海洋酵母饵料及其生产方法和用途 本发明涉及一种海洋酵母饵料及其生产方法和用途。使用生物培养和浓缩、冷冻处理的海洋酵母饵料主要用于对虾、罗氏沼虾、海湾扇贝、虾夷扇贝、牡蛎、海参及河蟹等海淡水珍品种类人工育苗苗种的开口饵料。
水产养殖业，苗种培育是一项重要的基础环节。苗种培育生产过程中，饵料又是重要的物质基础。传统的海水育苗所采用的苗种开口饵料通常为硅藻等单细胞藻类，在单细胞藻类不足的情况下，补充一些非活性的代用饵料，如豆浆、蛋黄、医用或食用酵母粉和海藻粉等。所有这些饵料都存在一定的弊端。采用单细胞藻类作为苗种开口饵料，需要在育苗期间现场临时培育，除占用育苗场地设施外，由于受培育条件、技术水平等诸多因素的限制，一般都难以满足实际生产的需要，必须采用非活性饵料来补充。非活性饵料不仅容易造成苗种幼体营养缺乏，而且容易污染水质，并进一步导致苗种减产或培育失败。
针对上述现有技术存在的实际问题，本发明提供一种商品化活性饵料，具有适口性好、营养全面、不占用育苗场地设施、不污染水质、能有效提高苗种质量的特点。
本发明提供的海洋酵母饵料的特点是选用的酵母为海洋红酵母属的种类，其菌液浓度为80～150亿细胞/每毫升，溶剂是盐度为25～35‰的过滤消毒海水，菌液的最佳浓度为100亿细胞/每毫升。
专用于生产海洋酵母的方法，它是选用纯化的海洋红酵母属的菌种经固体培养制成菌苔，再经连续充气进行液体培养，制成20～30亿细胞/每毫升的种子液，将种子液按一定比例接种于反应釜中进行生产培养，制成30亿细胞/每毫升生产原液，对生产原液进行离心分离、浓缩处理制成菌泥，再定量配制成80～150亿细胞/每毫升的菌液，最佳浓度可以是100亿细胞/每毫升，经包装、速冻制成商品海洋酵母饵料。
前述的种子液培养和生产培养的液体培养基，其配方可以是葡萄糖1.0～1.5％，蛋白胨0.3～0.6％，酵母浸膏0.1～0.3％，其余是盐度为25～35‰的过菌消毒海水，PH值为5.0～7.0。海洋酵母的培养温度可以是18～28℃，最佳温度为22℃，连续充气培养地充气量是每分钟为培养基体积的1/2，种子液的培养时间可以是30～36小时，生产培养的时间可以是48小时。所说的定量配制的海洋酵母产品的速冻温度为-25～-30℃，商品冷藏的温度为-10～15℃。在生产培养中种子液与液体培养基的接种比例可以是1∶15～20(体积比)。
海洋酵母饵料的菌体大小为4×6微米，椭园形，不运动，在海水中分散性、悬浮性强。细胞体营养成份含量为：蛋白质50％；脂类8％；糖类32％；矿物质9％。此外必需氮基酸和必需脂肪酸含量丰富且平衡，还含有多种维生素、生长激素以及酶类等活性物质。系广谱生物饵料，可作为：河蟹、对虾、扇贝、牡蛎、魁蚶、海参等虾、贝、蟹幼体初期(开口期)饵料，或者做为常规单细胞藻类开口饵料的补充饵料。
本发明的海洋酵母饵料具有以下优点：
1.由于采用高密度浓缩手段制成活菌株制剂，又通过冷冻储存的方法延长使用期限，使活体饵料商品化。常规的单细胞藻类，培养密度最高只能达到300～500万细胞/每毫升，不能长期保存，也不能运输。本产品的细胞浓度比单胞藻的培养密度高达2000倍，因此易于在市场流通。大型育苗场(如1000水体育苗场)仅用60公斤即可满足需要，而用单细胞藻类则需要120吨，而且只能保存一周左右，本产品在常温条件下(如15℃)能保存2个月，冷冻(-15℃)能保存1年以上，保质期内活细胞为95％以上。
2.海洋酵母用于海水育苗与其它酵母相比(如食用或医用酵母)有明显区别，其它酵母粉剂在海水中分散性差，而且不能在海水中存活，而海洋酵母是适于海洋生长的种类，营养成份含量也不同，不饱和脂肪酸明显高于其它酵母。
3.净化水质，菌体在海水中可利用溶解状态的有机物质和氨态氮、硫化氢等对育苗幼体有直接危害的物质，起到改善、稳定水质的作用。育苗过程中，由于育苗幼体的新陈代谢作用，水质极易污染，经常产生一些对幼体有害的物质，海洋酵母可以将这些物质分解同化，使水质迅速得到改善。经实验得出：海洋酵母在海水中24小时除氮率为92％。因此海洋酵母在海水育苗中除可作为直接开口饵料以外，在整个育苗期内同时还是一种良好的生物水质净化剂。
4.防病治病，通常育苗采用豆浆、蛋黄等非活性饵料作为补充饵料，由于大量投喂，溶解状态的有机物浓度增高，易引起细菌大量繁殖，为防止疾病发生，常投入水中大量药物，但尽管如此，疾病的发病率也很高。采用海洋酵母可以去除在水中的有机营养物，限制了有害细菌大量繁殖，海洋酵母体内还含有大量的免疫活性物质，能够增强苗种幼体的抗病能力，又由于海水中投入海洋酵母，使整个水体中海洋酵母占有种群优势，使其它细菌难以繁殖，这些方面可以说明海洋酵母具有防治病害作用，是一种良好的育苗病害生物防治剂。
本发明的实施例如下；
实施例一：100亿细胞/每毫升海洋酵母饵料的生产。
生产过程由以下几个步骤完成：
1.菌种选择：通过分离、纯化的手段选择海洋红酵母属的种类为生产菌种。
2.菌种扩大培养制成种子液：
①将得到的纯化菌种转接到常规琼脂平板培养基上面，在恒温箱中22℃培养48小时。
②配制液体培养基，装入玻璃容器中，然后将琼脂平板培养基上长好的菌苔刮入玻璃容器内的液体培养基中。
③充气培养，采用小型充气泵通过细菌过滤器，向玻璃容器内连续充无菌空气，通气量每分钟应达到培养基体积的1/2，培养温度22℃，最佳温度22℃，PH控制在6.0，培养时间36小时，使菌液达到浓度30亿/每毫升，作为生产用种子液。
3.生产培养：
生产装置采用普通工业反应釜，将上述扩大培养所获得的种子液接入反应釜培养基中，种子液和生产培养基的比例为1∶15，接种完毕即充气培养，充气量每分钟为培养基体积的1/2，保持培养温度22℃，控制PH值6.0，连续培养48小时，使菌体细胞不分裂为止，达到每毫升菌液30亿个则停止培养。
前述各流程环节均需严格的无菌操作，培养基及器械等灭菌(湿热)温度均为120℃20分钟。
4.菌体细胞分离浓缩：
采用三足式离心机，要求离心机转数为1000～1400转/分钟，将反应釜中的菌液通过反应釜排料口进入离心机中，开动离心机，通过离心的作用将培养液和菌体分离，最后在离心机里留下不含培养基液体的菌泥物。
5.浓度为每毫升100亿海洋酵母浓缩剂配制：
无菌操作从离心机中取出不含液体培养基的菌泥，加入适量的消毒过滤海水进行定量，调整细胞浓度为每毫升100亿个。
6.分装：
无菌操作将配制定量好的标准规格的菌体浓缩物，打入分装容器中，包装瓶采用无毒聚乙烯细口瓶，每瓶装0.2或0.4升(以便于速冻)。
7.速冻：
将已装瓶的海洋酵母浓缩饵料移入冷库或冰柜中速冻，速冻温度-25～-30℃，使瓶中物体全部冻结时间不得超过8小时。
8.装箱冷冻储藏：
将冻结后的饵料瓶装入纸箱中移入冷库储藏间储存，储藏温度-10～-15℃，储存保质期1年，解冻后活细胞占95％左右。
海洋酵母的液体培养基的配方是葡萄糖1.5％、蛋白胨0.6％、酵母浸膏0.3％，其余是盐度为25～35‰的过滤消毒海水，PH值为6.0。
实施例二：中国对虾初期(开口期)幼体培育效果。
采用海洋酵母与其它常规饵料搭配使用，培育中国对虾早期幼体蚤状至糠虾的变态率为51.5％，而单纯采用常规饵料在相同的条件下变态率仅为9.3％。
实施例三：太平洋牡蛎幼体培育效果。
以往被公认为育苗效果最佳的小球藻与叉鞭金藻混合投喂饲育太平洋牡蛎的效果不如海洋酵母与叉鞭金藻混合投喂的效果好。海洋酵母与叉鞭金藻混合投喂饲育太平洋牡蛎幼体，能够缩短从受精卵到眼点幼虫的变态天数，而且能够提高幼体生长率。见下表。
太平洋牡蛎幼体试验结果单细胞种类 小球藻湛江叉鞭藻海洋酵母 小球藻+ 海洋酵母 叉鞭+ 海洋酵母 叉鞭+ 小球藻至眼点幼虫天 数 19 15 19 16 14 15至眼点幼虫日增长(um) 15.7 20.0 15.9 18.8 21.4 20.0
实施例四：中华绒毛蟹培育效果。
使用海洋酵母饵料培养河蟹早期幼体，在规范的条件下，三天内完成从蚤状I期——蚤状II期的变态过程，而且变态整齐同步，变态率达到95％，完全超过常规饵料的综合效果。生产实际观察，搭配少量蛋黄和微粒饲料饲育蚤状I期幼体，发现幼体发育正常，变态整齐，布苗时蚤状I期幼体26万只/m3，到蚤状II期时达到20万只/m3，变态率达77％，而同时同样条件下另外两个采用常规单细胞藻类作开口饵料的生产池从蚤状I期到蚤状II期时每立方水体仅剩9万只，变态率只有35％，减少一半以上。
实施例五：刺参幼体培育效果。
在刺参育苗生产中，从进入耳状幼虫阶段开始摄食，单纯投喂海洋酵母，在发育阶段各期变态正常，而且生长速度快。至小耳状幼体时，投入海洋酵母在海水中的密度为3万细胞/每毫升，变态时间为2天7小时；至大耳状幼体时投入海洋酵母在海水中的密度为4万细胞/每毫升，变态时间为4天7小时；樽形幼虫、五触手、雅参阶段，投入海水中的密度均为4万细胞/每毫升，变态时间分别为7天、8天10小时、9天7小时。整个各期培养过程中未发现非正常死亡现象。