一种草夹竹桃苷的提纯工艺.pdf

摘要
申请专利号：	CN201310373779.7	申请日：	2013.08.26
公开号：	CN103408611A	公开日：	2013.11.27
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07H 15/203申请公布日:20131127\|\|\|公开
IPC分类号：	C07H15/203; C07H1/08	主分类号：	C07H15/203
申请人：	南京泽朗医药科技有限公司
发明人：	刘东锋; 万冬梅
地址：	210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼
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内容摘要

本发明公开了一种草夹竹桃苷的提纯工艺，方法是以番茄的愈伤组织为原料，加入乙醇溶液，微波提取，提取液回收乙醇，浸膏加热水溶解，加入极性大孔树脂柱吸附，洗脱，洗脱液通过超滤膜超滤，纳滤膜浓缩，干燥得到粗品，用热水溶解，放置沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。本发明所述方法的先进性和实用价值在于，应用本方法所制备的草夹竹桃苷纯度高，方法简便实用，易于工业化。

权利要求书

权利要求书
1.  一种草夹竹桃苷的提纯工艺，其特征在于包含以下步骤：
1）用醇类溶液对番茄的愈伤组织进行微波提取，得到提取液；
2）上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加热水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液；
3）上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，浓缩液干燥得到粗品；
4）上述粗品用热水溶解，放冷沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。

2.  如权利要求1所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤1）中对番茄的愈伤组织进行粉碎处理，控制粒径为20-60目。

3.  如权利要求1所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤1）中醇类溶液为20-40%乙醇水溶液，优选35%乙醇水溶液。

4.  如权利要求1至3中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤1）中固液体积比为1:8-1:13，优选1:12。

5.  如权利要求1至3中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤1）中微波功率为1-10kw，提取2-3次，每次20-40min。

6.  如权利要求1至3中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤2）中大孔树脂可选AB-8、D101、SPD100、HPD100和HZ830中一种。

7.  如权利要求1至3中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤2）中洗脱剂为3-5BV水→5-7BV55-70%乙醇。

8.  如权利要求1至3中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤3）中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量100的中空复合膜，进口压力控制0.4-0.9Mpa。

9.  根据权利要求1所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤4）中热水控制温度为80-100℃，用量为粗品重量的5-8倍量（V/W）。

说明书

说明书一种草夹竹桃苷的提纯工艺
技术领域
本发明涉及一种草夹竹桃苷的提纯工艺，属于医药领域。
背景技术
草夹竹桃苷（Androsin）为苯乙酮苷类化合物，分子式为C15H20O8，分子量328.32，易溶于热水、甲醇，难溶于冷水，结构式为：

草夹竹桃苷来源于茄科(Solanaceae) 番茄Lycopersicon esculentum L.愈伤组织。现代药理研究表明草夹竹桃苷具有多种生活性：对CCl4和GalN诱导的大鼠肝细胞中毒有弱的抗肝毒活性；支气管扩张作用，豚鼠吸入本品,能防止由致敏原ovalbumin和PAF诱导的支气管障碍，可作为先导化合物；抑制由酵母多糖诱导的化学荧光；显著抑制11β－羟基酶的活性，抑制去氧皮质酮转化为皮质酮。
目前尚未见草夹竹桃苷工业分离制备方法的相关报道。
发明内容
本发明目的是提供一种简单、提率较高的草夹竹桃苷提纯工艺。
本发明是通过以下技术方案实现的：
1）用醇类溶液对番茄的愈伤组织进行微波提取，得到提取液；
2）上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加热水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液；
3）上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，浓缩液干燥得到粗品；
4）上述粗品用热水溶解，放冷沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。
所述步骤1）中对番茄的愈伤组织进行粉碎处理，控制粒径为20-60目。
所述步骤1）中醇类溶液为20-40%乙醇水溶液，优选35%乙醇水溶液。
所述步骤1）中固液体积比为1:8-1:13，优选1:12。
所述步骤1）中微波功率为1-10kw，提取2-3次，每次20-40min。
所述步骤2）中大孔树脂可选AB-8、D101、SPD100、HPD100和HZ830中一种。
所述步骤2）中洗脱剂为3-5BV水→5-7BV55-70%乙醇。
所述步骤3）中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量100的中空复合膜，进口压力控制0.4-0.9Mpa。
所述步骤4）中热水控制温度为80-100℃，用量为粗品重量的5-8倍量（V/W）。
本发明采用大孔树脂吸附，富集量大，除杂质效果好；洗脱液用生物膜截流浓缩，能耗低，并且避免温度过高发生物质变化；根据草夹竹桃苷溶于热水，在冷水中给溶解度下降的性质采用自然放冷沉淀的方法，步骤简单，无能耗，节省成本；整个工艺操作简单，不使用挥发毒性溶剂，废液可回收再利用，安全环保。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
具体实施方式：
实施例1：
将番茄的愈伤组织粉碎至20目，取5kg投入微波提取罐，加入60L35%乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为10kW，提取3次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L D101大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用20L60%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量3000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.8Mpa得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的8倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为80℃，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为85.5%。
实施例2：
将番茄的愈伤组织粉碎至60目，取5kg投入微波提取罐，加入60L35%乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为1kW，提取1次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L AB-8大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用35L55%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量10000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.5Mpa得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的5倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为100℃，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为76.5%。
实施例3：
将番茄的愈伤组织粉碎至80目，取5kg投入微波提取罐，加入60L35%乙醇溶液微波提取2h，微波提取功率为5kW，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L SPD100大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用28L70%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量6000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.6Mpa得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的8倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为100℃，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为75.8%。
实施例4：
将番茄的愈伤组织粉碎至60目，取5kg投入微波提取罐，加入60L35%乙醇溶液微波提取1.5h，微波提取功率为4kW，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L HPD100大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用30L60%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量3000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.4Mpa得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的6倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为90℃，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为85.2%。
实施例5：
将番茄的愈伤组织粉碎至40目，取5kg投入微波提取罐，加入60L35%乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为8kW，提取2次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L HZ830大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用25L40%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量6000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.9Mpa得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的7倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为90℃，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为85.6%。

资源描述

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1、(10)申请公布号 CN 103408611 A (43)申请公布日 2013.11.27 CN 103408611 A *CN103408611A* (21)申请号 201310373779.7 (22)申请日 2013.08.26 C07H 15/203(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人南京泽朗医药科技有限公司地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边 108 号 05 幢 6 楼 (72)发明人刘东锋万冬梅 (54) 发明名称一种草夹竹桃苷的提纯工艺 (57) 摘要本发明公开了一种草夹竹桃苷的提纯工艺，方法是以番茄的愈伤组织。

2、为原料，加入乙醇溶液，微波提取，提取液回收乙醇，浸膏加热水溶解，加入极性大孔树脂柱吸附，洗脱，洗脱液通过超滤膜超滤，纳滤膜浓缩，干燥得到粗品，用热水溶解，放置沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。本发明所述方法的先进性和实用价值在于，应用本方法所制备的草夹竹桃苷纯度高，方法简便实用，易于工业化。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书3页 (10)申请公布号 CN 103408611 A CN 103408611 A *CN103408611A* 1/1 页 2。

3、 1. 一种草夹竹桃苷的提纯工艺，其特征在于包含以下步骤： 1）用醇类溶液对番茄的愈伤组织进行微波提取，得到提取液； 2）上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加热水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液； 3）上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，浓缩液干燥得到粗品； 4）上述粗品用热水溶解，放冷沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。 2. 如权利要求 1 所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 1）中对番茄的愈伤组织进行粉碎处理，控制粒径为 20-60 目。 3. 如权利要。

4、求 1 所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 1）中醇类溶液为 20-40% 乙醇水溶液，优选 35% 乙醇水溶液。 4. 如权利要求 1 至 3 中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 1）中固液体积比为 1:8-1:13，优选 1:12。 5. 如权利要求 1 至 3 中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 1）中微波功率为 1-10kw，提取 2-3 次，每次 20-40min。 6. 如权利要求 1 至 3 中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 2）中大孔树脂可选 AB-8、 D101、。

5、 SPD100、 HPD100 和 HZ830 中一种。 7. 如权利要求 1 至 3 中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 2）中洗脱剂为 3-5BV 水 5-7BV55-70% 乙醇。 8. 如权利要求 1 至 3 中任一项所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 3）中超滤膜为截留分子量 3000-10000 的中空复合膜，纳滤膜为截留分子量 100 的中空复合膜，进口压力控制 0.4-0.9Mpa。 9. 根据权利要求 1 所述的草夹竹桃苷提纯工艺，其特征在于：所述步骤 4）中热水控制温度为 80-100，用量为粗品重量的 5-。

6、8 倍量（V/W）。权利要求书 CN 103408611 A 2 1/3 页 3 一种草夹竹桃苷的提纯工艺技术领域 0001 本发明涉及一种草夹竹桃苷的提纯工艺，属于医药领域。背景技术 0002 草夹竹桃苷（Androsin）为苯乙酮苷类化合物，分子式为 C15H20O8，分子量 328.32，易溶于热水、甲醇，难溶于冷水，结构式为：草夹竹桃苷来源于茄科 (Solanaceae) 番茄 Lycopersicon esculentum L. 愈伤组织。现代药理研究表明草夹竹桃苷具有多种生活性：对 CCl4 和 GalN 诱导的大鼠肝细胞中毒有弱的抗。

7、肝毒活性；支气管扩张作用，豚鼠吸入本品,能防止由致敏原ovalbumin和PAF诱导的支气管障碍，可作为先导化合物；抑制由酵母多糖诱导的化学荧光；显著抑制 11 羟基酶的活性，抑制去氧皮质酮转化为皮质酮。 0003 目前尚未见草夹竹桃苷工业分离制备方法的相关报道。发明内容 0004 本发明目的是提供一种简单、提率较高的草夹竹桃苷提纯工艺。 0005 本发明是通过以下技术方案实现的： 1）用醇类溶液对番茄的愈伤组织进行微波提取，得到提取液； 2）上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加热水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再。

8、用乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液； 3）上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，浓缩液干燥得到粗品； 4）上述粗品用热水溶解，放冷沉淀，过滤得到草夹竹桃苷。 0006 所述步骤 1）中对番茄的愈伤组织进行粉碎处理，控制粒径为 20-60 目。 0007 所述步骤 1）中醇类溶液为 20-40% 乙醇水溶液，优选 35% 乙醇水溶液。 0008 所述步骤 1）中固液体积比为 1:8-1:13，优选 1:12。 0009 所述步骤 1）中微波功率为 1-10kw，提取 2-3 次，每次 20-40min。 0010 所述步骤 2）中大孔树脂可选 A。

9、B-8、 D101、 SPD100、 HPD100 和 HZ830 中一种。 0011 所述步骤 2）中洗脱剂为 3-5BV 水 5-7BV55-70% 乙醇。 0012 所述步骤 3）中超滤膜为截留分子量 3000-10000 的中空复合膜，纳滤膜为截留分说明书 CN 103408611 A 3 2/3 页 4 子量 100 的中空复合膜，进口压力控制 0.4-0.9Mpa。 0013 所述步骤 4）中热水控制温度为 80-100，用量为粗品重量的 5-8 倍量（V/W）。 0014 本发明采用大孔树脂吸附，富集量大，除杂质效果好；洗脱液用生物膜截流浓缩，能耗。

10、低，并且避免温度过高发生物质变化；根据草夹竹桃苷溶于热水，在冷水中给溶解度下降的性质采用自然放冷沉淀的方法，步骤简单，无能耗，节省成本；整个工艺操作简单，不使用挥发毒性溶剂，废液可回收再利用，安全环保。 0015 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。 0016 具体实施方式：实施例 1 ：将番茄的愈伤组织粉碎至 20 目，取 5kg 投入微波提取罐，加入 60L35% 乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为10kW，提取3次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L。

11、 D101大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用20L60%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量 3000 的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量 100 的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 0.8Mpa 得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的 8 倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为 80，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为 85.5%。 0017 实施例 2 ：将番茄的愈伤组织粉碎至 60 目，取 5kg 投入微波提取罐，加入 60L35% 乙醇溶液微波提取 1h，微波提取功率为 1kW，提。

12、取 1 次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L AB-8大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用35L55%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量 10000 的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量 100 的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 0.5Mpa 得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的 5 倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为 100，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为 76.5%。 0018 实施例 3 ：将番茄的愈伤组织粉碎至 80 目，取 5kg 投入。

13、微波提取罐，加入 60L35% 乙醇溶液微波提取2h，微波提取功率为5kW，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L SPD100大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用28L70%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量 6000 的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量 100 的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 0.6Mpa 得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的 8 倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为 100，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为 75.8%。。

14、 0019 实施例 4 ：将番茄的愈伤组织粉碎至 60 目，取 5kg 投入微波提取罐，加入 60L35% 乙醇溶液微波提取1.5h，微波提取功率为4kW，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L HPD100大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用30L60%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量 3000 的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量 100 的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 0.4Mpa 得浓缩液，浓缩说明书 CN 103408611 A 4 3/3 页 5 液干燥得到粗品。

15、，用粗品重量的 6 倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为 90，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为 85.2%。 0020 实施例 5 ：将番茄的愈伤组织粉碎至 40 目，取 5kg 投入微波提取罐，加入 60L35% 乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为8kW，提取2次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入 5L HZ830 大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用 25L40% 乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量 6000 的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量 100 的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 0.9Mpa 得浓缩液，浓缩液干燥得到粗品，用粗品重量的 7 倍量（V/W）的热水溶解，热水控制温度为 90，放冷沉淀，过滤、冷冻干燥即得草夹竹桃苷，含量为 85.6%。说明书 CN 103408611 A 5 。

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