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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410762713.1 (22)申请日 2014.12.14 A61K 39/42(2006.01) A61P 31/14(2006.01) A61P 31/16(2006.01) (71)申请人 郑州后羿制药有限公司 地址 451100 河南省郑州市新郑市港区新港 大道东侧 (72)发明人 徐进 李建正 郭俊清 (74)专利代理机构 郑州中原专利事务所有限公 司 41109 代理人 张春 乔玉萍 (54) 发明名称 一种四联卵黄抗体口服液及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种卵黄抗体口服液及其制备 方法。 其配方在于， 包。
2、括以下按照体积比计算的原 料 ： 含鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体的全蛋水溶液 95-105、 辛酸 0.2-0.3、 甲醛 0.2-0.3、 硫柳汞 0.01-0.02 ； 还包 括800-1000单位 / 毫升口服液的青链霉素。 这种 方法制备的卵黄抗体口服液不仅使生产过程中损 失少、 免疫活性物质强多、 生物活性高、 无临床副 作用， 同时， 含有蛋清中大量的各种蛋白质， 可以 减少口服时对抗体的不良影响。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 (10)申请公布号 CN 104383。
3、538 A (43)申请公布日 2015.03.04 CN 104383538 A 1/1 页 2 1. 一种四联卵黄抗体口服液， 其特征在于 ： 包括以下按照体积比计算的原料 ： 含卵 黄抗体的全蛋水溶液 95-105、 辛酸 0.2-0.3、 甲醛 0.2-0.3、 硫柳汞 0.01-0.02 ； 还包括 800-1000 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 2. 根据权利要求 1 所述的四联卵黄抗体口服液， 其特征在于 ： 所述卵黄抗体为鸡新城 疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体。 3. 根据权利要求 2 所述的四联卵黄抗体口服液的制备方法， 其特征在于具体步骤是 ：。
4、 1） 采用鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活疫苗对鸡只进行强化 免疫 ： 采用三次免疫程序， 每次间隔 10 天， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 当抗体效价达到 1 ： （128-256） 时， 进行高免蛋收集 ； 2） 使用 0.1-0.2% 新洁尔灭对高免蛋进行消毒 ； 3） 将 2） 中高免蛋的全蛋液进行乳化， 乳化时间 7-10min， 然后加入 pH 为 4.2-4.3 的、 温度为 4-6的盐酸酸化水， 盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的 5.5-6.5 倍， 混匀后， 降 温至 3-5， 静置 18-24 小时 ； 4） 取 3） 中的上层清液， 升温到。
5、 25-32， 加入辛酸， 搅拌 1-2h， 静置 10-12h， 过滤 ； 其中 辛酸体积量 ： 上层清液体积量为 （0.2-0.3） ：（95-105） ； 5） 加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素， 使卵黄抗体的全蛋水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞的体积 比为 （95-105） ：（0.2-0.3） ：（0.2-0.3） ：（0.01-0.02） ， 青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 毫升口服液 ； 6） 分装， 保存。 4. 根据权利要求 3 所述的四联卵黄抗体口服液的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 4） 过 滤时依次通过 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的。
6、滤膜进行过滤。 权 利 要 求 书 CN 104383538 A 2 1/6 页 3 一种四联卵黄抗体口服液及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于禽类用生物制品技术领域， 涉及一种四联卵黄抗体口服液及其制备方 法。 背景技术 0002 鸡新城疫 （NewCastledisease） 又名亚洲鸡瘟或伪鸡瘟， 由副粘病毒引起的高度接 触性传染病， 本病是一种急性、 败血性传染病。主要特征是呼吸困难、 便稀、 神经紊乱、 粘膜 和浆膜出血。 死亡率高， 对养鸡业为害严重。 1926年首先发现于印度尼西亚， 不久又在英国 新城发现， 世界各国均有流行记载。 0003 禽流感 （avian inf。
7、luenza;AI） 又名真鸡瘟， 由禽流感病毒 (AIV) 所引起的一种主 要流行于鸡群中的烈性传染病。高致病力毒株可致禽类突发死亡， 是国际兽疫局规定的 A 类疫病， 也能感染人。禽流感最早发生于 1878 的意大利。当时， 意大利发生鸡群大量死亡， 当时被称为鸡瘟。到 1955 年， 科学家证实其致病病毒为甲型流感病毒。此后， 这种疾病被 更名为禽流感。禽流感被发现 100 多年来， 人类并没有掌握特异性的预防和治疗方法， 仅能 以消毒、 隔离、 大量宰杀禽畜的方法防止其蔓延。 0004 鸡传染性支气管炎 (Infectious Bronchitis,IB) 是传染性支气管炎病毒引起的 。
8、鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病， 属冠状病毒科冠状病毒属。本病毒对环境抵抗力 不强， 对普通消毒药过敏， 对低温有一定的抵抗力。传染性支气管炎病毒具有很强的变异 性， 目前世界上已分离出 30 多个血清型。这些毒株中多数能使气管产生特异性病变， 有些 毒株能引起肾脏病变和生殖道病变。本病广泛流行于世界各地， 是养鸡业的重要疫病。 0005 鸡产蛋下降综合症也称鸡减蛋综合症 （EDS)。本病是 70 年代后期发现的， 是世界 性的商品蛋鸡和母鸡产蛋下降的一种病毒性疾病。群发性产蛋下降、 产蛋异常、 蛋体畸形、 蛋质低劣等症状状是本病患鸡的主要表现。尽管它只对产蛋鸡致病， 但其自然宿主是家鸭 。
9、和野鸭。 0006 卵黄抗体 IgY 是的一种免疫球蛋白 Ig， IgY 在功能上相当于哺乳动物 IgG， 但结构 上有所不同， 具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。 （1） 由于鸟 类与哺乳类动物种系发生学的差距， 鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄 抗体不会激发补体系统， 不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应， 不与哺乳动物和细菌的 Fc 受体结合， 这在免疫诊断中具有重要意义。 （2） 卵黄抗体量大， 成本低， 便于规模化生产。卵 黄中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上。总的来讲， 卵黄抗体 对动物没有毒副作用， 用卵黄抗体治疗动物疾病不。
10、但避免了血清价格昂贵、 产量低的缺点， 而且可以避免血清在治疗过程中引起的副作用， 是一种很有前途的新型免疫球蛋白制剂。 因此， 卵黄抗体在禽畜疾病诊断、 治疗和预防的应用越来越多。 发明内容 0007 本发明提供一种四联卵黄抗体口服液及其制备方法， 解决注射用的鸡新城疫、 传 说 明 书 CN 104383538 A 3 2/6 页 4 染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体使用不方便的问题。 0008 本发明的目的是通过以下形式实现的 ： 一种四联卵黄抗体口服液， 包括以下按照体积比计算的原料 ： 含卵黄抗体的全蛋水溶 液 95-105、 辛酸 0.2-0.3、 甲醛 0.2-0。
11、.3、 硫柳汞 0.01-0.02 ； 还包括 800-1000 单位 / 毫升口 服液的青链霉素。 0009 所述卵黄抗体为鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体。 0010 制备步骤是 ： 1） 采用鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活疫苗对鸡只进行强化 免疫 ： 采用三次免疫程序， 每次间隔 10 天， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 当抗体效价达到 1 ： （128-256） 时， 进行高免蛋收集 ； 2） 使用 0.1-0.2% 新洁尔灭对高免蛋进行消毒 ； 3） 将 2） 中高免蛋的全蛋液进行乳化， 乳化时间 7-10min， 然后加入。
12、 pH 为 4.2-4.3 的、 温度为 4-6的盐酸酸化水， 盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的 5.5-6.5 倍， 混匀后， 降 温至 3-5， 静置 18-24 小时 ； 4） 取 3） 中的上层清液， 升温到 25-32， 加入辛酸， 搅拌 1-2h， 静置 10-12h， 过滤 ； 其中 辛酸体积量 ： 上层清液体积量为 （0.2-0.3） ：（95-105） ； 5） 加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素， 使卵黄抗体的全蛋水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞的体积 比为 （95-105） ：（0.2-0.3） ：（0.2-0.3） ：（0.01-0.02） ， 青链霉素的含量为 80。
13、0-1000 单位 / 毫升口服液 ； 6） 分装， 保存。 0011 步骤 4） 过滤时依次通过 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜进行过滤。 0012 本发明通过对高免蛋全蛋提取、 低温酸化处理、 辛酸处理后得到澄清卵黄抗体口 服液。 本发明将全蛋使用到卵黄抗体的提取中， 可以直接在临床上进行口服使用， 蛋清中含 有大量的各类蛋白质， 可充分利用高免蛋的价值， 提高动物机体的免疫力和应激能力， 生物 利用度高， 具有生物活性不受影响的优点。 具体实施方式 0013 实施例 1 ： 一种鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体口服液的配方包括 以下原料 。
14、： 含卵黄抗体的全蛋水溶液 105 L、 辛酸 0.2 L、 甲醛 0.3 L、 硫柳汞 0.02 L， 以及 1000 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 0014 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 采用市售的鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活疫苗 （La Sota 株 +M41 株 +EDS76 株 +HP 株） 进行强化免疫， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 每次间隔 10 天， 进行三次免疫程序， 当抗体效价达到 1 ： 256 时， 开始收集高免蛋。 0015 2） 将收集高免蛋整理， 0.2% 新洁尔灭消毒， 备用。 0016 3） 水稀释法酸化处理 ： 将 。
15、2） 步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化， 乳化时 间 7min， 然后将乳化后的全蛋液加入 pH 为 4.2、 温度为 4的盐酸酸化水， 盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的 6 倍， 混匀， 放置 4环境中 18 小时静置沉淀， 取上清液 ； 盐酸酸化水是 说 明 书 CN 104383538 A 4 3/6 页 5 在水中加入盐酸使其 PH 值达到 4.2。 0017 4） 辛酸处理 ； 将步骤 3） 的上清液， 即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量， 升温到 25， 加入辛酸， 充分混匀 1h， 然后静置 10h ； 其中， 按体积比， 上层清液 ： 辛酸 =105 ： 0.2 ； 5） 。
16、对步骤 4） 所得澄清液依次用 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜过滤， 留取滤液 ； 6） 向步骤 5) 所得滤液加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素 ； 按体积比， 含卵黄抗体的全蛋全 蛋水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞=105 ： 0.2 ： 0.3 ： 0.02 ； 青链霉素在该口服液中的含量为1000 单位 / 毫升 ； 7） 分装， 保存。 0018 为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期， 做了以下试验 ： 将本品保存在 37培养箱中， 保存 24 个月， 分别 1 周、 2 周、 1 月、 2 月、 4 月、 8 月、 12 月、 16 月、 20 月、 24。
17、 月 后， 用琼脂扩散 （AGP） 法， 测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化， 结果见表 1。 0019 表 1. 常温放置口服液不同时间段效价的变化 结果显示 ： 卵黄抗体在常温的保存下可以存放 16 个月。 0020 质量标准 ： 性状 本品为淡黄色液体。 0021 无菌检验 按 中国兽药典 进行， 无菌生长。 0022 支原体检验 按 中国兽药典 进行， 无支原体生长。 0023 外源病毒检验 按 中国兽药典 进行， 符合规定。 0024 安全检验 用 7 日龄雏鸡 5 只， 各口服 5 羽份， 观察 2 周， 应全部健活。 0025 效力检验 1） 保护力检测 ： 用 7 日龄雏鸡。
18、 30 只， 其中 10 只， 每只口服 2 羽份卵黄抗体， 另 20 只对 照隔离饲养。24h， 取试验组和对照组中的 10 只雏鸡肌注接种 NDV、 IBV、 EDS、 AIV 稀释后病 毒液， 记录 96h 死亡情况， 试验组的保护率在 95% 以上， 攻毒对照组死亡率在 90% 以上， 空白 对照组雏鸡无任何变化。 0026 2） 治愈力测定 ： 用 7 日龄雏鸡 120 只， 40 只作阴性对照， 80 只点眼接种 NDV、 IBV、 EDS、 AIV 稀释的病毒液， 感染 12h 后， 其中 40 只， 每只口服本品 2 羽份， 每日 1 次， 连续 3 日， 另 40 只做阳性对。
19、照， 隔离饲养。治疗后 72h， 记录各组死亡情况， 攻毒阳性对照组死亡率在 95% 以上， 治疗组存活率在 92% 以上， 健康阴性对照组 40 只无任何变化。 0027 实施例 2 ： 一种鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体口服液的配方包括 以下原料 ： 含卵黄抗体的全蛋水溶液95 L、 辛酸0.2 L、 甲醛0.2 L、 硫柳汞0.01 L， 以及800 说 明 书 CN 104383538 A 5 4/6 页 6 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 0028 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 采用市售的鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活。
20、疫苗 （La Sota 株 +M41 株 +EDS76 株 +HP 株） 进行强化免疫， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 每次间隔 10 天， 进行三次免疫程序， 当抗体效价达到 1 ： 128 时， 开始收集高免蛋。 0029 2） 将收集高免蛋整理， 0.1% 新洁尔灭消毒， 备用。 0030 3） 水稀释法酸化处理 ： 将 2） 步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化， 乳化时 间10min， 然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.3、 温度为6的盐酸酸化水， 盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的 5.5 倍， 混匀， 放置 3环境中 24 小时静置沉淀， 取上清液 ； 盐酸酸化水 是在水中加入。
21、盐酸使其 PH 值达到 4.3。 0031 4） 辛酸处理 ； 将步骤 3） 的上清液， 即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量， 升温到 32， 加入辛酸， 充分混匀 2h， 然后静置 12h ； 其中， 按体积比， 上层清液 ： 辛酸 =95 ： 0.2 ； 5） 对步骤 4） 所得澄清液依次用 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜过滤， 留取滤液 ； 6） 向步骤 5) 所得滤液加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素 ； 按体积比， 含卵黄抗体的全蛋全蛋 水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞 =95 ： 0.2 ： 0.2 ： 0.01 ； 青链霉素在该口服液中的含量为 800 单 位。
22、 / 毫升 ； 7） 分装， 保存。 0032 为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期， 做了以下试验 ： 将本品保存在 37培养箱中， 保存 24 个月， 分别 1 周、 2 周、 1 月、 2 月、 4 月、 8 月、 12 月、 16 月、 20 月、 24 月 后， 用琼脂扩散 （AGP） 法， 测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化， 结果见表 1。结果见 表 2。 0033 表 2. 常温放置注射液不同时间段效价的变化 结果显示 ： 卵黄抗体在常温的保存下可以存放 16 个月。 0034 质量标准 ： 性状 本品为淡黄色液体。 0035 无菌检验 按 中国兽药典 进行， 无菌生长。
23、。 0036 支原体检验 按 中国兽药典 进行， 无支原体生长。 0037 外源病毒检验 按 中国兽药典 进行， 符合规定。 0038 安全检验 用 7 日龄雏鸡 5 只， 各口服 5 羽份， 观察 2 周， 应全部健活。 0039 效力检验 1） 保护力检测 ： 用 7 日龄雏鸡 30 只， 其中 10 只， 每只口服 2 羽份卵黄抗体， 另 20 只对 照隔离饲养。24h， 取试验组和对照组中的 10 只雏鸡肌注接种 NDV、 IBV、 EDS、 AIV 稀释后病 说 明 书 CN 104383538 A 6 5/6 页 7 毒液， 记录 96h 死亡情况， 试验组的保护率在 95% 以上。
24、， 攻毒对照组死亡率在 89% 以上， 空白 对照组雏鸡无任何变化。 0040 2） 治愈力测定 ： 用 7 日龄雏鸡 120 只， 40 只作阴性对照， 80 只点眼接种 NDV、 IBV、 EDS、 AIV 稀释的病毒液， 感染 12h 后， 其中 40 只， 每只口服本品 2 羽份， 每日 1 次， 连续 3 日， 另 40 只做阳性对照， 隔离饲养。治疗后 72h， 记录各组死亡情况， 攻毒阳性对照组死亡率在 90% 以上， 治疗组存活率在 95% 以上， 健康阴性对照组 40 只无任何变化。 0041 实施例 3 ： 一种鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体。
25、口服液的配方包括 以下原料 ： 含卵黄抗体的全蛋水溶液 100 L、 辛酸 0.3 L、 甲醛 0.3 L、 硫柳汞 0.02 L， 以及 1000 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 0042 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 采用市售的鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活疫苗 （La Sota 株 +M41 株 +EDS76 株 +HP 株） 进行强化免疫， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 每次间隔 10 天， 进行三次免疫程序， 当抗体效价达到 1 ： 256 时， 开始收集高免蛋。 0043 2） 将收集高免蛋整理， 0.2% 新洁尔灭消毒， 备用。 0044 3）。
26、 水稀释法酸化处理 ： 将 2） 步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化， 乳化时 间 8min， 然后将乳化后的全蛋液加入 pH 为 4.3、 温度为 5的盐酸酸化水， 盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的 6.5 倍， 混匀， 放置 5环境中 20 小时静置沉淀， 取上清液 ； 盐酸酸化水 是在水中加入盐酸使其 PH 值达到 4.3。 0045 4） 辛酸处理 ； 将步骤 3） 的上清液， 即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量， 升温到 30， 加入辛酸， 充分混匀 2h， 然后静置 11h ； 其中， 按体积比， 上层清液 ： 辛酸 =100 ： 0.3 ； 5） 对步骤 4） 所得澄清液依次用。
27、 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜过滤， 留取滤液 ； 6） 向步骤 5) 所得滤液加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素 ； 按体积比， 含卵黄抗体的全蛋全 蛋水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞=100 ： 0.3 ： 0.3 ： 0.02 ； 青链霉素在该口服液中的含量为1000 单位 / 毫升 ； 7） 分装， 保存。 0046 用 7 日龄雏鸡 100 只， 第一组 50 只作本产品组， 第二组 50 只作为阳性对照组， 隔 离饲养， 点眼接种 NDV、 IBV、 EDS、 AIV 稀释的病毒液， 表现出临床症状时， 开始治疗， 第一组 每只口服本品 2ml， 每日 1 。
28、次， 连续 3 日， 第四组生理盐水 2 ml， 每日 1 次， 连续 3 日。治疗 后 72h， 记录各组发病及治疗情况。表 3。 0047 表 3 实验情况 实施例 4 ： 一种鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体口服液的配方包括 以下原料 ： 含卵黄抗体的全蛋水溶液 103 L、 辛酸 0.3 L、 甲醛 0.2 L、 硫柳汞 0.01 L， 以及 1000 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 说 明 书 CN 104383538 A 7 6/6 页 8 0048 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 采用市售的鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭。
29、活疫苗 （La Sota 株 +M41 株 +EDS76 株 +HP 株） 进行强化免疫， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 每次间隔 10 天， 进行三次免疫程序， 当抗体效价达到 1 ： 128 时， 开始收集高免蛋。 0049 2） 将收集高免蛋整理， 0.1% 新洁尔灭消毒， 备用。 0050 3） 水稀释法酸化处理 ： 将 2） 步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化， 乳化时 间 9min， 然后将乳化后的全蛋液加入 pH 为 4.3、 温度为 6的盐酸酸化水， 盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的 5.5 倍， 混匀， 放置 5环境中 22 小时静置沉淀， 取上清液 ； 盐酸酸化水 是。
30、在水中加入盐酸使其 PH 值达到 4.3。 0051 4） 辛酸处理 ； 将步骤 3） 的上清液， 即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量， 升温到 28， 加入辛酸， 充分混匀 2h， 然后静置 12h ； 其中， 按体积比， 上层清液 ： 辛酸 =103 ： 0.3 ； 5） 对步骤 4） 所得澄清液依次用 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜过滤， 留取滤液 ； 6） 向步骤 5) 所得滤液加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素 ； 按体积比， 含卵黄抗体的全蛋全 蛋水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞=103 ： 0.3 ： 0.2 ： 0.01 ； 青链霉素在该口服液中的含量为10。
31、00 单位 / 毫升 ； 7） 分装， 保存。 0052 实施例 5 ： 一种鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联卵黄抗体口服液的配方包括 以下原料 ： 含卵黄抗体的全蛋水溶液99 L、 辛酸0.2 L、 甲醛0.3 L、 硫柳汞0.01 L， 以及800 单位 / 毫升口服液的青链霉素。 0053 其制备方法包括以下步骤 ： 1） 采用市售的鸡新城疫、 传染性支气管炎、 减蛋综合症、 禽流感四联灭活疫苗 （La Sota 株 +M41 株 +EDS76 株 +HP 株） 进行强化免疫， 每只鸡每次疫苗用量为 2ml， 每次间隔 10 天， 进行三次免疫程序， 当抗体效价达到。
32、 1 ： 256 时， 开始收集高免蛋。 0054 2） 将收集高免蛋整理， 0.2% 新洁尔灭消毒， 备用。 0055 3） 水稀释法酸化处理 ： 将 2） 步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化， 乳化时 间10min， 然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.2、 温度为4的盐酸酸化水， 盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的 6 倍， 混匀， 放置 5环境中 24 小时静置沉淀， 取上清液 ； 盐酸酸化水是 在水中加入盐酸使其 PH 值达到 4.2。 0056 4） 辛酸处理 ； 将步骤 3） 的上清液， 即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量， 升温到 30， 加入辛酸， 充分混匀 2h， 然后静置 12h ； 其中， 按体积比， 上层清液 ： 辛酸 =99 ： 0.2 ； 5） 对步骤 4） 所得澄清液依次用 1.0mm、 0.45mm、 0.22mm 的滤膜过滤， 留取滤液 ； 6） 向步骤 5) 所得滤液加入甲醛、 硫柳汞、 青链霉素 ； 按体积比， 含卵黄抗体的全蛋全蛋 水溶液 ： 辛酸 ： 甲醛 ： 硫柳汞 =99 ： 0.2 ： 0.3 ： 0.01 ； 青链霉素在该口服液中的含量为 800 单 位 / 毫升 ； 7） 分装， 保存。 说 明 书 CN 104383538 A 8 。