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1、(10)申请公布号 CN 103865522 A (43)申请公布日 2014.06.18 CN 103865522 A (21)申请号 201410071543.2 (22)申请日 2014.02.28 C09K 11/06(2006.01) G01N 21/64(2006.01) C07D 241/12(2006.01) C07C 247/16(2006.01) C07F 7/10(2006.01) (71)申请人 浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38 号 (72)发明人 蔡云波 秦安军 唐本忠 孙景志 (74)专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 3322。
2、4 代理人 胡红娟 (54) 发明名称 一种荧光分子探针及其在硫化氢检测中的应 用 (57) 摘要 本发明公开了一种荧光分子探针及其在硫 化氢检测中的应用， 该荧光分子探针的结构为 R1-N3， 其中， R1为具有聚集诱导发光性能的基团。 原理为该含叠氮官能团的分子由于叠氮的猝灭作 用在溶液中或者聚集态均不发光， 而利用硫化氢 对叠氮官能团的还原后生成的含氨基的分子则呈 现 AIE 的特性， 从而实现聚集态下对硫化氢浓度 的检测。原理为由于聚集态下残留的叠氮基团 会导致整个聚集体的荧光猝灭， 所以探针分子的 发光只能在叠氮基团大部分被还原后才能被 “打 开” ， 从而实现了通过调控探针分子的浓。
3、度得以调 控检测限和有效检测范围。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 附图6页 (10)申请公布号 CN 103865522 A CN 103865522 A 1/1 页 2 1. 一种荧光分子探针， 其特征在于， 结构为 R1-N3， 其中， R1为具有聚集诱导发光性能的 基团。 2. 根据权利要求 1 所述的荧光分子探针， 其特征在于， 所述的 R1选自式 （） 式 （） 中的一种 ； 式 （） 中， R2 R4独立地选自芳基、 烷基、 烷氧基或者 H ； 式 （。
4、II） 中， R5和 R6选自 C1 C5烷基或者芳基 ； “*” 代表取代位置。 3. 根据权利要求 2 所述的荧光分子探针， 其特征在于， 所述的 R1的结构如式 （ -1） 所 示 ： 式 （ -1） 中，“*” 代表取代位置。 4. 一种硫化氢浓度的检测方法， 其特征在于， 将含硫化氢或者 HS- 的待测液与权利要 求 1 3 任一项所述的不同浓度的荧光分子探针混合后测定其荧光强度， 若混合后发射荧 光， 则根据荧光探针分子的浓度确定硫化氢或者 HS- 的浓度 ； 所述的荧光分子探针为聚集态。 5. 根据权利要求 4 所述的硫化氢浓度的检测方法， 其特征在于， 将所述的荧光分子探 针的。
5、二甲基亚砜溶液滴加到 pH 为 6.5-8.0 的缓冲溶液中即可得到聚集态的荧光分子探 针 ； 所述的二甲基亚砜溶液与缓冲溶液的体积比为 1 3 ： 9 7。 6. 根据权利要求 5 所述的硫化氢浓度的检测方法， 其特征在于， 所述的缓冲溶液为 pH 为 7.4 的 HEPES 缓冲液 ； 所述的二甲基亚砜溶液与 HEPES 缓冲液的体积比为 2:8。 7. 根据权利要求 5 所述的硫化氢浓度的检测方法， 其特征在于， 所述的硫化氢的检测 限通过荧光分子探针在聚集态中的浓度进行调节 ； 所述的硫化氢的检测限为 0-100M。 8. 根据权利要求 7 所述的硫化氢浓度的检测方法， 其特征在于， 。
6、所述的硫化氢的检测 限在 10 50M 范围内调整。 权 利 要 求 书 CN 103865522 A 2 1/7 页 3 一种荧光分子探针及其在硫化氢检测中的应用 技术领域 0001 本发明涉及化学检测和生物检测领域， 具体涉及一种新型的荧光分子探针及其在 硫化氢检测中的应用。 背景技术 0002 硫化氢 （H2S） 作为一种内源性的气体信号分子， 参与了生物体内的众多生理过程， 与众多疾病相关。硫化氢参与了众多生理过程， 包括血管扩张、 血管生成、 氧传感、 细胞凋 亡、 组织炎症、 神经调节过程以及外伤和缺血保护等。 同时， 人体内硫化氢水平高低， 可能暗 示着人体内一些疾病的存在， 包。
7、括阿尔茨海默病、 唐氏综合症、 糖尿病以及肝硬化。但是硫 化氢在生物体内的作用、 作用机理尚无定论， 对硫化氢的检测和浓度的确定显得尤为重要。 生物体内硫化氢的浓度在怎样的范围内才能让其发挥应有的作用？反过来， 在确定生物体 内正常的硫化氢含量后， 也有助于研究硫化氢参与的各个生理过程的具体机理。 0003 近期， 有文献报道使用单壁纳米碳管和量子点作为荧光探针在非生物体系中检测 硫化氢， 检测限分别到了 3ppb（具体参见 ： Anal.Chem.2010,82,250-257） 和 0.15M（具体 参见 ： J.Fluoresc.2010,20,243-250） 。这两种方法对硫化氢检测。
8、都具有非常好的灵敏度 和选择性， 但是无法引入细胞内部。 根据同样思路， 有人开发了基于荧光分子的硫化氢检测 手段。通过探针分子与硫化氢反应， 产生荧光增强或猝灭， 再通过检测荧光强度的变化， 来 定性或定量测定体系中的硫化氢， 是这种检测手段的基本思路。Xian 等人设计了一个含二 硫键的无荧光分子作为探针 （具体参见 ： Angew Chem.Int.Ed.2011,50,10327-10329） ， 与硫 化氢作用后产生能发射很强荧光的分子， 通过检测荧光的强度的变化， 可以确定硫化氢含 量。根据类似原理， Wang 等人设计了一个新型的、 稳定的无荧光分子丹酰基叠氮 （具体 参见 ： 。
9、Angew Chem.Int.Ed.2011,50,9672-9675） ， 在被硫化氢还原后可以发射强烈的荧光。 硫化氢的荧光检测法具有操作简单， 响应迅速等优点。 0004 然而， 大多数有机发光材料在聚集态或固态时通常会呈现发光效率降低甚至不发 光的现象， 即聚集荧光猝灭 （ACQ） ， 这就极大的限制了有机发光材料的应用范围。 0005 2001 年， 唐本忠教授领导的研究组观察到了一个与传统的 ACQ 现象相反的光物 理现象 ： 一系列硅杂环戊二烯 （silole） 分子在溶液中不发光， 而在聚集后却发射很强的荧 光 （具体参见 ： Chem.Commun.,2001,1740） 。。
10、唐随即将这一独特现象定义为 “聚集诱导发光” （Aggregation-Induced Emission,AIE） 。AIE 现象具有十分重大的学术意义， 人们不再需 要刻意的去避免难以避免的聚集现象的发生， 因为聚集有益于发光。 之后， 他们发现了很多 具有类似螺旋桨结构的分子具有同样的性质， 在越来越多的新型 AIE 体系被开发出来的同 时， AIE 分子也作为荧光探针及电致发光材料被广泛的应用于分析检测、 生物传感及电致发 光器件等多个领域 ( 具体参见 ： Chem Soc Rev,2011,5361 ； Chem.Commun.2009,4332)。 0006 虽然可以预计 AIE 。
11、分子在硫化氢检测方面将有独特的优势， 但目前却尚未见报 道。常规的检测硫化氢的荧光探针分子表现为聚集猝灭荧光的行为， 所以只能在溶液中实 现对硫化氢的检测。 矛盾在于， 有机探针分子往往不溶于水， 而对硫化氢的检测需要在水相 说 明 书 CN 103865522 A 3 2/7 页 4 中进行， 另外， 生物体系的介质通常为水。 在这些介质中检测将大大降低荧光探针分子的性 能。 而如果将AIE分子用来检测硫化氢， 即使是在水中， 探针分子形成了聚集态， 由于其AIE 性能， 也可以发射荧光， 实现对硫化氢的高灵敏检测。因此， 采用 AIE 活性的分子作为探针 来实现对硫化氢的检测具有重要的科学。
12、意义和在非有机溶剂体系的应用价值。 发明内容 0007 本发明提供了一种荧光分子探针及其在硫化氢检测中的应用， 该荧光分子探针能 够在非有机溶剂体系中基于检测限可以调节的原理实现硫化氢浓度的简易检测。 0008 一种荧光分子探针， 结构为 R1-N3， 其中， R1为具有聚集诱导发光性能的基团。 0009 本发明中， R1-N3聚集体与硫化氢发生反应生成 R1-NH2， 反应式如下 ： 0010 0011 由于叠氮官能团的荧光猝灭作用导致分子 R1-N3在溶液中或聚集态下均不发光， 而与硫化氢作用后生成的 R-NH2分子可在聚集态下发光， 从而实现非有机溶剂体系中硫化 氢的检测 ； 另外， 由。
13、于聚集态下残留的叠氮基团可能会导致整个聚集体的荧光猝灭， 所以荧 光只能在叠氮基团全部反应后才能被 “打开” 。这样， 就实现了硫化氢检测限的调节。 0012 作为优选， 所述的 R1选自式 （） 式 （） 中的一种 ； 0013 0014 式 （） 中， R2 R4独立地选自芳基、 烷基、 烷氧基或者 H ； 0015 式 （II） 中， R5和 R6选自 C1 C5烷基或者芳基 ； 0016 “*” 代表取代位置。 0017 作为进一步的优选， 所述的 R1的结构如式 （ -1） 所示 ： 0018 0019 式 （ -1） 中，“*” 代表取代位置。此时， 所述的荧光分子探针对硫化氢的检。
14、测具 有专一性， 对除了硫氢根以外的其他阴离子没有响应 ； 并且该荧光分子探针对硫化氢的检 测具有抗干扰性， 当有其他阴离子存在时， 不影响其对硫氢根离子的响应。 说 明 书 CN 103865522 A 4 3/7 页 5 0020 本发明还提供了一种硫化氢浓度的检测方法， 将含硫化氢或者 HS- 的待测液与所 述的不同浓度的荧光分子探针混合后测定其荧光强度， 若混合后发射荧光， 则确定待测液 中硫化氢或者 HS- 的浓度 0021 所述的荧光分子探针为聚集态。 0022 作为进一步的优选， 将所述的荧光分子探针的二甲基亚砜溶液滴加到 pH 为 6.5-8.0 的缓冲溶液中即可得到聚集态的荧。
15、光分子探针 ； 0023 所述的二甲基亚砜溶液与缓冲溶液的体积比为 1 3 ： 9 7。 0024 作为更进一步的优选， 所述的缓冲溶液为 pH 为 7.4 的 HEPES 缓冲液 ； 0025 所述的二甲基亚砜溶液与 HEPES 缓冲液的体积比为 2:8。 0026 作为优选， 所述的硫化氢的检测限通过荧光分子探针在聚集态中的浓度进行调 节 ； 0027 所述的硫化氢的检测限为 0-100M ； 在该范围内， 检测的专一性好， 响应迅速。 0028 作为进一步的优选， 所述的硫化氢的检测限在 10 50M 范围内调整。 0029 与现有技术相比， 本发明的有益效果体现在 ： 0030 （1）。
16、 对硫化氢的检测具有专一性、 抗干扰性、 响应迅速等特点， 本发明还具有以下 独特性能 ： 0031 （2） R1-N3的聚集体与硫化氢作用还原生成的 R1-NH2， 由于 AIE 的特性使其发射荧 光， 所以该检测手段可以应用于水相， 解决了传统的探针分子由于其 ACQ 效应在水相呈聚 集态不发光而检测需要在水相进行的矛盾。另外， 由于聚集态下残留的叠氮基团可能会导 致整个聚集体的荧光猝灭， 所以荧光只能在叠氮基团全部反应后才能被 “打开” 。 这样， 就实 现了通过调整探针分子的浓度可以调控检测限的独特性能。 附图说明 0032 图 1 是实施例 1 制得的探针分子四苯基乙烯叠氮分子在 D。
17、MSO-d6中的核磁共振氢 谱 （图中 “*” 代表溶剂峰） ； 0033 图2是实施例1制得的参比物氨基四苯基乙烯分子在CDCl3中的核磁共振氢谱 （图 中 “*” 代表溶剂峰） ； 0034 图 3 是氨基四苯基乙烯分子的 AIE 曲线， 其中， A 为氨基四苯基乙烯在水分含量不 同的二甲基亚砜 / 水的混合溶液中的发光光谱， B 为发光的峰值强度随水分含量的变化 ； 0035 图 4 是四苯基乙烯叠氮分子检测硫化氢的存在 ； 0036 图 5 是四苯基乙烯叠氮分子与不同阴离子的作用曲线， A 为四苯基乙烯叠氮分子 与不同阴离子和硫化氢作用后的发光光谱 ； B 为四苯基乙烯叠氮分子与不同阴。
18、离子和硫化 氢作用后发光的峰值强度增强倍数 ； 0037 图 6 是四苯基乙烯叠氮分子在不同阴离子的存在下对硫化氢检测的抗干扰性， A 为在其他离子存在下， 四苯基乙烯叠氮分子与硫化氢作用后的发光光谱 ； B 为在其他离子 存在下， 四苯基乙烯叠氮分子与硫化氢作用后发光的峰值强度增强倍数 ； 0038 图 7 是四苯基乙烯叠氮分子浓度为 10M 时定量检测硫化氢 ； 0039 图 8 是四苯基乙烯叠氮分子浓度为 20M 时定量检测硫化氢 ； 0040 图 9 是四苯基乙烯叠氮分子浓度为 50M 时定量检测硫化氢。 说 明 书 CN 103865522 A 5 4/7 页 6 具体实施方式 00。
19、41 本发明在聚集态下检测硫化氢的荧光探针分子， 合成路线为 ： 0042 四苯基乙烯叠氮分子的合成路线 ： 将二苯甲烷溶解在四氢呋喃中， 在氮气保护下 与丁基锂反应， 得到的溶液滴加进 4- 溴二苯甲酮的四氢呋喃溶液中， 得到第一中间体 9 ； 将 9溶解于甲苯， 加入对甲基苯磺酸作为脱水剂， 脱水后得到溴代四苯基乙烯10 ； 将10溶解于 四氢呋喃中， 在氮气保护下与正丁基锂反应后再滴加对甲基苯磺酰叠氮， 得到四苯基乙烯 叠氮 （1） 。 0043 0044 下面结合实施例对本发明进行具体地描述， 但本发明的保护范围不限于以下实施 例。 0045 实施例 1 0046 （1） AIE 活性。
20、四苯基乙烯叠氮衍生物的合成 ： 0047 称取二苯甲烷 （5.5g,32.8mmol） 加入 500mL 双口圆底烧瓶中， 置于液氮丙酮浴中， 抽真空通氮气三次， 加入 100mL 新蒸四氢呋喃溶解， 缓慢滴入正丁基锂 （18.75mL,30mmol） ， 将 4- 溴二苯甲酮 （7.8g,30mmol） 溶于适量的新蒸四氢呋喃中， 加入到反应体系， 体系恢复 到室温， 过夜。用饱和氯化铵终止反应， 萃取后所得中间体 9 的粗产物用适量甲苯溶解， 加 入 500mg 对甲基苯磺酸， 回流过夜。旋干溶剂， 萃取洗涤后得到的粗产物以硅胶柱色谱分离 纯化 （石油醚为淋洗剂） ， 得白色固体溴代四苯基。
21、乙烯 10（9.897g， 产率 80.2%） 。 0048 将10 （617mg,1.5mmol） 加入250mL双口圆底烧瓶中， 抽真空换氮气三次， 加入50mL 四氢呋喃溶解， 液氮丙酮浴下滴加正丁基锂 （1.125mL,1.8mmol） ， 保持低温 1.5 小时后， 称 取对甲基苯磺酰叠氮 （345.7mg， 1.8mmol） ， 溶解于10mL四氢呋喃中， 加入到双口瓶中。 缓慢 升至室温后反应过夜。 加水终止反应， 用二氯甲烷萃取， 干燥有机相， 旋干， 所得粗产物用硅 胶柱色谱分离纯化 （石油醚为淋洗剂） ， 得黄色固体四苯基乙烯叠氮 （517mg, 产率 92.3%） 。 核。
22、磁氢谱谱图见图 1。 0049 四苯基乙烯叠氮的表征数据为 ： IR(KBr),v(cm-1) ： 3083,2124,1498,1287,823,75 5,695.1H NMR(400MHz,DMSO-d6),(TMS,ppm):7.10-7.14(m,9H),6.96-7.00(m,8H),6.89( d,2H).13CNMR(400MHz,DMSO-d6),(TMS,ppm):143.5,143.4,141.3,140.5,140.1,137.9,1- 32.8,131.1,128.3,127.1.Anal.Calcd for C26H19N3:C,83.62;H,5.13;N,11.2。
23、5;Found:C,8 3.85;H,5.11;N,10.99. 0050 （2） 参比物氨基四苯基乙烯的合成 ： 0051 锌粉 （9.6g,144mmol）加入 250mL 双口圆底烧瓶中， 抽真空通氮气三次， 加入 说 明 书 CN 103865522 A 6 5/7 页 7 60mL 四氢呋喃， 冰浴下滴加 TiCl4(7.8mL,72mmol), 缓慢回至室温后加热回流 2.5 小时， 再次用冰浴冷却， 加入吡啶 （6mL,36mmol） ， 搅拌 10 分钟后称取 4- 氨基二苯甲酮 （2.84g， 14.4mmol） 和二苯甲酮 （3.15g， 17.28mmol） 一起溶于适量。
24、四氢呋喃后加入反应体系。缓慢 恢复至室温后加热回流 12 小时。反应液冷却过滤。所得粗产物以硅胶柱色谱分离纯化 （石 油醚 / 二氯甲烷 =5:1 混合溶剂做淋洗剂） ， 得到淡黄色固体氨基四苯基乙烯 （2.56g, 产率 51.2%） ， 得到的氨基四苯基乙烯作为四苯基乙烯叠氮检测硫化氢时的参比物。核磁氢谱图 见图 2。 0052 氨基四苯基乙烯表征数据为 ： IR(KBr),v(cm-1):3385,3044,1617,1513,1277,820, 739,698.1HNMR(400MHz,DMSO-d6),(TMS,ppm):6.97-7.11(m,17H),6.80(d,2H),6.4。
25、3(d,2 H).13C NMR(400MHz,DMSO-d6),(TMS,ppm):144.2,144.1,144.0,140.8,139.4,134.5,132 .5,131.4,127.5,126.3,126.0,114.6.Anal.Calc d for C26H21N:C,89.88;H,6.09;N,4.03; Found:C,90.09;H,6.09;N,3.97. 0053 （3） 氨基四苯基乙烯荧光曲线的绘制 ： 0054 氨基四苯基乙烯是理论上探针分子四苯基乙烯叠氮与硫化氢作用后生成的分子， 其具有典型的聚集诱导发光性能， 氨基四苯基乙烯的AIE荧光曲线如图3所示 ： 当水。
26、含量为 0 时， 浓度为 10M 的氨基四苯基乙烯的二甲基亚砜溶液完全没有荧光 ； 直到水含量增加到 80% 时， 氨基四苯基乙烯开始发生聚集， 荧光开始明显增强。 0055 （4） 四苯基乙烯叠氮对硫化氢的检测 ： 0056 硫化氢的定性检测过程如下 ： 配制 10-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基亚砜溶液， 取 1mL 加入 10mL 容量瓶中， 再取 1mL 二甲基亚砜加入容量瓶中， 用 pH 调整到 7.4 的 HEPES （4- 羟乙基哌嗪乙磺酸） 缓冲溶液定容至 10mL， 得到 10M 的四苯基乙烯叠氮的水相含量为 80% 的溶液， 快速测定其荧光光谱， 作为空白参比。 0057 。
27、配制四苯基乙烯叠氮和 NaHS 的混合溶液， 操作与空白参比的制备基本相同， 不同 之处在定容前加入 50L 的 10-2M 的 NaHS( 一种常用的硫化氢供体 ) 水溶液， 得到了四苯基 乙烯叠氮浓度为 10M， NaHS 浓度为 50M 的水相含量为 80% 的混合溶液， 测定其荧光光 谱， 得到测试曲线。 0058 用上述类似操作配制相同浓度的氨基四苯基乙烯溶液， 快速测定其荧光光谱， 作 为比较。可得到如图 4 所示的检测结果， 只有四苯基乙烯叠氮的溶液几乎不发光， 而四苯基 乙烯叠氮和 NaHS 的混合溶液与相同浓度的氨基四苯基乙烯的发光光谱几乎相同， 即四苯 基乙烯叠氮可以在聚集。
28、态下检测硫化氢， 其机理是四苯基乙烯叠氮与硫化氢作用后得到氨 基四苯基乙烯。 0059 （5） 四苯基乙烯叠氮在聚集态下对硫化氢检测的专一性试验 ： 0060 对硫化氢检测的专一性鉴定过程如下 ： 配制 10-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基亚 砜溶液， 取 1mL 加入 10mL 容量瓶中， 再取 1mL 二甲基亚砜加入容量瓶中， 用 pH 调整到 7.4 的HEPES缓冲溶液定容至10mL， 得到10M的四苯基乙烯叠氮的水相含量为80%的溶液， 快 速测定其荧光光谱， 作为空白参比。 0061 配制四苯基乙烯叠氮与 NaHS 以及其他阴离子的混合溶液， 操作与空白参比的制 备基本相同， 不同。
29、之处在定容前分别加入 50L 的 10-2M 的一系列阴离子的水溶液， 得到了 四苯基乙烯叠氮浓度为 10M， 阴离子浓度为 50M 的水相含量为 80% 的一系列混合溶液， 说 明 书 CN 103865522 A 7 6/7 页 8 测定其荧光光谱， 得到测试曲线。可得到如图 5 所示的检测结果， 可以看出， 四苯基乙烯叠 氮分子只对硫化氢有响应， 对其他阴离子均无响应。 0062 （6） 本实施例的四苯基乙烯叠氮在聚集态下对硫化氢的检测具有抗干扰性。 0063 对硫化氢检测的抗干扰性鉴定过程如下 ： 配制 10-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基 亚砜溶液， 取1mL加入10mL容量瓶中， 。
30、再取1mL二甲基亚砜加入容量瓶中， 用PH调整到7.4 的HEPES缓冲溶液定容至10mL， 得到10M的四苯基乙烯叠氮的水相含量为80%的溶液， 快 速测定其荧光光谱， 作为空白参比。 0064 配制其他阴离子存在下的四苯基乙烯叠氮分子和 NaHS 的混合溶液， 操作与空白 参比的制备基本相同， 不同之处在定容前分别加入50L的10-2M的NaHS(一种常用的硫化 氢供体 ) 和其他阴离子的混合水溶液， 得到了四苯基乙烯叠氮浓度为 10M， 其他阴离子浓 度为 50M， NaHS 浓度也为 50M 的水相含量为 80% 的一系列混合溶液， 测定其荧光光谱， 得到测试曲线。可得到如图 6 所示。
31、的检测结果， 可以看出， 四苯基乙烯叠氮分子在其他阴 离子存在的条件下， 对硫化氢有响应， 且不受其他阴离子的影响， 说明其具有良好的抗干扰 性。 0065 （7） 四苯基乙烯叠氮在聚集态下定量检测硫化氢。 0066 硫化氢的定量检测过程如下 ： 配制 10-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基亚砜溶液， 取 1mL 加入 10mL 容量瓶中， 再取 1mL 二甲基亚砜加入容量瓶中， 用移液枪吸取不同体积的 10-2M 的 NaHS 水溶液加入容量瓶中， 用 pH 调整到 7.4 的 HEPES 缓冲溶液定容至 10mL， 得到 了四苯基乙烯叠氮浓度为 10M， NaHS 浓度为 2-50M 的水相。
32、含量为 80% 的一系列混合溶 液， 测试其荧光光谱。为了减小误差， 上述操作重复三次， 得到如图 7 所示的检测硫化氢的 荧光增强曲线。当硫化氢浓度为 0 时， 水含量 80% 的四苯基乙烯叠氮溶液几乎不发光 ； 当硫 化氢浓度小于四苯基乙烯叠氮浓度的时候， 荧光没有明显增强 ； 当硫化氢浓度超过四苯基 乙烯叠氮浓度后， 荧光开始显著增长 ； 当硫化氢浓度超过四苯基乙烯叠氮浓度三倍之后， 荧 光强度又趋于稳定。即荧光强度在一定范围内随着硫化氢浓度的增长而增长， 其有效检测 范围及响应的下限由探针分子四苯基乙烯叠氮的浓度决定。 0067 实施例 2 0068 （1） 四苯基乙烯叠氮和氨基四苯基。
33、乙烯的合成同实施例 1 0069 （2） 四苯基乙烯叠氮定性检测硫化氢的存在同实施例 1 0070 （3） 四苯基乙烯叠氮在聚集态下对硫化氢的检测的专一性和抗干扰性鉴定同实施 例 1。 0071 （4） 不同四苯基乙烯叠氮浓度在聚集态下定量检测硫化氢。 0072 硫化氢的定量检测过程如下 ： 配制 210-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基亚砜溶 液， 取 1mL 加入 10mL 容量瓶中， 再取 1mL 二甲基亚砜加入容量瓶中， 用移液枪吸取不同体积 的210-2M的NaHS水溶液加入容量瓶中， 用PH调整到7.4的HEPES缓冲溶液定容至10mL， 得到得到了四苯基乙烯叠氮浓度为 20M， N。
34、aHS 浓度为 4-100M 的水相含量为 80% 的一系 列混合溶液， 测试其荧光光谱。为了减小误差， 上述操作重复三次， 得到如图 8 所示的检测 硫化氢的荧光增强曲线。 荧光增强倍数与硫化氢相对于四苯基乙烯叠氮的当量的关系同实 施例1。 即荧光强度在一定范围内随着硫化氢浓度的增长而增长， 其有效检测范围及响应的 下限由探针分子四苯基乙烯叠氮的浓度决定。 说 明 书 CN 103865522 A 8 7/7 页 9 0073 实施例 3 0074 （1） 四苯基乙烯叠氮和氨基四苯基乙烯的合成同实施例 1 0075 （2） 四苯基乙烯叠氮定性检测硫化氢的存在同实施例 1 0076 （3） 本。
35、实施例四苯基乙烯叠氮在聚集态下对硫化氢的检测的专一性和抗干扰性鉴 定同实施例 1。 0077 （4） 四苯基乙烯叠氮在聚集态下定量检测硫化氢。 0078 硫化氢的定量检测过程如下 ： 配制 510-4M 的四苯基乙烯叠氮的二甲基亚砜溶 液， 取 1mL 加入 10mL 容量瓶中， 再取 1mL 二甲基亚砜加入容量瓶中， 用移液枪吸取不同体积 的510-2M的NaHS水溶液加入容量瓶中， 用PH调整到7.4的HEPES缓冲溶液定容至10mL， 得到得到了四苯基乙烯叠氮浓度为 50M， NaHS 浓度为 10-250M 的水相含量为 80% 的一 系列混合溶液， 测试其荧光光谱。为了减小误差， 上。
36、述操作重复三次， 得到如 9 所示的检测 硫化氢的荧光增强曲线。 荧光增强倍数与硫化氢相对于四苯基乙烯叠氮的当量的关系同实 施例1。 即荧光强度在一定范围内随着硫化氢浓度的增长而增长， 其有效检测范围及响应的 下限由探针分子四苯基乙烯叠氮的浓度决定。 说 明 书 CN 103865522 A 9 1/6 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 10 2/6 页 11 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 11 3/6 页 12 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 12 4/6 页 13 图 7 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 13 5/6 页 14 图 8 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 14 6/6 页 15 图 9 说 明 书 附 图 CN 103865522 A 15 。