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1、(10)申请公布号 CN 103990144 A (43)申请公布日 2014.08.20 CN 103990144 A (21)申请号 201410241619.1 (22)申请日 2014.06.03 A61K 47/48(2006.01) A61K 36/56(2006.01) A23K 1/18(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A61P 43/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) (71)申请人 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研 究所 地址 730000 甘肃省兰州市七里河区小西湖 硷沟沿 335 号 (72)发明人 梁剑平 郭文柱 郝宝。
2、成 王学红 陶蕾 刘宇 赵凤舞 尚若锋 郭志廷 贾忠 (74)专利代理机构 北京中恒高博知识产权代理 有限公司 11249 代理人 陆菊华 (54) 发明名称 一种钩吻生物碱的包合物及其制备方法和应 用 (57) 摘要 本发明公开一种钩吻生物碱的包合物， 所述 包合物的主体分子为 - 环糊精， 客体分子为钩 吻生物碱。本发明的钩吻生物碱包合物能显著降 低钩吻生物碱的毒性， 作为鸡饲料添加剂， 可明显 提高肉鸡的日增重及采食量， 并提高饲料转化率 ； 同时还能提高饲料氮的利用率， 增加氮沉积 ； 促 进肌细胞的肥大性增生， 增强肌肉的生物蛋白合 成能力。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 。
3、页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103990144 A CN 103990144 A 1/1 页 2 1. 一种钩吻生物碱的包合物， 所述包合物的主体分子为 - 环糊精， 客体分子为钩吻 生物碱。 2. 权利要求 1 所述钩吻生物碱的包合物的制备方法， 钩吻生物碱与 - 环糊精在乙醇 溶液中， 于 20-50反应 2-12 小时， 得到钩吻生物碱的包合物。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述钩吻生物碱与-环糊精的质量 比为 1:(1-4)。 4. 权利要求 1 所述钩吻生物。
4、碱的包合物作为鸡饲料添加剂的应用。 5. 根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 所述包合物在鸡饲料中的添加量为 5-7.5mg/kg。 6. 根据权利要求 5 所述的应用， 其特征在于， 所述包合物在鸡饲料中的添加量为 5mg/ kg。 权 利 要 求 书 CN 103990144 A 2 1/5 页 3 一种钩吻生物碱的包合物及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明属于药物领域， 具体涉及一种钩吻生物碱的包合物及其制备方法和应用。 背景技术 0002 钩吻 (Gelsemium elegans Benth) 又名断肠草、 毒根、 大茶药等， 为马钱科植物， 性温味辛、 苦， 有。
5、大毒， 主要含生物碱， 亦是其重要的有毒成分。国内外研究表明， 钩吻具有 多方面的药理作用， 如抑制呼吸中枢和心脏收缩作用， 松驰平滑肌、 镇痛、 散瞳、 促进巨噬细 胞吞噬功能， 抗炎作用等， 但由于钩吻有效剂量与中毒剂量接近， 临床表现出其剂量不好把 握、 制作饲料添加剂比较困难， 使其推广应用受到限制。 发明内容 0003 本发明的目的是提供一种降低钩吻生物碱毒性的包合物及其制备方法和应用。 0004 本发明实现上述目的所采用的技术方案如下 ： 一种钩吻生物碱的包合物， 所述包合物的主体分子为 - 环糊精， 客体分子为钩吻生 物碱。 0005 所述钩吻生物碱的包合物的制备方法， 钩吻生物。
6、碱与 - 环糊精在乙醇溶液中， 于 20-50反应 2-12 小时， 得到钩吻生物碱的包合物。 0006 进一步， 所述钩吻生物碱与 - 环糊精的质量比为 1:(1-4)。 0007 所述钩吻生物碱的包合物作为鸡饲料添加剂的应用。 0008 进一步， 所述包合物在鸡饲料中的添加量为 5-7.5mg/kg。 0009 进一步， 所述包合物在鸡饲料中的添加量为 5mg/kg。 具体实施方式 0010 以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。 0011 钩吻生物碱的生产技术已非常成熟， 如 生物化工产品生产技术 ， 王荣富， 周可金 编著， 安徽科学技术出版社， 1995年06月第1版， 第185-。
7、186页详细记载了钩吻生物碱的生 产过程， 现简述生产过程如下 ： 先将钩吻的干燥根皮粉碎， 接着用氢氧化钠溶液拌湿， 阴干， 在 60-70处烘 0.5-3 小时， 再用氯仿回流提取， 过滤， 滤液用盐酸萃取， 合并酸液， 调 pH 值 至 11， 再用氯仿萃取， 合并氯仿液， 浓缩回收氯仿， 以无氯仿味为止， 得到浸膏， 即钩吻生物 碱。 0012 实施例 1 将1g钩吻生物碱和1g -环糊精加入烧杯中， 加入10毫升50%(V/V)乙醇使钩吻生物 碱和 - 环糊精溶解， 在 30下搅拌 2h 后， 减压蒸除乙醇， 过滤， 滤液真空干燥即得到包合 物。 0013 实施例 2 将1g钩吻生物。
8、碱和2g -环糊精加入烧杯中， 加入50毫升50%(V/V)乙醇使钩吻生物 说 明 书 CN 103990144 A 3 2/5 页 4 碱和-环糊精溶解， 在50下搅拌6h， 减压蒸除乙醇， 过滤， 滤液真空干燥即得到包合物。 0014 实施例 3 将 1g 钩吻生物碱和 3g - 环糊精加入烧杯中， 加入 50 毫升 50%(V/V) 乙醇使钩吻生 物碱和-环糊精溶解， 在20下搅拌10h， 减压蒸除乙醇， 过滤， 滤液真空干燥即得到包合 物。 0015 实施例 4 将 1g 钩吻生物碱和 4g - 环糊精加入烧杯中， 50 毫升加入 50%(V/V) 乙醇使钩吻生物 碱和-环糊精溶解， 。
9、在30下搅拌6h， 减压蒸除乙醇， 过滤， 滤液真空干燥即得到包合物。 0016 实施例 5 急性毒性试验 （一） 小白鼠的急性毒性试验 1、 试验动物 试验动物及其饲养管理 ： 健康 SPF 级昆明小鼠， 6-7 周龄， 每组各 10 只， 雌雄各半， 体重 差异不超过平均体重的 20%。实验动物自由采食、 饮水， 非交配期雌雄分笼饲养 ； 饲养温度 223， 相对湿度 5020%。 0017 2、 试验方法 试验前， 小鼠在动物房饲养 5-7d， 以适应试验条件。给药前动物隔夜空腹 ( 一般禁食 16h， 不限饮水)。 试验时， 称量动物体重， 对各组动物采用经口灌胃法一次染毒， 急性毒性。
10、试 验结果如下 ： 3 结果如下 。 （二） 雏鸡急性毒性试验 1 材料 1.1 试验动物 1 日龄三黄鸡， 购自甘肃省兰州市华陇家禽育种公司， 室温 30左右饲养， 观察 3d， 临 床健康， 自由采食与饮水。 0018 2 试验方法 将 5 日龄雏鸡随机分为 7 个组， 其中 5 个给药组， 1 个溶剂组， 1 个空白对照组， 每组 10 只。按 1:0.75 的等比级数设 5 个剂量组， 禁食 15h（不禁水） 后， 各给药组均按每只小白鼠 的体重计算出给药量， 用金属胃管经口灌服。 0019 3 结果如下 说 明 书 CN 103990144 A 4 3/5 页 5 。 0020 由急。
11、性毒性试验结果可见 , 钩吻生物碱包合前后， 小白鼠 LD50 分别为 69.44mg/ kg 与 367.75mg/kg， 肉仔鸡 LD50 为 64.8mg/kg 与 324mg/kg， 表明钩吻生物碱用 - 环糊精 包合后， 能显著降低钩吻生物碱的毒性。而钩吻生物碱毒性太大， 不易作为饲料添加剂。 0021 实施例 6 包合物作为饲料添加剂对肉鸡生长的影响 1 材料与方法 1. 1 试验动物与试验材料 试验用鸡由甘肃省华垄鸡场购入 ； 添加剂为钩吻生物碱包 合物。 0022 1. 2 试验设计 采用单因子随机分组试验设计。设钩吻生物碱包合物的每公斤饲 料添加不同水平 4 个处理 ： 0、。
12、 5、 7.5、 10.0 mg。1 日龄安卡红羽肉鸡 160 只， 饲喂 1 周后， 随 机分为 4 组， 每组 4 个重复， 每重复 10 只， 公母各半， 经方差检验， 分组后体重差异不显著。 0023 1. 3 测定项目及方法 1. 3. 1 饲养试验。试验期为 56 d， 分为 3 期 ： 1-3 周龄、 4-6 周龄、 7-8 周龄。试验饲粮 根据 5 安卡红羽肉鸡饲养管理手册 6 营养推荐量配制各阶段玉米 - 豆粕型基础饲粮配方， 试鸡经空白饲粮预饲6d 后， 从7日龄开始喂添加包合物的饲料， 测定日增重、 日采食量和饲 料效率。 0024 1. 3. 2 代谢试验。在 28 日。
13、龄时进行 6d 消化代谢试验， 记录每天的投料量和剩余 料量 ； 并在每天给各组试鸡称取饲粮的同时， 采集每组饲粮样品， 将 6d 所采集饲粮样混合 均匀以备分析 ； 于消化代谢试验期每天早晨饲喂前收集粪便， 将收集的粪便的 10% 采样装 入铝盒内， 65烘箱中烘干， 回潮 24h 后恒重。 0025 1. 3. 3 屠宰试验。分别在 21、 42、 56 日龄时每个处理每重复随机抽取 2 只鸡， 颈 静脉采血5ml， 3000 r/min 离心15min， 分离血浆， -2 保存待测 ； 然后宰杀试鸡， 进行采样， 同时采集胸肌 1g， -7保存待测。 0026 1. 4 样品的制备和分析。
14、 1. 4. 1 饲料和粪尿中的粗蛋白测定。采用常规的半微量凯氏定氮法分析。 0027 1. 4. 2 血浆总蛋白、 白蛋白的测定。 总蛋白采用双缩脲法测定， 白蛋白采用溴-甲 酚绿比色法测定， 试剂盒均由南京建成生化公司提供。 0028 1. 4. 3 肌肉中 DNA 和 RNA 的测定。试鸡肌肉组织中 DNA 和 RNA 的提取采用 STS 法， 然后用紫外分光光度计测定光吸收值。 0029 2 结果与分析 2. 1 不同浓度钩吻生物碱包合物对肉鸡生产性能的影响， 由表 1 可见， 饲喂钩吻生物 碱包合物后， 5.0 和 7.5 mg/ kg 剂量组的日增重明显高于对照组 ( P 0.05。
15、) ， 7.5mg/ kg 剂量组的平均日采食 量则显著高于10.0mg/ kg 和对照组( P0.05) ， 且全 期也表现差异不显著 ( P0.05)。 0030 2. 2 不同浓度钩吻生物碱包合物对氮平衡的影响 由表 2 可以看到， 4 组试鸡中， 钩吻生物碱包合物 5.0 和 7.5 mg/ kg 剂量组日食入粗蛋白显著高于对照组和 10.0mg/ kg 剂量组 ( P 0.05)， 钩吻生物碱 包合物 10.0mg/ kg 组比对照组稍高， 但差异不显著 ( P0.05) ； 饲喂钩吻生物碱包合物的 3 组日排出蛋白显著低于对照组 ( P0. 05) ； 添加钩吻生物碱包合物的试鸡肌。
16、肉中 RNA/DNA 值显著高于 对照组 ( P 0. 05)， 表明饲料 中添加钩吻生物碱包合物后能提高肉鸡的健康水平。 0036 表 4 不同浓度钩吻生物碱包合物对肉鸡肌肉组织中 DNA 和 RNA 的影响 。 0037 由可以看出， 本发明的钩吻生物碱包合物以每公斤饲料添加 5mg 的综合效果最明 显， 与空白对照组相比， 肉鸡的日增重 （1-8 周） 由 34.91.25g/ 只提高到 39.880.49g/ 只， 日采食量由81.571.38g/只提高到92.990.28g/只， 而饲料/增重则由2.540.04 降至 2.210.06， 显著提高了饲料转化率 ； 饲料氮的利用率 (%) 由 61.573.45 提高到 69.571.56， 提高了对营养物质 ( 特别是蛋白质 ) 吸收利用， 节约了饲料 ； 鸡肌肉中 RNA/ DNA由37.932.35显著提高到56.562.38。 表明钩吻生物碱包合物作为鸡饲料添加剂具 有显著的催肥效果， 能显著提高饲料转化率和营养吸收利用率， 促进肌细胞的肥大性增生， 增强肌肉的生物蛋白合成能力。 说 明 书 CN 103990144 A 7 。