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1、(10)申请公布号 CN 102987164 A (43)申请公布日 2013.03.27 CN 102987164 A *CN102987164A* (21)申请号 201210573614.X (22)申请日 2012.12.26 A23K 1/18(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A23K 1/14(2006.01) (71)申请人 中国水产科学研究院淡水渔业研究 中心 地址 214081 江苏省无锡市山水东路 9 号 (72)发明人 刘波 谢骏 戈贤平 周群兰 缪凌鸿 任明春 高启平 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 楼高。
2、潮 (54) 发明名称 团头鲂复合中草药抗应激制剂、 制备方法及 其使用方法 (57) 摘要 本发明公布了一种团头鲂复合中草药抗应激 制剂， 其组成包括 （重量份） ： 五倍子 22 28 份、 刺 五加 15 19 份、 黄柏 5 20 份、 蒲公英 12 19 份、 白头翁 10 16 份和甘草 10-15 份。制备方法 为 ： 按上述配方分别称取各组份， 分别烘干后粉 碎， 混匀即得。 所述复合中草药抗应激制剂在鱼饲 料中的添加量为 1.0%-5.0%。本发明的复合中草 药抗应激制剂可直接清除机体内的自由基， 消除 自由基对机体组织器官正常功能的负面影响， 加 快修复被破坏的免疫系统， 。
3、减缓机体对应激条件 的反应， 能提高团头鲂的免疫与抗氧化能力、 抗高 密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力， 改善饲 料适口性， 促进团头鲂生长。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种团头鲂复合中草药抗应激制剂， 其特征在于其组成包括 （重量份） ： 五倍子 22 28 份、 刺五加 15 19 份、 黄柏 5 20 份、 蒲公英 12 19 份、 白头翁 10 16 份和甘草 10-15 份。 2. 如权利要求 1 所述的团头鲂复合中草药抗应激制剂的。
4、制备方法， 其特征在于所述制 备方法为 ： 按权利要求 1 所述配方分别称取各组份， 分别烘干后粉碎， 混匀即得。 3. 如权利要求 2 所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述烘干的温度为 50-60， 烘干至水 分 12%。 4. 如权利要求 2 所述的制备方法， 其特征在于所述粉碎的方法为 ： 粉碎， 过 40-60 目筛 网 ； 二次粉碎， 过 200-300 目筛网。 5. 如权利要求 1 所述的团头鲂复合中草药抗应激制剂的使用方法， 其特征在于 ： 将所 述复合中草药抗应激制剂添加到团头鲂饲料中， 添加量为 1.0%-5.0%。 6. 如权利要求 5 所述的使用方法， 其特征在于 ：。
5、 当使用周期在 30d 以上， 在饲料中添加 量为 1.0%-2.0% ； 当使用周期在 7-30d 以内， 在饲料中添加量为 2.0%-3.0% ； 当使用周期在 7d 以内， 在饲料中添加量为 3.0%-5.0%。 权 利 要 求 书 CN 102987164 A 2 1/5 页 3 团头鲂复合中草药抗应激制剂、 制备方法及其使用方法 技术领域 0001 本发明涉及一种团头鲂复合中草药抗应激制剂、 制备方法及其使用方法， 属于水 产配合饲料技术领域。 背景技术 0002 团头鲂 （Megalobrama amblycephala） ， 隶属于硬骨鱼纲， 鲤形目， 鲤科， 鳊亚科， 鲂 属，。
6、 现为我国主要的淡水养殖品种之一， 近年来年产量已超过 60 万吨， 并有上升趋势。团头 鲂生理特点是身体大、 内脏小， 集中在南方地区养殖， 易受高温气候影响， 相对于鲤、 鲫鱼等 鱼类， 团头鲂不耐低氧和运输， 因此在养殖生产过程当中经常受到外界不利因素的影响产 生应激， 病害频繁发生， 团头鲂养殖业带来巨大的经济损失。为防治病原菌， 抗生素及抗菌 药物得到了大量使用， 并造成药物残留、 耐药性增强、 引起动物免疫力下降等一系列不良后 果， 影响人类食品安全， 影响水产养殖业的可持续发展。 0003 随着抗生素、 抗菌药物的逐渐禁用， 一些绿色、 安全、 高效饲料添加剂的开发与应 用应运而。
7、生。 中草药具有天然、 高效、 毒副作用少、 资源丰富等优点， 含有与动物的免疫功能 密切相关的生物碱、 茶多酚、 皂甙、 低聚糖、 黄酮类、 挥发油类等， 能促进机体健康， 减少抗生 素在动物生产中的使用， 是我国传统的防病治病药物。 0004 五倍子 （Galla Chinensis） 又名百虫仓、 百药煎、 棓子， 化学成分主要包括单宁酸、 没食子酸、 五倍子油、 树脂、 蛋白质、 脂肪、 淀粉、 蜡质、 矿物质等。 其中主要有效成分单宁酸 含量很高， 最高可达 70% 以上， 具有抗菌、 抗病毒、 清除自由基和抗氧化等作用。 0005 刺五加 （Radix Acanthopanacis。
8、 Senticosl） 是五加科五加属， 化学成分主要包括 多种醣类、 氨基酸、 脂肪酸、 维生素 A、 B1、 B2 及多量的胡萝卜素 ； 另含有芝麻脂素、 甾醇、 香 豆精、 黄酮、 木栓酮、 非芳香性不饱和有机酸、 及多种微量矿物质等， 具有调节机体紊乱， 使 之趋于正常的功能， 提高耐缺氧能力， 抗菌消炎等作用。 0006 黄柏 （Cortex Phellodendri Chinensis） 为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树 皮。 主要成分小檗碱、 黄柏碱、 木兰花碱等多种生物碱及内酯、 甾醇、 黏液质等， 具有抗真菌、 抗细菌、 抗氧化、 提高免疫机能等功效。 0007 蒲公英 （H。
9、erba Taraxaci） 属菊科多年生草本植物。含有蒲公英醇、 蒲公英素、 胆 碱、 有机酸、 菊糖等多种健康营养成分， 同时含有蛋白质、 脂肪、 碳水化合物、 微量元素及维 生素等， 有丰富的营养价值。 具有有利尿、 缓泻、 退黄疸、 利胆、 保肝等功效， 同时具有抗真 菌、 抗细菌、 抗氧化、 提高免疫机能等作用。 0008 白头翁 （Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel） 是毛莨科植物， 多年生草本， 别 名有奈何草、 粉乳草、 白头草、 老姑草、 菊菊苗、 老翁花、 老冠花、 猫爪子花等等， 具有清热解 毒， 凉血止痢， 用于热毒血痢， 阿米巴痢疾，。
10、 对肠粘膜有收敛作用， 能止泻， 止血， 对绿脓杆 菌、 金黄色葡萄球菌、 枯草杆菌、 痢疾杆菌有抑制作用。 0009 甘草 （Radix Glycyrrhizae） 是一种补益中草药。含有多种化学成分， 主要成分有 甘草酸、 甘草甙等。 研究证明甘草能抗病毒、 抗细菌、 抗氧化、 抗应激， 且能调节免疫机能， 如 说 明 书 CN 102987164 A 3 2/5 页 4 增强巨噬细胞吞噬能力 , 促进辅助性 T 淋巴细胞的增殖与激活等。 0010 最近的一些专利 ： 喻运珍等申请了专利 “一种鱼用复方中草药制剂及其制备方法” （201010162861.1 ） ； 张其中等申请了专利 “。
11、一种鱼用复方中草药免疫增强剂及其制备方 法” （201110201424.0 ） ； 张璐等申请了专利 “一种淡水养殖鱼类通用复合中草药免疫增强 剂” （201110186183.7 ） ； 徐维娜等申请了专利 “一种团头鲂免疫增强剂饲料及其生产方法” （20210033844.7 ） 等， 都是提高鱼类的免疫力复方中草药制剂， 但是有关提高鱼体抗应激 复合中草药的论文与专利还少见， 特别是能提高团头鲂专用的复合中草药制剂还少见。目 前已有一些关于五倍子、 刺五加、 黄柏、 蒲公英、 白头翁、 甘草的在水产养殖的使用， 但是有 关五倍子、 刺五加、 黄柏、 蒲公英、 白头翁、 甘草配伍使用， 。
12、还未见报道。 因此研制复合中草药 抗应激制剂， 提高团头鲂抗病能力， 抗应激能力， 对水产养殖的健康发展和可持续发展具有 重要意义。 发明内容 0011 本发明的目的在于从中医的理论出发， 以五倍子为君， 刺五加、 黄柏为臣， 蒲公英、 白头翁、 甘草等为使， 研制中草复合物， 从而提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂及制备 方法， 其能耗低、 工艺简单、 生产成本低， 能提高鱼体免疫与抗氧化能力， 提高鱼体抗高密度 以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力， 且可促进鱼体生长。 0012 本发明提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂， 其组成包括 （重量份） ： 五倍子 22 28 份、 刺五加 15 19。
13、 份、 黄柏 5 20 份、 蒲公英 12 19 份、 白头翁 10 16 份和甘 草 10-15 份。 0013 制备方法为 ： 按上述配方分别称取各组份， 分别烘干后粉碎， 混匀即得。所述烘干 至水分 12%， 烘干温度范围为 50-60。 0014 上述团头鲂复合中草药抗应激制剂在鱼饲料中的添加量为1%-5.0%。 优选地， 添加 量与使用的周期有关， 当使用周期在 30d 以上， 在饲料中添加量为 1.0%-2.0% ； 当使用周期 在 7-30d 以内， 在饲料中添加量为 2.0%-3.0%。当使用周期在 7d 以内， 在饲料中添加量为 3.0%-5.0%。 此复合中草药抗应激制剂可。
14、直接清除机体内的自由基， 消除自由基对机体组织 器官正常功能的负面影响， 加快修复被破坏的免疫系统， 减缓机体对应激条件的反应， 能提 高团头鲂的免疫与抗氧化能力、 抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力， 改善饲料适 口性， 促进团头鲂生长。 0015 本发明的团头鲂复合中草药抗应激制剂， 从中医的理论出发， 以五倍子为君， 刺五 加、 黄柏为臣， 蒲公英、 白头翁、 甘草等为使， 研制复合中草药抗应激制剂， 能克服某一种产 品的不足之处， 相互补充， 既有抗应激的功效， 又具有一定的抗病原菌的功效， 促进鱼体生 长 ； 本发明原料来源稳定， 制备简单， 取材广泛， 成本低廉。 0016 具。
15、体实施方式 下面结合实施例进一步描述本发明。 0017 实施例 1 配制 1 kg 复合中草药抗应激制剂， 其各原料组成 ： 五倍子 280g、 刺五加 150g、 黄柏 200g、 蒲公英 120g、 白头翁为 ： 100g、 甘草 150g 份 ； 将上述各组份进行烘干， 烘干至水分 12% ； 烘干后的各组分进行粗粉碎， 粉碎机 （WKX-160 型中草药粉碎机， 青州市富尔康制药 说 明 书 CN 102987164 A 4 3/5 页 5 机械有限公司） 内粉碎后为粗物料， 并通过 40 目筛网， 粉碎机粉碎速度 ： 200 转 / 分 ； 后经超 微粉碎机 （ZNC-300小型超微。
16、粉碎机， 北京兴时利和科技发展有限公司） 进行第二次粉碎， 并 通过 200 目筛网， 粉碎机粉碎速度 ： 500 转 / 分 ； 再将上述各组分在混合机 （V 型混合机， 上 海华夏渔业机械有限公司） 内充分混匀， 制成 200 目干粉的复合中草药抗应激制剂， 混合机 投料转速 ： 18 转 / 分。所用五倍子、 刺五加、 黄柏、 蒲公英、 白头翁、 甘草等中草药均购自江 苏中草药贸易有限公司， 下同。 0018 生长实验 ： 团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健 康、 规格、 重量基本一致的团头鲂， 个体初均重约30g。 随机分组， 设有试验组与对照组， 每组 设 3。
17、 个平行试验， 每平行组 50 尾试验鱼， 共 6 个网箱 （规格为 250cm150cm100cm） 。团头 鲂驯化 30d 后投喂 0、 1.0% 两个剂量复合中草药抗应激制剂 56d， 测定其生长的影响。 0019 应激试验 ： 饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度 (100 g/L) 应激， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 20 尾左右， 放养于同样规格容 积为 40 L 塑料桶中。采用流水系统， 水温 251， 流速为 2 L/min， 并保证充足的氧气， 减 少人为干扰， 保持安静， 防止额外应激。 每12观察鱼体死亡情况， 观察4d， 统计死亡。
18、率， 采集 血液、 肝脏样品等。 0020 攻毒实验 ： 饲养试验结束后， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 10 尾鱼。 病原菌采用淡水鱼类细菌 - 嗜水性气单胞菌， 将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理 盐水稀释， 使终浓度约为 5106cells/ml。按每 100 g 鱼重腹腔注射菌液 1.0 ml， 后放养 于同样规格容积的水泥池网箱中 （规格为 100cm100cm100cm） ， 并保证充足的氧气， 每天 观察鱼体死亡情况， 观察 7d， 统计死亡率。 0021 结果表明 ： 与对照组相比， 1.0% 复合中草药抗应激制剂增重率显著 (P0.05) 分别 提高了 12.。
19、58% ； 病原菌感染鱼体 7d， 对照组死亡率为 90.0%， 1.0% 复合中草药抗应激制剂 鱼死亡率为 28.0% ； 高密度应激 1d 试验后， 与对照组相比， 1.0% 免疫增强剂显著 (P0.05) 降低血液皮质醇浓度 9.21%， 血糖水平 5.54% 及丙二醛浓度 8.11%， 增加了血液过氧化氢酶 15.34%、 超氧化物歧化酶活性11.238%以及应激蛋白HSP70浓度6.33%， 因此， 该复合中草药 抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力， 提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感 染能力， 提高鱼体抗应激能力， 促进鱼体生长。 0022 实施例 2 配制 1 kg 复合。
20、中草药抗应激制剂， 其各原料组成 ： 五倍子 250g、 刺五加 170g、 黄柏 170g、 蒲公英 150g、 白头翁为 ： 160g、 甘草 100g 份 ； 将上述各组份进行烘干， 烘干至水分 12% ； 烘干后的各组分进行粗粉碎， 粉碎机 （WKX-160 型中草药粉碎机， 青州市富尔康制药 机械有限公司） 内粉碎后为粗物料， 并通过 50 目筛网， 粉碎机粉碎速度 ： 250 转 / 分 ； 后经超 微粉碎机 （ZNC-300小型超微粉碎机， 北京兴时利和科技发展有限公司） 进行第二次粉碎， 并 通过 250 目筛网， 粉碎机粉碎速度 ： 550 转 / 分 ； 再将上述各组分在混。
21、合机 （V 型混合机， 上 海华夏渔业机械有限公司） 内充分混匀， 制成 250 目干粉的复合中草药抗应激制剂， 混合机 投料转速 ： 19 转 / 分。 0023 生长实验 ： 团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。 试验选择健康、 规格、 重量基本一致的团头鲂， 个体初均重约 30g。随机分组， 设有试验组与对照组， 每组设 3 个平行试验， 每平行组 50 尾试验鱼， 共 6 个网箱 （规格为 250cm150cm100cm） 。团头鲂 说 明 书 CN 102987164 A 5 4/5 页 6 驯化 30d 后投喂 0、 2.5% 两个剂量复合中草药抗应激制剂 25d， 测。
22、定其生长的影响。 0024 应激试验 ： 饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度 (100 g/L) 应激， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 20 尾左右， 放养于同样规格容 积为 40 L 塑料桶中。采用流水系统， 水温 251， 流速为 2 L/min， 并保证充足的氧气， 减 少人为干扰， 保持安静， 防止额外应激。每 12h 观察鱼体死亡情况， 观察 4d， 统计死亡率， 采 集血液、 肝脏样品等。 0025 攻毒实验 ： 饲养试验结束后， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 10 尾鱼。 病原菌采用淡水鱼类细菌 - 嗜水性气单胞菌， 将两次活化。
23、后的嗜水性气单胞菌用无菌生理 盐水稀释， 使终浓度约为 5106cells/ml。按每 100 g 鱼重腹腔注射菌液 1.0 ml， 后放养 于同样规格容积的水泥池网箱中 （规格为 100cm100cm100cm） ， 并保证充足的氧气， 每天 观察鱼体死亡情况， 观察 7d， 统计死亡率。 0026 结果表明 ： 与对照组相比， 2.5% 复合中草药抗应激制剂增重率显著 (P0.05) 分别 提高了11.21% ； 病原菌感染鱼体7d， 对照组死亡率为94.0%， 2.5%复合中草药抗应激制剂鱼 死亡率为 24.0% ； 高密度应激 1d 试验后， 与对照组相比， 2.5% 复合中草药抗应激。
24、制剂显著 (P0.05) 降低血液皮质醇浓度 9.54%， 血糖水平 6.99% 及丙二醛浓度 12.857%， 增加了血液 过氧化氢酶 8.99%、 超氧化物歧化酶活性 8.44% 以及应激蛋白 HSP70 浓度 12.45%， 因此， 该 免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力， 提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感 染能力， 提高鱼体抗应激能力， 促进鱼体生长。 0027 实施例 3 配制1 kg复合中草药抗应激制剂其各原料组成 ： 五倍子220g、 刺五加190g、 黄柏150g、 蒲公英 190g、 白头翁 130g、 甘草 120g 份 ； 将上述各组份进行烘干， 烘干至水分 1。
25、2% ； 烘干 后的各组分进行粗粉碎， 粉碎机 （WKX-160 型中草药粉碎机， 青州市富尔康制药机械有限公 司） 内粉碎后为粗物料， 并通过 60 目筛网 ； 粉碎机粉碎速度 ： 300 转 / 分 ； 后经超微粉碎机 （ZNC-300 小型超微粉碎机， 北京兴时利和科技发展有限公司） 进行第二次粉碎， 并通过 300 目筛网 ； 粉碎机粉碎速度 ： 600 转 / 分 ； 再将上述各组分在混合机 （V 型混合机， 上海华夏渔 业机械有限公司） 内充分混匀， 制成300目干粉的复合中草药抗应激制剂， 混合机投料转速 ： 20 转 / 分。 0028 生长实验 ： 团头鲂由中国水产科学院淡水。
26、渔业研究中心渔场提供。 试验选择健康、 规格、 重量基本一致的团头鲂， 个体初均重约 30g。随机分组， 设有试验组与对照组， 每组设 3 个平行试验， 每平行组 50 尾试验鱼， 共 6 个网箱 （规格为 250cm150cm100cm） 。团头鲂 驯化 15d 后投喂 0、 4.0% 复合中草药抗应激制剂 7d， 测定其生长的影响。 0029 应激试验 ： 饲养试验结束后， 选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度 (100 g/L) 应激， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 20 尾左右， 放养于同样规格容 积为 40 L 塑料桶中。采用流水系统， 水温 251， 流速为 2。
27、 L/min， 并保证充足的氧气， 减 少人为干扰， 保持安静， 防止额外应激。每 12h 观察鱼体死亡情况， 观察 2d， 统计死亡率， 采 集血液、 肝脏样品等。 0030 攻毒实验 ： 饲养试验结束后， 每个剂量组分三个平行组， 每个平行组均为 10 尾鱼。 病原菌采用淡水鱼类细菌 - 嗜水性气单胞菌， 将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理 盐水稀释， 使终浓度约为 5106cells/ml。按每 100 g 鱼重腹腔注射菌液 1.0 ml， 后放养 说 明 书 CN 102987164 A 6 5/5 页 7 于同样规格容积的水泥池网箱中 （规格为 100cm100cm100cm） 。
28、， 并保证充足的氧气， 每天 观察鱼体死亡情况， 观察 7d， 统计死亡率。 0031 结果表明 ： 与对照组相比， 4.0% 复合中草药抗应激制剂增重率显著 (P0.05) 分别 提高了10.78% ； 病原菌感染鱼体7d， 对照组死亡率为89.0%， 4.0%复合中草药抗应激制剂鱼 死亡率为 36.0% ； 高密度应激 1d 试验后， 与对照组相比， 4.0% 复合中草药抗应激制剂显著 (P0.05) 降低血液皮质醇浓度 8.39%， 血糖水平 4.46% 及丙二醛浓度 9.64%， 增加了血液过 氧化氢酶 9.66%、 超氧化物歧化酶活性 6.76% 以及应激蛋白 HSP70 浓度 5.76%， 因此， 该复合 中草药抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力， 提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单 胞菌感染能力， 提高鱼体抗应激能力， 促进鱼体生长。 说 明 书 CN 102987164 A 7 。