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1、(10)申请公布号 CN 103141433 A (43)申请公布日 2013.06.12 CN 103141433 A *CN103141433A* (21)申请号 201310073195.8 (22)申请日 2013.03.07 A01K 67/02(2006.01) A23K 1/14(2006.01) A23K 1/16(2006.01) (71)申请人 青岛农业大学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700 号 (72)发明人 刘宗柱 刘文华 李学民 张金玲 (54) 发明名称 维生素 A 临界缺乏家禽动物模型的构建方法 (57) 摘要 本发明涉及一种维生素 A 临界缺。
2、乏家禽动 物模型的构建方法， 以缺乏维生素 A 的纯化日 粮饲喂产蛋期的种禽， 降低其血清 VA 水平至 0.60-0.85mol/L， 并通过维生素 A 溶液饮水使 其保持在此水平， 所生产的种蛋经孵化得到 1 日 龄的维生素 A 临界缺乏的家禽动物模型。应用本 方法所建立的动物模型既具有维生素 A 临界缺乏 的特征， 又具有足够强壮的体质存活至 5 周龄以 上， 并且具有群体内整齐度高、 性能稳定， 方便于 商业化制备的特点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附。
3、图1页 (10)申请公布号 CN 103141433 A CN 103141433 A *CN103141433A* 1/1 页 2 1. 一种维生素 A 临界缺乏家禽动物模型的构建方法， 其特征在于 ： 以缺乏维生素 A 的 纯化日粮饲喂产蛋期的种禽降低其血清VA水平至0.60-0.85mol/L， 并通过维生素A溶液 饮水使其保持在此水平， 所生产的种蛋经孵化得到 1 日龄的 VA 临界缺乏家禽动物模型。 2. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述缺乏维生素 A 的纯化日粮包括以下 重量份数比的原料 ： 酪蛋白 15.0-25.0， DL- 蛋氨酸 1.5-4.5， 玉米淀粉 。
4、10.0-18.0， 蔗糖 40.0-60.0， 纤维素 4.0-6.0， 玉米油 4.0-6.0， 微量元素预混料 3.5， 维生素预混料 1.0 ； 所 述维生素 A 溶液包括以下重量份数比的原料 ： 维生素 A 油 （含量 1000000IU/g） 0.1， 丙二 醇 10.0-15.0， Span60 10.0-15.0， Tween80 8.0-12.0， BHT 0.3， 焦亚硫酸钠 0.3， 纯化水 60-70 份。 3. 如权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 配制纯化日粮所用的微量元素预混料按美 国 NRC 推荐的家禽营养标准配制， 维生素预混料除不含维生素 A 外， 其。
5、余成分均按美国 NRC 推荐的家禽营养标准配制。 4.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 为保持种禽血清维生素A的水平稳定以及动 物模型具有足够健康的体质， 通过饮水补充维生素 A 溶液的剂量， 以日粮浓度重量比例计 算分别为 600IU/kg（种禽） 和 300IU/kg（雏鸡） 。 5. 如权利要求 1 所述家禽动物模型， 其特征在于， 所述的家禽为蛋鸡、 肉鸡、 肉鸭、 鹅以 及鹌鹑等。 权 利 要 求 书 CN 103141433 A 2 1/4 页 3 维生素 A 临界缺乏家禽动物模型的构建方法 0001 Construction of model poultry with ma。
6、rginal vitamin A deficiency 技术领域 0002 本发明属于动物营养相关科研、 兽医临床评价和实验动物学领域， 涉及营养缺乏 症动物模型的构建方法， 尤其是涉及一种家禽维生素 A 临界缺乏动物模型的构建方法。 背景技术 0003 近年来， 随着家禽营养与免疫学的发展， 维生素 A 的营养免疫调节作用日益受到 人们重视。维生素 A 通过其在动物体内的代谢产物视黄酸， 在家禽的呼吸道黏膜、 消化道黏 膜、 体液免疫以及细胞免疫等方面均有重要的调节作用。然而， 在研究在维生素 A 的营养 免疫调节及其作用机制方面的研究中， 构建家禽维生素 A 临界缺乏的动物模型成为瓶颈环 。
7、节。目前虽然已有通过饲喂缺乏维生素 A 的纯化日粮构建动物模型的报道， 但其技术手段 还主要存在以下问题 ： 由于家禽肝脏储存有比较多的维生素 A， 往往需要饲喂很长一段 时间的缺乏维生素 A 的纯化日粮， 才能表现出维生素 A 临界缺乏。由于构建时间较长， 而 家禽生长周期短 （例如商品肉鸡仅需 40 天左右出栏） ， 进行早期的试验 （如 1-2 周龄） 难以实 现。由于鸡对普通维生素 A 的吸收、 转运等环节变异很大， 往往同样处理的群体内不同个 体维生素 A 的营养水平参差不齐。直接采用缺乏维生素 A 的纯化日粮构建模型， 容易引 起动物维生素 A 重度缺乏而丧失食欲， 进而引起蛋白 。
8、- 能量营养失调导致死亡。 发明内容 0004 鉴于现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种构建维生素 A 临界缺乏的 1 日 龄雏禽动物模型。通过本方法构建的维生素 A 临界缺乏动物模型， 具有群体内整齐度高， 性 能稳定等特点， 可满足兽医临床维生素A补充剂的疗效评价、 维生素A营养免疫调节及其机 制的科学研究、 实验动物学其他相关研究等的需要。 0005 为了解决背景技术所存在的问题， 本发明采用以下技术方案 ： 配制缺乏维生素A的纯化日粮， 包括以下重量份数比的原料 ： 酪蛋白15.0-25.0， DL-蛋 氨酸 1.5-4.5， 玉米淀粉 10.0-18.0， 蔗糖 40.0-60。
9、.0， 纤维素 4.0-6.0， 玉米油 4.0-6.0， 微 量元素预混料 3.5， 维生素预混料 1.0。其中， 微量元素预混料按美国 NRC 推荐公布的家禽 营养标准配制， 维生素预混料除不含维生素 A 外， 其余成分均按美国 NRC 推荐的家禽营养 标准配制。另外配制维生素 A 微乳溶液， 包括以下重量份数比的原料 ： 维生素 A 油 （含量 1000000IU/g） 0.1， 丙二醇 10.0-15.0， Span60 10.0-15.0， Tween80 8.0-12.0， BHT 0.3， 焦 亚硫酸钠 0.3， 纯化水 60-70 份。通过维生素 A 溶液饮水可以灵活调整家禽维。
10、生素 A 摄入 量。选择 18-25 周龄的父母代种禽， 饲喂缺乏维生素 A 的纯化日粮， 每间隔 1 周翅静脉采血 测定血清维生素 A 含量。待种禽血清维生素 A 水平降低至 0.60-0.85mol/L 后， 通过饮水 调整其摄入维生素 A 水平稳定在 600IU/kg 日粮。在此范围内， 不影响其产蛋率和孵化率， 种蛋孵出的雏禽即达到维生素 A 的临界缺乏状态， 而又不至于由于体质太弱而发生早期死 说 明 书 CN 103141433 A 3 2/4 页 4 亡。出壳雏禽饲喂缺乏维生素 A 的纯化日龄， 配合维生素 A 微乳溶液饮水， 调整其摄入维生 素 A 日粮水平为 300IU/kg。
11、， 即可维持雏禽的维生素 A 临界缺乏状态。 0006 优选地， 配制缺乏维生素 A 的纯化日粮， 包括以下重量份数比的原料 ： 酪蛋白 18.0-22.0， DL- 蛋氨酸 1.7-4.2， 玉米淀粉 12.0-16.0， 蔗糖 42.0-55.0， 纤维素 4.5-5.5， 玉 米油 4.5-5.5， 微量元素预混料 3.5， 维生素预混料 1.0。其中， 微量元素预混料按美国 NRC 推荐公布的家禽营养标准配制， 维生素预混料除不含维生素A外， 其余成分均按美国NRC推 荐的家禽营养标准配制。 另外配制维生素A微乳溶液， 包括以下重量份数比的原料 ： 维生素 A 油 （含量 100000。
12、0IU/g） 0.1， 丙二醇 10.0-12.0， Span60 12.0-15.0， Tween80 8.0-10.0， BHT 0.3， 焦亚硫酸钠 0.3， 纯化水 60-65 份。选择 19-22 周龄的父母代种禽， 饲喂缺乏维生 素 A 的纯化日粮， 每间隔 1 周翅静脉采血测定血清维生素 A 含量。待种禽血清维生素 A 水 平降低至 0.60-0.85mol/L 后， 通过饮水调整其摄入维生素 A 水平稳定在 600IU/kg 日粮。 在此范围内， 不影响其产蛋率和孵化率， 种蛋孵出的雏禽即达到维生素 A 的临界缺乏状态， 而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。出壳雏禽饲喂缺乏维。
13、生素 A 的纯化日龄， 配合 维生素 A 微乳饮水剂， 调整其摄入维生素 A 日粮水平为 120IU/kg， 即可维持雏禽的维生素 A 临界缺乏状态。 0007 进一步优选地， 配制缺乏维生素 A 的纯化日粮， 包括以下重量份数比的原料 ： 酪蛋 白 19.0-20.0， DL- 蛋氨酸 1.9-4.0， 玉米淀粉 14.0-15.0， 蔗糖 44.0-52.0， 纤维素 4.7-5.2， 玉米油4.7-5.2， 微量元素预混料3.5， 维生素预混料1.0。 其中， 微量元素预混料按美国NRC 推荐公布的家禽营养标准配制， 维生素预混料除不含维生素A外， 其余成分均按美国NRC推 荐的家禽营养。
14、标准配制。 另外配制维生素A微乳溶液， 包括以下重量份数比的原料 ： 维生素 A 油 （含量 1000000IU/g） 0.1， 丙二醇 10.0-11.0， Span60 12.0-14.0， Tween80 9.0-10.0， BHT 0.3， 焦亚硫酸钠 0.3， 纯化水 62-65 份。选择 20-22 周龄的父母代种禽， 饲喂缺乏维生 素 A 的纯化日粮， 每间隔 1 周翅静脉采血测定血清维生素 A 含量。待种禽血清维生素 A 水 平降低至 0.60-0.85mol/L 后， 通过饮水调整其摄入维生素 A 水平稳定在 600IU/kg 日粮。 在此范围内， 不影响其产蛋率和孵化率， 。
15、种蛋孵出的雏禽即达到维生素 A 的临界缺乏状态， 而又不至于由于体质太弱而发生早期死亡。出壳雏禽饲喂缺乏维生素 A 的纯化日龄， 配合 维生素A微乳饮水， 调整其摄入维生素A日粮水平为120IU/kg， 即可维持雏禽的维生素A临 界缺乏状态。 0008 所述的家禽为蛋鸡、 肉鸡、 肉鸭、 鹅以及鹌鹑等。 0009 与现有技术相比， 本发明公开的家禽维生素 A 临界缺乏动物模型的构建方法具有 如下优点和显著进步 ： 可以得到 1 日龄雏禽维生素 A 临界缺乏模型， 便于进行早期的试 验研究。通过本方法构建的动物模型， 群体内整齐度高。通过本方法构建的动物模型， 既具有维生素 A 临界缺乏的特点，。
16、 又具有足够的抗逆能力。本方法配制缺乏维生素 A 的 纯化日粮， 通过饮水调整维生素A的摄入水平， 与直接配制低含量维生素A的纯化日粮相比 较， 更加方便灵活， 并且可以避免日粮配制后由于维生素 A 降解而导致的建模不确定性。 具体实施方式 0010 以下是本发明的具体实施例， 对本发明的技术方案做进一步作描述， 但是本发明 的保护范围并不限于这些实施例。 凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发 说 明 书 CN 103141433 A 4 3/4 页 5 明的保护范围之内。 0011 实施例一 ： 肉仔鸡维生素 A 临界缺乏动物模型的构建 配制缺乏维生素 A 的纯化日粮， 包括以下。
17、重量份数比的原料 ： 酪蛋白 20.0， DL- 蛋氨酸 3.0， 玉米淀粉15.0， 蔗糖50.0， 纤维素5.0， 玉米油5.0， 微量元素预混料3.5， 维生素预混料 1.0。其中， 微量元素预混料按美国 NRC 推荐公布的家禽营养标准配制， 维生素预混料除不 含维生素A外， 其余成分均按美国NRC推荐的家禽营养标准配制。 另外配制维生素A微乳溶 液， 包括以下重量份数比的原料 ： 维生素 A 油 （含量 1000000IU/g） 0.1， 丙二醇 10.0， Span60 12.0， Tween80 10.0， BHT 0.3， 焦亚硫酸钠 0.3， 纯化水 62 份。选择 20 周龄。
18、的罗斯 308 父 母代种鸡， 饲喂缺乏维生素 A 的纯化日粮， 每间隔 1 周翅静脉采血测定血清维生素 A 含量。 经过 12 周的饲喂试验， 种鸡血清维生素 A 水平降低至 0.60-0.85mol/L 的范围后， 通过维 生素 A 微乳制剂饮水调整其摄入维生素 A 水平稳定在 600IU/kg 日粮。在此范围内， 不影响 其产蛋率和孵化率， 种蛋孵出的雏禽即达到维生素 A 的临界缺乏状态， 而又不至于由于体 质太弱而发生早期死亡。 0012 由上述实验的种鸡生产的受精种蛋， 按常规孵化程序孵化， 出壳雏鸡的血清 VA 介 于 0.35-0.70mol/L， 符合 VA 临界缺乏动物模型的。
19、要求。 0013 实施例二 ： 肉仔鸡维生素 A 临界缺乏动物模型的验证与应用 为了进一步验证本发明所构建的肉仔鸡维生素 A 临界缺乏模型， 设计如下实验。 0014 1. 材料与方法 1.1 试验动物 选取由实施实例 1 所得到的 1 日龄罗斯 308 出壳雏鸡 120 羽， 随机分为 3组， 每组40羽 ： I组为临界缺乏组， 饲喂纯化饲料， 并通过维生素A纳米微乳饮水调整日粮 VA 水平为 300IU/kg ； II 组为空白组， 只饲喂纯化日粮组， 不补充维生素 A ； III 组为阳性对 照， 饲喂纯化日粮， 并通过维生素 A 纳米微乳饮水调整日粮 VA 水平为 12000IU/kg。
20、 ； 另取罗 斯 308 普通种蛋孵化的雏鸡 40 羽作为阴性对照 （IV 组） ， 只饲喂纯化日粮。 0015 1.2 试验方法 各组动物单笼饲养， 自由采食， 自由饮水。通过饮水补充维生素的 实验组， 维生素加入到适量饮水中， 于 2-3 小时内饮用完毕。饲养过程中各日龄温湿度控制 按罗斯 308 种禽公司推荐的程序。 0016 1.3 样品采集与指标测定 分别于 1 日龄、 7 日龄每组随机取 10 羽断头取血， 分别 于 14 日龄、 21 日龄、 28 日龄、 35 日龄、 42 日龄每组随机取 10 羽翅静脉采血。采集的血液样 品分离血清， 通过高效液相色谱法测定维生素 A 浓度。。
21、 0017 2. 试验结果 2.1 一般健康状况 试验 I 组的动物至试验结束时有 2 只死亡， 剖检表现出肾脏苍白， 爪、 喙无光泽等典型 的 VA 临界缺乏症状。存活的鸡只也表现出羽毛松乱、 生长迟缓等， 符合家禽 VA 临界缺乏的 症状表现。 0018 试验 II 组的试验动物由于饲料中缺乏 VA， 于第 3 周开始出现较多死亡， 第 4 周大 部分死亡， 表现出典型的 VA 缺乏症状。 0019 试验 III 组由于通过饮水补充了高水平的 VA， 健康状况及生长良好， 试验期内仅 仅发生 1 例死亡。 0020 试验 IV 组于第 2 周开始出现零星死亡， 第 5 周大部分死亡。死亡的。
22、动物剖检表现 说 明 书 CN 103141433 A 5 4/4 页 6 出典型的 VA 缺乏症状。 0021 2.2 血清 VA 含量 试验期内各试验组动物血清 VA 含量的变化如图 1 所示。 0022 附图说明 ： 图 1 是试验期内各实验组动物血清 VA 含量变化趋势图。 0023 由图 1 可见， I 组动物血清 VA 含量介于 0.50mol/L-0.68mol/L 之间， 一直保 持在相对稳定的水平， 并且群体内VA含量水平变异很小， 符合家禽VA临界缺乏动物模型的 有关要求。 0024 II 组动物血清 VA 含量下降很快， 第 2 周即降至临界缺乏水平 （0.35mol/L。
23、） 之 下， 群体内不同动物个体间血清 VA 水平变异较小。说明本方法建立的动物模型可用于 VA 缺乏症的相关研究。 0025 III 组动物血清 VA 水平逐渐升高， 群体内不同动物个体间血清 VA 水平变异较小， 说明本方法建立的动物模型可以对饮食补充的 VA 做出良好的响应。 0026 IV 组动物血清 VA 含量 1 日龄时处于较高水平， 之后迅速降低， 群体内不同个体血 清 VA 水平变异较大， 建立模型过程中伴随大量死亡。 0027 3. 实验结论 通过本方法建立的家禽 VA 临界缺乏动物模型， 血清 VA 水平稳定， 含量范围符合 VA 临 界缺乏的有关指标要求。模型动物健康状况可满足一般试验的要求， 建立的动物模型对补 充的 VA 具有良好的响应， 有效解决的目前动物模型构建中所存在的问题。 说 明 书 CN 103141433 A 6 1/1 页 7 说 明 书 附 图 CN 103141433 A 7 。