C2 心肌细胞的影响及对阿霉素损伤模型的保护作 用 注 ： # P0.01 给药组和正常组比较 * P0.01 各组和 ADR 组比较 4.4 结论 ： 研究结果表明， 紫红参对肝癌 （HEPG-2)、 肺癌 （A549)、 胃癌 （BGC) 三种肿瘤 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A7/9 页 9 细胞的抑制作用明。
30、显， 对 H9C2 细胞亦有抑制作用， 但弱于对肿瘤细胞。 紫红参在低浓度下 对阿霉素诱导的 H9C2 细胞凋亡具有明显保护作用， 但在高浓度下具有一定的毒性。 0041 本发明的紫红参在提高机体耐缺氧能力， 为因缺氧而因起的各种疾病的治疗做了 基础。 0042 为进一步说明本发明紫红参在耐缺氧方面的应用， 下面通过正常小鼠体内实验进 一步说明 ： 实验例 5 本发明紫红参对正常小鼠耐缺氧能力的影响 5.1 实验材料及试剂 紫红参 （本发明工艺制备） ； 红参 ： 购于吉林大药房 ； 动物 ： 昆明种小鼠， 体重 1822g， 雌 雄均用， 分别购自长春生物制品研究所生产管理中心， 许可证号 。
31、： SCXK（吉） 2006-0001 和吉 林大学基础医学院实验动物中心， 许可证号 ： SCXK（吉） 2007-0003 ； 5.2 实验方法 取健康小鼠 50 只， 随机分为 5 组 ： 空白对照组 ； 红参 1121 mg 生药 /kg、 560.5mg 生药 / kg 两个剂量给药组、 紫红参 1121 mg 生药 /kg、 560.5mg 生药 /kg 两个剂量给药组 ； 每天灌 服给药 1 次， 连续给药 3 天， 对照组同时给予同体积的蒸馏水。末次给药后 1 小时， 将小鼠 置于装有 5g 钠石灰的 300ml 三角烧瓶中， 塞紧胶塞， 记录其在缺氧条件下的存活时间。结 果见。
32、表 4-1。 0043 表 5-1 红参、 本发明制备紫红参对正常小鼠耐缺氧能力的影响 （S） 组 别动物数 （只）存活时间 （min） 空白对照组1025.2541.756 红参 1121mg/kg1025.2223.068 560.5mg/kg1025.0334.366 紫红参 1121mg/kg10 28.7554.583* 560.5mg/kg10 27.0331.815* 注 ： 与空白对照组比 *P0.05 5.3 结果 从表 4-1 中可知， 紫红参的两个剂量组对正常小鼠耐抗氧能力的影响上具有显著的差 异性。 0044 本发明以紫红参为基本药物， 及含有一种或多种药学上可接受的载。
33、体。这些物质 的存在会维持或者增强本发明工艺制备紫红参药物的作用。 另外， 应该特别指出的是， 可以 根据需要在发明的药物组合中加入一种或多种天然或合成的其它与本活性物质具有协同 或辅助作用的成分， 这些可能被加入的天然或合成的辅助成分是本领域技术人员已知的和 可以想象到的。可将所说的组合物配制成经口给药的剂型， 如片剂、 丸剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 散剂等。 为了制备适于口服给药的片剂、 丸剂、 颗粒剂、 胶囊剂等， 可以使用蔗糖、 半乳糖、 玉 米淀粉、 明胶、 微晶纤维、 滑石粉等作为载体或赋形剂。 在这些经口给药的剂型中， 还可以含 有合适的其它添加剂， 诸如崩解剂、 润滑剂、 填充剂。
34、、 黏合剂、 矫味剂、 防腐剂、 分散剂、 表面 活性剂、 着色剂等。 0045 本发明药物组合物最优选的给药途径是各种口服给药的剂型， 例如片剂、 颗粒剂、 胶囊剂或丸剂， 这些经口给药剂型的每日剂量一般含有 10 1000mg 本活性物质， 优选 50-300mg。 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A8/9 页 10 附图说明 0046 图 1 ： 本发明紫红参的 HPLC 图 ； 图 2 ： 本发明紫红参的 HPLC-MS 总离子流图 （负谱） ； 图 3 ： 本发明紫红参的 HPLC-DAD 液相图 ； 图 4 ： 本发明紫红参在 HPLC-MS 总。
35、离子流图种 35.531min 出现的化合物 Rg5 质谱图。 具体实施方式 0047 通过以下实施例进一步举例描述本发明， 并不以任何方式限制本发明， 在不背离 本发明的技术解决方案的前提下， 对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改 动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。 0048 实施例 1 紫红参的制作工艺 将新鲜人参 100g 清洗后， 然后制备越橘发酵液， 进行自然发酵， 最后添加水稀释。条 件 ： 越橘 : 白砂糖 ： 保加利亚菌 =1 ： 1 ： 0.2 （体积比） ， 保加利亚菌菌液浓度为 6108个 /ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度为2030， 发酵时间为。
36、5天， 制备好发酵液后加1倍水 ； 再 进行发酵熟化,条件 ： 1L发酵液/kg水参， 30， 12h ； 再次进行蒸熟熟化,条件 ： 30， 24h ； 最后进行低温熟化 , 条件 ： 20， 24h， 最后获得发酵紫红参 99g。 0049 实施例 2 紫红参的制作工艺 将新鲜人参 100g 清洗后， 然后制备越橘发酵液， 进行自然发酵， 最后添加水稀释。条件 是 ： 越橘 : 白砂糖 ： 保加利亚菌 =3:1 ： 0.3 （体积比） ， 保加利亚菌菌液浓度为 6108个 /ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度为2030， 发酵时间为5天， 制备好发酵液后加3倍水 ； 再 进行发酵熟化,条。
37、件 ： 3L发酵液/kg水参， 40， 15h ； 再次进行蒸熟熟化,条件 ： 40， 48h ； 最后进行低温熟化 , 条件 ： 40， 48h， 最后获得发酵紫红参 97g。 0050 实验例 3 紫红参的制作工艺 将新鲜人参 100g 清洗后， 然后制备越橘发酵液， 进行自然发酵， 最后添加水稀释。条 件 ： 越橘 : 白砂糖 ： 保加利亚菌 =7:1 ： 0.4 （体积比） ， 保加利亚菌菌液浓度为 6108个 /ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度为 20 30， 发酵时间为 6 天， 制备好发酵液后加 7 倍水 ； 再进行发酵熟化 , 条件 ： 7L 发酵液 /kg 水参， 50，。
38、 30h ； 再次进行蒸熟熟化 , 条件 ： 50， 78hr ； 最后进行低温熟化 , 条件 ： 45， 70h， 最后获得发酵紫红参 94g。 0051 实施例 4 紫红参的制作工艺 将新鲜人参 100g 清洗后， 然后制备越橘发酵液， 进行自然发酵， 最后添加水稀释。条 件 ： 越橘 : 白砂糖 ： 保加利亚菌 =10:1 ： 0.5（体积比） ， 保加利亚菌菌液浓度为 6108个 / ml， 发酵罐中搅拌密封发酵， 温度为 20 30， 发酵时间为 6 天， 制备好发酵液后加 10 倍 水 ； 再进行发酵熟化 , 条件 ： 10L 发酵液 /kg 水参， 70， 48h ； 再次进行蒸。
39、熟熟化 , 条件 ： 70， 108h ； 最后进行低温熟化 , 条件 ： 50， 108h， 最后获得发酵紫红参 93g。 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A9/9 页 11 0052 实施例 5 取上述紫红参 1g, 加入赋形剂药用环糊精 4g, 混合均匀， 造粒， 制得片剂， 每片含活性 成分 20mg。 0053 实施例 6 取上述紫红参 1g, 加入赋形剂药用环糊精 4g, 混合均匀， 造粒， 装入胶囊， 每粒含活性 成分 20mg。 说 明 书 CN 102302529 A CN 102302530 A1/2 页 12 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102302529 A CN 102302530 A2/2 页 13 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 102302529 A 。