宫颈异常细胞快速筛查方法 研究背景
宫颈癌在女性恶性肿瘤占第二位，仅次于乳腺癌，全球大约每两分钟就有一位女性死于宫颈癌，全球每年估计有27万女性死于宫颈癌，每年新发病例有50万，其中大约有一半来自亚洲。
宫颈癌是早期发现可以成功治愈的癌症之一。有大量证据表明早期发现宫颈癌并进行治疗，女性完全可以获得康复。因此，疾病的早期发现至关重要。宫颈癌筛查是一项极具意义的公共卫生措施。世界卫生组织、所有发达国家及一些发展中国家的政府部门都在极力推进和鼓励21-64岁的女性每年进行一次宫颈癌筛查，尤其对于性生活正常的女性，不管年龄大小，每年都需要进行此项检查。
目前宫颈癌筛查方法的原理是基于对细胞形态学异常改变的观察。遗憾的是，这项技术步骤过于复杂、耗时长，难以迎合进行大规模宫颈异常细胞筛查的要求。为了满足这一需要，我们开发了这种宫颈异常细胞的快速筛查方法。本项发明通过增强在传统涂片上异常宫颈细胞的可视性，来提高传统涂片法的敏感性和特异性。
发明概述
酸性磷酸酶是在男性前列腺高表达的一种酶，酸性磷酸酶检测已被当作一个生物标志物，来诊断前列腺癌及检测肿瘤有否向身体其他组织扩散，同时也被用来检测治疗效果。为了检测女性宫颈组织是否也有酸性磷酸酶表达，我们发现在宫颈异常细胞中酸性磷酸酶高表达，而在正常宫颈细胞中则没有表达。这项发现提示酸性磷酸酶是宫颈异常细胞筛查的一个非常实用的生物标志物。利用酸性磷酸酶这个生物标志物，开发出新的检测试剂盒用于宫颈异常细胞的筛查。这种新方法应用细胞染色技术，利用传统宫颈涂片来检测酸性磷酸酶的表达来甄别宫颈异常细胞，其原理是利用萘酚AS-BI盐或萘酚AS-MX盐作为酸性磷酸酶底物，利用快红紫、固酱紫或品红等重氮盐作为偶联物在异常细胞内形成红色沉淀。这种方法选择性标记宫颈异常细胞，而正常细胞则不会着色。因此，标记上红色的异常宫颈细胞与传统染色相比结果更鲜明突出，显著增加了异常细胞的可视性。
这种结果可读性的增强减少了传统涂片染色或新发展的液基细胞学检查中结果读取过程中的模糊性。我们的临床实验结果显示新地方法可以提高20％以上的灵敏度，降低假阴性率达60％以上。而且，新方法在可读性方面的提高适用于自动化，因而显著增加宫颈异常细胞筛查中的高敏感性和特异性的输出。新的检测方法更快捷、花费更小，同时采用了常规可靠的染色方法，这种检测方法在可以进行传统涂片检查的任何实验室都可以进行。新方法结果可读性的增加同时也显著减少了样本检测所需要的时间，传统涂片染色的操作可以由实验室技术员或医务人员进行，但结果则需要专业的病理学家来解读。
实验方法
一、染色试剂盒成分：
(1)试剂A：固定液：10％福尔马林
(2)试剂B：染色液：12.5克/升萘酚AS-BI磷酸盐溶于二甲基甲酰胺
(3)试剂C：盐酸品红：4％盐酸品红溶于2摩尔/升盐酸
(4)试剂D：亚硝酸钠：0.5摩尔/升
(5)试剂E：醋酸钠溶液：2.5摩尔/升，pH 5.2
(6)试剂F：苏木素复染液
(7)滤纸
二、染色步骤：
1.涂片在试剂A中固定1分钟
2.用水充分洗净
3.将试剂B，C，D，和E混匀后，用滤纸过滤到染色缸中
4.将涂片放入染色液中置于25-37℃染色20-30分钟
5.用水充分洗净
6.用试剂F染色1分钟
7.封片或晾干，镜检
三、染色结果：
异常宫颈细胞胞质中有红色沉淀，核呈蓝色；正常细胞胞质无着色，核呈蓝色。
说明书附图
图1临床确诊宫颈癌患者宫颈涂片染色示意图，实体箭头所示红色为酸性磷酸酶着色部位，图中A、B、C、D中实体箭头所示细胞分别为来自不同受试者的酸性磷酸酶染色阳性细胞即宫颈异常细胞，B、C、D中空心箭头所示细胞为着色阴性的正常宫颈细胞。
图2E为健康对照宫颈涂片染色示意图，无酸性磷酸酶阳性着色。F为宫颈癌细胞系Hela细胞染色示意图，箭头所示红色为酸性磷酸酶着色部位，G为细胞放大2倍后效果。