杀真菌活性酵母和杀真菌剂的组合物 技术领域 本发明总体上涉及用于减少由植物病原性真菌或其它有害的微生物引起的植物 和植物部分的总体损害以及收获的果实或蔬菜的损失的组合物和方法。具体地， 本发明涉 及用于在生长期、 采收前和采收后保护果实和蔬菜的组合物和方法。
背景技术 核果梅奇酵母 (Metschnikowia fructicola)， 特别是菌株 NRRL Y-30752， 已知于 US 6,994,849 B2。 这种酵母可很好地保护植物和植物部分免受植物病原性真菌的侵袭。 然 而， 在严重的患病压力条件下， 这种酵母的性能也仍然不能完全令人满意。
发明内容 令人意外的是， 发现含有 a) 杀真菌活性酵母 ( 在本发明的上下文中也被称为生物 控制剂 )， 特别是核果梅奇酵母， 更特别的是核果梅奇酵母菌株 NRRL Y-30752， 和 b) 至少一 种化学杀真菌剂的组合物， 表现出协同增强的杀真菌活性。
本发明的组合物具有的优点为， 可配制成具有农业上可接受的货架寿命的单一、 稳定的组合物， 或可在使用时进行组合 ( 如罐内混合 )。
此外， 由于本发明所述的生物控制剂和杀真菌剂之间的相互协同作用， 本发明的 组合物在处理植物、 植物部位或植物的繁殖材料中意外地呈现出极高的杀真菌的活性。
本发明也提供处理种子和 / 或植物或植物部分的方法。 该方法包括下述步骤 ： (a) 提供含有效量的至少一种生物控制剂和至少一种杀真菌剂的组合物 ； 以及 (b) 将该组合物 施用到植物上。可以任意期望的方式来施用本发明组合物， 例如以种子包被、 土壤浇灌和 / 或直接沟施和 / 或叶面喷施的形式， 以及在发芽前、 发芽后或发芽前后施用。换言之， 该组 合物可施用于种子、 植物或植物的果实或植物生长的土壤或预期适于植物生长的土壤。
优选地， 本发明的组合物特别适用保护果实、 蔬菜和花。
上述的以及本发明的其它方面将在下面的详述和实施例中进行详细解释。
已发现在线虫和 / 或真菌感染环境中， 施用本发明组合物与单独施用生物控制剂 或昆虫防治剂相比， 可提供更高的植物长势和产量。 可以任何的生理状态， 如活化或休眠状 态提供生物控制剂。可提供休眠的酵母， 如冷冻、 干燥或冻干的酵母。 6
当浓度超过 10 cfu/g( 每克的菌落形成单位 )， 优选超过 107cfu/g， 更优选超过 8 9 10 cfu/g， 最优选超过 10 cfu/g 时， 生物控制剂， 特别是核果梅奇酵母是生物有效的。
组合物中， 至少一种生物控制剂的用量可根据最终制剂以及所应用的植物或植物 种子大小和类型而改变。优选地， 组合物中至少一种生物控制剂的用量为制剂总重量的约 2％～约 80％ (w/w)。更优选地， 组合物中至少一种生物控制剂的用量为制剂总重量的约 5％～约 65％ (w/w)， 最优选地， 为制剂总重量的约 10％～约 60％ (w/w)。
本发明组合物中至少一种杀真菌剂的用量可根据最终制剂以及所处理的植物或 植物种子大小和类型而改变。 优选地， 组合物中， 该至少一种杀真菌剂的用量为制剂总重量
的约 0.1％～约 80％ (w/w)。 更优选地， 组合物中， 该杀真菌剂的用量为约 1％～约 60％ (w/ w)， 最优选地为约 10％～约 50％ (w/w)。
本发明中， 生物控制剂与化学杀真菌剂的比例如下 ： 通常， 生物控制剂与化学杀真 菌剂的比例在 1 ∶ 100 ～ 250 ∶ 1 的范围内。优选地， 生物控制剂与化学杀真菌剂的比例 在 1 ∶ 10 ～ 100 ∶ 1 的范围内。甚至更优选地， 这一比例在 1 ∶ 5 ～ 50 ∶ 1 范围内。所 6 有这些比例是指最小 10 cfu/g 的酵母制剂。
生物控制剂， 特别是酵母， 更特别是核果梅奇酵母菌株 NRRL Y-30752 优选的施用 率为 0.5 ～ 8Kg/ha。
本发明的组合物还包括一或多种杀真菌剂。所述杀真菌剂可选自 ：
(F1) 核 酸 合 成 抑 制 剂， 如 苯 霜 灵、 精 苯 霜 灵 (benalaxyl-M)、 乙 嘧 酚 磺 酸 酯、 clozylacon、 二甲嘧酚、 乙嘧酚、 呋霜灵、 噁霉灵、 甲霜灵、 精甲霜灵 (metalaxyl-M)、 呋酰胺 (ofurace)、 噁霜灵和噁喹酸。
(F2) 有 丝 分 裂 和 细 胞 分 裂 抑 制 剂， 如 苯 菌 灵、 2-(2- 氯 苯 基 )-1H- 苯 并 咪 唑 (chlorfenazole)、 乙霉威、 噻唑菌胺、 麦穗宁、 戊菌隆、 硫菌灵、 甲基硫菌灵和苯酰菌胺。
(F3) 呼吸抑制剂， 如作为 CI 呼吸抑制剂的二氟林 ； 作为 CII 呼吸抑制剂的联苯吡 菌胺 (bixafen)、 啶酰菌胺、 萎锈灵、 甲呋酰胺、 氟酰胺、 氟吡菌酰胺、 福拉比、 拌种胺、 萘吡菌 胺 (isopyrazam)(9R- 组分 )、 萘吡菌胺 (isopyrazam)(9S- 组分 )、 灭锈胺、 氧化萎锈灵、 吡 噻菌胺 (penthiopyrad)、 噻呋酰胺 ； 作为 CIII 呼吸抑制剂的吲唑磺菌胺、 嘧菌酯、 氰霜唑、 醚菌胺、 烯肟菌酯 (enestroburin)、 噁唑菌酮、 咪唑菌酮、 氟嘧菌酯、 醚菌酯、 苯氧菌胺、 肟醚 菌胺、 啶氧菌酯、 吡唑醚菌酯、 吡菌苯威 (pyribencarb)、 肟菌酯。
(F4) 可作为解偶联剂的化合物， 如乐杀螨、 敌螨普 (dinocap)、 氟啶胺和消螨多 (meptyldinocap)。
(F5)ATP 生成抑制剂， 如三苯基乙酸锡、 三苯锡氯、 毒菌锡和硅噻菌胺。
(F6) 氨基酸和 / 或蛋白质生物合成抑制剂， 如胺扑灭 (andoprim)、 杀稻瘟菌素 -S、 春雷霉素、 春雷霉素盐酸盐水合物、 嘧菌胺。
(F7) 信号转导抑制剂， 如拌种咯和喹氧灵。
(F8) 脂质和膜合成抑制剂， 如联苯、 乙菌利、 敌瘟磷、 土菌灵、 碘代丙炔基丁基甲胺 酸酯 (iodocarb)、 异稻瘟净、 稻瘟灵、 腐霉利、 霜霉威、 霜霉威盐酸盐、 吡菌磷、 甲基立枯磷和 乙烯菌核利。
(F9) 麦角甾醇生物合成抑制剂， 如十二吗啉 (aldimorph)、 氧环唑、 联苯三唑醇、 糠菌唑、 环丙唑醇、 苄氯三唑醇、 苯醚甲环唑、 烯唑醇、 M- 烯唑醇、 十二环吗啉、 十二环吗啉醋 酸盐、 氟环唑、 乙环唑、 氯苯嘧啶醇、 腈苯唑、 环酰菌胺、 苯锈啶、 丁苯吗啉、 氟喹唑、 呋嘧醇、 氟硅唑、 粉唑醇、 呋菌唑、 呋醚唑、 己唑醇、 亚胺唑、 种菌唑、 叶菌唑、 腈菌唑、 萘替芬、 氟苯嘧 啶醇、 噁咪唑、 多效唑、 稻瘟酯、 戊菌唑、 哌丙灵、 咪酰胺、 丙环唑、 丙硫菌唑、 稗草丹、 啶斑肟、 氯苯喹唑 (quinconazole)、 硅氟唑、 螺环菌胺、 戊唑醇、 特比萘酚、 氟醚唑、 三唑酮、 三唑醇、 十三吗啉、 氟菌唑、 嗪氨灵、 灭菌唑、 烯效唑、 烯霜苄唑 (viniconazole) 和伏立康唑。
(F10) 细胞壁合成抑制剂， 如苯噻菌胺、 烯酰吗啉、 氟吗啉、 缬霉威、 双炔酰菌胺、 多 氧霉素、 多抗霉素、 硫菌威、 井冈霉素 A 和霜霉灭。
(F11) 黑色素生物合成抑制剂， 如环丙酰亚胺、 双氯氰菌胺、 稻瘟酰胺、 四氯苯酞、咯喹酮和三环唑。
(F12) 能诱导宿主防御的化合物， 如阿拉酸式苯 -S- 甲基、 烯丙苯噻唑和噻酰菌 胺。
(F13) 具有多作用位点的化合物， 例如波尔多混合剂、 敌菌丹、 克菌丹、 百菌清、 环 烷酸铜、 氧化铜、 氯氧化铜， 铜制剂如氢氧化铜、 硫酸铜， 苯氟磺胺、 二氰蒽醌、 多果定、 多果 定游离碱、 福美铁、 N- 邻苯二甲酰亚胺 (fluorofolpet)、 灭菌丹、 双胍辛胺、 双胍辛胺醋酸 盐、 双胍三辛烷、 双胍三辛烷基苯磺酸盐、 双胍辛胺三乙酸酯、 代森锰铜、 代森锰锌、 代森锰、 代森联、 代森联锌、 喹啉铜、 普罗帕脒、 丙森锌， 硫和硫制剂包括多硫化钙、 福美双、 甲苯氟磺 胺、 代森锌和福美锌。
(F14) 其它化合物如 2， 3- 二丁基 -6- 氯噻吩 [2， 3-d] 吡啶 -4(3H)- 酮、 (2Z)-3- 胺 基 -2- 氰基 -3- 苯基丙 -2- 烯酸乙酯、 吡草醚 (pyflufen)(N-[2-(1， 3- 二甲基丁基 ) 苯 基 ]-5- 氟 -1， 3- 二甲基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺 )、 N-{2-[1， 1′ - 二 ( 环丙基 )-2- 基 ] 苯 基 }-3-( 二氟甲基 )-1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺、 3-( 二氟甲基 )-1- 甲基 -N-(3′， 4′， 5 ′ - 三氟二苯基 -2- 基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺、 3-( 二氟甲基 )-N-[4- 氟 -2-(1， 1， 2， 3， 3， 3- 六氟丙氧基 ) 苯基 ]-1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 甲酰胺、 (2E)-2-(2-{[6-(3- 氯 -2- 甲 基 苯 氧 基 )-5- 氟 嘧 啶 -4- 基 ] 氧 基 } 苯 基 )-2-( 甲 氧 亚 胺 基 )-N- 甲 基 乙 酰 胺、 (2E)-2-{2-[({[(2E， 3E)-4-(2， 6- 二氯苯基 ) 丁 -3- 烯 -2- 亚基 ] 胺基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯 基 }-2-( 甲氧亚胺基 )-N- 甲基乙酰胺、 2- 氯 -N-(1， 1， 3- 三甲基 -2， 3- 二氢 -1H- 茚 -4- 基 ) 吡啶 -3- 甲酰胺、 N-(3- 乙基 -3， 5， 5- 三甲基环己基 )-3-( 甲酰胺基 )-2- 羟基苯甲酰 胺、 5- 甲 氧 基 -2- 甲 基 -4-(2-{[({(1E)-1-[3-( 三 氟 甲 基 ) 苯 基 ] 亚 乙 基 } 胺 基 ) 氧 基 ] 甲 基 } 苯 基 )-2， 4- 二 氢 -3H-1， 2， 4- 三 唑 -3- 酮、 (2E)-2-( 甲 氧 亚 胺 基 )-N- 甲 基 -2-(2-{[({(1E)-1-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 亚乙基 } 胺基 ) 氧基 ] 甲基 } 苯基 ) 乙酰 胺、 (2E)-2-( 甲氧亚胺基 )-N- 甲基 -2-{2-[(E)-({1-[3-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙氧基 } 亚胺 基 ) 甲基 ] 苯基 } 乙酰胺、 (2E)-2-{2-[({[(1E)-1-(3-{[(E)-1- 氟 -2- 苯乙烯基 ] 氧基 } 苯基 ) 亚乙基 ] 胺基 } 氧基 ) 甲基 ] 苯基 }-2-( 甲氧亚胺基 )-N- 甲基乙酰胺、 1-(4- 氯苯 基 )-2-(1H-1， 2， 4- 三唑 -1- 基 ) 环庚醇、 1-(2， 2- 二甲基 -2， 3- 二氢 -1H- 茚 -1- 基 )-1H- 咪 唑 -5- 甲酸甲酯、 N- 乙基 -N- 甲基 -N′ -{2- 甲基 -5-( 三氟甲基 )-4-[3-( 三甲基甲硅烷基 ) 丙氧基 ] 苯基 } 亚胺基甲酰胺、 N′ -{5-( 二氟甲基 )-2- 甲基 -4-[3-( 三甲基甲硅烷基 ) 丙 氧基 ] 苯基 }-N- 乙基 -N- 甲基亚胺基甲酰胺、 O-{1-[(4- 甲氧基苯氧基 ) 甲基 ]-2， 2- 二甲 基丙基 }1H- 咪唑 -1- 硫代甲酸酯、 N-[2-(4-{[3-(4- 氯苯基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 ] 氧基 }-3- 甲 2 氧苯基 ) 乙基 ]-N -( 甲基磺酰基 ) 缬胺酰胺、 5- 氯 -7-(4- 甲基哌啶 -1- 基 )-6-(2， 4， 6- 三 氟苯基 )[1， 2， 4] 三唑并 [1， 5-a] 嘧啶、 5- 胺基 -1， 3， 4- 噻二唑 -2- 硫醇、 三乙膦酸霜霉威、 1-[(4- 甲氧苯氧基 ) 甲基 ]-2， 2- 二甲基丙基 1H- 咪唑 -1- 甲酸酯、 1- 甲基 -N-[2-(1， 1， 2， 2- 四氟乙氧基 ) 苯基 ]-3-( 三氟甲基 )-1H- 吡唑 -4- 甲酰胺、 2， 3， 5， 6- 四氯 -4-( 甲基 磺酰基 ) 吡啶、 2- 丁氧基 -6- 碘 -3- 丙基 -4H- 色满 -4- 酮、 2- 苯基苯酚和盐、 3-( 二氟甲 基 )-1- 甲基 -N-[2-(1， 1， 2， 2- 四氟乙氧基 ) 苯基 ]-1H- 吡唑 -4- 甲酰胺、 3， 4， 5- 三氯吡 啶 -2， 6- 二腈、 3-[5-(4- 氯苯基 )-2， 3- 二甲基异噁唑啉 -3- 基 ] 吡啶、 3- 氯 -5-(4- 氯苯 基 )-4-(2， 6- 二氟苯基 )-6- 甲基哒嗪、 4-(4- 氯苯基 )-5-(2， 6- 二氟苯基 )-3， 6- 二甲基哒 嗪、 喹啉 -8- 醇、 喹啉 -8- 醇硫酸盐 (2 ∶ 1)( 盐 )、 5- 甲基 -6- 辛基 -3， 7- 二氢 [1， 2， 4] 三唑并 [1， 5-a] 嘧啶 -7- 胺、 5- 乙基 -6- 辛基 -3， 7- 二氯 [1， 2， 4] 三唑并 [1， 5-a] 嘧啶 -7- 胺、 苯噻硫氰、 3- 苯并 [b] 噻吩 -2- 基 -5， 6- 二氢 -1， 4， 2- 噻嗪 4- 氧化物 (bethoxazin)、 卡巴 西霉素、 香芹酮、 灭螨猛、 地茂散、 硫杂灵杀菌剂、 环氟菌胺、 霜脲氰、 环丙磺酰胺、 棉隆、 咪菌 威、 双氯酚、 哒菌酮、 氯硝胺、 野燕枯、 野燕枯甲基硫酸盐、 二苯胺、 ecomate、 嘧菌腙、 氟联苯 菌 (flumetover)、 氟吡菌胺、 氟酰亚胺、 磺菌胺、 氟噻菌净 (flutianil)、 三乙膦酸铝、 三乙 膦酸钙、 三乙膦酸钠、 六氯苯、 人间霉素、 异噻菌胺 (isotianil)、 磺菌威、 (2E)-2-{2-[({ 环 丙基 [(4- 甲氧苯基 ) 亚胺基 ] 甲基 } 硫基 ) 甲基 ] 苯基 }-3- 甲氧基丙烯酸甲酯、 甲基 异硫氰酸酯、 苯菌酮、 (5- 溴 -2- 甲氧基 -4- 甲基吡啶 -3- 基 )(2， 3， 4- 三甲氧基 -6- 甲基 苯基 )- 甲酮、 灭粉霉素、 甲磺菌胺、 N-(4- 氯苄基 )-3-[3- 甲氧基 -4- 丙 -2- 炔 -1- 基氧 基 ) 苯基 ] 丙酰胺、 N-[(4- 氯苯基 )( 氰基 ) 甲基 ]-3-[3- 甲氧基 -4-( 丙 -2- 炔 -1- 基 氧基 ) 苯基 ] 丙酰胺、 N-[(5- 溴 -3- 氯吡啶 -2- 基 ) 甲基 ]-2， 4- 二氯吡啶 -3- 甲酰胺、 N-[1-(5- 溴 -3- 氯吡啶 -2- 基 ) 乙基 ]-2， 4- 二氯吡啶 -3- 甲酰胺、 N-[1-(5- 溴 -3- 氯 吡啶 -2- 基 ) 乙基 ]-2- 氟 -4- 碘吡啶 -3- 甲酰胺、 N-{(Z)-[( 环丙基甲氧基 ) 亚胺基 ] [6-( 二氟甲氧基 )-2， 3- 二氟苯基 ] 甲基 }-2- 苯基乙酰胺、 N-{(E)-[( 环丙基甲氧基 ) 亚 胺基 ][6-( 二氟甲氧基 )-2， 3- 二氟苯基 ] 甲基 }-2- 苯基乙酰胺、 纳他霉素、 二甲基二硫 代氨基甲酸镍、 酞菌酯、 辛噻酮、 oxamocarb、 oxyfenthiin、 五氯酚和盐、 吩嗪 -1- 甲酸、 苯醚 菊酯、 亚磷酸及其盐、 霜霉威乙膦酸盐、 丙醇菌素 (propanosine)- 钠、 丙氧喹啉、 吡咯尼群 (pyrrolnitrine)、 五氯硝基苯、 S- 丙 -2- 烯 -1- 基 5- 胺基 -2-(1- 甲基乙基 )-4-(2- 甲基 苯基 )-3- 氧代 -2， 3- 二氢 -1H- 吡唑 -1- 硫代甲酸酯、 叶枯酞、 四氯硝基苯、 咪唑嗪、 水杨菌 胺、 5- 氯 -N′ - 苯基 -N′ - 丙 -2- 炔 -1- 基噻吩 -2- 磺酰肼和氰菌胺 (zarilamid)。
在一个优选的实施方案中， 杀真菌剂选自下列 ：
甲霜灵、 精甲霜灵、 啶酰菌胺、 氟吡菌酰胺、 联苯吡菌胺、 吡噻菌胺、 嘧菌酯、 噁唑菌 酮、 咪唑菌酮、 醚菌酯、 吡唑醚菌酯、 肟菌酯。
根据本发明， 优选的组合物含有生物控制剂， 其为核果梅奇酵母， 特别是菌株 NRRL Y-30752 和至少一种选自 (F1) ～ (F14) 中所列的真菌控制剂。
根据本发明， 尤其优选的组合物含有生物控制剂， 其为核果梅奇酵母， 特别是菌株 NRRL Y-30752 和至少一种选自下述中所列的真菌控制剂 ： 甲霜灵、 精甲霜灵、 啶酰菌胺、 氟 吡菌酰胺、 联苯吡菌胺、 吡噻菌胺、 嘧菌酯、 噁唑菌酮、 咪唑菌酮、 醚菌酯、 吡唑醚菌酯、 肟菌 酯。
进一步特别优选的组合物如表 (I) 所示 ：
表 (I)
最优选的组合物如表 (II) 所示 ： 表 (II)
根据本发明下述优选的实施方案中的其它特征， 提供的组合物含有核果梅奇酵母 的生物纯菌株， 具有 NRRL Y-30752 的生物纯培养物的所有识别特征。
根据所述的优选的实施方案中的其它特征， 提供的组合物含有核果梅奇酵母的生 物纯突变体， 具有 NRRL Y-30752 的生物纯培养物的所有识别特征。
根 据 所 述 的 优 选 的 实 施 方 案 中 的 其 它 特 征， 有害微生物选自下组 ： 灰霉菌 (Botrytis cinerea)、 黑曲霉 (Aspergillus niger)、 指状青霉 (Penicillium digitatum)、 扩 展 青 霉 (Penicillium expansum)、 匍 枝 根 霉 (Rhizopus stolonifer)、 链格孢属 (Alternaria spp.)、 链核盘菌属 (Molinilia spp.) 和镰孢属 (Fusariurn spp.)。
根据所述的优选的实施方案中的其它特征， 以选自活化和休眠的生理状态提供酵 母。
根据所述的优选的实施方案中的其它特征， 梅奇酵母属的酵母具有鉴定为 NRRL Y-30752 的核果梅奇酵母或其任何菌株或该菌株任何突变体的所有识别特征。特别优选处理梨果和核果和浆果， 特别是苹果、 梨、 李子、 桃、 杏、 樱桃、 草莓、 树莓 和黑莓。
特别优选处理柑果， 特别是橙子、 柠檬、 葡萄柚、 桔子。特别优选处理热带水果， 特 别是木瓜、 百香果、 芒果、 杨桃、 菠萝、 香蕉。
特别优选处理葡萄。
进一步优选处理蔬菜， 特别是瓜类、 葫芦、 生菜、 土豆。
进一步优选处理花、 鳞茎、 盆栽植物、 树木。
除了根据本发明将组合物施用到正在生长的植物或植物部分上， 它们还可用于保 护采收后的植物或植物部分。
本申请中， “采收后处理” 应理解为是非常广义的。一方面， 按字面上理解是指已经 采收的果实或蔬菜的处理。为了采收后处理， 果实或蔬菜以 ( 如使用 WO 2005/009474 中公 开的方法和设备 ) 浸没或农药箱倾倒或浸入液体中、 刷、 熏蒸、 涂抹、 喷雾 ( 暖或冷 ) 处理， 或果实用蜡或其它组合物进行涂布。
根据本发明， 采收后和储藏病害可由如下述真菌引起 ：
炭疽菌属， 如香蕉炭疽菌、 胶孢炭疽菌、 球状炭疽菌 ； 镰刀菌属， 如半裸镰刀菌、 串珠镰刀菌、 腐皮镰刀菌、 尖孢镰刀菌 ； 轮枝孢属， 如可可轮枝孢 ； 黑孢属 ； 葡萄孢属， 如葡萄孢菌 ； 地丝菌属， 如白地霉 (Geotrichum candidum) ； 拟茎点霉属， 如 Phomopsis natalensis ； 色 二 孢 属， 如 柑 桔 色 二 孢 (Diplodia citri) ； 链 格 孢 属， 如 柑 桔 链 格 孢、 互隔交链孢霉 ； 疫霉属， 如柑橘褐腐疫霉， 草莓疫霉、 人参疫霉、 烟草疫霉 ； 壳针孢属， 如 Septoria depressa ； 毛霉属， 如梨形毛霉 ； 链核盘菌属， 如果生链核盘菌、 核果链核盘菌 ； 黑星菌属， 如苹果黑星菌、 梨黑星菌 ； 根霉属， 如匍枝根霉、 米根霉 ； 小从壳属， 如围小从壳 菌； 核盘菌属， 如果生核盘菌 ； 长喙壳属， 如奇异长喙壳 ； 青霉菌属， 如蝇状青霉、 扩展青霉、 指状青霉、 意大利青霉 ； 盘长孢属， 如白盘长孢、 Gloeosporium perennans、 果生盘长孢、 Gloeosporium singulata ； 壳蛇孢属， 如 Phlyctaena vagabunda ； 柱孢属， 如苹果柱孢 ； 匍 柄霉属， 如黄花菜匍柄霉菌 ； 星裂壳孢属， 如 Phacydiopycnis malirum ； 根串珠霉属， 如奇 异根串株霉 ； 曲霉属， 如黑曲霉、 炭黑曲霉 ； 丛赤壳属， 如仁果癌丛赤壳菌 ； 无柄盘菌属。
根据本发明， 采收后储藏病害为如灼伤 (scald)、 枯萎、 软化、 衰败、 皮孔斑点、 苦 陷、 褐化、 水心病、 维管破裂、 CO2 损伤、 CO2 缺乏和 O2 缺乏。
可根据本发明进行处理的水果、 切花和蔬菜特别选自 ：
谷类， 如小麦、 大麦、 黑麦、 燕麦、 水稻、 高粱等 ； 甜菜， 如糖用甜菜和饲用甜菜 ； 梨 果、 核果和浆果， 如苹果、 梨、 李子、 桃、 杏、 樱桃、 草莓、 树莓和黑莓 ； 豆科植物， 如菜豆、 扁豆、 豌豆、 大豆 ； 含油植物， 如油菜、 芥菜、 罂粟、 橄榄、 向日葵、 椰子、 蓖麻油植物、 可可、 地上生坚 果； 葫芦科， 如南瓜、 小黄瓜、 甜瓜、 黄瓜、 西葫芦 ； 纤维植物， 如棉花、 亚麻、 大麻、 黄麻 ； 柑桔 类水果， 如橙子、 柠檬、 葡萄柚、 柑桔 ； 热带水果， 如木瓜、 西番莲果、 芒果、 杨桃、 菠萝、 香蕉 ； 蔬菜， 如菠菜、 生菜、 芦笋， 十字花科， 如卷心菜和萝卜、 胡萝卜、 洋葱、 番茄、 土豆、 辣椒和甜 椒； 月桂样植物， 如鳄梨、 肉桂、 樟树 ； 或植物如玉米、 烟草、 坚果、 咖啡、 甘蔗、 茶树、 葡萄藤、 啤酒花、 橡胶作物以及观赏植物， 如切花， 玫瑰、 非洲菊和花的鳞茎、 灌木、 落叶树和常绿树， 如针叶树。列举的栽培植物仅作说明解释之用， 本发明不限于此。
在本发明的另一个优选的实施方案中， 用两个步骤对植物或植物部分进行处理 ：a) 用化学杀真菌剂处理， 以及 b) 用酵母处理， 其中， 两个施用步骤 a) 和 b) 之间的时间间隔如下所定义 ：化学杀真菌剂施用时间 采收前 7 ～ 60 天 采收前 14 ～ 100 天 酵母施用时间 采收前 1 ～ 14 天 采收前 1 ～ 14 天在所有情况下， 应在 50 ～ 85 的植物生长阶段 (BBCH) 施用化学杀真菌剂， 且应在 80 的植物生长阶段 (BBCH) 向前包括采收后施用酵母。
步骤 a) 中的化学杀真菌剂优选地选自 ：
环 酰 菌 胺、戊 唑 醇、氟 喹 唑、三 唑 醇、三 唑 酮、苯 醚 甲 环 唑、氧 唑 菌 (epoxyconazole)、 戊 菌 唑、 联 苯 三 唑 醇、 丙 环 唑、 腈 菌 唑、 抑 霉 唑、 咪 酰 胺、 螺 环 菌 胺、 十三吗啉、 丁苯吗啉、 苯锈啶、 肟菌酯、 嘧菌酯、 醚菌酯、 吡唑醚菌酯、 咪唑菌酮、 噁唑菌酮 (fenoxadone)、 嘧霉胺、 嘧菌环胺、 嘧菌胺、 二甲酰胺、 异菌脲、 甲基代森锌、 代森锰锌、 三乙 膦酸铝、 烯酰吗啉、 氟啶胺、 丙森锌、 多菌灵、 甲基托布津、 噻苯咪唑、 氟吡菌胺、 甲霜灵、 精甲 联苯吡菌胺、 啶酰菌胺、 萘吡菌胺 (isopyrazam)、 吡噻菌胺、 二硫代氨基 霜灵、 氟吡菌酰胺、 甲酸酯。
步骤 a) 中的化学杀真菌剂特别优选自 ： 氟吡菌酰胺、 戊唑醇、 环酰菌胺、 肟菌酯。
实施本实施方案的步骤 a) 最优选的化学杀真菌剂为氟吡菌酰胺或戊唑醇。
进一步地， 步骤 a) 中的化学杀真菌剂优选地选自含有两种、 三种或多种下述化学 杀真菌剂的混合物 ：
环 酰 菌 胺、戊 唑 醇、氟 喹 唑、三 唑 醇、三 唑 酮、苯 醚 甲 环 唑、氧 唑 菌 (epoxyconazole)、 戊 菌 唑、 联 苯 三 唑 醇、 丙 环 唑、 腈 菌 唑、 抑 霉 唑、 咪 酰 胺、 螺 环 菌 胺、 十三吗啉、 丁苯吗啉、 苯锈啶、 肟菌酯、 嘧菌酯、 醚菌酯、 吡唑醚菌酯、 咪唑菌酮、 噁唑菌酮 (fenoxadone)、 嘧霉胺、 嘧菌环胺、 嘧菌胺、 二甲酰胺、 异菌脲、 甲基代森锌、 代森锰锌、 三乙 膦酸铝、 烯酰吗啉、 氟啶胺、 丙森锌、 多菌灵、 甲基托布津、 噻苯咪唑、 氟吡菌胺、 甲霜灵、 精甲 霜灵、 氟吡菌酰胺、 联苯吡菌胺、 啶酰菌胺、 萘吡菌胺 (isopyrazam)、 吡噻菌胺、 二硫代氨基 甲酸酯。
步骤 b) 的酵母优选为可移植于植物或植物部分的酵母。特别优选为核果梅奇酵 母， 更优选优选为核果梅奇酵母菌株 NRRL Y-30752。
最优选的， 步骤 a) 用氟吡菌酰胺或戊唑醇实施， 且步骤 b) 用核果梅奇酵母 NRRL Y-30752 实施。
BBCH 是指植物的生长阶段， 描述于 ： “单双子叶的生长阶段” ， BBCH 专题论文 (BBCH Monograph)， 第二版， 2001， Uwe Meier Ed.， 德国联邦农林生物研究中心。
令人意外地， 本方法高效地实现了控制植物或植物部分对抗有害微生物。与现有 技术的处理相比， 即仅使用化学杀真菌剂或仅用生物杀真菌剂， 本方法综合了高效控制有 害微生物和被处理的植物或植物部分化学杀真菌剂的残留极低。本发明还提供处理植物的方法， 通过施用有效量的任何一种常规制剂至土壤 ( 即 浇灌 )、 或至部分植物 ( 即浇透 ) 或至播种前的种子 ( 即种子包埋或拌种 )。常规制剂包括 溶液 (SL)、 乳化浓缩液 (EC)、 可湿性粉剂 (WP)、 悬浮浓缩液 (SC 和 FC)， 可湿性粉剂 (WP)， 可 溶性粉剂 (SP)、 粒剂 (GR)、 悬浮乳化浓缩液 (SE)、 浸润过活性化合物的天然或合成材料， 以 及聚合物材料的极细控释胶囊。在一个实施方案中， 可将昆虫防治剂和生物控制剂调配成 即用型制剂或使用时混合的粉末。在任一具体的实施方案中， 该粉末可于播种前或播种时 拌入土壤中。在一个可选择的实施方案中， 生物控制剂或昆虫防治剂或其组合均为液体制 剂， 并可在处理时相互混合。 本领域技术人员理解， 可根据组合物的最终制剂以及被处理的 植物或种子的大小确定组合物的有效用量。
根据最终制剂以及施用方法， 本发明组合物还可加入一或多种合适的添加剂。本 发明组合物中可添加粘合剂如羧甲基纤维素以及粉末型、 颗粒型或乳胶型天然或合成聚合 物， 如阿拉伯胶、 几丁质、 聚乙烯醇和聚醋酸乙酸酯及天然磷脂如脑磷脂和卵磷脂以及合成 磷脂。
在一个优选的实施方案中， 所述组合物被配制成单一的稳定溶液或乳液或悬浮 液。 就溶液而言， 将活性化合物 ( 即昆虫防治剂 ) 在加入生物控制剂前溶解于溶剂中。 合适 的液体溶剂包括石油基芳香族化合物， 如二甲苯、 甲苯或烷基萘 ； 脂肪烃如环己烷或石蜡， 如石油分馏物、 矿物和植物油 ； 醇类如丁醇或甘醇及其醚类和酯类 ； 酮类如甲乙酮、 甲基异 丁基酮或环己酮 ； 强极性溶剂例如二甲基甲酰胺和二甲亚砜。就乳液或悬浮液而言， 液体 介质为水。 在一个具体的实施方案中， 将昆虫防治剂和生物控制剂分别悬浮于液体内， 并在 使用时混合。在悬浮液的优选实施方案中， 昆虫防治剂和生物控制剂被混合制成具有至少 两年保质期的即用型制剂。 使用时， 该液体可在种植植物时进行喷雾、 雾化施用于叶子或沟 中。所述液体组合物可在种子发芽前引入土壤中， 或利用各种技术包括但不限于滴灌、 喷 灌、 土壤灌注或土壤漫灌而直接进入土壤接触根部。
可选择性地加入稳定剂和缓冲剂， 包括碱金属和碱土金属盐、 有机酸如柠檬酸和 抗坏血酸， 无机酸如盐酸或硫酸。 还可加入生物灭杀剂包括甲醛或甲醛释放剂， 以及苯甲酸 衍生物如对羟基苯甲酸。
在一个实施方案中， 所述液体或固体组合物进一步含有能保护种子免受选择性除 草剂有害影响的功能助剂如活性炭、 养分 ( 肥料 )， 以及能改善发芽和产物品质或其组合的 其它制剂。
在一个尤其优选的实施方案中， 本发明的组合物被配制成种子处理剂， 该种子处 理剂含有至少一种昆虫防治剂和至少一种生物控制剂。根据本发明， 利用特别设计和制造 的处理装置用来准确、 安全和有效地将种子涂布上种子处理剂， 通过混合、 喷洒或其组合的 常用方法将种子基本均匀地包埋上一或多层本发明所述的组合物。 所述处理装置可使用多 种包埋技术， 如旋转包埋技术、 滚筒式包埋技术、 流态化床技术、 喷动床技术、 旋转喷雾技术 或各种技术的组合。当其移动通过喷雾模式时， 本发明所述的液体种子处理剂可通过旋转 “喷雾器” 盘或喷嘴将该种子处理剂均匀地涂布于种子上。优选的是， 将该种子再混合或滚 动一段时间以获得进一步的处理分布和干燥。 该种子可在种子包埋前进行预处理或不进行 预处理， 目的是增加发芽和出土的一致性。 在另一个可选的实施方案中， 将干粉剂添加到滚 动的种子上， 与种子混合直到分布均匀为止。可通过批次或连续包埋步骤对种子进行包埋。在一个连续包埋的实施方案中， 连 续流动设备能同时测定种子流和种子处理产品。滑动门、 锥和喷嘴、 种子轮或称重装置 ( 带 或分流器 ) 可调节种子流。一旦测定出经过处理设备的种子流速， 可校正种子处理的种子 流速， 从而当种子流经种子处理设备时可输送预定剂量至该种子。 此外， 可利用计算机系统 监控涂布机输入的种子， 因此可维持适当种子量的恒定流速。
在批次包埋实施方案中， 用批次处理设备称出预定量的种子并将该种子放入密封 处理舱内或筒内， 然后向其中加入对应量的种子处理剂。 然后从处理舱内倒出这一批次， 以 准备下一批次的处理。利用电脑控制系统， 可自动、 连续重复地进行批次处理作业。
在任一实施方案中， 可通过一个程式化逻辑控制器操作该种子包埋机器， 从而实 现无人即可开启和停止各种设备。该系统的元件可通过多种渠道市售获得， 如明尼苏达州 Shakopee 市的 Gustafson 设备公司。
可将各种添加剂加入到含有本发明组合物的种子处理剂中。可加入粘合剂， 优选 为对被包埋的种子无毒副作用的天然或人工粘性聚合物。可使用任何一种着色剂， 包括有 机发色团， 分类为亚硝基、 硝基 ； 偶氮， 包括单偶氮、 双偶氮或多偶氮 ； 二苯甲烷 ； 三芳基甲 烷； 氧杂蒽 ； 次甲基 ； 吖啶 ； 噻唑 ； 噻嗪 ； 吲达胺 ； 靛酚 ； 吖嗪 ； 噁嗪 ； 蒽醌和酞菁染料。可被 加入的其它添加剂包括微量元素， 如铁、 锰、 硼、 铜、 钴、 钼和锌的盐。 可利用聚合物或其它除 尘剂使处理剂保留在种子表面。
其它传统的种子处理添加剂包括但不限于包埋剂、 湿润剂、 缓冲剂和多糖。 种子处 理制剂可加入至少一种农业上可接受的载体， 如水、 固体或干粉末。 干粉末可源自各种材料 如碳酸钙、 石膏、 蛭石、 滑石粉、 腐殖土、 活性炭以及各种磷化物。
在一个实施方案中， 种子包埋组合物可包括至少一种填料， 该填料为有机或无机、 天然或人工合成的组分， 其与活性成分结合后便于种子包埋。 所述填料优选为惰性固体， 如 粘土、 天然或人工合成的硅酸盐、 二氧化硅、 树脂、 石蜡、 固体肥料 ( 如铵盐 )， 天然土壤矿物 质如高岭土、 粘土、 滑石粉、 石灰、 石英、 硅镁土、 蒙脱土、 膨润土或硅藻土， 或人工矿物如氧 化硅、 氧化铝或硅酸盐， 特别是硅酸铝或镁。
根据本发明， 可处理易受线虫和 / 或病原真菌感染的发芽后能形成的植物的任何 植物种子。合适的种子包括油菜作物、 蔬菜、 果实、 树木、 纤维作物、 油料作物、 块茎作物、 咖 啡、 花卉、 豆科植物、 谷物以及其它单子叶和双子叶植物。优选的可包埋的种子作物包括但 不限于大豆、 花生、 烟草、 草、 小麦、 大麦、 黑麦、 高粱、 水稻、 油菜、 甜菜、 向日葵、 番茄、 辣椒、 菜豆、 生菜、 马铃薯、 胡萝卜的种子。最优选的可用本发明组合物包埋棉花和玉米 ( 甜玉米、 大田玉米、 籽用玉米或爆米花用玉米 ) 的种子。
通过将本发明的组合物与农业上有效量的至少一种环保的生物控制剂和至少一 种昆虫防治剂组合， 可意想不到地改善植物整体长势和产量。这种意想不到的效果归功于 生物控制剂的杀线虫和 / 或杀真菌的特性和昆虫防治剂增加根群 (root mass) 特性的组 合。
本发明进一步的优点为， 与各自单独的活性化合物相比， 本发明制剂的杀虫剂和 / 或杀真菌剂活性有协同增效作用， 其活性超过各自活性化合物之和。 根据这种方法， 可施用 最适量的活性化合物。
本发明组合物的另一个优点为可特别适用于转基因种子， 从而使该种子发育成的植物能表达直接对抗虫害和病原的蛋白。用本发明的制剂处理此类种子， 通过表达如杀虫 蛋白， 某些害虫和病原已能得到控制， 此外， 更意外地发现本发明制剂的辅助协同活性可进 一步改善对虫害和病原侵害的保护有效性。
本发明的制剂适用于保护已被记载用于农业、 温室、 林业、 花园或葡萄园内的各种 类型的植物种子。 特别合适的为玉米、 花生、 芥菜、 油菜、 罂粟、 橄榄、 椰子、 可可、 大豆、 棉花、 甜菜 ( 糖用甜菜或饲用甜菜 )、 水稻、 小麦、 大麦、 燕麦、 黑麦、 向日葵、 甘蔗或烟草的种子。 本 发明的制剂也适用于处理前述的水果和蔬菜的种子。最为重要的是处理玉米、 大豆、 棉花、 小麦、 芥菜和油菜的种子。因此， 如编号 (1) 的组合最适合处理玉米种子。
如前述， 用本发明制剂处理转基因种子极具重要。与此有关的植物种子通常含 有至少一种控制特定杀虫多肽表达的外源基因。该转基因种子内的外源基因可源自微生 物如杆菌、 根瘤菌、 假单胞菌、 沙雷氏菌、 木霉菌、 棒状杆菌、 球囊菌或粘帚霉菌。本发明 特别适合用于处理含有至少一种源自芽孢杆菌的外源基因的转基因种子， 其基因产物具 有对抗欧洲玉米螟和 / 或西方玉米根虫活性。最优选的外源基因源自苏云金芽孢杆菌 (B.thuringiensis)。
令人感到意外地是， 在化学昆虫防治剂存在的情况下， 该细菌孢子不仅可保留其 杀线虫和 / 或杀真菌活性， 还具有增强植物根系定殖的能力。这种增强能力导致其杀线虫 和 / 或杀真菌活性的扩增， 因而长势得到改善， 转而使产量得到提高。
已经公开了本发明的主题， 可显而易见地对本发明进行许多修饰、 替换和变型。 应 当理解， 除具体描述的以外， 还可实施本发明。这种修饰、 替换和变型应属于本申请的范围 内。如所附权利要求中所使用的， 冠词 “一种” 、 “所述” 等可指代其后面宾语的单数或复数 形式。 具体实施方式
通过下述实施例说明该组合物意料不到的活性和方法。
实施例 1
ShemerTM 为一种市售产品， 含有核果梅奇酵母 NRRL Y-30752 的 56％ WG( 可湿性 粒剂 ) 制剂。该制剂中核果梅奇酵母 NRRL Y-30752 最小的含量为 1.6x1010cfu/g(cfu/g ＝ 每克产品菌落形成单位 )。
2008 年 7 月和 8 月， 在意大利和法国对桃树进行施用。 施用含有戊唑醇和氟吡菌酰 胺 200+200g SC( 悬浮浓缩液 )3 次， 每隔约 7 天施用 1 次， BBCH 81 ～ 85， 安全间隔期 (Pre TM Harvest Interval， PHI) 为 7 天。施用 Shemer 4 次， BBCH 81 ～ 87， PHI 为 1 天。
在第三种处理方案中， BBCH 81， 两次施用戊唑醇和氟吡菌酰胺后， BBCH 85 和 TM BBCH 87， 两次施用 Shemer， 所有的使用间隔为 7 天， 最后施用 Shemer 的 PHI 为 1 天。
在 400L/ha 的水体积中， 通过马达驱动的喷雾器施用所有的产品。
戊唑醇和氟吡菌酰胺施用量为 150+150g ai/ha。ShemerTM 的施用浓度为 0.2％， 相当于 0.8kg/ha。Shemer 含有最小 1.6x1010cfu/g 的活性组分， 因此， 每公顷最小施用 13 1.3x10 cfu。
对 果 实 进 行 评 价 来 测 定 200 个 果 实 样 品 中 感 染 果 生 链 核 盘 菌 (Monilinia fructigena) 的果实数量， 将结果转化成每个处理的感染百分率， 并与未处理的对照进行比较， 确定控制百分率。
在最后一次施用后 9 天和 13 天进行评价。ShemerTM 具有平均 28％的病害控制率。 戊唑醇 + 氟吡菌酰胺具有 75 ％的控制率。两次施用戊唑醇 + 氟吡菌酰胺后， 再施用两次 Shemer 的方案具有 89％的控制率。16