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1、(10)申请公布号 CN 104116740 A (43)申请公布日 2014.10.29 CN 104116740 A (21)申请号 201410394512.0 (22)申请日 2014.08.12 A61K 31/4748(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61K 31/445(2006.01) (71)申请人 中山大学 地址 510000 广东省广州市越秀区中山二路 74 号 (72)发明人 顾怀宇 林润轩 林睿邦 段松伟 黄嘉琦 (74)专利代理机构 广州三环专利代理有限公司 44202 代理人 张帅 (54) 发。
2、明名称 汉防己甲素治疗老年痴呆症的医药用途及含 有汉防己甲素的药物组合物 (57) 摘要 本发明请求保护汉防己甲素用于制备预防或 治疗老年痴呆症药物中的用途及其药物组合， 属 于医药领域。 药理实验证实， 汉防己甲素可以显著 抑制 淀粉样蛋白的沉积， 并且可以与其他药物 作用机制不同的老年痴呆症药物联合用药， 其不 仅能够降低化学治疗药物的毒副作用， 而且可以 取得协同治疗的效果。其用于老年痴呆症预防或 治疗疗效确切， 副作用小， 因此具有广阔的医学应 用前景。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 12 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书。
3、1页 说明书12页 (10)申请公布号 CN 104116740 A CN 104116740 A 1/1 页 2 1. 汉防己甲素在制备预防或治疗老年痴呆症药物中的用途。 2. 如权利要求 1 所述的药物用途， 其特征在于汉防己甲素为口服制剂， 其人用给药量 为 0.1mg/kgd5mg/kgd， 优选为 0.5mg/kgd3.5mg/kgd。 3. 如权利要求 2 所述的药物用途， 其特征在于所述汉防己甲素的口服制剂为其片剂、 胶囊剂， 缓释胶囊剂、 缓释片剂、 混悬剂。 4. 一种治疗老年痴呆症的药物组合物， 其特征在于该药物组合物含有汉防己甲素和银 杏内酯。 5. 如权利要求 4 所述。
4、的药物组合物， 其特征在于所述药物组合物中汉防己甲素和银杏 内酯的重量比为 1 ： 0.1-1， 优选为 1 ： 0.5。 6.如权利要求4或5所述的药物组合物， 其特征在于所述药物组合物中含有多奈哌齐。 7. 如权利要求 6 所述的药物组合物， 其特征在于所述药物组合物中汉防己甲素与多奈 哌齐的重量份数比为 1 ： 0.1-10， 优选为 1 ： 1-5， 更优选为 1 ： 2。 8. 如权利要求 4-7 任一所述的药物组合物， 其特征在于所述药物组合物为口服制剂， 所述口服制剂中每一制剂单位中含有汉防己甲素的含量为 0.1mg-200mg。 权 利 要 求 书 CN 104116740 A。
5、 2 1/12 页 3 汉防己甲素治疗老年痴呆症的医药用途及含有汉防己甲素 的药物组合物 技术领域 0001 本发明属于医药领域， 涉及一种已知药物的新用途及药物组合物， 具体的说涉及 汉防己甲素在制备治疗老年痴呆症药物中的用途及含有汉防己甲素的药物组合物。 背景技术 0002 老年痴呆症， 又称阿尔茨海默病 (Alzhimer s Disease， AD)， 是一种中枢神经系统 的退行性疾病， 其临床表现为认知和记忆能力的不断恶化， 日常生活能力进行性减退以及 出现各种精神分裂症状和行为障碍。 随着疾病的发展， 患者会逐渐丧失生活自理能力， 给患 者的个人家庭和社会带来沉重的负担。患病率研究。
6、显示， 美国在 2000 年的阿尔茨海默病例 数为450万例， 年龄每增加5岁， 阿尔茨海默病病人的百分数将上升2倍， 也就是说， 60岁人 群的患病率为 6%， 而 85 岁人群的患病率为 30%。目前我国超过 60 岁的老人约有 1.29 亿， 占总人口的 10.15%。因而， 重视老年痴呆症的预防和治疗具有十分重要的社会意义和临床 意义。 0003 老年痴呆症的发病机制目前仍不明确， 关于老年痴呆症发病机制的主流学说是 淀粉样蛋白级联假说。该假说认为 淀粉样蛋白样前体 (APP) 异常降解生成过量的 A 蛋白， 并在脑内沉积形成老年斑的核心， 其可激活小胶质细胞， 引起炎症反应， 损伤线。
7、粒体 引起能量代谢障碍， 生成过多氧自由， 导致机体的氧化应激损害， 激活细胞凋亡途径。另一 方面， A 还能激活蛋白激酶， 促使 tau 蛋白异常磷酸化， 损伤胆碱能神经元， 引起中枢胆碱 能系统的病变。这些病理变化又促进 A 的生成和异常堆积， 产生正反馈的级联放大效应， 最终导致神经元的减少和递质释放异常。 0004 目前治疗AD的药物主要包括以下几个方面 ： 乙酰胆碱酯酶抑制剂， 针对AD患者 脑内胆碱能神经元大量丢失， 乙酰胆碱递质严重缺乏， 运用乙酰胆碱酯酶抑制剂， 可增加脑 内乙酰胆碱的含量， 促进神经元的恢复。这一类的药物现在主要有他克林、 多奈哌齐、 利斯 的明等抗炎药物， 。
8、由于在老年斑淀粉样变核心的周围存在着反应性的胶质细胞， 有人因 此提出 AD 的慢性炎症学说， 并利用合适的抗炎药物来达到预防和治疗的目的。这一类的药 物有阿司匹林等。兴奋性谷氨酸受体拮抗剂， 保护细胞免受兴奋性递质细胞毒性作用的 攻击。这一类的药物有美金刚等。神经生成因子， 它能特异性的作用于神经元， 刺激神经 元的可塑性， 促进神经元的生长、 存活， 维护细胞的功能。其他， 如雌激素的替代疗法， 脑 细胞代谢激活剂， 钙离子拮抗剂的运用等。虽然上述药物在临床应用上已经显示一定的疗 效， 但长期使用过程中存在着严重的不可避免的副作用。 如他克林具有严重的肝脏毒性， 需 要定期监测肝功能 , 。
9、故他克林现在已极少用于病人。 0005 当化学合成药物的毒副作用严重困扰着医学界时， 人们开始更多的关注天然药 物， 近年来， 天然药物应用于 AD 的防治已积累了大量的宝贵经验， 运用天然药物治疗 AD 主 要有一下两点优势 ：（1） 作用于多靶点并能对人体机能经行整体性的调节 ；（2） 副作用小。 因此， 对于 AD 的治疗， 天然药物的开发和运用具有更大的优势和更广阔的前景。 说 明 书 CN 104116740 A 3 2/12 页 4 0006 汉防己甲素 ( 又名粉防己碱 ) 来源于防己科植物粉防己 (Stephania tetrandra S.Moore) 的根， 其结构如式 (。
10、I) 所示， 为无色针状结晶， 熔点 217 218， 临床主要用 于治疗早期轻度高血压。金满文等报道汉防己甲素对动物的乳头肌， 免心房及主动脉系等 心血管方面均呈现不同的药理作用。王冈等经动物实验发现， 此药可使心肌收缩力降低， 心动频率减慢， 扩张末梢血管， 降低外周阻力， 减轻心脏后负荷及降低心肌耗氧量， 抑制兴 奋一收缩偶联以及松弛血管平滑肌。对动物左心房肌收缩有频率依赖性及膜电位依赖性 的抑制作用， 并具有明显缩短动物心乳壮肌细胞动作电位时程， 对慢反应动作电位幅度和 时程均有明显抑制作用。经对照实验证明， 其上述作用与慢通道阻滞剂维拉帕米的效应极 相似， 此效应呈剂量及时间依赖性。。
11、当药浓度为 30umol/L 和 100umoi/L， 给药后 100min 时， 慢内向电流的峰值分别由给药前的 47.95.6nA 和 38.421.5nA 降至 217.8nA 和 6.37.7Na,p0.01， 如用汉防己甲素100umol/L对由二价阳离子Sr2+所介导的慢内向电 流亦有明显的抑制作用。结果提示， 汉防己甲素为一良好的慢通道阻滞剂。 0007 专利申请CN 102669118 A公开了一种汉防己甲素( 又名粉防己碱)的药物用途， 实验结果显示该化合物在体外具有较好的抗真菌生物被膜活性。 专利申请CN 102898433 A 公开了一种汉防己甲素的没食子酸盐、 其药物组。
12、合物、 其制备方法及其用途。 该申请对汉防 己甲素进行结构修饰， 制备了一种汉防己甲素的新衍生物即汉防己甲素没食子酸盐， 所述 汉防己甲素没食子酸盐为活性成分制备抗肿瘤、 降血压、 抗炎、 镇痛药物。 发明内容 0008 为了克服目前老年痴呆症治疗药物药效不明确、 药物毒副作用大的特点， 提高广 大老年痴呆症患者的认知能力和生活能力， 本发明提供一种新型老年痴呆症治疗药物， 该 药物以汉防己甲素为主要药物活性成分。如前所述， 汉防己甲素临床上常用于心脑血管疾 病的治疗， 因此本发明涉及汉防己甲素的一种药物用途， 即汉防己甲素用于制备预防或治 疗老年痴呆症药物中的用途。 本发明所提供的药物用于老。
13、年痴呆症的治疗或预防时疗效确 切， 药物毒副作用小， 具有广泛的医学应用前景。 0009 本发明的目的之一在于公开汉防己甲素用于预防或制备治疗老年痴呆症的药物 中的应用。发明人经过探索性试验发现， 汉防己甲素化合物具有显著地抑制 淀粉样蛋白 沉积的作用。A 的聚集与老年斑的形成以及老年痴呆症的发生和进展之间具有十分密切 的关系， 因此可以预见本发明中汉防己甲素用于老年痴呆症的预防或治疗会改善患者的病 情或延缓疾病的发生起到积极的作用。本发明药效实施例 11 和药效实施例 12 证实汉防己 甲素高剂量组和汉防己甲素低剂量组对A25-35所致大鼠老年痴呆模型和D-半乳糖所致小 鼠老年痴呆模型具有很。
14、好的治疗或预防作用。 0010 本发明目的之二在于提供一种治疗老年痴呆症并含有汉防己甲素的药物组合物。 本发明所述的汉防己甲素对老年痴呆症的治疗作用主要是由于其对 A 的聚集的抑制作 用， 其与其他采用不同治疗机制的老年痴呆症药物联用可以取得意想不到的治疗或预防效 果。 实验证明， 药物联用不仅可以增强药物的治疗效果， 而且可以降低药物不良反应以及机 体对药物的耐药性。 基于此， 本发明提供一种治疗老年痴呆症的药物组合物， 该药物组合物 中含有汉防己甲素和银杏内酯。银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然 PAF 受体 拮抗剂， 其拮抗作用活性与化学结构密切相关。当内酯结构中 R3 为羟基或。
15、羟基数目增多 说 明 书 CN 104116740 A 4 3/12 页 5 时， 对 PAF 的拮抗活性减弱 ; 而当 R2 为羟基且 R3 为 H 时， 则活性显著增强， 其中以银杏内 酯 B 对 PAF 产生的操拮抗作用最强申请人发现， 当银杏内酯和汉防己甲素联合用于老年痴 呆症的治疗时， 两种药物可以体现显著的协同作用 （参见本发明实施例 11 和实施例 12） ， 不 但可以延缓老年痴呆症的发生进程， 更体现出显著的治疗效果， 增强患者的记忆恢复能力。 0011 优选地， 上述药物组合物中汉防己甲素和银杏内酯的重量比为 1 ： 0.1-1， 更优选 为 1 ： 0.5。 0012 作。
16、为本发明所优选的治疗老年痴呆症药物组合物的一种实施方式， 所述药物组合 物活性成分还可以进一步含有多奈哌齐。多奈哌齐是一种长效的阿尔茨海默病 (AD) 的对 症治疗药 。AD 是一种以记忆减退为主要表现， 伴有其他认知功能损害的获得性智能减退。 盐酸多奈哌齐是第二代胆碱酯酶 (ChE) 抑制剂， 其治疗作用是可逆性地抑制乙酰胆碱酯酶 (AchE)引起的乙酰胆 酰 水解而增加受体部位的乙酰胆碱含量。 多奈哌齐可能还有其他机 制， 包括对肽的处置、 神经递质受体或 Ca2+ 通道的直接作用。多奈哌齐适用于轻、 中度阿 尔茨海默型痴呆症。 在上述药物组合物基础上加用多奈哌齐不但可以增强药物组合物的治。
17、 疗效果， 体现出显著的协同作用， 更能降低老年痴呆症并发症的发生概率和改善老年痴呆 症患者的运动机能。优选地， 所述药物组合物中汉防己甲素与多奈哌齐的重量份数比为 1 ： 0.1-10， 优选为 1 ： 1-5， 更优选为 1 ： 2。 0013 由于现代动物福利的提高和饮食的复杂性， 动物患病病机率也明显增加。本发明 所述的用途治疗对象可以为人或者动物， 所述动物优选为哺乳动物。本发明所述汉防己甲 素的药物用途或含有汉防己甲素的治疗老年痴呆症的药物组合物中， 汉防己甲素可以单独 给药也可以联合其他老年痴呆症药物给药， 其用于预防或治疗老年痴呆症时可以根据病情 和药物性质选择合适的给药途径，。
18、 优选为口服给药， 人用给药量为 0.1mg/kg d5mg/kg d， 优选为 0.5mg/kgd3.5mg/kgd ， 其他动物的给药剂量可以按照人与动物体表面积换算 而得到， 这对于本领域技术人员是已知的。用于治疗或预防老年痴呆症的给药剂型可以为 本发明上述所述的药物制剂， 如片剂、 胶囊剂， 缓释胶囊剂、 缓释片剂、 混悬剂。 0014 本发明目的之三是公开含有汉防己甲素并能够实现上述药物用途的药物制剂及 含有汉防己甲素的药物组合物制剂。以上所述的药物用途中， 发明人通过试验将其制备成 了比较稳定的口服制剂， 如片剂、 胶囊剂， 缓释胶囊剂、 缓释片剂、 混悬剂。其中片剂含有两 种以上。
19、如下辅料 ： 淀粉、 糊精、 低取代羟丙基纤维素、 硬脂酸镁、 微晶纤维素、 羟丙基纤维素、 淀粉浆乳糖、 甘露醇、 微粉硅胶、 交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮 ； 所述胶囊剂 含有两种以上如下辅料 ： 可压性淀粉、 乳糖、 低取代羟丙基纤维素、 微晶纤维素和微粉硅胶 ； 所述混悬剂含有两种以上如下辅料 ： 硫酸锌、 樟脑醑、 羧甲基纤维素钠、 甘油、 卡波姆 ； 所述 缓释片或缓释胶囊中含有两种以上如下辅料 ： 微晶纤维素、 乳糖、 甲基纤维素 （MC） 、 乙基纤 维素 （EC） 、 羟乙基纤维素 （HEC） 、 羟丙甲基纤维素 （HPMC） 、 羟丙基纤维素 （HPC） 、 羧甲。
20、基纤维 素 （CMC） 、 预凝胶淀粉。上述含有汉防己甲素的药物制剂中， 每一制剂单位含有汉防己甲素 的有效量为 0.1mg-200mg。 0015 本发明公开了汉防己甲素用于制备治疗老年痴呆症药物中的用途及防治老年痴 呆症的药物组合物， 其与现有技术相比， 具有以下突出的优势 ： 1) 汉防己甲素可以显著地抑制 淀粉样蛋白沉积， 其用于老年痴呆症的预防或治疗 时疗效确切， 剂量明确， 单独用于老年痴呆症的治疗或预防时， 可以显著延缓老年痴呆症的 说 明 书 CN 104116740 A 5 4/12 页 6 发病进程， 大大改善患者的认知能力和生活质量。 0016 2) 汉防己甲素为天然植物。
21、中提取的活性成分， 其用于老年痴呆症的治疗或预防时 副作用低， 患者的用药依从性高， 其与其它治疗老年痴呆症的化学药物联用可以显著降低 化学药物的用量， 从而降低化学药物的毒副作用。 0017 3) 汉防己甲素与其它作用机制并对老年痴呆症起到治疗作用的药物联用时， 其药 物作用机制互补， 其与银杏内酯联用可以起到对老年痴呆症预防或治疗的协同作用， 在上 述联用基础上加用多奈哌齐可以改善老年痴呆症患者的运动机能和治疗效果。 具体实施方式 0018 以下通过具体实施例进一步说明本发明， 但本领域技术人员应当知晓本发明的具 体实施例并不以任何方式限制本发明， 且在本发明基础上所作出的任何等同替换均落。
22、入本 发明的保护范围。 0019 实施例 1 汉防己甲素片剂制备 制备工艺 ： 称取处方量的汉防己甲素、 淀粉、 糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另 取适宜量的 60% 乙醇， 加入于混合粉末中， 混合均匀后制软材， 通过 16 目筛制粒， 60以下 干燥。干燥后完成后用 18 目筛进行整粒， 筛出干粒中的细粉， 与过筛的硬脂酸镁混匀， 然后 再与干颗粒混和均匀， 压片， 即得。 0020 实施例 2 汉防己甲素片剂制备 制备工艺 ： 称取处方量的汉防己甲素、 微晶纤维素和羟丙基纤维素混合均匀。另取适 宜量的8%淀粉浆溶液， 加入混合粉末中， 混合均匀后制软材， 通过16目筛制粒， 60以下。
23、干 燥。干燥后完成后用 18 目筛进行整粒， 筛出干粒中的细粉， 与过筛的硬脂酸镁混匀， 然后再 与干颗粒混和均匀， 压片， 即得。 0021 实施例 3 汉防己甲素片剂制备 说 明 书 CN 104116740 A 6 5/12 页 7 制备工艺 ： 称取处方量的、 汉防己甲素、 银杏内酯淀粉、 糊精和低取代羟丙基纤维素混 合均匀。 另取适宜量的60%乙醇， 加入于混合粉末中， 混合均匀后制软材， 通过16目筛制粒， 60以下干燥。干燥后完成后用 18 目筛进行整粒， 筛出干粒中的细粉， 与过筛的硬脂酸镁 混匀， 然后再与干颗粒混和均匀， 压片， 即得。 0022 实施例 4 汉防己甲素片剂。
24、制备 制备工艺 ： 称取处方量的、 汉防己甲素、 银杏内酯淀粉、 糊精和低取代羟丙基纤维素混 合均匀。 另取适宜量的60%乙醇， 加入于混合粉末中， 混合均匀后制软材， 通过16目筛制粒， 60以下干燥。干燥后完成后用 18 目筛进行整粒， 筛出干粒中的细粉， 与过筛的硬脂酸镁 混匀， 然后再与干颗粒混和均匀， 压片， 即得。 0023 实施例 5 汉防己甲素片剂制备 制备工艺 ： 将处方中的各辅料过 100 目筛， 称取汉防己甲素、 银杏内酯、 多奈哌齐与乳 糖、 甘露醇混合均匀后， 再分别加入处方量的微粉硅胶、 微晶纤维素、 交联聚乙烯吡咯烷酮 和交联羧甲基纤维素钠， 混合均匀， 加入 6。
25、0% 乙醇溶液制软材， 18 目筛制颗粒， 湿颗粒于 60干燥， 16 目筛整粒， 加入硬脂酸镁混合均匀， 压片， 即得。 说 明 书 CN 104116740 A 7 6/12 页 8 0024 实施例 6 汉防己甲素胶囊剂制备 制备工艺 ： 将处方中的各辅料过 100 目筛， 称取汉防己甲素、 银杏内酯、 多奈哌齐与可 压性淀粉、 乳糖和低取代羟丙基纤维素混合均匀后， 加入 60% 乙醇溶液制软材， 18 目筛制颗 粒， 于 60干燥， 16 目筛整粒， 装填胶囊， 即得。 0025 实施例 7 汉防己甲素混悬剂的制备 制备工艺 ： 称取处方量的汉防己甲素、 银杏内酯和多奈哌齐置乳钵中， 。
26、加甘油研磨成细 糊状， 硫酸锌溶于 200ml 水中， 另将羧甲基纤维素钠用 200ml 水制成胶浆， 在搅拌下缓缓加 入乳钵中， 移入量器中， 搅拌下加入硫酸锌溶液， 搅匀， 在搅拌下以细流加入樟脑醑， 加蒸馏 水至全量， 搅匀， 即得。 0026 实施例 8 汉防己甲素缓释片的制备 制备工艺 ： 分别称取处方量的汉防己甲素、 银杏内酯、 乳糖和羧丙基甲基纤维素粉碎后 过 80 目筛后置于乳钵中混合均匀， 加入适量 80% 乙醇制备软材， 过筛制备湿粒， 60-70干 燥制备干颗粒后整粒， 加入硬脂酸镁压片即可得到汉防己甲素缓释片剂。 0027 实施例 9 汉防己甲素缓释胶囊剂的制备 说 明。
27、 书 CN 104116740 A 8 7/12 页 9 制备工艺 ： 称取处方量汉防己甲素、 多奈哌齐和银杏内酯与辅料分别粉碎过 80 目筛后 混合均匀， 加 50% 乙醇适量制成软材， 经挤出筛板 ( 孔径 0.8mm) 挤成直径相当的细条状， 然 后使条状物料进滚圆机使之完全滚圆， 取出微丸， 于 60烘干 3h 左右， 使水分含量控制在 1%4%， 取1824目的微丸。 测定微丸的含量， 确定胶囊的装量， 用充填机进行胶囊充填。 0028 实施例 10 汉防己甲素缓释胶囊剂的制备 制备工艺 ： 称取处方量汉防己甲素、 多奈哌齐和银杏内酯与辅料分别粉碎过 80 目筛后 混合均匀， 加 5。
28、0% 乙醇适量制成软材， 经挤出筛板 ( 孔径 0.8mm) 挤成直径相当的细条状， 然 后使条状物料进滚圆机使之完全滚圆， 取出微丸， 于 60烘干 3h 左右， 使水分含量控制在 1%4%， 取1824目的微丸。 测定微丸的含量， 确定胶囊的装量， 用充填机进行胶囊充填。 0029 实施例 11 本发明汉防己甲素对 A25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗作用 目前还没有发现 AD 独特的、 公认的、 理想的动物模型。现有的 AD 动物模型有 2 类 ： 损 伤性动物模型和转基因动物模型。 损伤性动物模型主要包括物理、 化学、 有机物损伤和自身 免疫损伤模型。转基因动物模型主要指与 AD 有。
29、关的前体样蛋白 (APP)、 载脂蛋白 (Apo)E4、 早老蛋白 1(PSI)、 早老蛋白 2(psII) 等有关基因的单转基因或多转基因动物模型。转基因 模型是目前研究的热点， 但造模过程复杂， 费用昂贵， 传代缺乏稳定性。AD 患者主要的神经 病理学特征之一是老年斑 (sP) 沉积， 而 A 是老年斑中的主要成分。体内、 外试验都己证 实A的神经毒性作用， 能导致神经元损伤和认知功能衰退， 是AD形成和发展的关键因素， 而海马注射 A 建立的 AD 大鼠模型却观察到神经元损伤、 A 沉积、 tau 蛋白的异常磷酸化 ( 即神经纤维缠结 ) 等多种病理改变。 0030 1 材料和方法 1.。
30、1 实验材料 实验动物为雄性SD大鼠， 鼠龄812周， 体重250-300 g， 由第二军医大学实验动物中 心提供。A25-35购自美国 Sigma 公司， Morris 水迷宫购自上海吉量公司。 0031 1.2 大鼠老年痴呆模型的建立及评价 说 明 书 CN 104116740 A 9 8/12 页 10 1.2.1 脑室内注射用 A25-35 溶液的配制 ： 将 A25-35溶于无菌生理盐水， 使 A 浓度 为 10 mmol L， 置 37恒温箱内孵育 3 d 进行老化。 0032 1.2.2 动物模型的制作 ： 标准环境下饲养， 随机分为 2 组 ： 对照组和模型组， 每组 10 只。
31、。2 组在鼠龄和体重上无显著性差异。动物予适应性喂养 1 周后， 将大鼠用 2戊巴 比妥钠腹腔麻醉 (40 50 mg kg 体质量 )， 固定于脑立体定向仪上， 剪去头顶部毛发， 碘 酊消毒后切开皮肤， 参照 大鼠脑立体定位图 选择右侧侧脑室为注射靶区， 于前囟向后 1.0 mm， 中线旁开1.7 mm处， 用三棱针钻开颅骨， 暴露硬脑膜， 再用微量注射器以15 m/s的速 度自脑表面垂直进针 4.0 mm， 将 10 mmol L A25-35 溶液 5l 缓慢注入， 留针 2 min 后 缓慢撤针， 缝合切口。对照组注入等体积无菌生理盐水。 0033 1.2.3 Morris 水迷宫行为。
32、学测定 ： 2 组大鼠分别于术后第 10 天开始进行 Morris 水迷宫测试。测试程序为定位航行试验 ： 历时 5 d， 前 2 d 为训练适应期， 后 3 d 记录成绩， 如果大鼠在 1 min 内找到平台， 记录其实际逃避潜伏期 ； 如果在 1 min 内仍 未找到平台， 则由实验者将其引上平台并停留 20 S， 逃避潜伏期记录为 1 min。 0034 1.2.4 动物模型的评价 由下表可以看出， 模型组的逃避潜伏期从实验记录的第 1 天开始对照组就明显延长 （P 0.05 或 P 0.01） ， 而模型组 3 天之间的逃避潜伏期以及对照组 3 天之间逃避潜伏期无 明显差异， 表明采用。
33、该方法建立的老年痴呆模型可靠准确， 可以用于老年痴呆症治疗药物 的药效评价。 0035 2 动物造模及分组给药 按照上述造模方法造模， 并设置对照组、 正常组， 每组 10 只， 标准环境下饲养。各组给 药方式如下所述 ： 正常组 ： 灌胃给予相同体积的生理盐水 ； 对照组 ： 灌胃给予相同体积的生理盐水 ； 模型组 ： 灌胃给予相同体积的生理盐水 ； 汉防己甲素高组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d ； 汉防己甲素低组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d ； 银杏内酯高组 ： 灌胃给予银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 银杏内酯低组 ： 灌胃给予银杏内酯 2.8mg/k。
34、g/d ； 多奈哌齐高组 ： 灌胃给予多奈哌齐 6mg/kg/d ； 多奈哌齐低组 ： 灌胃给予多奈哌齐 3mg/kg/d ； 复方一组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d 和银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 复方二组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d 和银杏内酯 2.8mg/kg/d ； 复方三组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d 和银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 复方四组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d 和银杏内酯 2.8mg/kg/d ； 复方五组 ： 灌胃给予汉防己甲素0.5 mg/kg/d、 银杏内酯5.6mg/kg/d和多奈哌齐。
35、6 mg/ 说 明 书 CN 104116740 A 10 9/12 页 11 kg/d ； 复方六组 ： 灌胃给予汉防己甲素28mg/kg/d、 银杏内酯2.8mg/kg/d和多奈哌齐3mg/kg/ d ； 复方七组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d、 银杏内酯 2.8mg/kg/d 和多奈哌齐 3mg/ kg/d ； 上述给药组分别于造模后 10 天之后给药， 第 11 天记录为第 1 天， 每天给药一次， 每天 观察动物饮水与饮食情况， 分别于给药第 1 天， 给药第 5 天， 给药第 10 天， 给药第 15 天， 给 药 20 天用 Morris 水迷宫行为学测定方法测。
36、定大鼠的逃避潜伏期。最后一次测定完成后处 死大鼠。各组大鼠 Morris 水迷宫行为学测定结果如下表所示。 0036 表 1 各给药组对 A25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗效果 由表 1 可以看出 ： 各给药组第 1 天的逃避潜伏期物显著性差异， 但随着给药时间的延 长， 各给药组大鼠的逃避潜伏期差异加大， 其中汉防己甲素各给药组以及含有汉防己甲素 说 明 书 CN 104116740 A 11 10/12 页 12 的复方组均具有积极的治疗作用。具体表现为 ： 1) 汉防己甲素各治疗组的大鼠逃避潜伏期与模型组相比具有显著性差异， 且无论汉防 己甲素高组还是汉防己甲素低组与阳性药物多奈哌齐。
37、组相比， 均显著缩短大鼠的逃避潜伏 期， 其中药物治疗 15 天后， 其逃避潜伏期与阳性药物的逃避潜伏期具有显著性差异。汉防 己甲素对 A25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗效果呈现剂量依赖性。 0037 2) 复方各治疗组的大鼠逃避潜伏期与模型组相比具有显著性差异， 且复方组无论 与汉防己甲素单药组相比还是与阳性药物多奈哌齐组相比， 其大鼠的逃避潜伏期均明显缩 短， 其中复方药物治疗 15 天后， 其逃避潜伏期与单药治疗组逃避潜伏期相比具有显著性差 异。这表明汉防己甲素对 A25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗作用与多奈哌齐对其治疗 作用并不排斥， 两种药物对老年痴呆大鼠模型存在协同作用。 。
38、0038 3) 复方各治疗组无论与其对应的单药组相比具有显著性差异， 这表明本发明所述 汉防己甲素可以与银杏内酯、 或与银杏内酯多奈哌齐的组合存在显著的协同作用， 其中汉 防己甲素与银杏内酯多奈哌齐的组合不但在药物治疗效果上显著增强， 更能改善老年痴呆 症患者的运动机能， 而且作用迅速， 加速患者的痊愈过程。 0039 实施例 12 本发明汉防己甲素对 D- 半乳糖所致小鼠老年痴呆模型的治疗作用 1 材料 D- 半乳糖为上海试剂二厂产品 ； 汉防己甲素由本研究室自制。避暗自动测试仪为成都 泰盟科技有限公司产品。 0040 2 实验方法 2.1 老年痴呆模型小鼠的建立 ： 取昆明系小鼠随机分成如。
39、下给药治疗组每组 12 只小 鼠。除对照组外各治疗组小鼠每日按 120mg/kg 腹腔注射 D- 半乳糖， 连续注射 4 周。各治 疗组分别给予下述药物 ： 正常组 ： 灌胃给予相同体积的生理盐水 ； 模型组 ： 灌胃给予相同体积的生理盐水 ； 汉防己甲素高组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d ； 汉防己甲素低组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d ； 银杏内酯高组 ： 灌胃给予银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 银杏内酯低组 ： 灌胃给予银杏内酯 2.8mg/kg/d ； 多奈哌齐高组 ： 灌胃给予多奈哌齐 6mg/kg/d ； 多奈哌齐低组 ： 灌胃给予多奈哌齐 3m。
40、g/kg/d ； 复方一组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d 和银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 复方二组 ： 灌胃给予汉防己甲素 28mg/kg/d 和银杏内酯 2.8mg/kg/d ； 复方三组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d 和银杏内酯 5.6mg/kg/d ； 复方四组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d 和雷藤甲素 2.8mg/kg/d ； 复方五组 ： 灌胃给予汉防己甲素0.5 mg/kg/d、 银杏内酯5.6mg/kg/d和多奈哌齐6 mg/ kg/d ； 复方六组 ： 灌胃给予汉防己甲素28mg/kg/d、 银杏内酯2.8mg/kg/d和。
41、多奈哌齐3mg/kg/ d ； 复方七组 ： 灌胃给予汉防己甲素 0.5 mg/kg/d、 银杏内酯 2.8mg/kg/d 和多奈哌齐 3mg/ 说 明 书 CN 104116740 A 12 11/12 页 13 kg/d ； 2.2 避暗实验行为学检测 避暗自动测试仪的活动箱分明暗两室， 两室之间有一洞口， 箱底通以铜栅。 正式实验前 对各组小鼠进行训练， 将小鼠头背着洞口放人明室先适应环境 3min， 然后给暗室铜栅通 36V电流， 小鼠进入暗室后受到电击即逃到明室， 铜栅持续通电5min， 此为训练过程。 24h后 进行小鼠的记忆测验， 记录小鼠第一次进入暗室的时间(避暗潜伏期)， 若。
42、小鼠5min内仍未 进入暗室。其潜伏期计作 300s。 0041 3 统计学方法 实验数据用s表示， 用SPSS11.5软件包进行统计分析， 采用ANOVA和LSD S posthoc test 进行统计学分析， 以 P0.05 表示有显著性差异。 0042 4 实验结果 汉防己甲素对老年痴呆模型小鼠避暗实验的影响如表 2 所示。 0043 表 2 汉防己甲素对老年痴呆模型小鼠避暗潜伏期的影响 （s） 与正常组相比， #P 0.01 ； 与模型组相比， *P 0.05， *P 0.01 ； 由表 2 可以看出， 汉防己甲素治疗组相对于模型组小鼠避暗潜伏期显著延长 （P 0.01） ， 提示汉防。
43、己甲素对老年痴呆小鼠模型具有显著的预防和治疗效果， 其治疗效果优 于多奈哌齐组。具体表现为 ： 1) 汉防己甲素各治疗组的小鼠避暗潜伏期与模型组相比具有显著性差异， 且无论汉 防己甲素高组还是汉防己甲素低组与阳性药物多奈哌齐组相比， 均显著缩短小鼠避暗潜伏 期， 存在显著性差异。汉防己甲素对小鼠老年痴呆模型的治疗效果呈现剂量依赖性。 0044 2) 复方一组和复方二组的小鼠避暗潜伏期与模型组相比具有显著性差异， 且复方 组无论与汉防己甲素单药组相比还是与阳性药物多奈哌齐组相比， 其小鼠避暗潜伏期均明 显缩短， 具有显著性差异。这表明汉防己甲素对小鼠老年痴呆模型的治疗作用与多奈哌齐 对其治疗作用。
44、并不排斥， 两种药物对老年痴呆小鼠模型存在协同作用。 0045 3) 复方各治疗组无论与其对应的单药组相比具有显著性差异， 这表明本发明所述 说 明 书 CN 104116740 A 13 12/12 页 14 汉防己甲素可以与银杏内酯、 或与银杏内酯多奈哌齐的组合存在显著的协同作用， 其中汉 防己甲素与银杏内酯多奈哌齐的组合不但在药物治疗效果上显著增强， 更能改善老年痴呆 症患者的运动机能， 而且作用迅速， 加速患者的痊愈过程。 0046 本发明实施例11或实施例12中表明汉防己甲素作用于老年性痴呆的机制与其他 药物作用于老年痴呆症的药物并不冲突， 其可以联合使用， 并能够取得治疗上的协同作用。 说 明 书 CN 104116740 A 14 。