说明书一种卡非佐米的合成方法
技术领域
本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种卡非佐米的合成方法。
背景技术
卡非佐米，化学名称为（2S）-N-（（S）-1-（（S）-4-甲基-1-（（R）-2-甲基环氧乙烷-2-基）-1-氧代戊烷-2-基氨基甲酰基）-2-苯乙基）-2-（（S）-2-（2-吗啉乙酰胺基）-4-苯基丁酰胺基）-4-甲基戊酰胺，外文名或通用名为Carfilzomib，商品名为Kyprolis，分子式为C19H25BN4O4，具有如式Ⅸ所示结构。
2012年7月20日，美国食品与药物管理局（FDA）批准了ONYXPHARMSINC公司产品卡非佐米(carfilzomib)注射用冻干粉针剂的上市，Carfilzomib可用于治疗之前接受过至少2种药物（包括硼替佐米和免疫调节剂）治疗的多发性骨髓瘤患者。多发性骨髓瘤是一种浆细胞恶性克隆性疾病，发病率逐年增加，已位居血液肿瘤的第二位，随着治疗水平的提高，虽然完全缓解率较高，但生存率仍较低，主要原因之一是复发。carfilzomib的获批，为那些经当前疗法治疗后复发的多发性骨髓瘤患者，提供了一种治疗选择。
卡非佐米现有的合成方法为直线合成法，专利US20050245435中，卡非佐米合成步骤如下：N-Boc亮氨酸和苯丙氨酸苄酯缩合反应，然后在三氟乙酸作用下脱保护得到其三氟乙酸盐，之后在N,N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三氮唑的催化下与氨基酸缩合生成二肽胺，所得二肽胺脱保护后与氯乙酰氯、碘化钠、吗啉反应，再通入氢气，在钯碳催化下还原得到化合物，所得化合物与侧链缩合即得卡非佐米粗品。这种方法能最终合成卡非佐米，但应用于大规模生产时仍存在一些问题，如直线合成法反应收率较低，所用碘化钠氯取代反应收率不高，因此消耗较多的起始原料；而且此合成方法中由于用到氯乙酰氯，污染较大；此外，此合成方法中反应类型较多，反应条件复杂多样，可控性差，不适用于大规模工业生产。
因此，研发一种收率高、无污染、反应简单可控、适用于工业化生产的卡非佐米新的 合成方法具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种卡非佐米的合成方法。本合成方法采用汇聚合成法，提高了反应收率；所用试剂简便易得，污染较小；本工艺仅涉及氨基酸间的缩合以及脱保护，反应简单可控；适用于工业化生产。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种卡非佐米的合成方法，包括以下步骤：
步骤1、在第一有机溶剂中，式Ⅰ所示结构的化合物和式Ⅱ所示结构的化合物在第一缩合剂和第一有机碱作用下发生缩合反应，再经脱羧基保护，生成式Ⅴ所示结构的化合物；
步骤2、在第二有机溶剂中，式Ⅲ所示结构的化合物和式Ⅳ所示结构的化合物，在第二缩合剂和第二有机碱的作用下发生缩合反应，再经脱氨基保护，生成式Ⅵ所示结构的化合物；
步骤3、在第三有机溶剂中，式Ⅴ所示结构的化合物和式Ⅵ所示结构的化合物，在第三缩合剂和第三有机碱作用下发生缩合反应，再经脱羧基保护，生成式Ⅶ所示结构的化合物；
步骤4、式Ⅶ所示结构的化合物和式Ⅷ所示结构的化合物发生缩合反应，生成卡非佐米；
其中R为第一基团，第一基团的盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硝酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐；
R1为第一基团，第一基团的盐酸盐、硫酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硝酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐；第一基团为C1-C5的直链或支链基团。
作为优选，第一基团为甲基，乙基，异丙基，正丁基，异丁基或叔丁基。
R还可为任意一种起到保护羧基作用的基团。
作为优选，R为常温常压条件即可实现脱羧基保护的基团。
作为优选，R为甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲基的盐酸盐，乙基的盐酸盐，异丙基的盐酸盐，正丁基的盐酸盐，异丁基的盐酸盐，叔丁基的盐酸盐、甲基的醋酸盐、乙基的醋酸盐、异丙基的醋酸盐、正丁基的醋酸盐、异丁基的醋酸盐、叔丁基的醋酸盐、甲基的柠檬酸盐、乙基的柠檬酸盐、异丙基的柠檬酸盐、正丁基的柠檬酸盐、异丁基的柠檬酸盐、叔丁基的柠檬酸盐、甲基的硝酸盐、乙基的硝酸盐、异丙基的硝酸盐、正丁基的硝酸盐、异丁基的硝酸盐、叔丁基的硝酸盐、甲基的苯磺酸盐、乙基的苯磺酸盐、异丙基的苯磺酸盐、正丁基的苯磺酸盐、异丁基的苯磺酸盐、叔丁基的苯磺酸盐、甲基的对甲苯磺酸盐、乙基的对甲苯磺酸盐、异丙基的对甲苯磺酸盐、正丁基的对甲苯磺酸盐、异丁基的对甲苯磺酸盐或叔丁基的对甲苯磺酸盐。
R1还可为任意一种起到保护羧基作用的基团。
作为优选，R1为用常温常压条件即可实现脱羧基保护的基团。
作为优选，R1为甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲基的盐酸盐，乙基的盐酸盐，异丙基的盐酸盐，正丁基的盐酸盐，异丁基的盐酸盐，叔丁基的盐酸盐、甲基的醋酸盐、乙基的醋酸盐、异丙基的醋酸盐、正丁基的醋酸盐、异丁基的醋酸盐、叔丁基的醋酸盐、甲基的柠檬酸盐、乙基的柠檬酸盐、异丙基的柠檬酸盐、正丁基的柠檬酸盐、异丁基的柠檬酸盐、叔丁基的柠檬酸盐、甲基的硝酸盐、乙基的硝酸盐、异丙基的硝酸盐、正丁基的硝酸盐、异丁基的硝酸盐、叔丁基的硝酸盐、甲基的苯磺酸盐、乙基的苯磺酸盐、异丙基的苯磺酸盐、正丁基的苯磺酸盐、异丁基的苯磺酸盐、叔丁基的苯磺酸盐、甲基的对甲苯磺酸盐、乙基的对甲苯磺酸盐、异丙基的对甲苯磺酸盐、正丁基的对甲苯磺酸盐、异丁基的对甲苯磺酸盐或叔丁基的对甲苯磺酸盐。
由于化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ中羧基用甲基、乙基等基团保护，脱保护条件只需常温常压下 氢氧化锂催化即可，避免了使用昂贵、易燃的钯碳催化剂。
作为优选，步骤1中第一缩合剂为任何一种或两者以上的可引起缩合反应的试剂。
作为优选，第一缩合剂为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺、羰基二咪唑、4-N,N-二甲基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-丁二酰亚胺基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-endo-5-降莰烯-2,3-二碳二酰亚胺)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的一种或两者以上的混合物。
作为优选，第一有机碱为任意一种或两者以上的可催化缩合反应进行的试剂。
更优选的，第一有机碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、吗啉或N-甲基吗啉中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，第一有机碱为N,N-二异丙基乙胺。
作为优选，第一有机溶剂为任意一种或两者以上的可为步骤1反应提供反应条件的试剂。
更优选的，第一有机溶剂为腈类溶剂、醚类溶剂、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，醚类溶剂为四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二甲醚或1，4-二氧六环。
作为优选，式Ⅰ所示结构的化合物、式Ⅱ所示结构的化合物、第一有机碱、第一缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.5：1.1～20：1.1～18。
作为优选，式Ⅰ所示结构的化合物、式Ⅱ所示结构的化合物、第一有机碱、第一缩合剂的摩尔比为1：1.2～1.5：3～10：1.1～5。
作为优选，步骤1缩合反应的温度为-20℃～60℃，步骤1缩合反应的时间为1～24h。
作为优选，步骤1缩合反应的温度为-5℃～30℃。
更优选的，步骤1缩合反应的时间为2～8h。
作为优选，步骤1脱羧基保护的温度为-20℃～60℃，步骤1脱羧基保护的时间为1～24h。
作为优选，步骤1脱羧基保护的温度为-5℃～30℃。
更优选的，步骤1脱羧基保护时间为2～8h。
作为优选，步骤1中脱羧基保护的催化剂为氢氧化锂。
作为优选，步骤1中脱羧基保护的溶剂为甲醇或甲醇的水溶液。
作为优选，步骤1中缩合反应的气体环境为常态或惰性气体。
作为优选，步骤1中脱羧基保护的气体环境为常态或惰性气体。
其中，常态为常压常温非隔绝空气状态，惰性气体优选为氮气、氩气。
作为优选，步骤2中第二缩合剂为任何一种或两者以上的可引起缩合反应的试剂。
作为优选，第二缩合剂为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺、羰基二咪唑、4-N,N-二甲基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、O-(7-氮杂苯并三氮 唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-丁二酰亚胺基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-endo-5-降莰烯-2,3-二碳二酰亚胺)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的一种或两者以上的混合物。
作为优选，第二有机碱为任意一种或两者以上的可催化缩合反应进行的试剂。
作为优选，第二有机碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、吗啉或N-甲基吗啉中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，第二有机碱为N,N-二异丙基乙胺。
作为优选，第二有机溶剂为任意一种或两者以上的可为步骤2反应提供反应环境的试剂。
作为优选，第二有机溶剂为腈类溶剂、醚类溶剂、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，醚类溶剂为四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二甲醚或1，4-二氧六环。
作为优选，式Ⅲ所示结构的化合物、式Ⅳ所示结构的化合物、第二有机碱、第二缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.5：1.1～20：1.1～20。
作为优选，式Ⅲ所示结构的化合物、式Ⅳ所示结构的化合物、第二有机碱、第二缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.0：3～10：1.5～5。
作为优选，步骤2缩合反应的温度为-20℃～60℃，步骤2缩合反应的时间为1～24h。
作为优选，步骤2缩合反应的温度为-5℃～30℃。
更优选的，步骤2缩合反应的时间为2～5h。
作为优选，步骤2脱氨基保护的温度为-20℃～60℃。
更优选的，步骤2脱氨基保护的温度为-5℃～30℃。
作为优选，步骤2脱氨基保护的时间为0.5～12h。
更优选的，步骤2脱氨基保护的时间为1～5h。
作为优选，步骤2中缩合反应的气体环境为常态或惰性气体。
作为优选，步骤2中脱氨基保护的气体环境为常态或惰性气体。
其中，常态为常压常温非隔绝空气状态，惰性气体优选为氮气、氩气。
作为优选，步骤3中第三缩合剂为任何一种或两者以上的可引起缩合反应的试剂。
更优选的，第三缩合剂为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺、羰基二咪唑、4-N,N-二甲基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-丁二酰亚胺基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-endo-5-降莰烯-2,3-二碳二酰亚胺)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳 鎓六氟磷酸盐或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的一种或两者以上的混合物。
作为优选，作为优选，第三有机碱为任意一种或两者以上的可催化缩合反应进行的试剂。
作为优选，第三有机碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、吗啉或N-甲基吗啉中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，第三有机碱为N,N-二异丙基乙胺。
作为优选，第三有机溶剂为任意一种或两者以上的可为步骤3反应提供反应环境的试剂。
作为优选，第三有机溶剂为腈类溶剂、醚类溶剂、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，醚类溶剂为四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二甲醚或1，4-二氧六环。
作为优选，式Ⅴ所示结构的化合物、式Ⅵ所示结构的化合物、第三有机碱、第三缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.5：1.1～20：1.1～10。
作为优选，式Ⅴ所示结构的化合物、式Ⅵ所示结构的化合物、第三有机碱、第三缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.0：3～10：1.5～5。
作为优选，步骤3缩合反应的温度为-20℃～60℃，步骤3缩合反应的时间为1～24h。
作为优选，步骤3缩合反应的温度为-5℃～30℃。
作为优选，步骤3缩合反应时间为2～10h。
作为优选，步骤3脱羧基保护的温度为-20℃～60℃，步骤3脱羧基保护的时间为1～24h。
作为优选，步骤3脱羧基保护的温度为-5℃～30℃。
作为优选，步骤3脱羧基保护的时间为2～10h。
作为优选，步骤3中脱羧基保护的催化剂为氢氧化锂。
作为优选，步骤3中脱羧基保护的溶剂为甲醇或甲醇的水溶液。
作为优选，步骤3中缩合反应的气体环境为常态或惰性气体。
作为优选，步骤3中脱羧基保护的气体环境为常态或惰性气体。
其中，常态为常压常温非隔绝空气状态，惰性气体优选为氮气、氩气。
作为优选，步骤4中缩合反应具体为第四有机溶剂、第四缩合剂和第四有机碱存在的条件下式Ⅶ所示结构的化合物和式Ⅷ所示结构的化合物发生缩合反应，生成卡非佐米。
作为优选，式Ⅶ所示结构的化合物、式Ⅷ所示结构的化合物、第四有机碱、第四缩合剂的摩尔比为1：1.05～2.5：1.1～20：1.1～10。
更优选的，式Ⅶ所示结构的化合物、式Ⅷ所示结构的化合物、第四有机碱、第四缩合剂的摩尔比为1：1.2～2.0：5～15：1.5～10。
作为优选，步骤4中第四缩合剂为任何一种或两者以上的可引起缩合反应的试剂。
作为优选，第四缩合剂为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺、羰基二咪唑、4-N,N-二甲基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二（二甲胺基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)- 二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-丁二酰亚胺基)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(N-endo-5-降莰烯-2,3-二碳二酰亚胺)-二（二甲胺基）碳鎓四氟硼酸盐、O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐、O-（苯并三氮唑-1-基)-二（四氢吡咯基）碳鎓六氟磷酸盐或苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐中的一种或两者以上的混合物。
作为优选，第四有机碱为任意一种或两者以上的可催化缩合反应进行的试剂。
作为优选，第四有机碱为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、吗啉或N-甲基吗啉中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，第四有机碱为N,N-二异丙基乙胺。
作为优选，第四有机溶剂为任意一种或两者以上的可为步骤4反应提供反应环境的试剂。
作为优选，第四有机溶剂为腈类溶剂、醚类溶剂、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮中的一种或两者以上的混合物。
作为优选，醚类溶剂为四氢呋喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二甲醚或1，4-二氧六环。
作为优选，步骤4缩合反应的温度为-20℃～60℃。
更优选的，步骤4缩合反应的温度为-5℃～30℃。
作为优选，步骤4缩合反应的时间为1～24h。
更优选的，步骤4缩合反应的时间为2～10h。
作为优选，步骤4中缩合反应的气体环境为常态或惰性气体。
其中，常态为常压常温非隔绝空气状态，惰性气体优选为氮气、氩气。
作为优选，卡非佐米重结晶方法为：用良性溶剂将卡非佐米溶解后直接低温析出，或加入不良溶剂析晶。由于本发明提供的卡非佐米的合成路线中加入重结晶步骤，卡非佐米纯度达到99.5%以上，单个杂质小于0.1%。
作为优选，良性溶剂为醇、酯、酮、氯代烷烃、烷烃、芳烃、乙二醇二甲醚、乙二醇单甲醚、二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或两者以上的混合物。
更优选的，醇为甲醇，乙醇或异丙醇。
更优选的，酯为甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯或丙二酸二乙酯。
更优选的，酮为丙酮或丁酮。
更优选的，烷烃为二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿或三氯乙烷。
更优选的，芳烃为苯、甲苯或二甲苯。
作为优选，不良溶剂为戊烷、正己烷、环己烷、正庚烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚或异丙醚。
本发明提供了一种卡非佐米的合成方法。该合成方法步骤为：吗啉-4-基乙酸（Ⅰ）与L-高苯丙氨酸酯及盐（Ⅱ）发生缩合反应，再脱羧基保护，生成化合物Ⅴ；L-苯丙氨酸酯及盐（Ⅲ）与N-Boc-L-亮氨酸（Ⅳ）发生缩合反应，再脱氨基保护，生成化合物Ⅵ；化合物Ⅴ与化合物Ⅵ发生缩合反应，再脱羧基保护，生成化合物Ⅶ；化合物Ⅶ与化合物Ⅷ发生缩合反应，即得卡非佐米，本发明采用汇聚合成法，反应步骤少，反应条件温和，本发明提供的实施例中，卡非佐米合成路线的反应收率可达19.3%～30.8%，显著高于（P<0.05） 对比例1收率(8.9%～10.9%)；所用试剂价格低廉，简便易得，且避免使用昂贵、易燃的钯碳催化剂，降低了生产成本；此路线同时避免使用氯乙酰氯和碘化钠，降低了污染并提高了反应效率；本工艺仅涉及氨基酸间的缩合以及脱保护，反应简单可控；因此，本发明提供了一种反应步骤少、收率高、成本低、污染小、反应简单可控、利于工业化生产的卡非佐米的合成方法。
附图说明
图1为实施例1制备的化合物Ⅴ的HPLC图；
图2为实施例2制备的化合物Ⅴ的HPLC图；
图3为实施例9制备的化合物X的HPLC图；
图4为实施例10制备的化合物XI的HPLC图；
图5为实施例17制备的化合物Ⅶ的HPLC图；
图6为实施例25制备的卡非佐米的HPLC图。
具体实施方式
本发明提供了一种卡非佐米的合成方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的卡非佐米的合成方法中，所用到的原料与试剂均可由市场购得。
本发明提供实施例中所用原料中英文名称对应关系如表1所示：
表1 本发明提供实施例中所用原料中英文名称对应表
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 化合物Ⅴ的制备
在氮气保护下，将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸甲酯20.3g（0.105mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL乙腈，再向其中加入DIEA51.7g（0.4mol），将混合物在搅拌下冷却至0℃。向此混合物中加入HOBT14.9g（0.11mol）然后在五分钟内分三次加入PyBOP共57.3g(0.11mol)。将反应物置于氮气下，搅拌反应8h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物19.5g，将其溶于甲醇：水=3:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂12.1g（0.5mol）反应12h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体17.0g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilent SB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，所得结果如图1所示，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度96.3%，收率55.5%。
实施例2 化合物Ⅴ的制备
在氩气保护下，将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸乙酯48.3g（0.25mol）加入2000mL三口瓶中，加入1200mL四氢呋喃，再向其中加入吡啶158.2g（2.0mol），将混合物在搅拌下冷却至-20℃。向此混合物中加入HATU380.2g（1.0mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应24h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物21.6g，将其溶于甲醇：水=9:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂24.2g（1.0mol）反应8h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体17.9g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilent SB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，检测结果如图2所示，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度97.3%，收率58.4%。
实施例3 化合物Ⅴ的制备
将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸甲酯盐酸盐114.8g（0.50mol）加入2000mL三口瓶中，加入600mLDMF，再向其中加入三乙胺50.6g（0.50mol），将混合物在于20℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应24h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物20.4g，将其溶于甲醇：水=5:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂19.4g（0.8mol）反应8h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体17.3g，经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度97.3%，收率56.5%。
实施例4 化合物Ⅴ的制备
将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸异丙酯盐酸盐128.9g（0.50mol）加入2000ml三口瓶中，加入600mlDMF，再向其中加入三乙胺50.6g（0.50mol），将混合物在于20℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应24h，减压蒸馏，将剩余物溶于300ml二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，有机层减压蒸干所得化合物20.4g，溶于甲醇后，在-5℃加入氢氧化锂19.4g（0.8mol）反应8h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体19.3g经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度96.7%，收率63.0%。
实施例5 化合物Ⅴ的制备
在氮气保护下，将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸正丁酯柠檬酸盐44.9g（0.105mol）加入2000mL三口瓶中，加入1200mL溶剂DMSO，再向其中加入吗啉174.2g（2.0mol），将混合物在60℃下搅拌，向此混合物中加入DCC:DIC为1:1的混合物，共18.3g（0.11mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应1h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物19.8g，将其溶于甲醇：水=4:1的混合溶液中，冷至-20℃，加入氢氧化锂14.6g（0.6mol）反应24h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体18.4g，经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度96.2%，收率60.1%。
实施例6 化合物Ⅴ的制备
将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸甲酯醋酸盐63.3g（0.25mol）加入2000mL三口瓶中，加入1200mL溶剂DMA，再向其中加入N-甲基吗啉9.6g（0.11mol），将混合物在搅拌下冷却至-5℃，向此混合物中加入EDCI345.1g（1.8mol），将反应物置于常态下，搅拌反应2h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物25.4g，将其溶于甲醇：水=6:1的混合溶液中，在60℃下加入氢氧化锂14.6g（0.6mol）反应1h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体23.4g，经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度96.8%，收率76.4%。
实施例7 化合物Ⅴ的制备
将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸叔丁酯苯磺酸盐49.4g（0.12mol）加入2000mL三口瓶中，加入1200mL溶剂DMA，再向其中加入三乙胺101.2g（1mol），将混合物在30℃下搅拌，向此混合物中加入HOBT14.9g（0.11mol），将反应物置于常态下，搅拌反应8h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物22.3g，将其 溶于甲醇：水=6:1的混合溶液中，冷至-5℃，加入氢氧化锂24.3g（1mol）反应2h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体20.5g，经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度97.3%，收率67.0%。
实施例8 化合物Ⅴ的制备
将吗啉-4-基乙酸14.6g（0.10mol）和L-高苯丙氨酸正戊酯硫酸盐52.1g（0.15mol）加入2000mL三口瓶中，加入1200mL溶剂DMA，再向其中加入N,N-二异丙基乙胺38.8g（0.3mol），将混合物在25℃下搅拌，向此混合物中加入HBTU189.6g（0.5mol），将反应物置于常态下，搅拌反应6h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物21.8g，将其溶于甲醇：水=6:1的混合溶液中，30℃下加入氢氧化锂12.2g（0.5mol）反应7h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体20.1g，经HPLC检测，此白色固体中含有式Ⅴ所示结构的化合物，纯度97.7%，收率65.7%。
实施例9 化合物Ⅵ（具体为式X所示结构化合物）的制备
在氮气保护下，将L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐18.0g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸24.3g（0.105mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL四氢呋喃，再向其中加入DIEA51.7g（0.4mol），将混合物在搅拌下冷却至0℃。向此混合物中加入HOBT14.9g（0.11mol）。将反应物置于氮气下，搅拌反应2h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物34.5g，向其中加入三氟乙酸：二氯甲烷=4:1的混合溶液120mL，15℃搅拌反应7h，浓缩后即得类白色固体28.2g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilent SB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，检测结果如图3所示，此类白色固体中含有式Ⅹ所示结构的化合物，纯度为96.3%，收率69.4%。
实施例10 化合物Ⅵ（具体为式XI所示结构化合物）的制备
在氩气保护下，将L-苯丙氨酸乙酯盐酸盐19.4g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸46.3g（0.2mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL乙腈，再向其中加入吡啶158.2g（2.0mol），将混合物在搅拌下冷却至-5℃。向此混合物中加入HBTU113.8g（0.3mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应18h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物35.3g，将其加入到HCl-乙酸乙酯（约1.5mol/L）溶液中，20℃反应10h后，浓缩至干加入200mL乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液调PH=8～9，分别用100mL乙酸乙酯萃取两次水层，合并有机相用饱和氯化钠洗涤1次，浓缩至干，得到类白色固体25.2g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilent SB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，检测结果如图4所示，此类白色固体中含有式XI所示结构的化合物，纯度为97.4%，收率73.5%。
实施例11 化合物Ⅵ（具体为式XI所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸乙酯盐酸盐23.0g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸34.7g（0.7mol）加入2000mL三口瓶中，加入600mL1,4-二氧六环，再向其中加入三乙胺50.6g（0.50mol），将混合物在于10℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下， 搅拌反应14h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物24.4g，将其加入到HCl-乙酸乙酯（约3.0mol/L）溶液中，-5～0℃反应3h后，浓缩至干加入200mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调PH=8～9，分别用100mL二氯甲烷萃取两次水层，合并有机相用饱和氯化钠洗涤1次，浓缩至干得类白色固体20.2g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XI所示结构的化合物，纯度96.8%，收率58.9%。
实施例12 化合物Ⅵ（具体为式XII所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸异丙酯20.7g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸34.7g（0.7mol）加入2000ml三口瓶中，加入600ml1,4-二氧六环，再向其中加入三乙胺50.6g（0.50mol），将混合物在于10℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应14h，减压蒸馏，将剩余物溶于300ml二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，有机层减压蒸干所得化合物30.2g，将其加入到HCl-乙酸乙酯（约3.0mol/L）溶液中，-5℃反应1h后，浓缩至干加入200mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调PH=8～9，分别用100mL二氯甲烷萃取两次水层，合并有机相用饱和氯化钠洗涤1次，浓缩至干得类白色固体21.5g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XII所示结构的化合物，纯度97.6%，收率62.2%。
实施例13 化合物Ⅵ（具体为式XIII所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸叔丁酯22.1g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸57.8g（0.25mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mLNMP，再向其中加入DIEA14.2g（0.11mol），将混合物在30℃下搅拌。向此混合物中加入CDI：DMAP为1：2的混合物，共271.1g（2mol）。将反应物置于氮气下，搅拌反应5h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物32.9g，向其中加入三氟乙酸：二氯甲烷=4:1的混合溶液120mL，30℃搅拌反应0.5h，浓缩后即得类白色固体23.7g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XIII所示结构的化合物，纯度98.3%，收率70.9%。
实施例14 化合物Ⅵ（具体为式XIV所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸异丁酯22.1g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸34.7g（0.15mol）加入2000mL三口瓶中，加入1500mLNMP，再向其中加入吡啶87.0g（1.1mol），将混合物在搅拌下冷却至-20℃。向此混合物中加入TBTU417.4g（1.3mol）。将反应物置于氮气下，搅拌反应24h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物31.6g，向其中加入三氟乙酸：二氯甲烷=4:1的混合溶液120mL，-20℃搅拌反应5h，浓缩后即得类白色固体23.4g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XIV所示结构的化合物，纯度95.7%，收率70.0%。
实施例15 化合物Ⅵ（具体为式XV所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸正丁酯22.1g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸24.3g（0.105mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mLNMP，再向其中加入吗啉87.1g（1mol），将混合物在60℃下搅拌。向此混合物中加入CDI24.3g（0.15mol）。将反应物置于氮气下，搅拌反应1h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物28.6g，向其中加入三氟乙酸：二氯甲烷=4:1的混合溶液120mL，60℃下搅拌反应12h，浓缩后即得类白色固体21.1g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XV所示结构的化合物，纯度96.9%，收率63.1%。
实施例16 化合物Ⅵ（具体为式XVI所示结构化合物）的制备
将L-苯丙氨酸正戊酯醋酸盐29.5g（0.10mol）和N-Boc-L-亮氨酸46.3g（0.2mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mLNMP，再向其中加入N-甲基吗啉30.3g（0.3mol），将混合物在25℃下搅拌。向此混合物中加入DMAP61.1g（0.5mol）。将反应物置于氮气下，搅 拌反应5h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物31.4g，向其中加入三氟乙酸：二氯甲烷=4:1的混合溶液120mL，10℃搅拌反应6h，浓缩后即得类白色固体29.9g，经HPLC检测，此类白色固体中含有式XVI所示结构的化合物，纯度97.2%，收率73.3%。
实施例17 化合物Ⅶ的制备
在氮气保护下，取实施例1制备的化合物Ⅴ15.3g（0.05mol）和实施例9制备的化合物X21.3g（0.105mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL四氢呋喃，再向其中加入DIEA51.7g（0.4mol），将混合物在搅拌下冷却至0℃。向此混合物中加入HOBT13.5g（0.10mol）。将反应物置于氮气下，搅拌反应2h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物20.3g，将其溶于乙腈：水=3:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂4.8g（0.2mol）反应10h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用200mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体18.2g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilentSB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，检测结果如图5所示，式Ⅶ所示结构的化合物纯度为98.3%，收率64.2%。
实施例18 化合物Ⅶ的制备
在氩气保护下，将实施例2制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例10制备的化合物XI21.4g（0.063mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL乙腈，再向其中加入吡啶39.6g（0.5mol），将混合物在搅拌下冷却至-5℃。向此混合物中加入HBTU28.5g（0.075mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应18h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL乙酸乙酯，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物12.3g，将其溶于四氢呋喃：水=3:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂4.8g（0.2mol）反应24h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至4左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体8.9g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度97.7%，收率62.8%。
实施例19 化合物Ⅶ的制备
将实施例3制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例11制备的化合物XI9.2g（0.03mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL1,4-二氧六环，再向其中加入三乙胺25.3g（0.25mol），将混合物在于-10℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应14h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物12.4g，溶于四氢呋喃：水=5:1的混合溶液中，冷至0℃，加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应8h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体8.3g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度94.8%，收率58.6%。
实施例20 化合物Ⅶ的制备
将实施例4制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例12制备的化合物XII9.6g（0.03mol）加入1000ml三口瓶中，加入600ml1,4-二氧六环，再向其中加入三乙胺25.3g（0.25mol），将混合物在于-10℃下搅拌，向此混合物中加入TBTU64.2g（0.2mol），将反应物置于氮气下，搅拌反应14h，减压蒸馏，将剩余物溶于300ml二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，有机层减压蒸干所得化合物12.9g，溶于四氢呋喃后，在20℃，加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应8h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体8.6g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度95.7%，收率60.7%。
实施例21 化合物Ⅶ的制备
将实施例5制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例13制备的化合物XIII8.8g（0.02625mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL苯乙腈，再向其中加入吗啉43.6g（0.5mol），将混合物在于-20℃下搅拌，向此混合物中加入HCTU11.4g（0.0275mol），将反应物置于常态下，搅拌反应10h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物16.2g，溶于四氢呋喃：水=5:1的混合溶液中，冷至-20℃，加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应2h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体10.1g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度96.5%，收率71.3%。
实施例22 化合物Ⅶ的制备
在氩气保护下，将实施例6制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例14制备的化合物XIV20.9g（0.0625mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL甲基叔丁基醚，再向其中加入吗啉：DIEA为1:1的混合物共0.0275mol，其中吗啉1.2g，DIEA1.8g。将混合物在30℃下搅拌，向此混合物中加入TSTU75.3g（0.25mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应1h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物17.2g，溶于四氢呋喃：水=4:1的混合溶液中，60℃下加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应1h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体10.5g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度96.5%，收率74.1%。
实施例23 化合物Ⅶ的制备
在氩气保护下，将实施例7制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例15制备的化合物XV8.8g（0.02625mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL甲基叔丁基醚，再向其中加入N-甲基吗啉29.3g(0.25mol)，将混合物在60℃下搅拌，向此混合物中加入HOBT5.1g（0.0375mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应24h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物15.4g，溶于四氢呋喃：水=4:1的混合溶液中，30℃下加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应5h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体9.8g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度97.8%，收率69.2%。
实施例24 化合物Ⅶ的制备
在氩气保护下，将实施例8制备的化合物Ⅴ7.4g（0.025mol）和实施例16制备的化合物XVI20.4g（0.05mol）加入1000mL三口瓶中，加入600mL甲基叔丁基醚，再向其中加入三乙胺7.6g(0.075mol)，将混合物在18℃下搅拌，向此混合物中加入PyBOP65.1g（0.125mol），将反应物置于氩气下，搅拌反应5h，减压蒸馏，将剩余物溶于300mL二氯甲烷，依次用饱和碳酸氢钠、水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，有机层减压蒸干所得化合物16.7g，溶于四氢呋喃：水=4:1的混合溶液中，-5℃下加入氢氧化锂29.0g（1.2mol）反应6h，用200mL饱和氯化铵终止反应，用1N盐酸调节pH值至3左右，分别用100mL二氯甲烷萃取两次，蒸干后即得白色固体11.7g，经HPLC检测，含有式Ⅶ所示结构的化合物，纯度95.3%，收率82.6%。
实施例25 卡非佐米的制备
在氮气保护下，将实施例17制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ7.1g（0.026mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mLDMF，再向其中加入DIEA64.6g（0.5mol），HOBT22.8g(0.168mol)，将混合物在搅拌下冷却至0℃。分三次加入PyBOP共45.6g(0.088mol)。将反应物置于氮气下，0～5℃搅拌反应20h，反应物用饱和氯化钠稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用少量乙醇溶解后，搅拌下快速加入到0℃冷水中析晶，抽滤烘干后即得白色固体9.8g，经HPLC检测，所用色谱柱为agilent SB-C18，规格为5μm×4.6mm×150mm，柱温为25℃，进样量为10μl，流速为1.2ml/min，以0.1%三氟乙酸-水（A）和乙腈（B）作为流动相梯度洗脱，溶剂如下：
在210nm波长下检测，检测结果如图6所示，纯度99.7%，收率54.5%，总收率为19.4%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例26 卡非佐米的制备
在氩气保护下，将实施例18制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ17.1g（0.063mol）加入1000mL三口瓶中，加入800mL四氢呋喃，再向其中加入三乙胺25.3g（0.25mol），HATU15.2g(0.04mol)，将混合物在搅拌下冷却至10℃以下.分三次加入PyBOP共20.7g(0.04mol)。将反应物置于氮气下，10～15℃搅拌反应10h，反应物用饱和氯化钠稀释，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用乙酸乙酯和甲基叔丁基醚精制即得白色固体10.3g，经HPLC检测，纯度99.8%，收率57.2%，总收率为21.0%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例27 卡非佐米的制备
将实施例19制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ8.8g（0.033mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL乙二醇二甲醚，再向其中加入三乙胺25.3g（0.25mol），HOBT11.0g(0.04mol)，将混合物在搅拌下冷却至-10℃。分三次加入PyBOP共7.9g(0.018mol)。将反应物置于氮气下，-10～0℃搅拌反应8h，反应物用饱和氯化钠稀释，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，加入丙酮：正己烷为1:6的混合溶剂共150mL，室温搅拌3h，过滤，滤饼用丙酮：正己烷为1:6的混合溶剂洗涤两次，每次用量均为30mL，烘干得白色固体10.5g，经HPLC检测，此白色固体纯度99.7%，收率58.3%，总收率为19.3%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例28 卡非佐米的制备
在氮气保护下，将实施例20制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ7.5g（0.02625mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL DMSO：DMF为1：2的混合溶剂，再向其中加入三乙胺：DIEA为1:2的混合物，共59.9g（0.5mol），TNTU:HBPyu为2:1的混合物共0.0275mol，其中TNTU3.4g，HBPyu7.9g，将混合物在搅拌下冷却至-20℃。将反应物置于氮气下，0～60℃搅拌反应24h，反应物用饱和氯化钠稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用少量乙醇溶解后，搅拌下快速加入到0℃冷水中析晶，抽滤烘干后即得白色固体9.3g，经HPLC检测，纯度99.6%，收率51.7%，总收率为19.8%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H), 3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例29 卡非佐米的制备
在氩气保护下，将实施例21制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ17.8g（0.0625mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL四氢呋喃：乙腈为1:1的混合溶剂，再向其中加入吡啶：DIEA:三乙胺为1：1：1的混合物，共0.0275mol，其中吡啶0.7g，DIEA1.2g，三乙胺0.9g，加入HAPyu108.1g(0.25mol)，将混合物在搅拌下冷却至0℃。将反应物置于氮气下，60℃搅拌反应2h，反应物用饱和氯化钠稀释，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用少量乙醇溶解后，搅拌下快速加入到0℃冷水中析晶，抽滤烘干后即得白色固体11.4g，经HPLC检测，纯度99.8%，收率63.3%，总收率为27.1%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例30 卡非佐米的制备
在氩气保护下，将实施例23制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ8.6g（0.03mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL四氢呋喃：乙腈为1:1的混合溶剂，再向其中加入吡啶14.8g（0.375mol），加入HAPyu16.2g(0.0375mol)，将混合物在搅拌下冷却至0℃。将反应物置于氮气下，30℃搅拌反应1h，反应物用饱和氯化钠稀释，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用少量乙醇溶解后，搅拌下快速加入到0℃冷水中析晶，抽滤烘干后即得白色固体10.6g，经HPLC检测，纯度99.7%，收率58.9%，总收率为27.3%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m,12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
实施例31 卡非佐米的制备
在氩气保护下，将实施例24制备的化合物Ⅶ14.2g（0.025mol）和化合物Ⅷ14.3g（0.05mol）加入1000mL三口瓶中，加入500mL四氢呋喃：乙腈为1:1的混合溶剂，再向其中加入吗啉16.1g（0.125mol），加入HAPyu108.1g g(0.25mol)，将混合物在搅拌下冷却至0℃。将反应物置于氮气下，-5℃搅拌反应9h，反应物用饱和氯化钠稀释，用二氯甲烷萃取，有机层依次用水和饱和食盐水分别洗涤两次，每次用量均为150mL，经无水硫酸镁干燥，浓缩为油状物，用少量乙醇溶解后，搅拌下快速加入到0℃冷水中析晶，抽滤烘干后即得白色固体10.2g，经HPLC检测，纯度99.5%，收率56.7%，总收率为30.8%。将所得白色固体进行核磁共振检测，所得核磁共振氢谱数据为：1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.25-8.15(m,1H),8.07(t,J=7.3Hz,1H),7.90(m,2H),7.28(t,J=7.4Hz,2H),7.18(m,7H),7.10(m,1H),4.62-4.51(m,1H),4.44-4.34(m,1H)，4.33-4.20(m,1H),3.61(m,4H),3.14(dd,J=15.1,5.2Hz,1H),3.03-2.74(m,5H),2.45(m,4H),2.01-1.76(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.40(m,9H),0.84(m, 12H),8.07(t,J=7.3Hz,1H)。所测数据与自制卡非佐米标准品氢谱数据一致，因此确定此化合物为卡非佐米。
对比例1 卡非佐米的制备
向NBoc亮氨酸、苯丙氨酸苄酯的MeCN溶液加入DIEA(4.0eq.)，将混合物在冰浴中冷却至0℃，向此混合物加入HOBT(1.6eq)，然后在5min内分几次加入PyBOP(1.6eq)，经后处理得缩合物。通过70％TFA/DCM的0℃冷溶液反应得到脱保护物，加入BocNHLeuPheOBz(1.0eq.)反应4h，通过80％TFA/DCM的0℃冷溶液反应得到二肽胺的TFA盐。向二肽胺的TFA盐的MeCN溶液加入氯乙酰氯(1.2eq.)和DIEA(4eq.)，反应过夜，然后浓缩得到固体烷基氯。向烷基氯的无水丙酮溶液加入NaI(2eq.)，将反应物回流过夜，然后真空浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁，减压除去挥发分，得到的物质溶于THF溶液加入哌啶(5eq)和DIEA(5eq)。在室温下搅拌2小时后，将内容物浓缩，溶于EtOAc，用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁，减压除去挥发分。将粗制酯溶于EtOAc/MeOH比例为1∶1的混合溶液，加入5％Pd/C，将混合物置于2个大气压的氢气条件反应2小时。通过硅藻土过滤反应物，减压除去挥发分，获得的中间体与侧链反应后通过快速色谱纯化，获得卡非佐米。IC50 20S CT-L＜50nM，IC50基于细胞的CT-L＜50nM。卡非佐米的收率为8.9%～10.9%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。