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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410650684.X (22)申请日 2014.11.14 A61K 38/40(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) (71)申请人 江南大学 地址 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道 1800 号 (72)发明人 庞庆丰 范红斌 杜斌 陈俊良 (54) 发明名称 乳铁蛋白在疼痛治疗中的应用 (57) 摘要 本发明属生物医药技术领域， 具体涉及乳铁 蛋白在疼痛治疗中的一种治疗方法。主要用于治 疗由于各种原因引起的疼痛。本实验证明了乳铁 蛋白对于临床疼痛患者具有显著。
2、的抗伤害作用且 不产生耐受， 可以显著抑制疼痛的时相反应， 乳 铁蛋白影响了脊髓神经元放电， 参与脊髓水平的 调制过程， 引起抗伤害性效应。 且其抗伤害性和抑 制NOS的表达呈剂量依赖性。 在自然条件下， 外源 性乳铁蛋白通常来源于哺乳动物， 是一种可以安 全使用的天然药物。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104367993 A (43)申请公布日 2015.02.25 CN 104367993 A 1/1 页 2 1. 乳铁蛋白在疼痛治疗中的一种治疗方法。 2. 根据权利要求 1 所述。
3、的乳铁蛋白在疼痛治疗中的一种治疗方法。其特征在于 ： 乳铁 蛋白对于临床疼痛患者具有显著的抗伤害作用且不产生耐受， 在自然条件下， 外源性乳铁 蛋白通常来源于哺乳动物， 是一种可以安全使用的天然药物。 使用方法为口服牛乳， 剂量为 500 750ml/ 天。 权 利 要 求 书 CN 104367993 A 2 1/3 页 3 乳铁蛋白在疼痛治疗中的应用 技术领域 0001 本发明公开了乳铁蛋白在临床疼痛治疗中的一种方法， 属于生物医药领域。 背景技术 0002 疼痛 (pain)， 是一种复杂的生理心理活动， 通常由导致组织损伤的伤害性刺激引 起， 是临床上最常见的症状之一。 痛觉可作为机体。
4、受到伤害的一种警告， 引起机体一系列防 御性保护反应 ； 但另一方面， 疼痛作为报警也有其局限性 ( 如癌症等出现疼痛时， 已为时太 晚 )， 而某些长期的剧烈疼痛， 对机体已成为一种难以忍受的折磨。 0003 乳铁蛋白 (lactoferrin， LF) 是动物初乳中的天然蛋白质， 是一种多功能蛋白质， 具有广谱抗菌、 抗氧化、 抗癌、 抗病毒感染作用， 能调节体内铁的平衡 ； 调节骨髓细胞的生 成， 促进细胞的生长 ； 调节机体免疫功能， 增强机体抗病能力 ； 抑制人体肿瘤细胞的作用 ； 能同多种抗生素及抗真菌制剂协同作用， 更加有效地治疗疾病。乳铁蛋白在乳汁中是一种 重要的非血红素铁结合。
5、糖蛋白， 在中性粒细胞颗粒中属于具有杀菌活性的单体糖蛋白。在 人体内乳铁蛋白具有强大的生物学功能， 目前被认为是一种新型抗菌、 抗癌药物和极具开 发潜力的食品和饲料添加剂。 发明内容 ： 0004 本发明公开了乳铁蛋白在临床疼痛治疗中的一种方法， 属于生物医药领域。用于 治疗由于各种原因引起的疼痛。 0005 本发明通过以下实验证明乳铁蛋白在临床由于各种原因引起的疼痛的一种治疗 方法 ： 通过对雄性 SD 大鼠 80 只， 随机分为生理盐水组 (NS 组 ) 和福尔马林组 (F 组 ) ； 实验 组分为乳铁蛋白 1g- 福尔马林组 (F-R1 组 )、 乳铁蛋白 lOg- 福尔马林组 (F-R。
6、10 组 ) 和 乳铁蛋白 100g- 福尔马林组 (F-R100 组 )。五组鞘内分别给予生理盐水 (NS)20l， NS 20l， 乳铁蛋白 lg， 乳铁蛋白 10g， 乳铁蛋白 100g ； 10min 后， 除 NS 组大鼠足底注射 NS 100l 外， 其余各组均给予 5福尔马林 100l。经以上处理后， 将 8 只动物在福尔马 林处理后 30min 取脊髓观察 NOS 的表达， 另 8 只动物在福尔马林处理后 0 l h 观察行为 学。结果 F 组的缩腿舔爪的时间和脊髓 NOS 表达显著长于和强于 NS 组 ； 预先给予乳铁蛋白 能抑制以上的作用， 且呈剂量依赖性。实验证明乳铁蛋白。
7、明显抑制福尔马林致痛大鼠痛行 为及一氧化氮合酶 (NOS) 表达， 具有一定的抗伤害作用。 具体实施方式 0006 下面的实例将具体说明本发明的操作方法， 但不能作为对本发明的限定。 0007 研究对象选取鞘内置管成功的体重 250300g 雄性 SD 大鼠 80 只， 随机分为生理 盐水组 (NS 组 ) 和福尔马林组 (F 组 )， 实验组分为乳铁蛋白 1g- 福尔马林组 (F-R1 组 )、 乳铁蛋白 10g- 福尔马林组 (FRIO 组 ) 和乳铁蛋白 100g- 福尔马林组 (F-R100 组 )。 五组鞘内分别给予NS 201， NS 20l， 乳铁蛋白1g， 乳铁蛋白10g， 乳。
8、铁蛋白100g ； 说 明 书 CN 104367993 A 3 2/3 页 4 10min 后， 除 NS 组大鼠足底注射 NS 100l 外， 其余各组均给予 5 福尔马林 1001。鞘 内置管大鼠麻醉后， 在枕骨大孔上方纵向切开约 1.52.0cm 的切口， 钝性分离皮下组织和 颈部肌肉， 暴露出寰枕膜， 将已经消毒、 一端封闭的充满生理盐水的导管向尾端插入 7.0 7.5cm， 至脊髓腰骶段， 然后固定导管并逐层缝合伤口。大鼠清醒 24h 后观察其活动情况， 剔 除出现运动功能障碍的大鼠。用 2利多卡因经导管注射来判断导管的位置， 如注射后 30 秒内大鼠出现双后肢麻痹现象说明导管位置。
9、正确。 术后常规使用抗生素， 分笼单独饲养， 室 温维持 20一 25， 自然照明， 自由饮水和摄食， 5 天后即可用于实验。 0008 1 行为学反应 ： 采用缩腿及舔爪时间之和作为行为学反应指标， 在大鼠足底部注 射 5福尔马林后立即用跑表记录大鼠 1h 内每 5min 的缩腿舔爪的时间。在大鼠足底注射 福尔马林后， 其注射足缩腿舔爪反应表现明显有 2 期， 第 1 期注射后立即开始， 持续 5min， 经过约 10min 的问歇期， 开始第 2 期， 持续约 40min， 非注射足活动自如， 无缩腿舔爪反应。 各组第 1、 2 期行为学的比较结果见表 1， 第 1、 2 期均无缩腿舔爪反。
10、应， F 组的缩腿舔爪时间 显著长于 NS 组 ； 在第 l 期内， F-Rl 组、 F-R10 组、 FR100 组与 F 组无显著性差异 ； 而在第 2 期内 F-Rl 组、 F-R10 组、 F-R100 组的缩腿舔爪时间显著低于 F 组， 且其降低呈剂量依赖 性。 本实验通过行为观察， 发现乳铁蛋白可以显著抑制疼痛的时相反应， 说明乳铁蛋向影 响了脊髓神经元放电， 参与脊髓水平的调制过程， 引起抗伤害性效应。 且其抗伤害性和抑制 NOS 的表达呈剂量依赖性。 0009 2NOS 免疫组织化学染色 ： 动物麻醉下， 经升主动脉依次灌注 4生理盐水 100m1、 4多聚甲醛 400ml， 。
11、取 L4-5 脊髓节段。冰冻横断切片， 经 PBS 冲洗后， 血清封闭 10min 后加 入一抗 4孵育 48h, 第二抗体， 37孵育 2h， 冲洗， 滴加辣根酶标记链霉卵白索， 37孵育 2h， 冲洗， 显色， 贴片， 酒精梯度脱水， 二甲苯透明， 中性树胶封片光镜观察， 棕色染色为阳性 细胞。本实验证明了乳铁蛋白对福尔马林致痛大鼠抗伤害性效应。自然条件下， 外源性乳 铁蛋白通常来源于哺乳动物， 其本身具有显著的抗伤害作用且不产生耐受， 提示乳铁蛋白 对于临床疼痛患者来说， 是一种可以安全使用的天然药物。 0010 3 图像分析 ： 选用 Nikon E 600 研究显微镜， 计算机图像处。
12、理系统采集数码图像， 应用软件进行图像分析， 每只大鼠脊髓背角任选 5 个视野测定 NOS 阳性产物的 IOD 值， 取平 均值代表大鼠的NOS表达强度。 IOD值为阳性产物面积与染色深度之积。 IOD值越大表示阳 性产物表达越强。F 组于注射福尔马林后 30min 阳性神经元的 IOD 值显著高与 NS 组 ； F-R1 组、 F-R10 组、 F-R100 组阳性神经元的 IOD 值显著地低于 F 组， 阳性神经元的 10D 值降低呈 剂量依赖性。脊髓背角 NOS 表达见表 2。结果证明了乳铁蛋白在致疼痛中起抗伤害作用。 0011 表 l 各组行为学 ( 缩腿舔爪 ) 第 l、 2 期的变。
13、化 (xs) 0012 说 明 书 CN 104367993 A 4 3/3 页 5 0013 注 ： 与 NS 组比 *PO.01. 与 F 组比较， #PO.01 0014 表 2 各组 NOS 表达的灰度 (xs) 0015 0016 注 ： 与 NS 组比 *P0.01. 与 F 组比较， #P0.0l 0017 实例一 0018 疼痛是临床上常见的症状， 长期的剧烈疼痛， 对机体已成为一种难以忍受的折磨。 为了减轻患者的疼痛， 可以应用自然条件下， 来源广泛的哺乳动物的乳汁， 其本身具有显著 的抗伤害作用且不产生耐受。对于临床疼痛患者来说， 哺乳动物的乳汁是一种可以安全使 用的天然药物。使用方法为口服牛乳， 剂量为 500 750ml/ 天。 说 明 书 CN 104367993 A 5 。