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1、(10)申请公布号 CN 103314047 A (43)申请公布日 2013.09.18 CN 103314047 A *CN103314047A* (21)申请号 201180062868.9 (22)申请日 2011.12.16 2010A002404 2010.12.27 IT C08L 5/08(2006.01) C08L 5/00(2006.01) A61K 9/00(2006.01) (71)申请人 阿尔特刚股份有限公司 地址 瑞士卢加诺 申请人 因德纳有限公司 (72)发明人 C韦尔纳斯卡 AM焦里 S托格尼 (74)专利代理机构 北京市中咨律师事务所 11247 代理人 陈润。
2、杰 黄革生 (54) 发明名称 对热或酶的降解作用稳定的透明质酸组合物 (57) 摘要 本发明涉及添加剂使得在水性组合物中配制 的透明质酸对热或酶如透明质酸酶的降解作用稳 定化的用途， 其特征在于所述添加剂包含一种或 多种多糖， 所述多糖的分子量等于或大于 20,000 道尔顿并且在水中的溶解度至少等于或大于 1g/ l， 组合物中所述多糖和透明质酸的总浓度使得其 粘度至少为 500cP， 这尤其适用于向人或动物关 节内、 皮内或眼内施用。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2013.06.26 (86)PCT申请的申请数据 PCT/EP2011/073079 2011.1。
3、2.16 (87)PCT申请的公布数据 WO2012/089537 EN 2012.07.05 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书9页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103314047 A CN 103314047 A *CN103314047A* 1/1 页 2 1. 添加剂使得在水性组合物中配制的透明质酸对热或酶如透明质酸酶的降解作用稳 定化的用途， 其特征在于所述添加剂包含一种或多种多糖， 所述多糖的分子量等于或大于 20,000 道尔顿并且在水中的溶解度至少等。
4、于或大于 1g/l， 组合物中所述一种或多种多糖 与透明质酸的总浓度使得组合物的粘度至少为 500cP。 2. 根据权利要求 1 的用途， 其特征在于所述组合物适用于人或动物中的关节内、 皮内 或眼内施用。 3. 根据权利要求 1 的用途， 其特征在于所述多糖选自单独或彼此混合的吉兰糖胶、 来 自藻类的角叉菜胶、 来自酸豆籽的木葡聚糖以及黄原胶。 4. 根据权利要求 1 的用途， 其特征在于所述透明质酸的分子量等于或大于 2x105道尔 顿。 5. 根据权利要求 1 的用途， 其特征在于单独或混合的所述透明质酸和所述多糖的重量 比的范围分别为 1 10 至 10 1。 6. 分子量等于或大于 。
5、2x105道尔顿的透明质酸的水性组合物， 其特征在于其包含至少 一种多糖作为用于使得对热或酶如透明质酸酶的降解作用稳定化的添加剂， 所述多糖的分 子量大于 20,000 道尔顿并且在水中的溶解度至少等于或大于 1g/l， 所述组合物的粘度至 少为 500cP。 7. 根据权利要求 6 的组合物， 其适用于人或动物中的关节内、 皮内或眼内施用。 8. 根据权利要求 6 的组合物， 其特征在于单独或混合的所述透明质酸和所述多糖的重 量比的范围分别为 1 10 至 10 1。 9. 根据权利要求 6 的组合物， 其特征在于所述多糖选自单独或彼此混合的吉兰糖胶、 来自藻类的角叉菜胶、 来自酸豆籽的木葡。
6、聚糖以及黄原胶。 10. 多糖， 其分子量大于 20,000 道尔顿并且在水中的溶解度至少等于或大于 1g/l， 以 使得在水性组合物中配制的透明质酸对热或酶如透明质酸酶的降解作用稳定化， 在水性组 合物中配制的透明质酸作为最终组合物的粘度至少为 500cP。 11. 根据权利要求 10 的多糖， 其中所述组合物适用于人或动物中的关节内、 皮内或眼 内施用。 12. 根据权利要求 10 的多糖， 其特征在于其选自单独或彼此混合的吉兰糖胶、 来自藻 类的角叉菜胶、 来自酸豆籽的木葡聚糖以及黄原胶。 权 利 要 求 书 CN 103314047 A 2 1/9 页 3 对热或酶的降解作用稳定的透明。
7、质酸组合物 0001 本发明涉及对热或酶如主要是透明质酸酶的降解作用稳定的透明质酸组合物。 0002 透明质酸 (HA) 是存在于脊椎动物的所有组织和生物体液中、 尤其是在缔结组织 中的多糖。 其属于糖胺聚糖家族， 并且是通过二糖单位的重复形成的线性无支链多糖， 根据 以下结构， 所述二糖单位由 1-4 配苷键连接的 N- 乙酰基 -D- 葡糖胺和葡萄糖醛酸钠组 成 ： 0003 0004 透明质酸的平均分子量范围为 104至 107道尔顿。例如， 存在于滑液中的透明质酸 的分子量为 7x106道尔顿。 0005 将透明质酸及其衍生物、 特别是其盐如钠盐广泛用于治疗目的。 其高粘度、 流变学 。
8、特性、 生物相容性和完全生物降解性允许将透明质酸广泛用于医学和皮肤病学应用。根据 本发明感兴趣的范围， 在医学领域中的应用实例包括眼科手术中的眼内注射、 为恢复滑液 的功能性的整形术中的关节内注射以及用于美容的皮内填充物。 还发现在兽医领域的其他 应用的实例， 例如马中的黏弹性补充 (viscosupplementation)。 0006 透明质酸的生理学和物理化学性质与其分子量相关。 重量足够高的聚合物链如存 在于滑液中的那些具有高粘度， 这形成其减震能力和润滑性质的基础。 0007 不期望的分子量降低， 如由于在降解情况下聚合物链的片段化， 导致透明质酸的 固有性质的损失。 0008 透明。
9、质酸的主要降解剂是热和特异性酶， 尤其是透明质酸酶。将透明质酸暴露于 高温或透明质酸酶的作用会引起多糖链的片段化， 伴有分子量和粘度降低， 以及由此的透 明质酸的固有性质的降低。 0009 透明质酸的不稳定性限制其用途， 尤其对于需要高分子量多糖的特异性流变行为 的所有应用。为此， 已经开发出通过交联透明质酸链获得的一组半合成的衍生物。交联的 衍生物特别是对通过透明质酸酶的酶降解更具耐受性。 0010 通过插入以共价键结合的桥接分子， 通过结构改性透明质酸来获得对降解剂更大 的惰性。但是， 实际上， 以该方法获得的新聚合物既不是天然也不是内源性的， 并且其生物 相容性显著低于透明质酸。该方面以。
10、及可能存在的交联反应的残基， 是随这些透明质酸的 交联衍生物出现的一些不期望的副作用的原因， 并且由此限制其用途。 0011 因此， 在未损害其安全性和固有性质的结构改性下获得具有增加的稳定性的透明 质酸的能力仍然是一个技术问题， 这阻碍了该多糖的理想用途。 0012 根据本发明， 已经令人惊讶地发现， 向透明质酸中加入某些多糖物质提高其对降 解剂的稳定性， 而未对其一级结构引入任何修饰。 因此， 本发明提出添加剂使得配制为水性 说 明 书 CN 103314047 A 3 2/9 页 4 组合物的透明质酸对热降解或酶如透明质酸酶的作用稳定化的用途， 其特征在于所述添加 剂包含一种或多种多糖，。
11、 所述多糖的分子量等于或大于 20,000 道尔顿， 并且水溶解度至少 等于或大于 1g/l， 组合物中所述多糖和透明质酸的总浓度使得其粘度至少为 500cP。 0013 所述粘度使得透明质酸基组合物尤其适用于人和动物中关节内、 皮内或眼内施 用。 0014 本发明还感兴趣的应用领域似乎是耳科手术、 组织工程等。 0015 本发明还涉及由此稳定化的透明质酸的水性组合物， 其特别适用于关节内、 皮内 或眼内用途。 0016 根据本发明， 如通过下面描述的实验发现所证明， 与所述多糖组合的透明质酸获 得改进的热稳定性， 并且呈现降低的酶降解的动力学。 0017 表现该稳定化作用的多糖选自分子量超过。
12、 20,000 道尔顿， 优选大于 50,000 道尔 顿的多糖， 所述多糖是水溶性的， 其浓度至少等于或大于 1g/l， 优选大于 2g/l， 其与透明质 酸产生临界粘度不小于 500cP 的最终粘性溶液。 0018 用能够用具有中 - 高粘度的溶液操作的适合仪器测量所得溶液的粘度。适合的仪 器是剪切流变仪， 例如配备有旋转圆筒或锥/平板测量系统的Brookfield旋转粘度计和粘 度计。报告于本发明随后实例中的实验测量中所用的仪器是配有 C-50 转子的 Brookfield 流变仪 R/S CPS+。 0019 所述多糖优选选自单独或混合在一起的吉兰糖胶、 由海藻获得的角叉菜胶如 i- 。
13、角叉菜胶、 酸豆籽 (tamarind seed) 木葡聚糖 (xyloglucan) 以及黄原胶。 0020 作为实例但是非限制， 可用于获得本发明的稳定化透明质酸的商业多糖是 Phytagel 吉兰糖胶、 由本申请人生产的酸豆籽木葡聚糖以及 Glyloid。 0021 可使用具有高级或商业级纯度的单一多糖， 或两种或更多种多糖的混合物。将所 述多糖或其混合物以 1 10 至 10 1 重量比加至透明质酸中。因此， 在稳定化的透明质 酸中， 加入的多糖的含量范围为 10 重量至 90 重量。 0022 适用于本发明目的的透明质酸优选的分子量为等于或大于 2x105道尔顿。例如， 优选的透明质。
14、酸的 MW 1.8x106道尔顿。另一优选的透明质酸的 MW 3x105道尔顿。 0023 给出以下组合物实施例以及相应的组合物的总动态粘度， 用于说明本发明而非限 制目的。 0024 组合物实施例 0025 实施例 1 0026 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.0 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )0.5 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 说 明 书 CN 103314047 A 4 3/9 页 5 注射用水适量至 100ml 0027 组合物的动态粘度 ： 500cP 0028 实施例 2 0029 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖0.8 透明质酸 (Mw1.。
15、8x106道尔顿 )0.8 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0030 动态粘度 ： 750cP 0031 实施例 3 0032 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.0 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.0 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0033 动态粘度 ： 1000cP 0034 实施例 4 0035 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.2 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.2 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 说 明 书 CN 103。
16、314047 A 5 4/9 页 6 注射用水适量至 100ml 0036 动态粘度 ： 1500cP 0037 实施例 5 0038 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.4 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.4 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0039 动态粘度 ： 2300cP 0040 实施例 6 0041 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.6 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.6 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0042 动态粘度 ： 3000cP 0043。
17、 实施例 7 0044 成分 w/v 角叉菜胶1.6 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.6 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 说 明 书 CN 103314047 A 6 5/9 页 7 注射用水适量至 100ml 0045 动态粘度 2500cP 0046 实施例 8 0047 成分 w/v Phytagel1.4 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.4 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0048 动态粘度 ： 1500cP 0049 实施例 9( 眼内粘弹性组合物 ) 0050 成分 w/。
18、v 酸豆籽木葡聚糖2.0 透明质酸 (Mw1.8x106道尔顿 )1.6 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.0-7.5 注射用水适量至 100ml 0051 动态粘度 ： 3500cP 0052 实施例 10 0053 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.6 透明质酸 (Mw300.000 道尔顿 )1.6 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 说 明 书 CN 103314047 A 7 6/9 页 8 注射用水适量至 100ml 0054 动态粘度 ： 1000cP 0055 实施例 11 0056 成分 w/v 酸豆籽木葡聚糖1.4 透明质酸 (Mw。
19、1.0x106道尔顿 )1.4 氯化钠0.9 磷酸二氢钠和磷酸氢二钠适量至 pH7.00.5 注射用水适量至 100ml 0057 动态粘度 ： 2000cP 0058 还描述了以下实验应用实施例仅用于本发明的说明而非限制目的。 0059 如下文所述， 附图中的图显示特别参照以下实施例 16 的示意图。 0060 实施例 12- 热稳定化 0061 在 120下加热 1 小时之前和之后， 测量并比较单独和加入表格中指定的多糖的 1.6浓度的透明质酸 ( 下表中的 HA) 的水溶液的动态粘度。所述测试是显著的， 因为粘度 与透明质酸的分子量直接相关， 并且其降低与热降解成比例。 0062 在 2。
20、5的温度， 使用配有锥 / 平板系统和 C-50 转子的 Brookfield R/SCPS+ 流变 仪， 在 167.6sec-1 的速度梯度下测量溶液的粘度。 0063 将测量值 ( 厘泊， cP) 总结于下表中 ： 0064 0065 由于多糖的加入而引起的粘度降低的控制可由报告值明显看出。 0066 实施例 13- 在高压釜中的热稳定化 0067 测量并比较高压灭菌之前和之后， 透明质酸 ( 表格中的 HA) 以及加有多糖的透明 质酸的水溶液的动态粘度。粘度与透明质酸的分子量直接相关， 并且其降低与热降解成比 说 明 书 CN 103314047 A 8 7/9 页 9 例。 0068。
21、 高压釜中应用的灭菌条件是 ： 温度 ： 121+/-1， 时间 Fo 13。 0069 在 25的温度， 使用配有锥 / 平板系统和 C-50 转子的 Brookfield R/SCPS+ 流变 仪， 在 167.6sec-1 的速度梯度下测量溶液的粘度。 0070 将测量值 (cP) 总结于下表中 ： 0071 0072 由于多糖的加入而引起的粘度降低的控制可由报告值明显看出。 0073 实施例 14- 在高压釜中的热稳定化 0074 如下表中说明， 在高压灭菌之前和之后， 在不同透明质酸浓度和不同酸豆籽木葡 聚糖浓度下， 测量单独的透明质酸(表格中的HA)水溶液的动态粘度变化， 并与加入。
22、酸豆籽 木葡聚糖的透明质酸溶液进行比较。 0075 高压釜中应用的灭菌条件是 ： 温度 ： 121+/-1， 时间 Fo 13。在 25的温度， 使 用配有锥 / 平板系统和 C-50 转子的 Brookfield R/S CPS+ 流变仪， 在 167.6sec-1 的速度 梯度下测量溶液的粘度。 0076 将测量值 (cP) 总结于下表中 ： 0077 0078 0079 实施例 15- 对酶的稳定性 ( 透明质酸酶 ) 0080 以 1.33浓度制备透明质酸的水溶液 ( 下表中的 HA)， 并将其与透明质酸和酸豆 说 明 书 CN 103314047 A 9 8/9 页 10 籽木葡聚糖。
23、的水溶液 ( 均在 1.33浓度下 ) 进行比较。 0081 将 1g 透明质酸酶的 0.006水溶液加至 9.5g 各溶液中。在 37的温度， 使用配 有锥 / 平板系统以及 C-50 转子的 Brookfield R/S CPS+ 流变仪， 在 167.6sec-1 的速度梯 度下测量所得溶液的粘度随时间的变化。 0082 将测量值 (cP) 总结于下表中 ： 0083 0084 实施例 16- 对酶的稳定性 ( 透明质酸酶 ) 0085 还根据先前实施例中所用方法测量了粘度的类似变化， 并与以下透明质酸 (HA) 的水溶液进行比较 ： 0086 - 在 1.2浓度下的单独的 HA 008。
24、7 -1.2 HA 和 1.2酸豆籽木葡聚糖 0088 -0.5 HA 和 2.5酸豆籽木葡聚糖 0089 -1.2 HA 和 1.2 i- 角叉菜胶 0090 附图显示直至120分钟(x轴上的时间)获得的残留粘度值(以cP表示)的图。 明确显示了根据本发明提出的所有多糖的稳定化作用。 0091 总之， 以上提及的实验发现证明， 将本发明的多糖加至透明质酸产生溶液， 可将所 述溶液加热至高温而未引起透明质酸分子量的显著降低， 如通过溶液粘度的显著稳定化所 证明。 0092 类似地， 与本发明的多糖组合的透明质酸通过透明质酸酶的降解比相应未加入多 糖的透明质酸慢的多。 说 明 书 CN 103314047 A 10 9/9 页 11 0093 从描述和实施例可以看出， 有效地达到本发明的目的。 说 明 书 CN 103314047 A 11 1/1 页 12 说 明 书 附 图 CN 103314047 A 12 。