治疗增殖性疾病的联合疗法威罗菲尼和MDM2抑制剂.pdf

本申请公开了一种产品，其包含(i)作为第一种组分的威罗菲尼，和(ii)作为第二种组分的选自化合物(II)或化合物(III)的MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐，用于增殖性疾病治疗中的连续或同时使用，所述增殖性疾病如癌症，涉及b-RafV600突变阳性肿瘤。

权利要求书
1.  一种药物产品，其包含(i)第一种组合物，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组合物，其包含作为活性剂的MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐；作为组合制备物用于癌症治疗中的同时或连续使用；所述活性剂的含量使得其组合在癌症的治疗中是治疗有效的。

2.  权利要求1的药物产品，其中第一种组合物与第二种组合物连续给药。

3.  权利要求1的药物产品，其中第一种组合物与第二种组合物同时给药。

4.  权利要求1的药物产品，其中将第一种和第二种组合物共同配制。

5.  根据权利要求1至4任一项的药物产品，用作包含V600突变阳性b-Raf的癌症治疗中的药物，优选具有V600E突变的肿瘤。

6.  根据权利要求5的药物产品，其中所述癌症选自结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌，并且其中所述癌症涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。

7.  根据权利要求1至6任一项的药物产品，其中以约200mg/天至约3000mg/天的含量来给药威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐。

8.  根据权利要求1至6任一项的药物产品，其中以约960mg/天至约2000mg/天的含量来给药威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐。

9.  根据权利要求1至8任一项的药物产品，其中所述MDM2抑制剂是以下通式的化合物(III)

其药物学上可接受的盐。

10.  根据权利要求9的药物产品，其中以约100mg/天至约2500mg/天的含量来给药化合物(III)，或其药物学上可接受的盐。

11.  根据权利要求9的药物产品，其中以约300mg/天至约2000mg/天的含量来给药化合物(III)，或其药物学上可接受的盐。

12.  根据权利要求1的药物产品，其中在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1-5天，以300mg/天至约2000mg/天的含量，持续5天每日给药一次化合物III，或其药物学上可接受的盐。

13.  根据权利要求1的药物产品，其中在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1、8和15天，以约2500mg/天的含量，每周给药一次化合物III，或其药物学上可接受的盐。

14.  一种试剂盒，其包含：(i)第一种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的化合物III，或其药物学上可接受的盐。

15.  根据权利要求14的试剂盒，用于治疗增殖性疾病，优选选自结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌的癌症，并且其中所述癌症涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。

16.  威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐和MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐，用于治疗增殖性疾病的用途，所述增殖性疾病特别是癌症，更特别是选自结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌的癌症，并且其中所述癌症涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。

17.  根据权利要求16的用途，其中所述MDM2抑制剂是化合物(III)


18.  如前文描述的新产品、方法、组合物和用途。

说明书治疗增殖性疾病的联合疗法(威罗菲尼和MDM2抑制剂)
发明领域
本发明涉及用于治疗患有增殖性疾病的病人的联合疗法，所述增殖性疾病特别是实体肿瘤，例如，结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌，所述方法包括将(i)b-Raf抑制剂威罗菲尼(vemurafenib)和(ii)MDM2抑制剂同时或连续给药于病人。
发明背景
威罗菲尼(有时候称为化合物I)是特异性地靶向具有V600E突变的突变b-Raf的b-raf激酶抑制剂。威罗菲尼作为ZelborafTM可市售获自Genentech，South San Francisco，CA。该化合物描述于US专利No.7,504,509和7,863,288中。威罗菲尼目前批准用于V600E突变阳性转移性黑素瘤的治疗，并且正在进行用于几种其他肿瘤抑制的研究，例如，结肠直肠癌和甲状腺癌。
p53是有效的细胞周期抑制剂，其在细胞水平受到MDM2的紧密调控。MDM2和p53形成反馈控制环路。MDM2可以结合p53，并且抑制其转移激活p53-调控的基因的能力。此外，MDM2介导p53的泛素依赖性降解。P53可以激活MDM2基因的表达，由此提高MDM2蛋白的细胞水平。这一反馈控制环路确保将MDM2和p53在正常增殖细胞中保持在低水平。
MDM2与p53的比例在许多癌症中是失调的。因此，通过对抗其负调节剂MDM2的p53的激活在治疗癌症中是一种有用的策略，并且几种MDM2拮抗剂正在研发中。例如，(4S,5R)-1-[[4-[[4,5-双(4-氯苯基)-2-[4-(叔-丁基)-2-乙氧基-苯基]-4,5-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-1-基]]-羰基]-4-[3-(甲基磺酰基)丙基]-哌嗪(在本文中称为化合物II)和4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸(在本文中称为化合物III)正处于用于实体肿瘤治疗的I期临床试验中。化合物II公开于U.S.专利No.7,851,626中。化合物III公开于US公开2010/0152190A1中。至视为需要的程度，将这两篇公开文本按引用并入本文中。
申请人已经出乎预料地发现了使用威罗菲尼和MDM2抑制剂的联合疗法不仅能够克服威罗菲尼的抗药性(即，之前威罗菲尼抗性细胞中活性的增强作用)，而且还导致了提高的抗肿瘤作用，其明显优于使用各自单独的化合物所获得的结果，并且没有明显的毒性增加。此外，因为这两种类型的化合物通过影响不同的细胞机制来发挥抗肿瘤作用，因此预期这两种化合物的治疗组合将在特定的肿瘤中产生提高的抗肿瘤活性和/或防止或延迟对药物治疗的抗药性。
发明概述
本发明涉及一种药物产品，其包含(i)第一种组合物，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组合物，其包含作为活性剂的MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐；作为组合制备物用于癌症治疗中的同时或连续使用；所述活性剂的含量使得其组合在癌症的治疗中是治疗有效的。
本发明还涉及特定的MDM2抑制剂，即本文中公开的化合物(II)和(III)，以及用于涉及威罗菲尼和所述MDM2抑制剂的联合治疗的特定给药方案。
本发明还涉及一种治疗患有增殖性疾病(特别是癌症)的病人的方法，该方法包括将(i)第一种组分，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐，和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的MDM2抑制剂，同时或连续给药于病人，所述活性剂的含量使得其组合在所述增殖性疾病的治疗中是治疗有效的。
本发明还涉及一种试剂盒，其包含(i)第一种组分，其包含作为活性剂的一个或多个口服单位剂型的威罗菲尼；和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的一个或多个口服或注射单位剂型的MDM2抑制剂。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的(i)威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，和(ii)MDM2抑制剂。
此外，本发明涉及威罗菲尼或其药物学上可接受的盐和MDM2抑制剂用于增殖性疾病治疗的用途。
本发明的再一个方面涉及威罗菲尼或其药物学上可接受的盐和MDM2抑制剂在制备用于增殖性疾病治疗的药物的用途。
附图简述
图1说明了威罗菲尼单一疗法、化合物II和化合物III单一疗法以及威罗菲尼加化合物II和威罗菲尼加化合物III联合疗法的抗肿瘤活性，如通过随着时间的平均肿瘤体积的变化所确定的。
发明详述
如本文中所用的，术语“抗肿瘤的(antineoplastic)”或“抗肿瘤(antitumor)”意思是抑制恶性细胞的发育、成熟或增殖。
如本文中所用的，术语“癌症(cancer)”和“癌(cancerous)”是指或描述哺乳动物中通常特征在于不受控制的细胞生长/增殖的生理状况。癌症的实例包括，但不限于，实体癌，如结肠直肠癌、黑素瘤、甲状腺癌或血癌(白血病)。
术语“结直肠肿瘤”或“结肠直肠癌”是指大肠的任何肿瘤或癌症，大肠包括结肠(从盲肠到直肠的大肠)和直肠，所述癌症包括，例如，腺癌和不太普遍的形式，如淋巴瘤和扁平细胞癌。
如本文中所用的，化合物(II)是指(4S,5R)-1-[[4-[[4,5-双(4-氯苯基)-2-[4-(叔-丁基)-2-乙氧基-苯基]-4,5-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-1-基]]-羰基]-4-[3-(甲基磺酰基)丙基]-哌嗪，其具有以下通式II中所示的结构，

如本文中所用的，“化合物(III)”是指4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸，其具有以下通式III中所示的结构，

如本文中所用的，术语“同时”意思是在相同的24小时时间段的过程中，给药两种组分，优选在彼此的一小时或两小时内，最优选在彼此的约半个小时内。
“抑制细胞生长或增殖”意思是将细胞的生长或增殖降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％，并且包括诱导细胞死亡。
如本文中所用的，“MDM2抑制剂”是完全或部分干扰MDM2结合p53的化合物。
如本文中所用的，术语化合物的“药物学上可接受的盐”是指保持化合物的生物有效性和特性的任何常规盐或碱加成盐，并且从合适的有机或无机酸或有机或无机碱形成。
当所述肿瘤的体积减小时，则称治疗后发生了肿瘤的“消退”。如果肿瘤仍然存在(肿瘤体积>0mm3)，但体积已经从治疗开始时减小，则称发生了“部分消退”(PR)。如果治疗后触诊到肿瘤不存在，则称发生了“完全消退”(CR)。
如本文中所用的，术语“连续的给药”或“连续地给药”意思是在一种组分给药超过二十四小时后给药另一种组分，优选在其他组分的2-15天内。
如本文中所用的，术语“治疗有效的”意思是给药于病人时，药物或组合或组合物的含量对于产生所需的治疗作用是有效的，所需治疗作用为例如，阻止癌性肿瘤的生长，或导致癌性肿瘤的收缩，或提高病人的寿命。
“治疗指数”是本领域的公认术语并且是用于临床试验的抗癌剂的选择中的重要参数。治疗指数考虑抗癌剂的功效、药物动力学、代谢和生物利用率。参见，例如，J.Natl.Cancer Inst.81(13):988-94(1989年7月5日)。
术语“肿瘤”是指所有肿瘤细胞生长和增殖，不管是恶性的或是良性的，以及所有癌症前期和癌细胞和组织。如本文中所涉及的，术语“癌症”、“癌”、 “细胞增殖性疾病”、“增殖性疾病”和“肿瘤”不是互相排斥的。
如上所述，“威罗菲尼”是特异性地靶向具有V600E突变的b-Raf的b-Raf激酶抑制剂。其化学结构和名称如下：

丙烷-1-磺酸{3-[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基-2,4-二氟-苯基]-酰胺}(化合物I)。
在一个实施方案中，以无定形形式来提供威罗菲尼(化合物(I))。在另一个实施方案中，作为微沉淀的散粉来提供威罗菲尼，即，其通过共同沉淀在分子上分散于聚合物基质中。在优选的实施方案中，所述聚合物基质用聚合物HPMC-AS(或HPMCAS)制得，如例如WO2010/114928中公开的。
如本文中所用的，b-Raf的“V600E”突变是指b-Raf蛋白中的突变，其中b-Raf的残基位置600的缬氨酸残基被谷氨酸替代。
在一个方面中，本发明涉及一种治疗患有增殖性疾病的病人的方法，该方法包括将(i)第一种组分，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐，和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的MDM2抑制剂，同时或连续给药于病人，所述活性剂的含量使得其组合在所述增殖性疾病的治疗中是治疗有效的。
应当理解增殖性疾病的治疗包括维持或降低肿瘤大小、诱发肿瘤消退(部分或完全)、抑制肿瘤生长和/或提高患有所述疾病的病人的寿命。
本发明还涉及一种试剂盒，其包含(i)第一种组分，其包含作为活性剂的一个或多个口服单位剂型的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的一个或多个口服或注射单位剂型的MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐。优选的实施方案包含本文中公开的作为MDM2抑制剂的通式(II)和(III)的化合物。在另一个实施方案中，提供了如上所述的药物，其包含化合物(III)作为MDM2抑制剂。
试剂盒或组合物可以用于例如增殖性疾病的治疗中。
在本发明的一个实施方案中，增殖性疾病是实体肿瘤。这样的肿瘤包括， 例如，结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌。
在另一个实施方案中，增殖性疾病是白血病。
在本发明的再一个实施方案中，增殖性疾病是包含具有V600E突变的b-Raf的实体肿瘤。
在本发明的另一个实施方案中，增殖性疾病是包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。
在本发明的再一个实施方案中，增殖性疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤和甲状腺癌，并且所述癌症涉及具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。
在本发明的再一个实施方案中，增殖性疾病是结肠直肠癌。
在本发明的再一个实施方案中，增殖性疾病是涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤的结肠直肠癌。
在本发明的再一个实施方案中，MDM2抑制剂是小分子MDM2抑制剂。在一个这样的实施方案中，MDM2抑制剂选自化合物I或化合物II。
在本发明的再一个实施方案中，本发明涉及一种治疗患有涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤的结肠直肠癌的病人的方法，其中所述方法包括将(i)第一种组分，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐，和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的化合物II，或其药物学上可接受的盐，同时或连续给药于病人，所述活性剂的含量使得其组合在所述癌症的治疗中是治疗有效的。
在本发明的再一个实施方案中，本发明涉及一种治疗患有涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤的结肠直肠癌的病人的方法，其中所述方法包括将(i)第一种组分，其包含作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐，和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的化合物III，或其药物学上可接受的盐，同时或连续给药于病人，所述活性剂的含量使得其组合在所述癌症的治疗中是治疗有效的。
根据本发明方法给药的每种组分的含量可以，但不是必须自身是治疗有效的。即，本发明特意考虑了如下的组合：其中组合中的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐和/或MDM2抑制剂的含量可以低于在单一疗法中给药所述药剂时对于每种活性剂判断为治疗有效的含量。
威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，可以，例如口服给药。化合物I和II可以口服或通过注射给药。
本发明的第一种组分和第二种组分以任意含量来给药并且持续任意时间，主要其组合的含量在治疗增殖性疾病中是治疗有效的。
在本申请的内容中，剂量是指威罗菲尼或MDM2抑制剂的含量。因此，考虑任一种组分的盐时，调节盐的含量，以给病人传送所述剂量的威罗菲尼或MDM2抑制剂。
在本发明的实施方案中，威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，以约200mg/天至约3000mg/天，约300mg/天至约2000mg/天，约960mg/天至约2000mg/天，或约960mg/天至约1920mg/天的剂量来给药。在再另一个实施方案中，剂量为约500mg/天。在再另一个实施方案中，剂量为约1820mg/天。
在本发明的一个实施方案中，可以作为每日的单个剂量或分成例如相等剂量(尽管这是不需要的)，并且每日给药两次(bid)来给药上述含量的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐。例如，威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，可以以约100mg至约1500mg bid，约150mg至约1000mg bid，约480mg至约1000mg bid，约480mg至约960mg bid或约960mg bid的剂量来给药。
在本发明的实施方案中，化合物II，或其药物学上可接受的盐，以约100mg/天至约4500mg/天，约500mg/天至约3500mg/天，或约2000mg/天至约3000mg/天的剂量来给药。在一个实施方案中，化合物II以约2500mg/天的剂量来给药。在另一个实施方案中，化合物II以约3000mg/天的剂量来给药。在另一个实施方案中，化合物II以约3500mg/天的剂量来给药。化合物II可以作为每日的单个剂量或分成多个日剂量来给药。
在本发明的实施方案中，化合物III，或其药物学上可接受的盐，以约100mg/天至约2500mg/天，约300mg/天至约2000mg/天，或约800mg/天至约1800mg/天的剂量来给药。在一个实施方案中，化合物III以约2500mg/天的剂量来给药。在另一个实施方案中，化合物III以约1500mg/天的剂量来给药。化合物III可以作为每日的单个剂量或分成多个日剂量来给药。
本发明进一步提供了一种用于治疗增殖性疾病的方法，其中将威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，以约200mg/天至约3000mg/天的剂量，特别是约960mg/天至约2000mg/天的剂量来给药，并且化合物II，或其药物学上可接受的盐，以约500mg/天至约3500mg/天的剂量来给药。在本发明的一个实施方案中，根据这一方法治疗的增殖性疾病是实体肿瘤，特别是所述疾病 选自结肠直肠癌、黑素瘤和甲状腺癌。在本发明的另一个实施方案中，增殖性疾病涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。在本发明的特定实施方案中，增殖性疾病是涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤的结肠直肠癌。
本发明进一步提供了一种用于治疗增殖性疾病的方法，其中威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，以约200mg/天至约3000mg/天的剂量，特别是约960mg/天至约2000mg/天的剂量来给药，并且化合物III，或其药物学上可接受的盐，以约300mg/天至约2000mg/天的剂量，特别是约800mg/天至约1800mg/天的剂量来给药。
在本发明的一个实施方案中，用这一方法治疗的增殖性疾病是实体肿瘤，特别是所述疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌。在另一个实施方案中，增殖性疾病是白血病。在本发明的另一个实施方案中，增殖性疾病涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。在本发明的特定实施方案中，增殖性疾病是涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤的结肠直肠癌。
本发明提供了一种治疗患有增殖性疾病的病人的方法，该方法包括将(i)第一种组分，其包含含量为约200mg/天至约3000mg/天的作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含含量为约100mg/天至约4500mg/天，更特别是约500mg/g天至约3500mg/天的作为活性剂的(4S,5R)-1-[[4-[[4,5-双(4-氯苯基)-2-[4-(叔-丁基)-2-乙氧基-苯基]-4,5-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-1-基]]-羰基]-4-[3-(甲基磺酰基)丙基]-哌嗪(化合物II)或其药物学上可接受的盐给药于病人。更具体地，威罗菲尼或其药物学上可接受的盐以约960mg/天至约1920mg/天的含量来给药，并且化合物II以约500mg/天至约3500mg/天的含量来给药。
本发明还提供了一种治疗患有增殖性疾病的病人的方法，该方法包括将(i)第一种组分，其包含含量为约200mg/天至约3000mg/天的作为活性剂的威罗菲尼或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含含量为约300mg/天至约2000mg/天，更特别是约800mg/g天至约1800mg/天的作为活性剂的4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸(化合物III)或其药物学上可接受的盐给药于病人。更具体地，威罗菲尼或其药物学上可接受的盐以约960mg/天至约1920mg/天的含量来给药，并且化合物III以约800mg/天至约1800mg/天的含量来给药。
本发明还进一步提供了一种试剂盒或组合物，其包含：(i)第一种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的(4S,5R)-1-[[4-[[4,5-双(4-氯苯基)-2-[4-(叔-丁基)-2-乙氧基-苯基]-4,5-二甲基-4,5-二氢-1H-咪唑-1-基]]-羰基]-4-[3-(甲基磺酰基)丙基]-哌嗪，或其药物学上可接受的盐。
本发明还进一步提供了一种试剂盒或组合物，其包含：(i)第一种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组分，其包含作为活性剂的一个或多个单位剂型的4-{[(2R,3S,4R,5S)-4-(4-氯-2-氟-苯基)-3-(3-氯-2-氟-苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基-丙基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-甲氧基-苯甲酸，或其药物学上可接受的盐。
在本发明的另一个方面中，将上文中所述的组分与放疗一起和/或另一种活性剂一起施用。
如之前所述的，根据本发明方法给药的每种组分的含量可以，但不是必须自身是治疗有效的，并且本发明特意考虑了如下的组合：其中组合中的每种活性剂的含量可以低于在单一疗法中给药所述药剂时对于每种活性剂判断为治疗有效的含量。
本发明的两种组分，即含有威罗菲尼的药物组合物和含有MDM2抑制剂的药物组合物，可以同时或连续给药，在使得获得最大的治疗效果的时间段内给药。如以下所证明的，连续给药组分时，可以先给药任一种组分。在优选的实施方案中，两种组分同时给药。
根据本发明，与单一疗法中单独给药每种组分相比，两种组分同时或连续的给药增强了癌症的治疗。例如，预期联合疗法中所需的MDM2抑制剂的含量低于单一疗法中所需的含量。因此，与任一种单独的药剂相比，组合效果导致提高的治疗指数，同时毒性保持可接受的。
优选地，两种组分可以以口服单位剂型，更优选地以胶囊或片剂形式给予病人。
根据病人的需求和病人对治疗的反应，可以通过医生来改变每种组分的剂量水平，以低于或高于本文中所述的。可以根据病人的需求，根据医生决定的任何给药时间来给药所述剂量。例如，可以在几天时间段内以单个剂量 或分开剂量来给药每种组分的剂量，或交替每日时间表。
在一个实施方案中，含有威罗菲尼的组合物和含有化合物II的组合物的给药发生在28天周期(即，4周重复周期)的第一天。含有威罗菲尼的组合物每日给药两次，大约12小时的间隔，并且持续给药，直至发生疾病进展或不可接受的毒性。在28天周期的第1-5天，持续约5天每日给药一次含有化合物II的组合物。或者，在28天周期的第1-10天，持续约10天每日给药含有化合物II的组合物。或者，在28天周期的第1、8和15天，每日给药一次含有化合物II的组合物。然后将每个周期重复持续总共多达约16-24剂。
在一个实施方案中，含有威罗菲尼的组合物和含有化合物III的组合物的给药发生在28天周期(即，4周重复周期)的第一天。含有威罗菲尼的组合物每日给药两次，大约12小时的间隔，并且持续给药，直至发生疾病进展或不可接受的毒性。在28天周期的第1-5天，持续约5天每日给药一次含有化合物III的组合物。或者，在28天周期的第1-10天，持续约10天每日给药含有化合物III的组合物。或者，在28天周期的第1、8和15天，每日给药一次含有化合物III的组合物。然后将每个周期重复持续总共多达约16-24剂。
在一个实施方案中，在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1-5天，以约3500mg/天的含量，持续约5天每日给药一次化合物II。或者，在28天周期的第1-10天，以约1500mg含量，持续10天每日给药两次(BID)化合物II。或者，在28天周期的第1、8和15天，以约3000mg/天至约4500mg/天，尤其是4500mg/天的含量，每周给药一次化合物II。
在一个实施方案中，在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1-5天，以300mg/天至约2000mg/天的含量，持续约5天每日给药一次化合物III。或者，在28天周期的第1、8和15天，以约至约2500mg/天的含量，每周给药一次化合物III。
每种组分还可以含有其他物质，如防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂 和抗氧化剂。
此外，本发明提供了威罗菲尼或其药物学上可接受的盐和MDM2抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途。
本发明进一步提供了威罗菲尼或其药物学上可接受的盐和MDM2抑制剂在制备用于治疗增殖性疾病的药物的用途。
申请人已经使用含有重新(de novo)威罗菲尼抗性MDM2非扩增/非超表达RKO结肠直肠癌模型的小鼠进行了研究。这种p53野生型结肠直肠癌系表达B-raf V600E突变，并且因此认为是难以治疗人结肠直肠癌的模型。
申请人发现了将50mg/kg bid和200mg/kg化合物II每周一次的组合给予带有肿瘤的小鼠，产生了肿瘤生长抑制(TGI)和提高的寿命(ILS)结果，这在[p<0.05]下显著高于相关的单一疗法结果。
这些研究表明用威罗菲尼和化合物II的组合治疗病人将优于使用任一单独药剂的治疗。此外，他们表明组合这两种药剂允许至少降低威罗菲尼的剂量来获得相等或更好的结果。
申请人还发现了将50mg/kg bid和100mg/kg化合物III每周一次的组合给予带有肿瘤的小鼠，产生了生长抑制(TGI)和提高的寿命(ILS)结果，这在[p<0.05]下显著高于相关的单一疗法结果。
这些研究表明用威罗菲尼和化合物III的组合治疗病人将优于使用任一单独药剂的治疗。此外，他们表明组合这两种药剂允许至少降低威罗菲尼的剂量来获得相等或更好的结果。
因此，在根据本发明的一个实施方案中，提供了一种药物产品，其包含(i)第一种组合物，其包含作为活性剂的威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐；和(ii)第二种组合物，其包含作为活性剂的MDM2抑制剂，或其药物学上可接受的盐；作为组合制备物用于癌症治疗中的同时或连续使用；所述活性剂的含量使得其组合在癌症的治疗中是治疗有效的。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了一种如上限定的药物产品，其中第一种组合物与第二种组合物连续给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了一种如上限定的药物产品，其中第一种组合物与第二种组合物同时给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了一种如上限定的药物产品，其中将第一种和第二种组合物共同配制。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了之前本文中限定的药物产品，其用作包含V600突变阳性b-Raf的癌症，优选具有V600E突变的肿瘤的治疗中的药物。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中所述癌症选自结肠直肠癌、黑素瘤、肉瘤和甲状腺癌，并且其中所述癌症涉及包含具有V600E突变的b-Raf的肿瘤。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，以约200mg/天至约3000mg/天的含量来给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，以约960mg/天至约2000mg/天的含量来给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中所述MDM2抑制剂是本文之前公开的化合物(II)或(III)，或所述化合物的药物学上可接受的盐。在特别优选的实施方案中，MDM2抑制剂是本文中公开的通式(III)的化合物，或其药物学上可接受的盐。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中化合物(III)，或其药物学上可接受的盐，以约100mg/天至约2500mg/天的含量来给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中化合物(III)，或其药物学上可接受的盐，以约300mg/天至约2000mg/天的含量来给药。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1-5天，以300mg/天至约2000mg/天的含量，持续5天每日给药一次化合物III，或其药物学上可接受的盐。
在根据本发明的另一个实施方案中，提供了如上限定的药物产品，其中在28天周期的约第1天至约第28天，以约480mg至约960mg的含量，每日给药两次威罗菲尼，或其药物学上可接受的盐，并且在28天周期的第1、8和15天，以约2500mg/天的含量，每周给药一次化合物III，或其药物学 上可接受的盐。
现在将参考以下实施例来更全面地理解本发明。然而，它们不应当被解释为限制本发明的范围。
实施例
通过以下实验证明了本发明的组合对实体肿瘤的功效。
本文中使用的缩写如下：
q.s.   按照需要那么多
x      倍数
po     口服
ip     腹膜内
bid    每日两次
wk     每周一次
qd     每日一次
q4d×5 每四日一次，总共五剂
BWL    体重减轻
SEM    平均值的标准误差
在以下的实施例中，用图将体重减轻表示为平均组体重的百分比变化，使用公式：((W-W0)/W0)×100，其中“W”表示在特定天的治疗组的平均体重，而“W0”表示在开始治疗时相同治疗组的平均体重。还使用以上公式表示了最大体重减轻，并且表明了在整个实验过程中在任何时间针对特定组观察到的最大百分比体重减轻。
实施例1
这个实施例描述了包含测试化合物的悬浮液的形成。
威罗菲尼的悬浮液
首先形成了包含威罗菲尼和羟丙基甲基纤维素醋酸酯琥珀酸酯(HPMC-AS)的固体分子复合物。
将分别大约为3:7比例的威罗菲尼和HPMC-AS溶解于二甲基乙酰胺 (DMA)中。然后边搅拌边将所得到的溶液加入非常冷的稀盐酸中，形成作为固体分子复合物的威罗菲尼和HPMC-AS的共同沉淀，其中威罗菲尼以纳米颗粒大小范围存在。DMA与酸的比例在1:5至1:10的范围中。
然后用水洗涤共同沉淀物，以除去DMA，过滤，干燥至<2％含水量，并且通过#30筛网，然后评价。所得到的固体分子复合物为30％重量的威罗菲尼和70％重量的HPMC。
然后将复合物与胶体二氧化硅(可以作为200获自Evonik Industries AG，Essen，德国)混合，使得每100g混合物，97g为复合物，3g为胶体二氧化硅。
然后制备了含有2％羟丙基纤维素(可以作为LF获自Aqualon，Wilmington，Delaware，USA)以及为了pH调节目的Qs至pH4的1N HCl的水性载体。
将23.2ml载体平衡至室温，并且缓慢转移至773.2mg的上述混合物中。然后将所得到的制备物混合，直至获得均匀的悬浮液。所得到的悬浮液含有9.375mg/ml的威罗菲尼。
将悬浮液存储在2-8℃并且避光。
在2％羟丙基纤维素(Klucel)、0.2％聚山梨酸酯80(吐温80)中的化合物II在含有0.09％对羟基苯甲酸甲酯和0.01％对羟基苯甲酸丙酯的水中的悬浮液。化合物可以在制备悬浮液前进行研磨，或作为悬浮液进行研磨。
最终悬浮液的内含物如下：

这提供了12.5或25mg/ml化合物II的悬浮液。
将载体溶液或化合物悬浮液存储在2至8℃。
载体溶液(与用于化合物II的相同)中的化合物III的悬浮液。
首先形成了包含化合物III和羟丙基甲基纤维素醋酸酯琥珀酸酯(HPMC-AS)的固体分子复合物。
将大约为3:7或1:1比例的化合物III和HPMC-AS分别溶解于二甲基乙酰胺(DMA)中。然后边搅拌边将所得到的溶液加入非常冷的稀盐酸中，形成作为固体分子复合物的化合物III和HPMC-AS的共同沉淀，其中化合物III以纳米颗粒大小范围存在。DMA与酸的比例在1:5至1:10的范围中。
然后用水洗涤共同沉淀物，以除去DMA，过滤，干燥至<2％含水量，并且通过#30筛网，然后评价。所得到的固体分子复合物为30％重量的化合物III和70％重量的HPMC或50％化合物III和50％重量HPMCAS。
然后将复合物悬浮于载体溶液中，所述载体溶液是含有2％羟丙基纤维素(可以作为LF从Aqualon，Wilmington，Delaware，USA获得)和0.2％聚山梨酸酯80并含有0.09％对羟基苯甲酸甲酯和0.01％对羟基苯甲酸丙酯的水性载体。然后将所得到的制备物缓慢混合，直至获得均匀的悬浮液。所得到的悬浮液含有10或12.5mg/ml的化合物III。
将悬浮液存储在2-8℃并且避光。
最终悬浮液的内含物如下：

这提供了10或12.5mg/ml化合物III的悬浮液。
将载体溶液或化合物悬浮液存储在2至8℃。
实施例2：体内试验
体内植入：
给小鼠植入RKO细胞异种移植物。以下描述所用的小鼠、细胞系和植入。
将雌性无胸腺Crl:NU-Foxn1nu小鼠用于功效测试(Charles River，Wilmington，MA，USA)。小鼠为10-12周大并且称重为23-25克。每日通过观察和血样分析评价小鼠的健康，所述血样取自共用搁板架上的标记动物。允许所有动物适应并从运输相关的压力恢复一周。随意提供高压蒸汽处理过的水和辐照过的食物(5058-ms Pico Lab小鼠饲料，Purina Mills，Richmond，IN，USA)，并且将动物保持在12小时光暗周期中。在使用前将笼子、草垫和水瓶经过高压蒸汽处理，并且每周更换。所有动物实验根据Guide for the Care and Use of Laboratory Animals、当地法规以及由我们的AAALAC授权机构中的Roche Animal Care and Use Committee批准的实验方案来进行。
将RKO细胞(American Type Culture Collection，Rockville，MD)维持于DMEM培养基+10％(v/v)热灭活FBS+1％(v/v)200nM L-谷氨酰胺。每只小鼠接受了总体积0.2ml中的2×106个细胞。使用1cc注射器和26规格针，在每只小鼠的右侧皮下植入细胞。
根据肿瘤体积，将含有RKO异种移植物的小鼠随机分成每组10只小鼠的组，使得所有组具有约145mm3的相似起始平均肿瘤体积。
在细胞植入后第14天开始小鼠的治疗，并且在细胞植入后第28天结束。使用了10组小鼠。将每组接受如下的不同疗法：
接受对照载体的小鼠；qd po+bid po
接受80mg/kg qd po qd×5的化合物III的小鼠；
接受100mg/kg po每周一次×2的化合物III的小鼠；
接受100mg/kg po qd×14的化合物II的小鼠；
接受200mg/kg po每周一次×2的化合物II的小鼠；
接受50mg/kg po bid×14的威罗菲尼的小鼠；
接受80mg/kg qd×5的化合物III+50mg/kg bid的威罗菲尼的小鼠；
接受100mg/kg每周一次的化合物III+50mg/kg bid的威罗菲尼的小鼠；
接受100mg/kg qd的化合物II+50mg/kg bid的威罗菲尼的小鼠；
接受200mg/kg每周一次的化合物II+50mg/kg bid的威罗菲尼的小鼠
使用1cc注射器和18-规格饲喂针(0.2ml/动物)每日口服(po)给药化合物。对于组合组的同时给药，在早晨将MDM2抑制剂和威罗菲尼给药于每只小鼠，彼此分开快速连续地给药，并且没有特定的顺序。在8小时后的下午给予第二剂威罗菲尼。治疗持续时间为2周。所有给药基于25克的平均小鼠体重。
每周测量肿瘤体积和动物体重二至三次，并且每日监控动物的临床体征。
毒性：
在目前使用任何剂量或时间表、单一疗法或组合的研究中，没有观察到毒性。观察到了与错误给药相关的技术死亡，然而，认为这种死亡是非药物相关的。
用图将体重减轻表示为平均组体重的百分比变化，使用公式：((W-W0)/W0)×100，其中“W”表示在特定天的治疗组的平均体重，而“W0”表示在开始治疗时相同治疗组的平均体重。还使用以上公式表示了最大体重减轻，并且表明了在整个实验过程中在任何时间针对特定组观察到的最大百分比体重减轻。在证明了≧20％体重减轻和/或死亡的给定组中，将毒性限定为≧小鼠的20％。
实验的结果显示于表1中。
表1 毒性概述


肿瘤生长抑制(TGI)和存活/寿命增加(ILS)的评价
功效数据用图表示为平均肿瘤体积±平均的标准误差(SEM)。将治疗组的肿瘤体积表示为对照组的肿瘤体积的百分比(％T/C)，使用公式：100x((T-T0)/(C-C0))，其中T表示实验过程中特定天的治疗组的平均肿瘤体积，T0表示治疗第一天的相同治疗组的平均肿瘤体积；C表示实验过程中所述特定天的对照组的平均肿瘤体积，而C0表示治疗第一天的相同治疗组的平均肿瘤体积。
使用椭圆体公式计算了肿瘤体积(以立方厘米计)：(D x(d2))/2，其中“D”表示肿瘤的大直径，而“d”表示小直径。在一些情况中，使用公式：((T-T0)/T0)x100，计算肿瘤消退和/或肿瘤体积的百分比变化，其中“T”表示特定天的治疗组的平均肿瘤体积，而“T0”表示治疗开始时相同治疗组的平均肿瘤体积。
使用Mann-Whitney秩和检验，将治疗组的统计学分析与载体组进行比较，通过单侧ANOVA和post-hoc Bonferroni t-检验(GraphPad Prism，版本 5.03)分析组之间的比较。当概率值(p)≤0.05时，认为组之间的差异是显著的。
对于存活评价，将结果作为相对肿瘤植入后天数的百分比存活绘成图(GrophPad Prism，版本5.03)。将1500mm3的单独肿瘤体积用作死亡的替代。按照100×[(治疗组的中值存活天数-对照组的中值存活天数)/对照组的中值存活天数]来计算％ILS。利用Kaplan Meier存活分析测定了中值存活。通过Log-rank(Mantel-Cox)检验(GrophPad Prism，版本4.3，La Jolla，CA)，将治疗组的存活与载体组进行比较。当概率值(p)≤0.05时，认为组之间的差异是显著的。
功效结果显示于表2、3和4以及图1中。
表2 肿瘤生长抑制


表3 肿瘤生长抑制


存活的评估：
以下表4中显示了各种时间表的相对增加的寿命(ILS)。接受80mg/kg每日一次×5和100mg/kg每周一次的化合物III加50mg/kg bid的威罗菲尼的组具有最高百分比的寿命增加，接着是接受100mg/kg每日一次的化合物II加50mg/kg bid的威罗菲尼的组。
表4 存活概况


统计学分析：
以下表5中显示了统计学交叉比较。如所示的，100mg/kg每周一次的化合物III+50mg/kg bid的威罗菲尼和200mg/kg每周一次的化合物II+50mg/kg bid的威罗菲尼的组合在统计学上优于所有单一治疗组(p<0.05)。
表5 组间的统计学比较


*单侧ANOVA，post-hoc Bonferroni
**Log Rank检验