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1、(10)申请公布号 CN 102940609 A (43)申请公布日 2013.02.27 CN 102940609 A *CN102940609A* (21)申请号 201210534184.0 (22)申请日 2012.12.12 A61K 9/16(2006.01) A61K 38/08(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61P 5/00(2006.01) (71)申请人 上海苏豪逸明制药有限公司 地址 200333 上海市普陀区千阳路 57 号 申请人 周逸明 (72)发明人 倪伟磊 崔颀 徐强强 董堃华 刘哲鹏 包璇 。
2、周逸明 (74)专利代理机构 上海欣创专利商标事务所 31217 代理人 顾大平 (54) 发明名称 一种高包封率奥曲肽缓释微球及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种高包封率奥曲肽缓释微球 及其制备方法， 其特征在于奥曲肽与 PLGA 的重量 比为 1:10-1:5 ； 采用海藻糖为分散相稳定剂， 海 藻糖与奥曲肽的重量比为 1:10-1:1 ； 聚乙烯醇和 聚山梨酯 80 为连续相乳化剂， 两者浓度分别为 5-30mg/ml和0.1-0.6mg/ml， 比例为50:1 ； 并且连 续相 pH 值为 7.0-9.0。所制得的奥曲肽微球形态 圆整粒度分布均匀， 包封率高， 体外释药性能符。
3、合 长效制剂特征， 24h 内药物释放百分率小于 20%， 30d 累积释放达到 80% 以上。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 3 页 1/1 页 2 1.一种高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于,主要包括奥曲肽、 聚乳酸-羟基乙酸共 聚物和海藻糖， 其中奥曲肽与聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的重量比为 1:10-1:5， 海藻糖与奥 曲肽的重量比为 1:10-1:1， 所述微球是在 pH 值为 7.0-9.0 的含聚乙烯醇和聚山梨酯 80 的 溶液中形。
4、成的微球。 2.如权利要求1所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述聚乳酸-羟基乙酸 共聚物的相对分子质量为 38000-79300， 乳酸与羟基乙酸的比例为 75:25-50:50， 特性黏度 为 0.35-0.61dL/g。 3. 如权利要求 1 所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述奥曲肽与聚乳 酸 - 羟基乙酸共聚物的重量比是 1:8-1:5。 4. 如权利要求 1 所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述奥曲肽与聚乳 酸 - 羟基乙酸共聚物的重量比是 1:5.6。 5. 如权利要求 1 所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述海藻糖与奥曲肽 。
5、的重量比为 1:5-1:1。 6. 如权利要求 1 所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述海藻糖与奥曲肽 的重量比为 1:2。 7. 如权利要求 1 所述的高包封率奥曲肽缓释微球， 其特征在于， 所述含聚乙烯醇和聚 山梨酯 80 的溶液的 pH 值为 7.92。 8. 一种如权利要求 1 至 7 中任意一项所述的高包封率奥曲肽缓释微球的制备方法， 其 特征在于， 包括如下步骤 ： 将含有海藻糖的奥曲肽水溶液分散至含聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中， 形成初乳 ； 初乳分散至含聚乙烯醇、 聚山梨酯 80 的磷酸盐缓冲液中形成复乳， 磁力搅拌至 二氯甲烷挥发完全， 过滤并收集。
6、微球， 真空干燥后制得白色粉末即得奥曲肽缓释微球。 9. 如权利要求 8 所述的高包封率奥曲肽缓释微球的制备方法， 其特征在于， 磷酸盐缓 冲液中聚乙烯醇与聚山梨酯 80 的浓度分别为 5-30mg/ml 和 0.1-0.6mg/ml, 所述聚乙烯醇 与聚山梨酯 80 的重量比为 50:1。 10. 如权利要求 8 所述的高包封率奥曲肽缓释微球的制备方法， 其特征在于， 磷酸盐缓 冲液中聚乙烯醇与聚山梨酯80的浓度分别为8-20mg/ml和0.16-0.4mg/ml, 所述聚乙烯醇 与聚山梨酯 80 的重量比为 50:1。 权 利 要 求 书 CN 102940609 A 2 1/6 页 3 。
7、一种高包封率奥曲肽缓释微球及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种高包封率生物活性药物的生物可降解控释微球及其制备方法， 属 于生物医用高分子材料与生物活性药物控释制剂的交叉研究领域。 背景技术 0002 生长激素释放抑制激素 （somotostatin， SS） 在体内分布非常广泛， 它是一种调 节多肽， 主要对神经肽、 细胞因子、 营养素、 神经递质、 生长因子、 甲状腺和类固醇激素的分 泌起作用。然而血循环中天然的 SS 半衰期非常短， 而且停药后可能会出现一些激素高分 泌的反跳现象， 比如生长激素、 胰高血糖素和胰岛素等。为了更好的发挥 SS 的作用， 同时 最低限度的减少其副。
8、作用， 人们采用很多种方法合成了生长抑素类似物 （somotostatin analogue， SSA） ， 这些类似物的半衰期比天然的 SS 更长， 而且其对组织和器官的作用也具 有选择性。奥曲肽是第一个用于临床并且应用最广泛的 SSA， 它保留了天然 SS 的功能氨基 酸序列， 去除并修饰了其它不重要的氨基酸。奥曲肽要比天然 SS 的生物活性高， 因此其作 效果更好。目前在临床上奥曲肽的应用非常广泛， 胃肠胰内分泌肿瘤和肢端肥大症是长效 制剂的主要适应症。 0003 目前国内外奥曲肽微球研制中存在着系列问题， 其中包封率较低是主要问题之 一。大量研究及文献报道了提高奥曲肽微球包封率的方法，。
9、 如使用聚乙烯醇为连续相乳 化剂， 纯水为连续相溶媒， 蔗糖为分散相保护剂， 但成效不尽理想。聚乙烯醇 （polyvinyl alcohol， PVA） 是一种水溶性环保型高分子聚合物， 无毒无污染， 具有很好的成膜性能， 乳化 性能、 粘结性能和纺丝性能。它形成的膜具有优异的接着力， 耐溶剂性， 耐摩擦性， 伸张强 度与氧气阻绝性。因为聚乙烯醇同时拥有亲水基及疏水基两种官能基， 因此具有界面活性 的物质， 所以聚乙烯醇可以作为高分子乳化， 悬浮聚合反应时的保护胶体。PVA 具有合成方 便、 安全低毒、 产品质量易于控制、 价格便宜、 使用方便等特点。因此， PVA 是具有再次开发 潜力的优良。
10、药用辅料。聚山梨酯 80（Polysorbate80） 属于亲水型非离子表面活性剂， 有 增溶、 乳化、 润湿等作用， 目前广泛用做注射液及口服液的增溶剂或乳化剂、 胶囊剂用分散 剂、 软膏剂用乳化剂和基质、 栓剂用基质等。海藻糖 （Trehalose） 是由两个葡萄糖分子以 ,1,1- 糖苷键构成非还原性糖， 自身性质非常稳定， 因为海藻糖在高温、 高寒、 高渗透 压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜， 有效地保护蛋白质分子 不变性失活， 从而维持生命体的生命过程和生物特征。海藻糖除了可以作为蛋白质药物、 酶、 疫苗和其他生物制品的优良活性保护剂以外， 还是保持细胞活性、。
11、 保湿类化妆品的重要 成分， 更可作为防止食品劣化、 保持食品新鲜风味、 提升食品品质的独特食品配料。 0004 本发明采用界面活性剂聚乙烯醇和聚山梨酯 80 为连续相乳化剂， 并且两者比例 为 50:1， 连续相具有一定 pH 值， 首次采用海藻糖作为分散相稳定剂， 有效地提高了奥曲肽 微球药物的包封率， 并研制出安全有效、 质量可控的奥曲肽微球， 无论是对疾病治疗还是在 学术研究方面， 都有着重大及深远的意义。 说 明 书 CN 102940609 A 3 2/6 页 4 发明内容 0005 本发明的一种高包封率奥曲肽缓释微球及其制备方法， 采用海藻糖为分散相稳定 剂， 结合至奥曲肽表面以。
12、保护奥曲肽避免受到水油界面及搅拌剪切力的影响乃至降解进而 提高包封率 ； 采用聚乙烯醇和聚山梨酯 80 为连续相乳化剂， 较传统连续相乳化剂聚乙烯醇 提高制备微球的包封率 ； 连续相具有一定 pH 值可以保护奥曲肽活性， 从而运用此方法制得 微球药物稳定性好， 包封率高。 0006 本发明提供了一种奥曲肽缓释微球， 主要包括奥曲肽、 聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物 和海藻糖， 其中奥曲肽与聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的重量比为 1:10-1:5， 海藻糖与奥曲肽 的重量比为 1:10-1:1， 所述微球制剂是在 pH 值为 7.0-9.0 的含聚乙烯醇和聚山梨酯 80 的 溶液中形成的微球。 000。
13、7 其中， 聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的分子量为 38000 79300， 乳酸和羟基乙酸的比 例为 75:25 50:50， 特性粘度 0.35 0.61dL/g。 0008 其中， 奥曲肽与聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的重量比为 1:10-1:5， 优选的重量比为 1:8-1:5， 更为优选的重量比为 1:5.6。 0009 所述海藻糖与奥曲肽的重量比为 1:10-1:1， 优选的重量比为 1:5-1:1， 更为优选 的重量比为 1:5-1:1。 0010 所述含聚乙烯醇、 聚山梨酯80的溶液的pH值为7.0-9.0， 优选的pH值为7.8-8.0， 更为优选的 pH 值为 7.92。 00。
14、11 所述微球的粒径为 10-120m。 0012 本发明还提供了一种高包封率奥曲肽缓释微球的制备方法， 包括如下步骤 ： 将含有海藻糖的奥曲肽水溶液分散至含聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液中， 形成初乳 ； 初乳分散至含聚乙烯醇、 聚山梨酯 80 的磷酸盐缓冲液中形成复乳， 磁力搅拌至 二氯甲烷挥发完全， 过滤并收集微球， 真空干燥后制得白色粉末即得奥曲肽缓释微球。 0013 其中， 所述磷酸盐缓冲液中聚乙烯醇的浓度为 5-30mg/ml， 优选的浓度为 8-20mg/ ml， 更为优选的浓度为10mg/ml ； 磷酸盐缓冲液中聚山梨酯80的浓度为0.1-0.6mg/ml， 优选 的。
15、浓度为 0.16-0.4mg/ml， 更为优选的浓度为 0.2mg/ml。 0014 所述聚乙烯醇与聚山梨酯 80 的重量比为 50:1。 0015 所述含有海藻糖的奥曲肽水溶液的浓度为 39.2-78.4mg/ml。 0016 所述含聚乳酸 - 羟基乙酸共聚物的二氯甲烷溶液的浓度为 10mg/ml。 0017 本发明的积极效果是 ： 本发明采用海藻糖为分散相稳定剂， 聚乙烯醇和聚山梨酯 80 为连续相乳化剂， 两者比例为 50:1， 连续相具有一定 pH 值， 微球制备工艺稳定、 可行， 微 球的形态圆整， 表面光滑， 包封率高， 其体外释药性能符合长效制剂特征， 24 h 内药物释放 百分。
16、率小于 20%， 30d 累积释放达到 80% 以上。 0018 附图说明 0019 图 1 为实施例 1 所制奥曲肽缓释微球样品的光学显微镜照片 ； 图 2 为实施例 1 所制奥曲肽缓释微球样品的扫描电子显微镜照片 ； 图 3 为奥曲肽载药微球体外溶出曲线图。 说 明 书 CN 102940609 A 4 3/6 页 5 具体实施方式 0020 为了更好说明本发明的目的、 技术方案和优点， 下面结合附图和具体实施例对本 发明作进一步描述。 0021 实施例 1 处方工艺组成 ： 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGAMw=38000， 50:50poly， i.v.=0。
17、.61dL/g）1:5.6 海藻糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:2 连续相 pH 值7.92 聚乙烯醇 (mg/ml)10 聚山梨酯 80(mg/ml)0.2 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以二氯甲烷为溶剂溶解196mgPLGA为油相 ； 以水为溶剂溶解35mg奥曲肽和稳定剂海藻 糖 17.5mg 为分散相 ； 以 40ml 磷酸盐缓冲液为溶剂溶解 400mg 聚乙烯醇和 8mg 聚山梨酯 80 为连续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳， 将初乳加入到搅拌情况下的连续相中形成 复乳 ； 再将复乳迅速转移至磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过滤并收集微 球， 真空干燥后制得白色。
18、粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微球。 0022 取实施例 1 制得的微球对其包封率、 载药量、 粒径分布及表面形态进行了研究， 结 果见表 1。 0023 考察方法如下 ： （1） 精密称取载药微球溶于二氯甲烷 5ml 中， 加入去离子水 15ml 提取药物， 涡旋萃取 5min， 10000rmin-1离心 10min， 吸取上清液。上述步骤重复 10 次， HPLC 法分析， 计算微球 中药物含量， 即为载药量。 0024 HPLC 条件 色谱柱 ： Diamonsil C18 柱 （250mm4.6mm， 5m） ； 流动相 ： 磷酸溶液 （4ml 磷酸溶解于 2。
19、L 去离子水， 用三乙胺调节 pH 值至 5.4） ： 乙腈 =75:25 ； 检测波长 ： 214nm ； 流速 ： 1.0mLmin-1； 柱压为 14.3MPa ； 进样量为 20l。 0025 载药量 = 实际药量 / 微球质量 100% ； 包封率 = 实际载药量 / 理论载药量 100%。 0026 （2） 采用激光粒度分析仪考察制得微球粒径分布。 0027 （3） 采用扫描电子显微镜考察制得微球表面形态。 0028 表 1 奥曲肽缓释微球性能指标 指标名称 测试结果 包封率46.0% 载药量6.2% 粒径分布 10-70m 表面形态 球形圆整， 表面光滑 实施例 2 处方工艺组成。
20、 ： 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGAMw=38000， 50:50poly， i.v.=0.61dL/g）1:8 海藻糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:3 连续相 pH 值7.8 说 明 书 CN 102940609 A 5 4/6 页 6 聚乙烯醇 (mg/ml)20 聚山梨酯 80(mg/ml)0.4 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以二氯甲烷为溶剂溶解 196mgPLGA 为油相 ； 以水为溶剂溶解 24.5mg 奥曲肽为分散相， 其中含有稳定剂海藻糖 2.45mg ； 以 40ml 磷酸盐缓冲液为溶剂溶解 800mg 聚乙烯醇和 16mg 聚山梨酯 80 为连。
21、续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳后加入到搅拌情况下的连续相 中形成复乳， 再迅速转移至一定体积的磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过 滤并收集微球， 真空干燥后制得白色粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微球。 0029 实施例 3 ： 处方工艺组成 ： 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGA Mw=79300， 75:25poly， i.v.=0.55dL/g）1:10 海藻糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:5 连续相 pH 值7.4 聚乙烯醇 (mg/ml)8 聚山梨酯 80(mg/ml)0.16 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以。
22、二氯甲烷为溶剂溶解 196mgPLGA 为油相 ； 以水为溶剂溶解 19.6mg 奥曲肽为分散相， 其中含有稳定剂海藻糖3.92mg ； 以40ml磷酸盐缓冲液为溶剂溶解320mg聚乙烯醇和6.4mg 聚山梨酯 80 为连续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳后加入到搅拌情况下的连续相 中形成复乳， 再迅速转移至一定体积的磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过 滤并收集微球， 真空干燥后制得白色粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微球。 0030 实施例 4 实施例 4 为对比实施例， 将分散相中的海藻糖替换成蔗糖， 奥曲肽与蔗糖重量比为 1:2。 0031 处。
23、方工艺组成 ： 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGA Mw=38000， 50:50poly， i.v.=0.61dL/g）1:5.6 蔗糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:2 连续相 pH 值7.92 聚乙烯醇 (mg/ml)10 聚山梨酯 80(mg/ml)0.2 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以二氯甲烷为溶剂溶解 196mgPLGA 为油相 ； 以水为溶剂溶解 35mg 奥曲肽为分散相， 其 中含有稳定剂蔗糖 17.5mg ； 以 40ml 磷酸盐缓冲液为溶剂溶解 400mg 聚乙烯醇和 8mg 聚山 梨酯 80 为连续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳后加入到搅。
24、拌情况下的连续相中形 成复乳， 再迅速转移至一定体积的磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过滤并 收集微球， 真空干燥后制得白色粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微球。 0032 实施例 5 ： 实施例 5 为对比实施例， 以 pH5.0 磷酸盐缓冲液为连续相溶剂。 0033 处方工艺组成 ： 说 明 书 CN 102940609 A 6 5/6 页 7 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGA Mw=41700， 65:35poly， i.v.=0.35dL/g）1:5.6 海藻糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:2 连续相 pH 值5.0 聚乙。
25、烯醇 (mg/ml)10 聚山梨酯 80(mg/ml)0.2 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以二氯甲烷为溶剂溶解 196mgPLGA 为油相 ； 以纯水为溶剂溶解 35mg 奥曲肽为分散相， 其中含有稳定剂海藻糖 17.5mg ； 以 40mlpH5.0 磷酸盐缓冲液为溶剂溶解 400mg 聚乙烯醇和 8mg 聚山梨酯 80 为连续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳后加入到搅拌情况下的连续 相中形成复乳， 再迅速转移至一定体积的磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过滤并收集微球， 真空干燥后制得白色粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微 球。 0034 实施。
26、例 6 实施例 6 为对比实施例， 以 pH 值为 7.92 磷酸盐缓冲液为溶剂， 溶解聚乙烯醇为连续 相。 0035 处方工艺组成 ： 处方工艺含量或比例 奥曲肽 ： PLGA(w/w)（PLGA Mw=79300， 75:25poly， i.v.=0.55dL/g）1:5.6 海藻糖 ： 奥曲肽 (w/w)1:2 外水相 pH 值7.92 聚乙烯醇 (mg/ml)10 聚山梨酯 80(mg/ml)- 奥曲肽缓释微球制备方法如下 ： 以二氯甲烷为溶剂溶解 196mgPLGA 为油相 ； 以水为溶剂溶解 35mg 奥曲肽为分散相， 其 中含有稳定剂海藻糖 17.5mg ； 以 40ml 磷酸盐。
27、缓冲液为溶剂溶解 400mg 聚乙烯醇为连续相 ； 将分散相与油相混合震荡形成初乳后加入到搅拌情况下的连续相中形成复乳， 再迅速转移 至一定体积的磷酸盐缓冲液中， 磁力搅拌至二氯甲烷挥发完全， 过滤并收集微球， 真空干燥 后制得白色粉末即为奥曲肽聚乳酸 - 羟乙酸共聚物 （PLGA） 微球。 0036 实施例 7 分别取上述各实施例制得的微球， 按照实施例 1 中的考察方法， 对其包封率、 载药量、 粒径分布及表面形态进行了研究， 结果见表 2。 0037 表 2 不同处方工艺条件下， 各实施例性能指标比较 （药物溶出曲线见图 2） 说 明 书 CN 102940609 A 7 6/6 页 8 由上述各实施例性能指标比较可知， 分散相稳定剂海藻糖、 连续相乳化剂聚乙烯醇和 聚山梨酯 80、 连续相的 pH 值是影响微球包封率、 载药量和体外释药性能的关键因素。 说 明 书 CN 102940609 A 8 1/3 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102940609 A 9 2/3 页 10 图 2 图 3a 说 明 书 附 图 CN 102940609 A 10 3/3 页 11 图 3b 图 3c 说 明 书 附 图 CN 102940609 A 11 。