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1、(10)申请公布号 CN 103524321 A (43)申请公布日 2014.01.22 CN 103524321 A (21)申请号 201310449828.0 (22)申请日 2013.09.27 C07C 49/84(2006.01) C07C 45/78(2006.01) (71)申请人 湖南三为生物科技有限公司 地址 410000 湖南省长沙市雨花区环保中路 188号长沙国际企业中心第一栋C单元 4 层 C401 (72)发明人 张宝堂 张玉学 谭家忠 李芳 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王文君 (54) 发明名称 一种从酒花萃余物中提。
2、取黄腐酚的方法 (57) 摘要 本发明提供了一种从酒花萃余物中提取黄 腐酚的方法， 将超临界 CO2 萃取后的酒花萃余物 采用减压加热回流提取或常压超声提取， 提取液 经浓缩、 纯化步骤， 得到黄腐酚制品 ； 其中浓缩步 骤， 使用纳滤膜进行浓缩， 浓缩至8-10波美度。 本 发明所述方法提高了黄腐酚的收率， 减少对环境 的污染， 并有利于工厂生产的进行和生产成本的 降低。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 附图3页 (10)申请公布号 CN 103524321 A 。
3、CN 103524321 A 1/1 页 2 1. 一种从酒花萃余物中提取黄腐酚的方法， 其通过超临界 CO2萃取酒花萃余物进一步 提取获得， 其特征在于， 将超临界 CO2萃取后的酒花萃余物采用减压加热回流提取或常压超 声提取， 提取液经浓缩、 纯化步骤， 得到黄腐酚制品 ； 其中浓缩步骤， 使用纳滤膜进行浓缩， 浓缩至 8-10 波美度。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述纳滤膜采用截留分子量为200-300的 中空纤维纳滤膜。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述纯化步骤为将浓缩后的浓缩液加入 吸附剂， 加入层析柱中分别两次使用洗脱剂洗脱， 第一种洗脱。
4、剂是乙醇 ： 水 =1:9-1:4， 洗脱 剂用量为浓缩液的 1-3 倍 ； 第二种洗脱剂是乙醇 ： 水 =2:1-4:1， 洗脱剂用量为浓缩液的 3-5 倍 ； 收集第二次洗脱液， 经纳滤膜浓缩。 4. 根据权利要求 3 所述的方法， 其特征在于， 第一种洗脱剂为乙醇 ： 水 =1:6， 用量为浓 缩液的 2 倍 ； 第二种洗脱剂为乙醇 ： 水 =3:1， 用量为浓缩液的 4 倍。 5. 根据权利要求 3 所述的方法， 其特征在于， 所述吸附剂是硅藻土、 硅胶、 氧化铝或环 糊精 ； 吸附剂用量为浓缩液的 1/5-1/3。 6. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 减压加热回流提取。
5、时， 提取罐内抽真空， 真空度 -0.08 -0.1Mpa， 温度 50 70， 溶媒用量至少是原料的 4 倍， 提取两次以上， 每 次提取时间 60min 以上， 合并提取液。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 减压加热回流提取条件是提取温度65， 溶媒用量是原料的 5 倍， 提取两次， 每次提取时间 90min， 合并提取液。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 常压超声提取时， 超声波输出功率300W 600W， 温度 40 65， 溶媒用量至少是原料的 4 倍， 提取两次以上， 每次提取时间 15min 以 上 ； 所述溶媒为 60% 95% 乙醇水溶液， 合并提。
6、取液。 9. 根据权利要求 8 所述的方法， 其特征在于， 常压超声提取时， 超声波输出功率 400W， 温度50， 溶媒用量是原料的5倍， 提取两次， 每次提取30min ； 所述溶媒为80%的乙醇水溶 液， 合并提取液。 10. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 提取液经浓缩、 纯化后， 冷冻干燥或喷雾 干燥， 得到黄腐酚制品。 权 利 要 求 书 CN 103524321 A 2 1/3 页 3 一种从酒花萃余物中提取黄腐酚的方法 技术领域 0001 本发明涉及植物有效成分的提取， 具体地说， 涉及一种从酒花萃余物中提取黄腐 酚的方法。 背景技术 0002 啤酒花(Humun。
7、us Lupulus L)其学名为蛇麻， 又称香蛇麻、 蛇麻草和忽布(英语俗 名Hop的音译)， 是桑科蓬草属多年生草质蔓生藤本。 花单性， 雌雄异株， 酿造上所用的均为 雌花。 0003 酒花化学成分的研究可以归纳为树脂， 挥发油、 多酚类化合物、 黄酮类化合物等几 个方面。酒花中树脂类物质 （- 酸， - 酸） 为啤酒工业需要的重要原料， 能赋予啤酒苦味 和香味。 0004 黄腐酚的药理研究进展 ： 黄腐酚为啤酒花中特有的、 主要的异戊二烯基黄酮类物 质 , 其含量仅占啤酒花干重的 0.1% 1%。黄腐酚是于 1913 年首次在啤酒花中被发现的， 1950 年开始对其分子结构进行研究， 当。
8、时研究人员并没有注意到它的药理作用， 直到 1990 年这种物质的功效才被得知。据美联社报道， 首先对其进行研究的是当时美国俄勒冈州立 大学药剂学院的 Stevens 和 Don Buhler。Stevens 在 植物化学 杂志上发表了对黄腐酚 的最新研究结果， 引起了国际关注。据路透社消息 , 慕尼黑技术大学的科学家维尔纳巴 克也发现 , 黄腐酚能够阻止导致癌细胞生长的酶发挥作用， 并且能够帮助人体消除其他致 癌物质 , 尤其在癌症初期， 这种物质的抗癌效果更好。研究显示， 黄腐酚不仅对治疗乳腺 癌、 结肠癌、 前列腺癌等具有较好的辅助作用， 此外， 这种物质还具有抗氧化作用， 植物雌激 素。
9、作用， 抗病毒作用等。 0005 目前， 国外提纯高纯度黄腐酚的方法主要是采用制备液相色谱的方法， 中国专利 申请号为 200810079205.8 的发明专利采用逆流色谱的方法制备高纯度黄腐酚， 由于处理 样品的能力太小， 无法实现工业化生产。中国专利申请号为 200810225869.0 的发明专利及 美国专利公开号为 US6867332(B1) 的发明专利， 均采用硅藻土吸附洗脱的方法制备高纯度 黄腐酚， 但该方法至今未实现产业化。中国专利申请号为 200810073983.6 的发明专利采 用吸附树脂提纯黄腐酚到 90% 以上， 但市场上也未见产品或样品。本申请人申请的中国专 利申请号。
10、为 201010167119.X 的发明专利制备得到高纯度黄腐酚， 该方法适合小规模生产， 产品已在市场上销售， 但生产成本过高。中国专利申请号为 201110063773.0 的发明专利采 用酸碱处理， 有机试剂二氯乙烷、 乙酸乙酯、 三氯甲烷等易燃易爆试剂萃取， 安全隐患大， 对 环境污染严重， 溶剂残留控制难。中国专利申请号为 201110218675.X 的发明专利采用超滤 膜、 纳滤膜浓缩、 聚酰胺树脂纯化， 生产成本高， 且只能进行小规模生产。 发明内容 0006 为了解决现有技术中存在的问题， 本发明的目的是提供一种从酒花萃余物中提取 黄腐酚的新方法， 提高黄腐酚的收率， 减少对。
11、环境的污染， 并有利于工厂生产的进行和生产 说 明 书 CN 103524321 A 3 2/3 页 4 成本的降低。 0007 为了实现本发明目的， 本发明提供了一种从酒花萃余物中提取黄腐酚的方法， 将 超临界 CO2萃取啤酒花 - 酸后的酒花萃余物采用减压加热回流提取或常压超声提取， 提取液经浓缩、 纯化步骤， 得到黄腐酚制品 ； 其中浓缩步骤， 使用纳滤膜进行浓缩， 浓缩至 8-10 波美度。 0008 作为优选， 所述纳滤膜采用截留分子量为 200-300 的中空纤维纳滤膜。 0009 进一步地， 所述纯化步骤为将浓缩后的浓缩液加入吸附剂， 加入层析柱中分别两 次使用洗脱剂洗脱， 第一。
12、种洗脱剂是乙醇 ： 水 （体积比） =1:9-1:4， 洗脱剂用量为浓缩液的 1-3 倍 （L/kg)， 洗脱流速 1mL/min ； 第二种洗脱剂是乙醇 ： 水 =2:1-4:1， 洗脱剂用量为浓缩 液的 3-5 倍 , 洗脱流速 1.5mL/min ； 收集第二次洗脱液， 经纳滤膜浓缩。 0010 更进一步地， 第一种洗脱剂为乙醇 ： 水 =1:6， 用量为浓缩液的 2 倍 ； 第二种洗脱剂 为乙醇 ： 水 =3:1， 用量为浓缩液的 4 倍。 0011 进一步地， 所述吸附剂是硅藻土、 硅胶、 氧化铝或环糊精 ； 吸附剂用量为浓缩液的 1/5-1/3。 0012 进一步地， 减压加热回流。
13、提取时， 提取罐内抽真空， 真空度 -0.08 -0.1Mpa， 温度 50 70， 溶媒用量至少是原料的 4 倍， 提取两次以上， 每次提取时间 60min 以上， 合并提 取液。 0013 更进一步地， 减压加热回流提取条件是提取温度 65， 溶媒用量 （体积） 是原料的 5 倍， 提取两次， 每次提取时间 90min， 合并提取液。 0014 进一步地， 常压超声提取时， 超声波输出功率 300W 600W， 温度 40 65， 溶媒 用量至少是原料的 4 倍， 提取两次以上， 每次提取时间 15min 以上 ； 所述溶媒为 60% 95% 乙醇水溶液， 合并提取液。 0015 更进一步。
14、地， 常压超声提取时， 超声波输出功率 400W， 温度 50， 溶媒用量是原料 的 5 倍， 提取两次， 每次提取 30min ； 所述溶媒为 80% 的乙醇水溶液， 合并提取液。 0016 进一步地， 提取液经浓缩、 纯化后， 冷冻干燥或喷雾干燥， 得到黄腐酚制品。 0017 本发明的有益效果在于 ： 0018 1、 原料成本优势 ： 本发明中用的是以超临界 CO2 萃取啤酒花 - 酸后的啤酒花萃 余物 （啤酒花废渣） 为原料， 使该产品生产成本较低， 有利于大规模生产。 0019 2、 本发明采用膜浓缩技术， 在常温下进行， 减少产品的分解， 而且能耗较低， 减少 了对环境的污染， 工艺。
15、化程度高。 0020 3、 整个工艺无毒性试剂， 只用到乙醇， 产品质量安全， 可直接用于食品药品的生 产。 0021 4、 变废为宝、 低毒环保经济高效的技术路线 ： 本发明采取的是一种绿色环保经济 的技术路线， 该路线中采用的提取， 浓缩， 纯化装置等生产设备均可采用密闭的体系， 操作 的过程中， 能最大限度的避免操作人员接触到试剂， 有效地保障了他们的健康。 该方法中采 用的溶剂， 吸附剂等都能循环使用， 能降低物料损失， 提高产品得率。本发明采用的原料是 廉价的啤酒花废渣， 一旦扩大生产， 则能大大地推动我国啤酒花产业链的发展， 与我国可持 续发展的模式相呼应， 有良好的社会效益。 0。
16、022 5、 该工艺是根据从啤酒花废渣中提取黄腐酚的实际生产情况出发， 通过大量的实 说 明 书 CN 103524321 A 4 3/3 页 5 践摸索， 克服了诸多难点， 使得产品质量得到有效的提升， 而且所用生产设备均为常规设 备， 不需要对设备有新的要求， 更有利于工厂生产的进行和生产成本的降低。 附图说明 0023 图 1 为本发明所述一种从酒花萃余物中提取黄腐酚的方法的工艺流程图。 0024 图 2 为本发明实施例 1 的黄腐酚对照及黄腐酚样品的检测分析报告。 具体实施方式 0025 以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 0026 实施例 1 0027 取 500。
17、Kg 啤酒花残渣 （经 HPLC 检测黄腐酚含量 0.52%） 投入提取罐中， 加入 80% 的 乙醇 2500L， 减压， 真空度 -0.08Mpa， 加热至 65， 回流提取 90min, 趁热过滤， 药渣中再次 加入 2500L 的 80% 乙醇进行第二次提取， 同条件下回流 90min 后， 过滤， 合并两次提取液， 纳滤膜浓缩至 8 波美度 ； 浓缩液中加入 70kg 硅藻土， 拌匀， 上层析柱 ； 先用乙醇 ： 水 =1:6 的 溶液 1000mL 洗脱， 洗脱流速 1.0mL/min ； 再用乙醇 ： 水 =3:1 的溶液 2000mL 洗脱， 洗脱流速 1.5mL/min, 收。
18、集第二种洗脱液， 纳滤膜浓缩， 冷冻干燥得黄色粉末 19kg。对产物进行检测， 使用 Waters 高效液相色谱仪， 色谱柱 C18(4.6mm250mm,5um)， 流动相 ： 乙腈 ： 1% 的甲酸溶 液=60:40， 检测波长370nm， 流速为0.8mL/min， 进样量60uL。 经检测， 黄腐酚含量为11.02% （见图 2） ， 整个过程黄腐酚的回收率达 80.5%。 0028 实施例 2 0029 取 500kg 啤酒花残渣 （经 HPLC 检测黄腐酚含量 0.55%） 投入超声波提取罐中， 加 入 2500L 的 80% 乙醇， 超声波输出功率 400W， 50超声提取 30。
19、min， 过滤， 药渣中再加入 2500L80% 的乙醇进行第二次提取， 同条件下超声提取 30min， 过滤， 合并两次提取液， 纳滤 膜浓缩至 8 波美度 ； 浓缩液中加入 65kg 硅藻土， 拌匀， 上层析柱 ； 先用乙醇 ： 水 =1:9 的溶液 1000mL洗脱， 洗脱流速1.0mL/min， 再用乙醇 ： 水=4:1的溶液2000mL洗脱， 洗脱流速1.5mL/ min， 收集第二种洗脱液， 纳滤膜浓缩， 喷雾干燥得黄色粉末 22kg。经检测， 黄腐酚含量为 8.2%， 整个过程黄腐酚的回收率为 65.6%。 0030 实施例 3 0031 取 500kg 啤酒花残渣 （经 HPL。
20、C 检测黄腐酚含量 0.50%） 投入超声波提取罐中， 加入 2500L 的 80% 乙醇， 超声波输出功率 400W， 50超声提取 30min， 过滤， 药渣中再加入 2500L 的 80% 的乙醇进行第二次提取， 同条件下超声提取 30min， 过滤， 合并两次提取液， 纳滤膜 浓缩至 9 波美度 ； 浓缩液中加入 70kg 硅藻土， 拌匀， 上层析柱 ； 先用乙醇 ： 水 =1:4 的溶液 1000mL洗脱， 洗脱流速1.0mL/min ； 再用乙醇 ： 水=2:1的溶液2000mL洗脱， 洗脱流速1.5mL/ min， 收集第二种洗脱液， 纳滤膜浓缩， 喷雾干燥得黄色粉末 18.5k。
21、g。经检测， 黄腐酚含量为 8.5%， 整个过程黄腐酚的回收率为 62.9%。 0032 虽然， 上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述， 但在 本发明基础上， 可以对之作一些修改或改进， 这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进， 均属于本发明要求保护的范围。 说 明 书 CN 103524321 A 5 1/3 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 103524321 A 6 2/3 页 7 图 2 接下 说 明 书 附 图 CN 103524321 A 7 3/3 页 8 图 2 说 明 书 附 图 CN 103524321 A 8 。