一种真菌菌株LP16及其在含锌废水处理中的用途.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201310655461.8

申请日:

2013.12.05

公开号:

CN103642702A

公开日:

2014.03.19

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情:

授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/14申请日:20131205|||公开

IPC分类号:

C12N1/14; C02F3/34; C22B19/30; C12R1/77(2006.01)N; C02F101/20(2006.01)N

主分类号:

C12N1/14

申请人:

中节能六合天融环保科技有限公司

发明人:

丛海扬; 孙璐; 钱伟; 黄惠; 姚一夫; 王军芳; 曹金玲; 杜昊林

地址:

100085 北京市海淀区上地三街9号嘉华大厦E座六层

优先权:

专利代理机构:

北京品源专利代理有限公司 11332

代理人:

巩克栋

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内容摘要

本发明公开了一种能够去除或回收水中锌离子的真菌菌株LP-16(Fusarium oxysporum)、其分离培养基、包含该菌株的菌剂及其制备方法、包含该菌株的锌离子处理剂以及含锌废水的处理方法。本发明真菌菌株LP-16具有生长快、菌丝表面积大、吸附量大、吸附能力强的优点,可以有效去除或回收含锌废水中的锌离子;本发明所述处理含锌废水的方法无需添加大量的化学药剂,从而避免了后续的大量沉淀泥渣等废物的产生,具有低投入、高产出的优点。

权利要求书

权利要求书
1.  一种真菌菌株LP-16(Fusarium oxysporum),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏日期为2013年8月16日,保藏编号为CGMCC No.8037。

2.  一种用于分离如权利要求1所述真菌菌株LP-16的分离培养基,其特征在于,所述分离培养基包含0.1~0.4g/L乙酸钠,0.05~0.2g/L酵母提取物,5~25g/L琼脂,40~60mg/L Zn2+,0.01~0.12g/L MgSO4·7H2O,0.001~0.010g/L K2HPO4和0.05~0.2g/L氯霉素,且pH=7.0;
优选地,所述分离培养基包含0.2~0.3g/L乙酸钠,0.1~0.2g/L酵母提取物,10~20g/L琼脂,45~55mg/L Zn2+,0.03~0.1g/L MgSO4·7H2O,0.003~0.008g/L K2HPO4和0.08~0.15g/L氯霉素,且pH=7.0;
更优选地,所述分离培养基包含0.2461g/L乙酸钠,0.15g/L酵母提取物,15g/L琼脂,50mg/L Zn2+,0.05g/L MgSO4·7H2O,0.005g/L K2HPO4和0.1g/L氯霉素,且pH=7.0。

3.  根据权利要求2所述的分离培养基,其特征在于,在每升所述分离培养基中还加入2ml微量元素溶液,所述微量元素溶液包括1~5g/L CaCl2·2H2O,1~5g/L2.5g H3BO3,0.5~1.2g/L ZnCl2·4H2O,0.5~1.5g/L FeCl3·6H2O,0.3~0.6g/L ZnSO4·7H2O,0.1~0.4g/L Na2MoO4·2H2O和0.003~0.008g/LCuSO4·5H2O;
优选地,所述微量元素溶液包括2~4g/L CaCl2·2H2O、1~3g/L H3BO3、0.7~1g/LZnCl2·4H2O、0.8~1.2g/L FeCl3·6H2O、0.4~0.5g/L ZnSO4·7H2O、0.2~0.3g/LNa2MoO4·2H2O和0.005~0.006g/L CuSO4·5H2O;
更优选地,所述微量元素溶液包括3.7g CaCl2·2H2O、2.5g H3BO3、 0.87gZnCl2·4H2O、1.0g FeCl3·6H2O、0.44g ZnSO4·7H2O、0.29g Na2MoO4·2H2O和0.005g CuSO4·5H2O。

4.  一种真菌菌剂,其特征在于,包含权利要求1所述的真菌菌株LP-16。

5.  如权利要求4所述的真菌菌剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)培养皿培养:将如权利要求1所述的真菌菌株LP-16在无菌条件下接种于固体培养基上,20-30℃、优选22-28℃、进一步优选25℃下培养4-6天、优选4.4-5.5天、进一步优选5天;所述固体培养基包括如下组分:马铃薯浸粉4-6g/L、优选4.5-5.5g/L、进一步优选5g/L,葡萄糖或蔗糖15-25g/L、优选17-23g/L、进一步优选20g/L,琼脂13-18g/L、优选14-17g/L、进一步优选16g/L,氯霉素0.1g/L;
(2)一级种子培养:将步骤(1)培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基,20-30℃,优选22-28℃,进一步优选25℃下培养5-7天,优选地5.5-6.5天,更优选地6天,制得一级种子;所述液体培养基包括如下组分:马铃薯浸粉4-6g/L、优选4.5-5.5g/L、进一步优选5g/L,葡萄糖或者蔗糖15-25g/L、优选17-23g/L、进一步优选20g/L,氯霉素0.1g/L;
(3)二级种子培养:按液体培养基的体积比为5-15%、优选8-12%、更优选10%的接种量,将步骤(2)所得一级种子接种到发酵罐中,曝气,培养5-7天、优选5.5-6.5天、进一步优选6天,制得二级种子;
(4)混合发酵培养:按液体培养基的体积比为10-20%、优选12-18%、更优选15%的接种量,将二级种子接种到发酵罐中,进行高密度发酵培养,获得菌剂。

6.  一种锌离子处理剂,其特征在于,所述锌离子处理剂包括如权利要求1所述的真菌菌株LP-16;优选地,所述处理为去除或回收。

7.  一种处理含锌废水的方法,其特征在于,所述方法包括:将如权利要求1所述的真菌菌株LP-16、如权利要求4所述的真菌菌剂或如权利要求6所述的锌离子处理剂与所述含锌废水接触。

8.  如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)将含锌废水的pH值调节至5.0-8.0,优选5.5-7,进一步优选6.0;
(2)向水体中加入如权利要求1所述的真菌、如权利要求4所述的真菌菌剂或如权利要求6所述的锌离子处理剂,于10-35℃,优选15-30℃,进一步优选25℃,震荡4-8小时,优选5-7小时,进一步优选6小时,震荡速度90-180rpm,优选100-160rpm,进一步优选120rpm;
(3)静置8-16小时,优选10-14小时,进一步优选12小时。

9.  如权利要求7或8所述的方法,其中所述处理为去除或回收所述含锌废水中的锌离子。

说明书

说明书一种真菌菌株LP-16及其在含锌废水处理中的用途
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,尤其涉及一种能够去除水中锌离子的真菌菌株LP-16及其在含锌废水处理中的用途。 
背景技术
含有重金属的废水对人类和环境有着极大的危害,随着国家环境保护意识不断提高,一系列的相关法律和标准逐步建立和完善。尤其国家“十二五”后,对于重金属的治理更加重视。冶金、电镀、化工、电子、机械加工等行业中都会产生大量的含有重金属的废水,传统的方法已经不能满足行业发展的需要,如何高效、低耗的处理含有重金属的废水成为一个关键而且有意义的课题。 
国内含锌废水主要来源于锌冶炼和电镀企业。由于相关企业建厂较早,机器设备和处理工艺陈旧,对于含有重金属的废水处理也往往处于落后水平,废水的回收率低,回收的水质差。废水外排后对环境污染严重,相关的重金属污染物也无法回收和利用,资源得到严重浪费。 
近年来,生物方法尤其是微生物的方法在治理重金属污染领域逐步被人们所认识和接受。微生物方法具有成本低廉、操作运行简便、处理效率高、无二次污染、易于回收重金属等优势。目前,微生物处理技术已经成为世界各国重金属污染治理研究和应用领域的一大热点。本领域中存在对于处理含锌污水效果良好并且能够进行大规模工业应用的菌种的需要。 
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种真菌菌株LP-16(Fusarium oxysporum)。 
本发明的第二个目的在于提供了上述真菌菌株的分离培养基。 
本发明的第三个目的在于提供一种包含上述真菌菌株的菌剂。 
本发明的第四个目的在于提供上述菌剂的制备方法。 
本发明的第五个目的在于提供一种锌离子处理剂。 
本发明的第六个目的在于提供一种处理含锌废水的方法。 
为达此目的,本发明采用以下技术方案: 
第一方面,本发明提供了一种真菌菌株LP-16(Fusarium oxysporum),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,100101,保藏日期为2013年8月16日,保藏编号为CGMCC No.8037。 
第二方面,本发明提供了一种如第一方面所述真菌菌株LP-16的分离培养基,用于分离所述真菌菌株LP-16;所述分离培养基包含0.1~0.4g/L乙酸钠,0.05~0.2g/L酵母提取物,5~25g/L琼脂,40~60mg/L Zn2+,0.01~0.12g/L MgSO4·7H2O,0.001~0.010g/L K2HPO4和0.05~0.2g/L氯霉素,且pH=7.0; 
优选地,所述分离培养基包含0.2~0.3g/L乙酸钠,0.1~0.2g/L酵母提取物,10~20g/L琼脂,45~55mg/L Zn2+,0.03~0.1g/L MgSO4·7H2O,0.003~0.008g/L K2HPO4和0.08~0.15g/L氯霉素,且pH=7.0; 
进一步优选地,所述分离培养基包含0.2461g/L乙酸钠,0.15g/L酵母提取物,15g/L琼脂,50mg/L Zn2+,0.05g/L MgSO4·7H2O,0.005g/L K2HPO4和0.1g/L 氯霉素,且pH=7.0。 
优选地,在每升所述分离培养基中还加入2ml微量元素溶液,所述微量元素溶液包含1~5g/L CaCl2·2H2O,1~5g/L2.5g H3BO3,0.5~1.2g/L  ZnCl2·4H2O,0.5~1.5g/L FeCl3·6H2O,0.3~0.6g/L ZnSO4·7H2O,0.1~0.4g/L Na2MoO4·2H2O和0.003~0.008g/LCuSO4·5H2O。 
进一步优选地,所述微量元素溶液包含2~4g/L CaCl2·2H2O、1~3g/L H3BO3、0.7~1g/LZnCl2·4H2O、0.8~1.2g/L FeCl3·6H2O、0.4~0.5g/L ZnSO4·7H2O、0.2~0.3g/LNa2MoO4·2H2O和0.005~0.006g/L CuSO4·5H2O。 
更进一步优选地,所述微量元素溶液包含3.7g CaCl2·2H2O、2.5g H3BO3、0.87gZnCl2·4H2O、1.0g FeCl3·6H2O、0.44g ZnSO4·7H2O、0.29g Na2MoO4·2H2O和0.005g CuSO4·5H2O。 
第三方面,本发明提供了一种真菌菌剂,该真菌菌剂包含第一方面所述的真菌菌株LP-16。 
第四方面,本发明提供了如第三方面所述的真菌菌剂的制备方法,所述方法包括: 
(1)培养皿培养:将如权利要求1所述的真菌菌株LP-16在无菌条件下接种于固体培养基上,20-30℃、优选22-28℃、进一步优选25℃下培养4-6天、优选4.4-5.5天、进一步优选5天;所述固体培养基包括如下组分:马铃薯浸粉4-6g/L、优选4.5-5.5g/L、进一步优选5g/L,葡萄糖或蔗糖15-25g/L、优选17-23g/L、进一步优选20g/L,琼脂13-18g/L、优选14-17g/L、进一步优选16g/L,氯霉素0.1g/L; 
(2)一级种子培养:将步骤(1)培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基,20-30℃,优选22-28℃,进一步优选25℃下培养5-7天,优选地5.5-6.5天,更优选地6天,制得一级种子;所述液体培养基包括如下组分:马铃薯浸粉4-6g/L、优选4.5-5.5g/L、进一步优选5g/L,葡萄糖或者蔗糖15-25g/L、优选 17-23g/L、进一步优选20g/L,氯霉素0.1g/L; 
(3)二级种子培养:按液体培养基的体积比为5-15%、优选8-12%、更优选10%的接种量,将步骤(2)所得一级种子接种到发酵罐中,曝气,培养5-7天、优选5.5-6.5天、进一步优选6天,制得二级种子; 
(4)混合发酵培养:按液体培养基的体积比为10-20%、优选12-18%、更优选15%的接种量,将二级种子接种到发酵罐中,进行高密度发酵培养,获得菌剂。 
培养皿培养中,培养温度可以为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃;培养时间可以为4天、4.5天、110小时、5天、130小时、5.5天或6天;所用的固体培养基中马铃薯浸粉可以为4g/L、4.2g/L、4.5g/L、4.7g/L、4.9g/L、5g/L、5.lg/L、5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L或6g/L,葡萄糖或者蔗糖可以为15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L或25g/L,琼脂可以为13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L或18g/L。 
一级种子培养中,培养温度可以为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃;培养时间可以为5天、5.5天、140小时、6天、150小时、6.5天或7天;所用的液体培养基中马铃薯浸粉可以为4g/L、4.2g/L、4.5g/L、4.7g/L、4.9g/L、5g/L、5.lg/L、5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L或6g/L,葡萄糖或者蔗糖可以为15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L或25g/L。 
二级种子培养中,接种量按液体培养基的体积比可以为5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%;培养时间可以为5.5天、140 小时、6天、150小时或6.5天。 
混合发酵培养中,接种量按液体培养基的体积比可以为10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%。 
第五方面,本发明提供了一种锌离子处理剂,所述锌离子处理剂包括如第一方面所述的真菌菌株LP-16;优选地,所述处理为去除或回收。 
第六方面,本发明提供了一种处理含锌废水的方法,所述方法包括:将如第一方面所述的真菌菌株LP-16、如第三方面所述的真菌菌剂或如第五方面所述的锌离子处理剂与所述含锌废水接触。 
优选地,本发明的处理含锌废水的方法包括: 
(1)将含锌废水的pH值调节至5.0-8.0,优选5.5-7,进一步优选6.0; 
(2)向水体中加入如第一方面所述的真菌菌株LP-16、如第三方面所述的真菌菌剂或如第五方面所述的锌离子处理剂,于10-35℃,优选15-30℃,进一步优选25℃,震荡4-8小时,优选5-7小时,进一步优选6小时,震荡速度90-180rpm,优选100-160rpm,进一步优选120rpm; 
(3)静置8-16小时,优选10-14小时,进一步优选12小时。 
在本发明的处理含锌废水的方法中,含锌废水的pH值可以为5.0、5.5、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.5、7.0、7.5或8.0;处理温度可以为10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃;震荡时间可以为4小时、4.5小时、5小时、5.5小时、6小时、6.5小时、7小时、7.5小时或8小时;震荡速度可以为90rpm、100rpm、110rpm、120rpm、130rpm、140rpm、150rpm、160rpm、170rpm或180rpm;静 置时间可以为8小时、8.5小时、9小时、9.5小时、10小时、10.5小时、11小时、11.5小时、12小时、12.5小时、13小时、13.5小时、14小时、14.5小时、15小时、15.5小时或16小时。 
在本发明的处理含锌废水的方法中,所述处理为去除或回收所述含锌废水中的锌离子。 
本发明的有益效果: 
(1)本发明的真菌菌株LP-16具有生长快,菌丝表面积大,吸附量大,吸附能力强的优点,可以有效去除或回收含锌废水中的锌离子。 
(2)本发明的处理含锌废水的方法具有“低投入,高产出”的优点。 
(3)本发明的处理含锌废水的方法中,无需添加大量的化学药剂,从而避免了后续的大量沉淀泥渣等废物的产生。 
保藏信息 
分类命名:尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum); 
保藏日期:2013年8月16日; 
保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称:CGMCC),地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,100101; 
保藏编号:CGMCC No.8037。 
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。 
实施例1真菌菌株LP-16的分离 
本发明的真菌菌株LP-16的分离包含以下步骤: 
(1)将10克受重金属污染的新鲜土样装入含有90毫升无菌水的三角瓶中; 
(2)用玻璃珠打散,搅匀,制成土壤悬液; 
(3)利用涂布法将土壤悬液涂布在分离培养基平板上,所述分离培养基的组成为:无水醋酸钠0.2406g/L,酵母抽提物0.15g/L,琼脂15g/L,氯霉素0.1g/L,Zn2+50mg/L,0.05g/L的MgSO4·7H2O和0.005g/L的K2HPO4,其余为去离子水,且pH=7.0,120℃高温高压灭菌30分钟; 
(4)将所涂布的分离培养基在30℃的条件下培养2~4天,获得单个菌株; 
(5)将所述单个菌株接入新鲜的所述分离培养基中继续进行分离培养,获得纯化的菌株; 
(6)对步骤(5)中得到的纯化菌株重复步骤(5)的操作3~5次,以确保所得到的菌株为完全纯化的单个菌株,获得本发明的真菌菌株并且于4℃保存。 
实施例2菌剂的制备 
本发明中的菌剂的制备包含以下步骤: 
1)Petri Dishes培养:将已经纯化的原始菌种(Fusarium oxysporum)在无菌条件下分别接种于固体培养基上,室温(25℃)条件下培养5天;固体培养基具有以下组成:马铃薯浸粉5g/L,葡萄糖20g/L,琼脂15g/L,氯霉素0.1g/L; 
2)一级种子培养:将步骤1)培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体培养基,室温(25℃)条件下培养6天,制得一级种子悬液;液体培养基具有以下组成:马铃薯浸粉5g/L,葡萄糖20g/L,氯霉素0.1g/L; 
3)二级种子培养:按液体培养基的体积比为10%的接种量,将一级种子 分别接种到2.5L的发酵罐中,发酵罐内培养液的总体积为1.5L,适当曝气,培养6天,制得二级种子; 
4)混合发酵培养:按液体培养基的体积比为15%的接种量,将二级种子接种到10L的发酵罐中,发酵罐内的培养基总体积为7L,进行高密度发酵培养,获得菌剂。 
实施例3废水中锌离子浓度对真菌LP-16吸附锌离子能力的影响 
配制pH值为6.0的液态扩大培养基6等份,每份培养基体积为150mL,装入250mL三角瓶中。这6瓶溶液中分别含有Zn2+浓度为12、24、36、48、60、120mg/L。在这6瓶液体培养基中接种本发明真菌LP-16菌体,反应温度为25℃,振荡培养6小时,转速为120RPM,将含菌体的溶液进行离心,测量离心后液体中Zn2+浓度,观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度,不同锌离子浓度的废水中真菌LP-16菌株吸附Zn2+的效果如表1所示。 
表1、废水中锌离子浓度对菌株吸附锌离子能力的影响 
锌离子浓度(mg/L) 吸附后浓度(mg/L) 吸附效率 12 3.33 72.25% 24 9.1 62.08% 36 14.7 59% 48 27.9 41.88% 60 29.9 50.17% 120 68.3 43.08%
表1结果表明,随着锌离子浓度的增加,该菌体对锌离子的吸附逐渐降低,锌离子浓度的继续增加反而会影响该菌种的生长,继而影响对锌离子的吸 附效率。 
实施例4菌体投加量对真菌LP-16吸附废水中锌离子能力的影响 
配制pH值为6.0的液态扩大培养基,体积为150mL,装入250mL三角瓶中。溶液中含有Zn2+浓度为60mg/L。在培养液中分别添加0.5、1、2、5、10g的真菌LP-16菌体,反应温度为25℃,振荡培养6小时,转速120RPM,将培养好的菌悬液离心,测量离心后液体中Zn2+浓度,观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度,不同菌体投加量下真菌LP-16吸附废水中锌离子的效果见表2。 
表2、菌体投加量对菌株吸附锌离子能力的影响 

由表2结果可知,在投加量为5g菌体时最为经济,性价比最高。 
实施例5反应pH值对真菌LP-16从废水中回收锌离子能力的影响 
配制pH值分别为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0的液态扩大培养基,体积为150mL,装入250mL三角瓶中。溶液中含有Zn2+浓度为60mg/L。在培养液中接种2g的真菌LP-16菌体,反应温度为25℃,振荡培养6小时,转120RPM,速将培养好的菌悬液离心,测量离心后液体中Zn2+浓度,观察菌体生长状态以及菌体 进行吸附的程度,不同反应pH值下真菌LP-16吸附锌离子的效果见表3。 
表3、pH值对菌株吸附锌离子能力的影响 

表3结果可见,菌株在pH为5.0时,吸附效率最高,PH为6.0和7.0时次之,说明:真菌LP-16在pH为5.0-7.0之间的吸附效率最好。 
实施例6反应温度对真菌LP-16吸附废水中锌离子能力的影响 
配制pH值为6.0的液态扩大培养基,体积为150mL,装入250mL三角瓶中。溶液中含有Zn2+浓度为60mg/L,在培养液中接种2g真菌LP-16菌体,反应温度分别为15、20、25、30℃,振荡培养6小时,转速120RPM,将培养好的菌悬液离心,测量离心后液体中Zn2+浓度,观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度,不同反应温度下真菌LP-16吸附锌离子的效果见表4。 
表4、反应温度对菌株吸附锌离子能力的影响 


表4结果表明,在反应温度在15-30℃之间时,真菌LP-16菌体对于废水中锌离子的吸附均有不错的效果,尤其是在20-30℃之间,表现出吸附效率逐渐提升,表明该温度区间内,具体吸附效果越来越好。 
实施例7振荡时间对真菌LP-16吸附废水中锌离子能力的影响 
配制pH值为6.0的液态扩大培养基,体积为150mL,装入250mL三角瓶中。溶液中含有Zn2+浓度为60mg/L。在培养液中接种2g的真菌LP-16菌体,反应温度为25℃,分别振荡培养10min、30min、2h、4h、6h,转120RPM,速将培养好的菌悬液离心,测量离心后液体中Zn2+浓度,观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度,不同振荡时间的条件下真菌LP-16吸附锌离子的效果见表5。 
表5、不同振荡时间对菌株吸附锌离子能力的影响 

表5结果表明,在振荡时间为10min-6h的范围内,菌体的吸附效果较好;特别是,在震荡时间为2h时吸附效率最高,表明此时的菌体吸附效果最好。 
申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的,但本发明并不局限于上述,即不意味着本发明必须依赖上述才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。 

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1、(10)申请公布号 CN 103642702 A (43)申请公布日 2014.03.19 CN 103642702 A (21)申请号 201310655461.8 (22)申请日 2013.12.05 CGMCC No. 8037 2013.08.16 C12N 1/14(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C22B 19/30(2006.01) C12R 1/77(2006.01) C02F 101/20(2006.01) (71)申请人 中节能六合天融环保科技有限公司 地址 100085 北京市海淀区上地三街 9 号嘉 华大厦 E 座六层 (72)发明人 丛海扬 孙。

2、璐 钱伟 黄惠 姚一夫 王军芳 曹金玲 杜昊林 (74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人 巩克栋 (54) 发明名称 一种真菌菌株 LP-16 及其在含锌废水处理中 的用途 (57) 摘要 本发明公开了一种能够去除或回收水中锌离 子的真菌菌株 LP-16(Fusarium oxysporum)、 其 分离培养基、 包含该菌株的菌剂及其制备方法、 包 含该菌株的锌离子处理剂以及含锌废水的处理方 法。 本发明真菌菌株LP-16具有生长快、 菌丝表面 积大、 吸附量大、 吸附能力强的优点, 可以有效去 除或回收含锌废水中的锌离子 ; 本发明所述处理 含锌废水的方法无需添加大。

3、量的化学药剂, 从而 避免了后续的大量沉淀泥渣等废物的产生, 具有 低投入、 高产出的优点。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书7页 (10)申请公布号 CN 103642702 A CN 103642702 A 1/2 页 2 1. 一种真菌菌株 LP-16(Fusarium oxysporum), 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心 (CGMCC), 保藏日期为 2013 年 8 月 16 日, 保藏编号为 CGMCC No.8037。 2. 一。

4、种用于分离如权利要求 1 所述真菌菌株 LP-16 的分离培养基, 其特征在于, 所述 分离培养基包含 0.1 0.4g/L 乙酸钠, 0.05 0.2g/L 酵母提取物, 5 25g/L 琼脂, 40 60mg/L Zn2+, 0.01 0.12g/L MgSO4 7H2O, 0.001 0.010g/L K2HPO4和 0.05 0.2g/L 氯 霉素, 且 pH=7.0 ; 优选地, 所述分离培养基包含 0.2 0.3g/L 乙酸钠, 0.1 0.2g/L 酵母提取物, 10 20g/L 琼脂, 45 55mg/L Zn2+, 0.03 0.1g/L MgSO47H2O, 0.003 0。

5、.008g/L K2HPO4和 0.08 0.15g/L 氯霉素, 且 pH=7.0 ; 更优选地, 所述分离培养基包含 0.2461g/L 乙酸钠, 0.15g/L 酵母提取物, 15g/L 琼脂, 50mg/L Zn2+, 0.05g/L MgSO47H2O, 0.005g/L K2HPO4和 0.1g/L 氯霉素, 且 pH=7.0。 3. 根据权利要求 2 所述的分离培养基, 其特征在于, 在每升所述分离培养基中还加入 2ml 微量元素溶液, 所述微量元素溶液包括 1 5g/L CaCl22H2O, 1 5g/L2.5g H3BO3, 0.5 1.2g/L ZnCl24H2O, 0.5。

6、 1.5g/L FeCl36H2O, 0.3 0.6g/L ZnSO47H2O, 0.1 0.4g/L Na2MoO42H2O 和 0.003 0.008g/LCuSO45H2O ; 优选地, 所述微量元素溶液包括 2 4g/L CaCl22H2O、 1 3g/L H3BO3、 0.7 1g/ LZnCl24H2O、 0.8 1.2g/L FeCl36H2O、 0.4 0.5g/L ZnSO47H2O、 0.2 0.3g/ LNa2MoO42H2O 和 0.005 0.006g/L CuSO45H2O ; 更优选地, 所述微量元素溶液包括 3.7g CaCl22H2O、 2.5g H3BO3、。

7、 0.87gZnCl24H2O、 1.0g FeCl36H2O、 0.44g ZnSO47H2O、 0.29g Na2MoO42H2O 和 0.005g CuSO45H2O。 4. 一种真菌菌剂, 其特征在于, 包含权利要求 1 所述的真菌菌株 LP-16。 5. 如权利要求 4 所述的真菌菌剂的制备方法, 其特征在于, 所述方法包括 : (1) 培养皿培养 : 将如权利要求 1 所述的真菌菌株 LP-16 在无菌条件下接种于固体培 养基上, 20-30、 优选 22-28、 进一步优选 25下培养 4-6 天、 优选 4.4-5.5 天、 进一步 优选 5 天 ; 所述固体培养基包括如下组分。

8、 : 马铃薯浸粉 4-6g/L、 优选 4.5-5.5g/L、 进一步优 选 5g/L, 葡萄糖或蔗糖 15-25g/L、 优选 17-23g/L、 进一步优选 20g/L, 琼脂 13-18g/L、 优选 14-17g/L、 进一步优选 16g/L, 氯霉素 0.1g/L ; (2) 一级种子培养 : 将步骤 (1) 培养的菌种在无菌条件下接种于液体培养基, 20-30, 优选 22-28, 进一步优选 25下培养 5-7 天, 优选地 5.5-6.5 天, 更优选地 6 天, 制得一级 种子 ; 所述液体培养基包括如下组分 : 马铃薯浸粉 4-6g/L、 优选 4.5-5.5g/L、 进一。

9、步优选 5g/L, 葡萄糖或者蔗糖 15-25g/L、 优选 17-23g/L、 进一步优选 20g/L, 氯霉素 0.1g/L ; (3) 二级种子培养 : 按液体培养基的体积比为5-15%、 优选8-12%、 更优选10%的接种量, 将步骤 (2) 所得一级种子接种到发酵罐中, 曝气, 培养 5-7 天、 优选 5.5-6.5 天、 进一步优选 6 天, 制得二级种子 ; (4) 混合发酵培养 : 按液体培养基的体积比为 10-20%、 优选 12-18%、 更优选 15% 的接种 量, 将二级种子接种到发酵罐中, 进行高密度发酵培养, 获得菌剂。 6. 一种锌离子处理剂, 其特征在于, 。

10、所述锌离子处理剂包括如权利要求 1 所述的真菌 菌株 LP-16 ; 优选地, 所述处理为去除或回收。 7. 一种处理含锌废水的方法, 其特征在于, 所述方法包括 : 将如权利要求 1 所述的真菌 权 利 要 求 书 CN 103642702 A 2 2/2 页 3 菌株LP-16、 如权利要求4所述的真菌菌剂或如权利要求6所述的锌离子处理剂与所述含锌 废水接触。 8. 如权利要求 7 所述的方法, 其特征在于, 所述方法包括 : (1) 将含锌废水的 pH 值调节至 5.0-8.0, 优选 5.5-7, 进一步优选 6.0 ; (2) 向水体中加入如权利要求1所述的真菌、 如权利要求4所述的。

11、真菌菌剂或如权利要 求6所述的锌离子处理剂, 于10-35, 优选15-30, 进一步优选25, 震荡4-8小时, 优选 5-7 小时, 进一步优选 6 小时, 震荡速度 90-180rpm, 优选 100-160rpm, 进一步优选 120rpm ; (3) 静置 8-16 小时, 优选 10-14 小时, 进一步优选 12 小时。 9. 如权利要求 7 或 8 所述的方法, 其中所述处理为去除或回收所述含锌废水中的锌离 子。 权 利 要 求 书 CN 103642702 A 3 1/7 页 4 一种真菌菌株 LP-16 及其在含锌废水处理中的用途 技术领域 0001 本发明涉及微生物技术领。

12、域, 尤其涉及一种能够去除水中锌离子的真菌菌株 LP-16 及其在含锌废水处理中的用途。 背景技术 0002 含有重金属的废水对人类和环境有着极大的危害, 随着国家环境保护意识不断提 高, 一系列的相关法律和标准逐步建立和完善。尤其国家 “十二五” 后, 对于重金属的治理 更加重视。冶金、 电镀、 化工、 电子、 机械加工等行业中都会产生大量的含有重金属的废水, 传统的方法已经不能满足行业发展的需要, 如何高效、 低耗的处理含有重金属的废水成为 一个关键而且有意义的课题。 0003 国内含锌废水主要来源于锌冶炼和电镀企业。由于相关企业建厂较早, 机器设备 和处理工艺陈旧, 对于含有重金属的废水。

13、处理也往往处于落后水平, 废水的回收率低, 回收 的水质差。 废水外排后对环境污染严重, 相关的重金属污染物也无法回收和利用, 资源得到 严重浪费。 0004 近年来, 生物方法尤其是微生物的方法在治理重金属污染领域逐步被人们所认识 和接受。 微生物方法具有成本低廉、 操作运行简便、 处理效率高、 无二次污染、 易于回收重金 属等优势。目前, 微生物处理技术已经成为世界各国重金属污染治理研究和应用领域的一 大热点。 本领域中存在对于处理含锌污水效果良好并且能够进行大规模工业应用的菌种的 需要。 发明内容 0005 本发明的第一个目的在于提供一种真菌菌株 LP-16(Fusarium oxysp。

14、orum)。 0006 本发明的第二个目的在于提供了上述真菌菌株的分离培养基。 0007 本发明的第三个目的在于提供一种包含上述真菌菌株的菌剂。 0008 本发明的第四个目的在于提供上述菌剂的制备方法。 0009 本发明的第五个目的在于提供一种锌离子处理剂。 0010 本发明的第六个目的在于提供一种处理含锌废水的方法。 0011 为达此目的, 本发明采用以下技术方案 : 0012 第一方面, 本发明提供了一种真菌菌株 LP-16(Fusarium oxysporum), 保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC), 地址 : 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号, 1。

15、00101, 保藏日期为 2013 年 8 月 16 日, 保藏编号为 CGMCC No.8037。 0013 第二方面, 本发明提供了一种如第一方面所述真菌菌株 LP-16 的分离培养基, 用 于分离所述真菌菌株 LP-16 ; 所述分离培养基包含 0.1 0.4g/L 乙酸钠, 0.05 0.2g/L 酵母提取物, 5 25g/L 琼脂, 40 60mg/L Zn2+, 0.01 0.12g/L MgSO47H2O, 0.001 0.010g/L K2HPO4和 0.05 0.2g/L 氯霉素, 且 pH=7.0 ; 0014 优选地, 所述分离培养基包含 0.2 0.3g/L 乙酸钠, 。

16、0.1 0.2g/L 酵母提取物, 说 明 书 CN 103642702 A 4 2/7 页 5 1020g/L琼脂, 4555mg/L Zn2+, 0.030.1g/L MgSO4 7H2O, 0.0030.008g/L K2HPO4 和 0.08 0.15g/L 氯霉素, 且 pH=7.0 ; 0015 进一步优选地, 所述分离培养基包含 0.2461g/L 乙酸钠, 0.15g/L 酵母提取物, 15g/L 琼脂, 50mg/L Zn2+, 0.05g/L MgSO47H2O, 0.005g/L K2HPO4和 0.1g/L 氯霉素, 且 pH=7.0。 0016 优选地, 在每升所述分。

17、离培养基中还加入 2ml 微量元素溶液, 所述微量元素溶液 包含15g/L CaCl2 2H2O, 15g/L2.5g H3BO3, 0.51.2g/L ZnCl2 4H2O, 0.51.5g/L FeCl36H2O, 0.3 0.6g/L ZnSO47H2O, 0.1 0.4g/L Na2MoO42H2O 和 0.003 0.008g/ LCuSO45H2O。 0017 进一步优选地, 所述微量元素溶液包含 2 4g/L CaCl22H2O、 1 3g/L H3BO3、 0.7 1g/LZnCl24H2O、 0.8 1.2g/L FeCl36H2O、 0.4 0.5g/L ZnSO47H2O。

18、、 0.2 0.3g/LNa2MoO42H2O 和 0.005 0.006g/L CuSO45H2O。 0018 更 进 一 步 优 选 地, 所 述 微 量 元 素 溶 液 包 含 3.7g CaCl22H2O、 2.5g H3BO3、 0.87gZnCl24H2O、 1.0g FeCl36H2O、 0.44g ZnSO47H2O、 0.29g Na2MoO42H2O 和 0.005g CuSO45H2O。 0019 第三方面, 本发明提供了一种真菌菌剂, 该真菌菌剂包含第一方面所述的真菌菌 株 LP-16。 0020 第四方面, 本发明提供了如第三方面所述的真菌菌剂的制备方法, 所述方法包。

19、 括 : 0021 (1) 培养皿培养 : 将如权利要求 1 所述的真菌菌株 LP-16 在无菌条件下接种于固 体培养基上, 20-30、 优选 22-28、 进一步优选 25下培养 4-6 天、 优选 4.4-5.5 天、 进一 步优选 5 天 ; 所述固体培养基包括如下组分 : 马铃薯浸粉 4-6g/L、 优选 4.5-5.5g/L、 进一步 优选5g/L, 葡萄糖或蔗糖15-25g/L、 优选17-23g/L、 进一步优选20g/L, 琼脂13-18g/L、 优选 14-17g/L、 进一步优选 16g/L, 氯霉素 0.1g/L ; 0022 (2)一级种子培养 : 将步骤 (1)培养。

20、的菌种在无菌条件下接种于液体培养基, 20-30, 优选 22-28, 进一步优选 25下培养 5-7 天, 优选地 5.5-6.5 天, 更优选地 6 天, 制得一级种子 ; 所述液体培养基包括如下组分:马铃薯浸粉4-6g/L、 优选4.5-5.5g/L、 进一 步优选 5g/L, 葡萄糖或者蔗糖 15-25g/L、 优选 17-23g/L、 进一步优选 20g/L, 氯霉素 0.1g/ L ; 0023 (3) 二级种子培养 : 按液体培养基的体积比为 5-15%、 优选 8-12%、 更优选 10% 的接 种量, 将步骤 (2) 所得一级种子接种到发酵罐中, 曝气, 培养 5-7 天、 。

21、优选 5.5-6.5 天、 进一 步优选 6 天, 制得二级种子 ; 0024 (4) 混合发酵培养 : 按液体培养基的体积比为 10-20%、 优选 12-18%、 更优选 15% 的 接种量, 将二级种子接种到发酵罐中, 进行高密度发酵培养, 获得菌剂。 0025 培养皿培养中, 培养温度可以为 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29或 30; 培养时间可以为 4 天、 4.5 天、 110 小时、 5 天、 130 小时、 5.5 天或 6 天 ; 所 用的固体培养基中马铃薯浸粉可以为 4g/L、 4.2g/L、 4.5g/L、 4.7g/L、 4.。

22、9g/L、 5g/L、 5.lg/L、 5.3g/L、 5.5g/L、 5.8g/L 或 6g/L, 葡萄糖或者蔗糖可以为 15g/L、 16g/L、 17g/L、 18g/L、 19g/ L、 20g/L、 21g/L、 22g/L、 23g/L、 24g/L 或 25g/L, 琼 脂 可 以 为 13g/L、 14g/L、 15g/L、 16g/L、 说 明 书 CN 103642702 A 5 3/7 页 6 17g/L 或 18g/L。 0026 一级种子培养中, 培养温度可以为 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29或 30; 培养时间可以为 5。

23、 天、 5.5 天、 140 小时、 6 天、 150 小时、 6.5 天或 7 天 ; 所 用的液体培养基中马铃薯浸粉可以为 4g/L、 4.2g/L、 4.5g/L、 4.7g/L、 4.9g/L、 5g/L、 5.lg/L、 5.3g/L、 5.5g/L、 5.8g/L 或 6g/L, 葡萄糖或者蔗糖可以为 15g/L、 16g/L、 17g/L、 18g/L、 19g/ L、 20g/L、 21g/L、 22g/L、 23g/L、 24g/L 或 25g/L。 0027 二级种子培养中, 接种量按液体培养基的体积比可以为 5%、 6%、 7%、 8%、 9%、 10%、 11%、 12。

24、%、 13%、 14% 或 15% ; 培养时间可以为 5.5 天、 140 小时、 6 天、 150 小时或 6.5 天。 0028 混合发酵培养中, 接种量按液体培养基的体积比可以为 10%、 11%、 12%、 13%、 14%、 15%、 16%、 17%、 18%、 19% 或 20%。 0029 第五方面, 本发明提供了一种锌离子处理剂, 所述锌离子处理剂包括如第一方面 所述的真菌菌株 LP-16 ; 优选地, 所述处理为去除或回收。 0030 第六方面, 本发明提供了一种处理含锌废水的方法, 所述方法包括 : 将如第一方面 所述的真菌菌株 LP-16、 如第三方面所述的真菌菌剂或。

25、如第五方面所述的锌离子处理剂与 所述含锌废水接触。 0031 优选地, 本发明的处理含锌废水的方法包括 : 0032 (1) 将含锌废水的 pH 值调节至 5.0-8.0, 优选 5.5-7, 进一步优选 6.0 ; 0033 (2) 向水体中加入如第一方面所述的真菌菌株 LP-16、 如第三方面所述的真菌菌剂 或如第五方面所述的锌离子处理剂, 于 10-35, 优选 15-30, 进一步优选 25, 震荡 4-8 小时, 优选 5-7 小时, 进一步优选 6 小时, 震荡速度 90-180rpm, 优选 100-160rpm, 进一步优 选 120rpm ; 0034 (3) 静置 8-16。

26、 小时, 优选 10-14 小时, 进一步优选 12 小时。 0035 在本发明的处理含锌废水的方法中, 含锌废水的 pH 值可以为 5.0、 5.5、 5.8、 5.9、 6.0、 6.1、 6.2、 6.5、 7.0、 7.5 或 8.0 ; 处理温度可以为 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30、 31、 32、 33、 34或 35 ; 震荡时间可以为 4 小时、 4.5 小时、 5 小时、 5.5 小时、 6 小 时、 6.5 小时、 7 小时、 7.5 小时。

27、或 8 小时 ; 震荡速度可以为 90rpm、 100rpm、 110rpm、 120rpm、 130rpm、 140rpm、 150rpm、 160rpm、 170rpm或180rpm ; 静 置时间可以为8小时、 8.5小时、 9小 时、 9.5 小时、 10 小时、 10.5 小时、 11 小时、 11.5 小时、 12 小时、 12.5 小时、 13 小时、 13.5 小 时、 14 小时、 14.5 小时、 15 小时、 15.5 小时或 16 小时。 0036 在本发明的处理含锌废水的方法中, 所述处理为去除或回收所述含锌废水中的锌 离子。 0037 本发明的有益效果 : 0038。

28、 (1) 本发明的真菌菌株 LP-16 具有生长快, 菌丝表面积大, 吸附量大, 吸附能力强 的优点, 可以有效去除或回收含锌废水中的锌离子。 0039 (2) 本发明的处理含锌废水的方法具有 “低投入, 高产出” 的优点。 0040 (3) 本发明的处理含锌废水的方法中, 无需添加大量的化学药剂, 从而避免了后续 的大量沉淀泥渣等废物的产生。 0041 保藏信息 说 明 书 CN 103642702 A 6 4/7 页 7 0042 分类命名 : 尖孢镰刀菌 (Fusarium oxysporum) ; 保藏日期 : 2013 年 8 月 16 日 ; 0043 保藏单位 : 中国微生物菌种。

29、保藏管理委员会普通微生物中心 ( 简称 : CGMCC), 地 址 : 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号, 100101 ; 0044 保藏编号 : CGMCC No.8037。 具体实施方式 0045 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。 0046 实施例 1 真菌菌株 LP-16 的分离 0047 本发明的真菌菌株 LP-16 的分离包含以下步骤 : 0048 (1) 将 10 克受重金属污染的新鲜土样装入含有 90 毫升无菌水的三角瓶中 ; 0049 (2) 用玻璃珠打散, 搅匀, 制成土壤悬液 ; 0050 (3) 利用涂布法将土壤悬液涂布在分离培养基平板上, 所述。

30、分离培养基的组成 为 : 无水醋酸钠 0.2406g/L, 酵母抽提物 0.15g/L, 琼脂 15g/L, 氯霉素 0.1g/L, Zn2+50mg/ L,0.05g/L 的 MgSO47H2O 和 0.005g/L 的 K2HPO4, 其余为去离子水, 且 pH=7.0, 120高温高 压灭菌 30 分钟 ; 0051 (4) 将所涂布的分离培养基在 30的条件下培养 2 4 天, 获得单个菌株 ; 0052 (5) 将所述单个菌株接入新鲜的所述分离培养基中继续进行分离培养, 获得纯化 的菌株 ; 0053 (6) 对步骤 (5) 中得到的纯化菌株重复步骤 (5) 的操作 3 5 次, 以。

31、确保所得到的 菌株为完全纯化的单个菌株, 获得本发明的真菌菌株并且于 4保存。 0054 实施例 2 菌剂的制备 0055 本发明中的菌剂的制备包含以下步骤 : 0056 1) Petri Dishes 培养 : 将已经纯化的原始菌种 (Fusarium oxysporum) 在无菌条 件下分别接种于固体培养基上, 室温 (25) 条件下培养5天 ; 固体培养基具有以下组成 : 马 铃薯浸粉 5g/L, 葡萄糖 20g/L, 琼脂 15g/L, 氯霉素 0.1g/L ; 0057 2) 一级种子培养 : 将步骤 1) 培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体培养基, 室 温 (25) 条件下培养 。

32、6 天, 制得一级种子悬液 ; 液体培养基具有以下组成 : 马铃薯浸粉 5g/ L, 葡萄糖 20g/L, 氯霉素 0.1g/L ; 0058 3) 二级种子培养 : 按液体培养基的体积比为 10% 的接种量, 将一级种子 分别接 种到 2.5L 的发酵罐中, 发酵罐内培养液的总体积为 1.5L, 适当曝气, 培养 6 天, 制得二级种 子 ; 0059 4) 混合发酵培养 : 按液体培养基的体积比为 15% 的接种量, 将二级种子接种到 10L 的发酵罐中, 发酵罐内的培养基总体积为 7L, 进行高密度发酵培养, 获得菌剂。 0060 实施例 3 废水中锌离子浓度对真菌 LP-16 吸附锌离。

33、子能力的影响 0061 配制 pH 值为 6.0 的液态扩大培养基 6 等份, 每份培养基体积为 150mL, 装入 250mL 三角瓶中。这 6 瓶溶液中分别含有 Zn2+浓度为 12、 24、 36、 48、 60、 120mg/L。在这 6 瓶液体 培养基中接种本发明真菌 LP-16 菌体, 反应温度为 25, 振荡培养 6 小时, 转速为 120RPM, 将含菌体的溶液进行离心, 测量离心后液体中 Zn2+浓度, 观察菌体生长状态以及菌体进行 说 明 书 CN 103642702 A 7 5/7 页 8 吸附的程度, 不同锌离子浓度的废水中真菌 LP-16 菌株吸附 Zn2+的效果如表。

34、 1 所示。 0062 表 1、 废水中锌离子浓度对菌株吸附锌离子能力的影响 0063 锌离子浓度 (mg/L)吸附后浓度 (mg/L)吸附效率 123.3372.25% 249.162.08% 3614.759% 4827.941.88% 6029.950.17% 12068.343.08% 0064 表 1 结果表明, 随着锌离子浓度的增加, 该菌体对锌离子的吸附逐渐降低, 锌离子 浓度的继续增加反而会影响该菌种的生长, 继而影响对锌离子的吸 附效率。 0065 实施例 4 菌体投加量对真菌 LP-16 吸附废水中锌离子能力的影响 0066 配制 pH 值为 6.0 的液态扩大培养基, 体。

35、积为 150mL, 装入 250mL 三角瓶中。溶液中 含有 Zn2+浓度为 60mg/L。在培养液中分别添加 0.5、 1、 2、 5、 10g 的真菌 LP-16 菌体, 反应温 度为 25, 振荡培养 6 小时, 转速 120RPM, 将培养好的菌悬液离心, 测量离心后液体中 Zn2+ 浓度, 观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度, 不同菌体投加量下真菌 LP-16 吸附废 水中锌离子的效果见表 2。 0067 表 2、 菌体投加量对菌株吸附锌离子能力的影响 0068 0069 由表 2 结果可知, 在投加量为 5g 菌体时最为经济, 性价比最高。 0070 实施例 5 反应 pH 值。

36、对真菌 LP-16 从废水中回收锌离子能力的影响 0071 配制 pH 值分别为 3.0、 4.0、 5.0、 6.0、 7.0 的液态扩大培养基, 体积为 150mL, 装入 250mL 三角瓶中。溶液中含有 Zn2+浓度为 60mg/L。在培养液中接种 2g 的真菌 LP-16 菌体, 反应温度为 25, 振荡培养 6 小时, 转 120RPM, 速将培养好的菌悬液离心, 测量离心后液体 中Zn2+浓度, 观察菌体生长状态以及菌体 进行吸附的程度, 不同反应pH值下真菌LP-16吸 附锌离子的效果见表 3。 0072 表 3、 pH 值对菌株吸附锌离子能力的影响 说 明 书 CN 1036。

37、42702 A 8 6/7 页 9 0073 0074 表 3 结果可见, 菌株在 pH 为 5.0 时, 吸附效率最高, PH 为 6.0 和 7.0 时次之, 说明 : 真菌 LP-16 在 pH 为 5.0-7.0 之间的吸附效率最好。 0075 实施例 6 反应温度对真菌 LP-16 吸附废水中锌离子能力的影响 0076 配制 pH 值为 6.0 的液态扩大培养基, 体积为 150mL, 装入 250mL 三角瓶中。溶液中 含有 Zn2+浓度为 60mg/L, 在培养液中接种 2g 真菌 LP-16 菌体, 反应温度分别为 15、 20、 25、 30, 振荡培养 6 小时, 转速 1。

38、20RPM, 将培养好的菌悬液离心, 测量离心后液体中 Zn2+浓度, 观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度, 不同反应温度下真菌 LP-16 吸附锌离子的效 果见表 4。 0077 表 4、 反应温度对菌株吸附锌离子能力的影响 0078 0079 0080 表 4 结果表明, 在反应温度在 15-30之间时, 真菌 LP-16 菌体对于废水中锌离子 的吸附均有不错的效果, 尤其是在 20-30之间, 表现出吸附效率逐渐提升, 表明该温度区 说 明 书 CN 103642702 A 9 7/7 页 10 间内, 具体吸附效果越来越好。 0081 实施例 7 振荡时间对真菌 LP-16 吸附废。

39、水中锌离子能力的影响 0082 配制 pH 值为 6.0 的液态扩大培养基, 体积为 150mL, 装入 250mL 三角瓶中。溶液中 含有 Zn2+浓度为 60mg/L。在培养液中接种 2g 的真菌 LP-16 菌体, 反应温度为 25, 分别振 荡培养 10min、 30min、 2h、 4h、 6h, 转 120RPM, 速将培养好的菌悬液离心, 测量离心后液体中 Zn2+浓度, 观察菌体生长状态以及菌体进行吸附的程度, 不同振荡时间的条件下真菌 LP-16 吸附锌离子的效果见表 5。 0083 表 5、 不同振荡时间对菌株吸附锌离子能力的影响 0084 0085 表 5 结果表明, 在振荡时间为 10min-6h 的范围内, 菌体的吸附效果较好 ; 特别是, 在震荡时间为 2h 时吸附效率最高, 表明此时的菌体吸附效果最好。 0086 申请人声明, 本发明通过上述实施例来说明本发明的, 但本发明并不局限于上述, 即不意味着本发明必须依赖上述才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了, 对本发明 的任何改进, 对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、 具体方式的选择等, 均落 在本发明的保护范围和公开范围之内。 说 明 书 CN 103642702 A 10 。

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