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1、(10)申请公布号 CN 103525892 A (43)申请公布日 2014.01.22 CN 103525892 A (21)申请号 201310429027.8 (22)申请日 2013.09.20 C12P 33/20(2006.01) (71)申请人 吉林大学 地址 130012 吉林省长春市前进大街 2699 号 (72)发明人 卢丞文 殷涌光 (74)专利代理机构 长春吉大专利代理有限责任 公司 22201 代理人 朱世林 王寿珍 (54) 发明名称 一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 即将人参皂甙 Rb1 。
2、降解生成人参皂甙 Rd 的方法。在常温条件下将人参皂甙 Rb1 溶液和酶 制剂混合均匀， 直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 5-20kV/cm， 处理的脉冲数为 1-10 个， 酶制剂的添加量为 1-4%， 所采用的酶为价格 低廉的商业化纤维素酶和 - 葡萄糖苷酶。本方 法在人参皂甙 Rb1 酶解过程中引入高压脉冲电 场， 提高了酶活性， 加速了人参皂甙 Rb1 降解的反 应速度， 快速、 高效地促进人参皂甙 Rb1 转化生成 稀有人参皂甙 Rd。本方法与传统的转化方法相 比， 无需加热、 制备时间短、 得率高、 能耗少。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 2 页。
3、 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书2页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103525892 A CN 103525892 A 1/2 页 2 1. 一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 利用高压脉冲电场技术耦合酶制剂降解人 参皂甙 Rb1 制备稀有人参皂甙 Rd， 其特征在于 ： 在常温下将人参皂甙 Rb1 样品溶解于缓冲溶液中， 加入酶制剂混合均匀， 直接通入高 压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 5-20kV/cm， 处理的脉冲数为 1-10 个， 将高压脉冲电场 处理后的物料加入有机溶剂萃取， 离心分离， 取上清液，。
4、 挥发除掉溶剂， 即获得人参皂甙 Rd。 2. 根据权利要求 1 所述的一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 其特征在于 ： 所述的酶制剂为纤维素酶或 - 葡萄糖苷酶， 添加量为 1-4%。 3. 根据权利要求 1 所述的一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 其特征在于 ： 所述缓冲溶液使用醋酸钠 - 醋酸缓冲液。 4. 根据权利要求 1 所述的一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 其特征在于 ： 所述有机溶剂使用正丁醇时用水饱和溶液。 5.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 其特征在 于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 3%- 葡萄糖。
5、苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压 脉冲电场进行处理， 其电场强度为 15kV/cm， 脉冲数为 8 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心 分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 91.42%。 6.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 其特征在 于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 3%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压 脉冲电场进行处理， 其电场强度为 10kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离 心分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 70.35%。 7.根据权利要求。
6、1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 其特征在 于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 3%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压 脉冲电场进行处理， 其电场强度为 20kV/cm， 脉冲数为 6 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心 分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 44.52%。 8.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 其特征在 于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 4%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压 脉冲电场进行处理， 其电场强度为 20kV/cm， 脉冲数为 8。
7、 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心 分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 56.29%。 9.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 其特征在 于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 2% 纤维素酶 Cellulase1.5L FG， 混合均匀， 在常温下 直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 15kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水饱和正丁醇萃 取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 51.06%。 10. 根据权利要求 1 至 4 任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 其特。
8、征 在于 ： 在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 2% 纤维素酶 Cellulase， Aspergillus niger， 混合均 权 利 要 求 书 CN 103525892 A 2 2/2 页 3 匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 15kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水 饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 人参皂甙 Rd 的得率为 46.81%。 权 利 要 求 书 CN 103525892 A 3 1/2 页 4 一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种快速制备稀有人参皂甙 Rd 的方法， 特别。
9、是涉及高压脉冲电场耦 合酶解制备方法。 背景技术 0002 人参 （Panax ginseng C.A.Meyer） 为五加科人参属植物， 广泛应用于医药学领域。 人参皂甙作为人参代谢重要次级产物， 具有多种药理活性。其中稀有人参皂甙 Rd 属于原人 参二元醇， 具有神经系统保护作用、 抗癌细胞转移、 促进神经干细胞增殖、 预防化学药物引 起肾损伤及阻止血管收缩等作用。 0003 但是稀有人参皂甙 Rd 在人参中含量较低， 含量只有千分之几， 从人参中直接提取 显然不符合实际。目前的化学合成技术步骤复杂、 产率很低， 也难以工业化生产。 0004 稀有人参皂甙的化学结构与人参中某些含量高的人参。
10、皂甙如 Rb1 相比， 只是缺少 了一个或几个糖基， 因此可以通过水解某些高含量人参皂甙的糖基来获得稀有人参皂甙。 目前， 用于人参皂甙糖基水解的方法主要有化学转化法和生物转化法。其中化学转化法反 应包括酸水解和碱水解， 但存在专一性差， 副产物多、 产率低的缺点 ； 生物转化法包括微生 物转化和酶法转化， 但反应周期长， 工艺复杂。 本发明方法具有条件温和、 不破坏皂甙结构、 操作步骤简单、 选择性高、 得率高等优点， 并且采用的酶为价格低廉的商业化用酶。 发明内容 0005 本发明的目的是提出一种高压脉冲电场与酶耦合降解人参皂甙 Rb1 制备稀有人 参皂甙 Rd 的方法， 以克服目前化学法。
11、和生物法降解人参皂甙 Rb1 的缺点。 0006 本发明涉及一种降解人参皂甙Rb1快速制备稀有人参皂甙Rd的方法， 利用高压脉 冲电场技术耦合酶制剂降解人参皂甙 Rb1 制备稀有人参皂甙 Rd， 在常温下将人参皂甙 Rb1 样品溶解于缓冲溶液中， 加入酶制剂混合均匀， 直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强 度为 5-20kV/cm， 处理的脉冲数为 1-10 个， 将高压脉冲电场处理后的物料加入有机溶剂萃 取， 离心分离， 取上清液， 挥发除掉溶剂， 即获得人参皂甙 Rd。 0007 所述的酶制剂为纤维素酶或 - 葡萄糖苷酶。 0008 所述酶制剂添加量为 1-4%。 0009 所述缓冲溶。
12、液使用醋酸钠 - 醋酸缓冲液。 0010 所述有机溶剂使用正丁醇时用水饱和溶液。 0011 本方法由于在酶解反应过程中引入高压脉冲电场， 提高酶活性， 加速酶解反应速 度， 快速、 高效地促进人参皂甙 Rb1 转化生成稀有人参皂甙 Rd。 0012 本发明将高压脉冲电场技术与商业化酶制剂进行耦合制备稀有人参人参皂甙 Rd， 具有非热、 反应速度快、 副产物少、 成本低等优点， 为人参皂甙结构修饰提供新方法。 附图说明 说 明 书 CN 103525892 A 4 2/2 页 5 0013 图 1 人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的反应途径 具体实施方式 0014 结合以下给出的实施例。
13、对本发明方法作进一步详细说明。 0015 实施例 1 0016 本发明将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液 中加入 3%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强 度为 15kV/cm， 脉冲数为 8 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 经高效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 91.42%。 0017 实施例 2 0018 将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加 入 3%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入。
14、高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 10kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 经高 效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 70.35%。 0019 实施例 3 0020 将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加 入 3%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 20kV/cm， 脉冲数为 6 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 经高 效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 44.52%。 0021 实施例 4。
15、 0022 将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加 入 4%- 葡萄糖苷酶， 混合均匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电场强度为 20kV/cm， 脉冲数为 8 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去溶剂， 经高 效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 56.29%。 0023 实施例 5 0024 将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 2%纤维素酶Cellulase1.5L FG， 混合均匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理， 其电 场强。
16、度为 15kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上清液挥发除去 溶剂， 经高效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 51.06%。 0025 实施例 6 0026 将人参皂甙 Rb1 降解生成人参皂甙 Rd 的方法， 是在 1mM 人参皂甙 Rb1 溶液中加入 2% 纤维素酶 Cellulase （Aspergillus niger） ， 混合均匀， 在常温下直接通入高压脉冲电场 进行处理， 其电场强度为 15kV/cm， 脉冲数为 10 ； 用水饱和正丁醇萃取反应液， 离心分离， 上 清液挥发除去溶剂， 经高效液相色谱分析人参皂甙 Rd 的得率为 46.81%。 说 明 书 CN 103525892 A 5 1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 103525892 A 6 。