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1、(10)申请公布号 CN 103421071 A (43)申请公布日 2013.12.04 CN 103421071 A *CN103421071A* (21)申请号 201310360228.7 (22)申请日 2013.08.19 C07J 9/00(2006.01) (71)申请人 南京标科生物科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边东 108 号 1 幢 701 室 (72)发明人 张金芳 万冬梅 (54) 发明名称 一种高纯度灵芝酮三醇的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种高纯度灵芝酮三醇的制备 方法。方法是取灵芝原料原料粉碎， 加入 5-10 倍 。
2、量 50%-99% 甲醇溶液， 超声提取 2-3 次， 提取液缩 后加入大孔树脂柱中吸附， 先用3-9倍量10%-50% 甲醇溶液洗脱， 再用 5-10 倍 60%-90% 甲醇溶液 洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph1-3， 加入石油醚充分搅 拌， 收集石油醚层过滤， 所得固体用高速逆流色谱 仪分离， 收集流分减压干燥即得。 采用本发明制备 灵芝酮三醇， 工艺操作简便、 得率高， 污染小， 适合 高纯度灵芝酮三醇生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 103。
3、421071 A CN 103421071 A *CN103421071A* 1/1 页 2 1. 一种高纯度灵芝酮三醇的制备方法， 其特征在于以下步骤 ： 取灵芝原料原料粉碎， 加入 5-10 倍量 50%-99% 甲醇溶液， 超声提取 2-3 次， 提取液缩后加入大孔树脂柱中吸附， 先 用 3-9 倍量 10%-50% 甲醇溶液洗脱， 再用 5-10 倍 60%-90% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph1-3， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 所得固体用高速逆流色谱仪分离， 收集流 分减压干燥即得。 2. 根据权利要求 1 所述的高纯度灵芝酮三醇的制备方法， 其特征在于所述的。
4、大孔树脂 可选 HZ816、 HPD100、 AB-8 和 D101 中的一种。 3. 根据权利要求 1 所述的高纯度灵芝酮三醇的制备方法， 其特征在于所述的高速逆流 色谱仪分离条件为 ： 取石氯仿、 甲醇、 水， 按 3-7:2-5:1-3 混合， 取上相做固定相、 下相为流 动相， 主机转速 700-1000rpm， 流速为 1-3ml/min。 权 利 要 求 书 CN 103421071 A 2 1/2 页 3 一种高纯度灵芝酮三醇的制备方法 技术领域 0001 本发明属于天然药物化学领域， 特别涉及一种高纯度灵芝酮三醇的制备方法。 背景技术 0002 灵芝酮三醇为三萜类化合物， CA。
5、S 号 106518-63-2， 分子式 C30H48O4， 分子量 4722.7, 分子结构式如下 ： 灵芝酮三醇为灵芝中的三萜类成分， 三萜类也是灵芝的有效成分之一， 对人肝癌细胞 具有细胞毒作用， 也能抑制组织胺的释放， 具有保肝作用和具有抗过敏作用等。 0003 通过文献检索， 现有灵芝酮三醇制备方法是采用硅胶、 凝胶色谱法进行分乙醇提 回流提取， 醋酸乙酯萃取， 硅胶、 凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂， 制备量较小， 样品得率低， 不适合高纯度灵芝酮三醇的制备。 发明内容 0004 本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷， 提供一种操作简便的高纯度灵芝酮 三醇的制备方法。 0。
6、005 为了实现上述目的， 本发明采用以下技术方案 ： 一种高纯度灵芝酮三醇的制备方法， 其特征在于以下步骤 ： 取灵芝原料原料粉碎， 加 入 5-10 倍量 50%-99% 甲醇溶液， 超声提取 2-3 次， 提取液缩后加入大孔树脂柱中吸附， 先 用 3-9 倍量 10%-50% 甲醇溶液洗脱， 再用 5-10 倍 60%-90% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph1-3， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 所得固体用高速逆流色谱仪分离， 收集流 分减压干燥即得。 0006 所述的大孔树脂可选 HZ816、 HPD100、 AB-8 和 D101 中的一种。 0007 所述的高速逆。
7、流色谱仪分离条件为 ： 取石氯仿、 甲醇、 水， 按 3-7:2-5:1-3 混合， 取 上相做固定相、 下相为流动相， 主机转速 700-1000rpm， 流速为 1-3ml/min。 0008 采用本法制备灵芝酮三醇， 工艺简便易操作， 制备量大， 产品得率高， 而且低污染。 0009 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明， 但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。 说 明 书 CN 103421071 A 3 2/2 页 4 具体实施方式 0010 实施例 1 ： 取灵芝原料粉碎， 称20kg， 用8倍90%甲醇溶液超声提取30分钟， 提取3次， 提取液减压 浓缩后加入HZ81。
8、6大孔树脂柱中吸附， 用5倍柱体积50%甲醇溶液洗脱， 再用8倍柱体积85% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph1， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 得固体粗提 物。取氯仿、 甲醇、 水， 按 3:2:1 混合， 充分分层后， 取上相注满高速逆流色谱管做固定相， 开 转主机， 转速 800rpm， 同时泵入下相做流定相， 建立动态平衡后， 流速调节为 2ml/min， 用流 动相溶解浸膏， 由进样阀进样， 蒸发光散射检测器在线监测， 收集目标成分， 连续制备， 流分 回收试剂， 得灵芝酮三醇 1.2g， 经 HPLC 检测， 含量 98.5%。 0011 实施例 2 ： 取灵芝原料。
9、粉碎， 称20kg， 用7倍80%甲醇溶液超声提取30分钟， 提取2次， 提取液减压 浓缩后加入D101大孔树脂柱中吸附， 用6倍柱体积30%甲醇溶液洗脱， 再用8倍柱体积80% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph3， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 得固体粗提 物。取氯仿、 甲醇、 水， 按 5:3:2 混合， 充分分层后， 取上相注满高速逆流色谱管做固定相， 开 转主机， 转速 850rpm， 同时泵入下相做流定相， 建立动态平衡后， 流速调节为 3ml/min， 用流 动相溶解浸膏， 由进样阀进样， 蒸发光散射检测器在线监测， 收集目标成分， 连续制备， 流分 回收试剂， 得。
10、灵芝酮三醇 1.3g， 经 HPLC 检测， 含量 98.5%。 0012 实施例 3 ： 取灵芝原料粉碎， 称20kg， 用7倍85%甲醇溶液超声提取30分钟， 提取2次， 提取液减压 浓缩后加入AB-8大孔树脂柱中吸附， 用4倍柱体积40%甲醇溶液洗脱， 再用10倍柱体积75% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph2， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 得固体粗提 物。取氯仿、 甲醇、 水， 按 4:3:2 混合， 充分分层后， 取上相注满高速逆流色谱管做固定相， 开 转主机， 转速 700rpm， 同时泵入下相做流定相， 建立动态平衡后， 流速调节为 1ml/min， 用流 动相。
11、溶解浸膏， 由进样阀进样， 蒸发光散射检测器在线监测， 收集目标成分， 连续制备， 流分 回收试剂， 得灵芝酮三醇 1.4g， 经 HPLC 检测， 含量 98.3%。 0013 实施例 4 ： 取灵芝原料粉碎， 称 20kg， 用 7 倍 95% 甲醇溶液超声提取 30 分钟， 提取 3 次， 提取液减 压浓缩后加入 HPD100 大孔树脂柱中吸附， 用 5 倍柱体积 50% 甲醇溶液洗脱， 再用 10 倍柱体 积 70% 甲醇溶液洗脱， 洗脱液浓缩调节 ph1， 加入石油醚充分搅拌， 收集石油醚层过滤， 得固 体粗提物。取氯仿、 甲醇、 水， 按 4:2:2 混合， 充分分层后， 取上相注满高速逆流色谱管做固 定相， 开转主机， 转速 850rpm， 同时泵入下相做流定相， 建立动态平衡后， 流速调节为 2ml/ min， 用流动相溶解浸膏， 由进样阀进样， 蒸发光散射检测器在线监测， 收集目标成分， 连续 制备， 流分回收试剂， 得灵芝酮三醇 1.3g， 经 HPLC 检测， 含量 97.7%。 说 明 书 CN 103421071 A 4 。