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1、(10)申请公布号 CN 102488764 A (43)申请公布日 2012.06.13 CN 102488764 A *CN102488764A* (21)申请号 201110450510.5 (22)申请日 2011.12.29 A61K 36/73(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 7/02(2006.01) (71)申请人 中国人民解放军第三军医大学第一 附属医院 地址 400038 重庆市沙坪坝区高滩岩正街 30 号 (72)发明人 陈剑鸿 夏培元 王显凤 胡小刚 张宏伟 黄明春 (74)专利代理机构 北京同恒源知识产权代理有 限公司 11275 代。
2、理人 赵荣之 (54) 发明名称 茅莓总皂苷的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种茅莓总皂苷的制备方法， 是将茅莓药材先用碱水提取， 再用水提取， 提取液 浓缩， 醇沉， 再浓缩， 调节pH至56， 静置， 过滤， 所 得沉淀用碱水溶解后上大孔型碱性阴离子交换树 脂， 依次用碱水、 水冲洗， 弃去冲洗液， 再用含水乙 醇洗脱， 洗脱液浓缩， 静置， 过滤， 所得沉淀即为茅 莓总皂苷 ； 与现有技术相比， 本发明方法能够显 著提高茅莓总皂苷中的总皂苷含量， 所得产品杂 质少、 色泽佳， 利于制剂成型和改善制剂外观， 此 外， 该方法操作简单， 重复性好， 产品质量稳定， 适 用于工业化大规。
3、模生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 茅莓总皂苷的制备方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： a取茅莓药材， 加碱水 I 提取 23 次， 再加水提取 12 次， 合并提取液， 浓缩， 加乙醇沉 淀， 过滤， 滤液浓缩， 调节 pH 至 56， 515放置 1248 小时， 过滤， 收集沉淀 ； 所述碱水 I 为 质量百分浓度为 0.030.15% 的碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； b将步骤 a 所得沉淀用碱水 II 溶解， 溶解。
4、液上大孔型碱性阴离子交换树脂， 依次用碱 水 III、 水冲洗， 弃去冲洗液， 再用体积百分浓度为 6090% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 515放置1248小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷 ； 所述碱水II为质量百分浓 度为 0.52% 的碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； 所述碱水 III 为质量百分浓度 为 13% 的氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； 所述大孔型碱 性阴离子交换柱为大孔型弱碱性阴离子交换树脂 D382、 D380、 D371、 D392 或大孔型强碱性 阴离子交换树脂 D201。 2.根据权利要求。
5、1所述的茅莓总皂苷的制备方法， 其特征在于， 所述步骤a是取茅莓药 材， 加碱水 I 提取 23 次， 再加水提取 12 次， 合并提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙 醇至含醇量为6585%， 静置2448小时， 过滤， 滤液浓缩至含醇量为1525%， 调节pH至56， 515放置 1248 小时， 过滤， 收集沉淀。 3. 根据权利要求 1 所述的茅莓总皂苷的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 b 是将步骤 a 所得沉淀用碱水 II 溶解， 溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂， 先用 13 倍树脂床体积的 碱水 III 冲洗， 再用 35 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 。
6、710 倍树脂床体积的体 积百分浓度为6585%的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至含醇量为1525%， 515放置1248 小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷。 4. 根据权利要求 1 或 2 或 3 所述的茅莓总皂苷的制备方法， 其特征在于， 包括如下步 骤 ： a取茅莓药材， 加入 610 倍药材量的碱水 I 提取 2 次， 再加入 68 倍药材量的水提取 1 次， 合并提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为 6575%， 静置 24 小时， 过 滤， 滤液浓缩至含醇量为1520%， 调节pH至56， 10放置24小时， 过滤， 收集沉淀 ； 所述碱 水 。
7、I 为质量百分浓度为 0.030.15% 的碳酸氢钠或碳酸钠溶液 ； b 将步骤a所得沉淀用碱水II溶解， 溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂， 先用1.52 倍树脂床体积的碱水 III 冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 89 倍 树脂床体积的体积百分浓度为 6580% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至含醇量为 1520%， 510放置 24 小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷 ； 所述碱水 II 为质量百分浓度 为 0.52% 的碳酸氢钠或碳酸钠溶液 ； 所述碱水 III 为质量百分浓度为 22.5% 的氢氧化钠 溶液。 5. 采用权利要求 1 至。
8、 4 任一项所述制备方法制得的茅莓总皂苷。 6. 含有权利要求 5 所述茅莓总皂苷的药物制剂。 权 利 要 求 书 CN 102488764 A 2 1/4 页 3 茅莓总皂苷的制备方法 技术领域 0001 本发明属于中药提取技术， 涉及一种中药提取物的制备方法。 背景技术 0002 中 药 茅 莓 为 民 间 常 用 中 草 药， 来 源 于 蔷 薇 科 悬 钩 子 属 植 物 茅 莓 Rubus parvifolius L.的干燥全草。 其性凉味苦， 根、 茎、 叶均可入药， 具有清热解毒、 凉血止血、 祛 风除湿、 杀虫疗疮等功效， 主治感冒发热、 咳嗽咯血、 痢疾、 跌打损伤、 产后腹。
9、痛、 崩漏、 外伤 出血、 疥疮等多种疾病。 0003 CN200310111034.X 公开了茅莓总皂苷对脑缺血、 脑血栓、 脑梗塞等脑血管系统疾 病有很好的治疗作用， 同时公开了茅莓总皂苷的制备方法 ： 将茅莓用水或浓度为 60-80% 的 乙醇进行提取， 提取物浓缩至 1-3g/ml， 上大孔树脂， 用 10-50% 的乙醇洗脱， 洗脱物减压或 常压浓缩、 干燥， 所得物即茅莓总皂苷， 纯度大于 50%。都述虎等 （中成药 , 2003, 25(3): 185-188） 对 D101 型大孔吸附树脂富集、 纯化茅莓总皂苷的工艺条件及参数进行了研究， 结 果发现， 茅莓提取液上大孔吸附树脂。
10、柱， 用水、 50% 乙醇依次洗脱， 茅莓总皂苷富集于 50% 乙 醇洗脱液部分， 洗脱率在 79.2% 以上， 总固物中茅莓总皂苷含量可达 55.3% ； 其中茅莓提取 液的制备方法为将茅莓用 70% 乙醇回流提取得浸膏， 水浴蒸发至无醇味， 加水适量， 冰箱放 置 24 小时后抽滤， 即得茅莓总皂苷提取液。此外， 文献 （任凌燕等 . 茅莓总皂苷的含量测 定 . 重庆医科大学学报 , 2005, 30(6): 854-856） 还报道了采用不同溶剂 （甲醇、 70% 乙 醇） 及不同提取方法 （回流提取、 索氏提取、 超声提取） 制得的茅莓提取液中总皂苷的含量， 结果发现， 以 70% 乙。
11、醇回流提取所得的总皂苷含量最高。在上述方法基础上， 发明人对茅莓 总皂苷的提取工艺和大孔吸附树脂纯化工艺均进行了优化， 结果发现， 制得的茅莓总皂苷 中总皂苷含量最高只能达到 67.4%， 含杂质较多， 颜色较深， 不利于制剂成型并影响制剂的 外观。因此， 研究一种产品纯度更高的茅莓总皂苷制备方法具有重要的意义。 发明内容 0004 有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种产品纯度更高的茅莓总皂苷制备方法。 0005 为达到上述目的， 本发明提供如下技术方案 ： 茅莓总皂苷的制备方法， 包括如下步骤 ： a取茅莓药材， 加碱水 I 提取 23 次， 再加水提取 12 次， 合并提取液， 浓缩， 加。
12、乙醇沉 淀， 过滤， 滤液浓缩， 调节 pH 至 56， 515放置 1248 小时， 过滤， 收集沉淀 ； 所述碱水 I 为 质量百分浓度为 0.030.15% 的碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； b将步骤 a 所得沉淀用碱水 II 溶解， 溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂， 依次用碱 水 III、 水冲洗， 弃去冲洗液， 再用体积百分浓度为 6090% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 515放置1248小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷 ； 所述碱水II为质量百分浓 度为 0.52% 的碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； 所述碱水 III 为质。
13、量百分浓度 为 13% 的氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液 ； 所述大孔型碱 说 明 书 CN 102488764 A 3 2/4 页 4 性阴离子交换柱为大孔型弱碱性阴离子交换树脂 D382、 D380、 D371、 D392 或大孔型强碱性 阴离子交换树脂 D201。 0006 优选的， 所述步骤 a 是取茅莓药材， 加碱水 I 提取 23 次， 再加水提取 12 次， 合并 提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为 6585%， 静置 2448 小时， 过滤， 滤液 浓缩至含醇量为 1525%， 调节 pH 至 56， 515放置 124。
14、8 小时， 过滤， 收集沉淀。 0007 优选的， 所述步骤 b 是将步骤 a 所得沉淀用碱水 II 溶解， 溶解液上大孔型碱性阴 离子交换树脂， 先用 13 倍树脂床体积的碱水 III 冲洗， 再用 35 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 710 倍树脂床体积的体积百分浓度为 6585% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至含醇量为 1525%， 515放置 1248 小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷。 0008 更优选的， 所述制备方法包括如下步骤 ： a取茅莓药材， 加入 610 倍药材量的碱水 I 提取 2 次， 再加入 68 倍药材量的水提取 1 次， 合并。
15、提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为 6575%， 静置 24 小时， 过 滤， 滤液浓缩至含醇量为1520%， 调节pH至56， 10放置24小时， 过滤， 收集沉淀 ； 所述碱 水 I 为质量百分浓度为 0.030.15% 的碳酸氢钠或碳酸钠溶液 ； b 将步骤a所得沉淀用碱水II溶解， 溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂， 先用1.52 倍树脂床体积的碱水 III 冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 89 倍 树脂床体积的体积百分浓度为 6580% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 浓缩至含醇量为 1520%， 510放置 24 小时， 过滤， 收集。
16、沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷 ； 所述碱水 II 为质量百分浓度 为 0.52% 的碳酸氢钠或碳酸钠溶液 ； 所述碱水 III 为质量百分浓度为 22.5% 的氢氧化钠 溶液。 0009 按照文献 （任凌燕等 . 茅莓总皂苷的含量测定 . 重庆医科大学学报 , 2005, 30(6): 854-856） 方法测定本发明方法制得的茅莓总皂苷中的总皂苷含量， 结果显示， 按照 本发明方法制得的茅莓总皂苷中总皂苷含量达到 95% 以上， 杂质少， 色泽佳。所制得的茅莓 总皂苷可以按照药物制剂学的常规方法制成适合于临床治疗需要的各种制剂， 包括但不限 于注射剂、 片剂、 散剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 。
17、滴丸剂以及缓释、 控释制剂等， 优选剂型为咀嚼片、 胶囊剂和注射用无菌粉末。 0010 本发明的有益效果在于 ： 本发明公开了一种茅莓总皂苷的制备方法， 与现有技术 相比， 该方法能够显著提高茅莓总皂苷中的总皂苷含量， 所得产品杂质少、 色泽佳， 利于制 剂成型和改善制剂外观， 此外， 该方法操作简单， 重复性好， 产品质量稳定， 适用于工业化大 规模生产。 具体实施方式 0011 为了使本发明的目的、 技术方案和优点更加清楚， 下面对本发明的优选实施例进 行详细的描述。 0012 实施例 1、 茅莓总皂苷的制备 a取茅莓药材， 粉碎成粗粉， 超声提取 3 次， 第一次加入 10 倍药材量的质。
18、量百分浓度 为 0.08% 的碳酸氢钠溶液， 第二次加入 8 倍药材量的质量百分浓度为 0.05% 的碳酸氢钠溶 液， 第三次加入 8 倍药材量的水提取 1 次， 每次 1 小时， 合并三次提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为 75%， 静置 24 小时， 过滤， 滤液减压回收乙醇至含醇量为 20%， 用 说 明 书 CN 102488764 A 4 3/4 页 5 盐酸调节 pH 至 6， 10放置 24 小时， 过滤， 收集沉淀 ； b将步骤 a 所得沉淀用质量百分浓度为 1.5% 的碳酸氢钠溶液溶解， 溶解液上大孔型 强碱性阴离子交换树脂D201， 先用1.5倍树脂床。
19、体积的质量百分浓度为2.5%的氢氧化钠溶 液冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 8 倍树脂床体积的体积百分浓度 为 80% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压回收乙醇至含醇量为 15%， 10放置 24 小时， 过滤， 收 集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷， 经测定总皂苷含量为 98.3%。 0013 实施例 2、 茅莓总皂苷的制备 a取茅莓药材， 粉碎成粗粉， 煎煮提取 3 次， 第一次加入 10 倍药材量的质量百分浓度 为 0.07% 的碳酸氢钠溶液， 第二次加入 8 倍药材量的质量百分浓度为 0.03% 的碳酸氢钠溶 液， 第三次加入 8 倍药材量的水提取 1 次。
20、， 每次 1 小时， 合并三次提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为 70%， 静置 24 小时， 过滤， 滤液减压回收乙醇至含醇量为 15%， 用 盐酸调节 pH 至 5， 10放置 24 小时， 过滤， 收集沉淀 ； b将步骤 a 所得沉淀用质量百分浓度为 2% 的碳酸钠溶液溶解， 溶解液上大孔型弱碱 性阴离子交换树脂 D382， 先用 2 倍树脂床体积的质量百分浓度为 2% 的氢氧化钠溶液冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 9 倍树脂床体积的体积百分浓度为 70% 的 乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压回收乙醇至含醇量为 20%， 10放置 24 。
21、小时， 过滤， 收集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷， 经测定总皂苷含量为 96.9%。 0014 实施例 3、 茅莓总皂苷的制备 a取茅莓药材， 粉碎成粗粉， 煎煮提取 3 次， 第一次加入 8 倍药材量的质量百分浓度为 0.09% 的碳酸氢钠溶液， 第二次加入 6 倍药材量的质量百分浓度为 0.05% 的碳酸氢钠溶液， 第三次加入 6 倍药材量的水提取 1 次， 每次 1 小时， 合并三次提取液， 浓缩至药材量的 2 倍 体积， 加乙醇至含醇量为 70%， 静置 24 小时， 过滤， 滤液减压回收乙醇至含醇量为 18%， 用盐 酸调节 pH 至 6， 10放置 24 小时， 过滤， 收集沉淀。
22、 ； b将步骤 a 所得沉淀用质量百分浓度为 0.5% 的碳酸氢钠溶液溶解， 溶解液上大孔型 弱碱性阴离子交换树脂 D392， 先用 2 倍树脂床体积的质量百分浓度为 2% 的氢氧化钠溶液 冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 9 倍树脂床体积的体积百分浓度为 70%的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压回收乙醇至含醇量为19%， 5放置24小时， 过滤， 收集沉 淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷， 经测定总皂苷含量为 95.3%。 0015 实施例 4、 茅莓总皂苷的制备 a取茅莓药材， 粉碎成粗粉， 煎煮提取 3 次， 第一次加入 8 倍药材量的质量百分浓度为 0.15% 的。
23、碳酸钠溶液， 第二次加入 6 倍药材量的质量百分浓度为 0.08% 的碳酸钠溶液， 第三 次加入 6 倍药材量的水提取 1 次， 每次 1 小时， 合并三次提取液， 浓缩至药材量的 2 倍体积， 加乙醇至含醇量为65%， 静置24小时， 过滤， 滤液减压回收乙醇至含醇量为20%， 用盐酸调节 pH 至 5， 10放置 24 小时， 过滤， 收集沉淀 ； b将步骤 a 所得沉淀用质量百分浓度为 0.5% 的碳酸氢钠溶液溶解， 溶解液上大孔型 弱碱性阴离子交换树脂D380， 先用1.5倍树脂床体积的质量百分浓度为2.5%的氢氧化钠溶 液冲洗， 再用 4 倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液， 再用 。
24、9 倍树脂床体积的体积百分浓度 为 65% 的乙醇洗脱， 收集洗脱液， 减压回收乙醇至含醇量为 15%， 10放置 24 小时， 过滤， 收 集沉淀， 干燥， 即得茅莓总皂苷， 经测定总皂苷含量为 97.4%。 说 明 书 CN 102488764 A 5 4/4 页 6 0016 实施例 5、 茅莓总皂苷注射用无菌粉末的制备 分别取实施例 14 制得的茅莓总皂苷， 加入适量无菌注射用水， 调节 pH 至 6.57.0， 搅 拌加热使溶解， 再加入适量注射用甘露醇， 混匀， 用无菌抽滤漏斗滤过， 再用灭菌的 G6垂熔 玻璃漏斗精滤， 滤液分装于 2ml 安瓿中， 冷冻干燥， 无菌熔封， 即得茅。
25、莓总皂苷注射用无菌 粉末。 0017 实施例 6、 茅莓总皂苷胶囊剂的制备 分别取实施例 14 制得的茅莓总皂苷， 以淀粉和糊精为填充剂， 以质量百分浓度为 3% 的淀粉浆为粘合剂制软材， 2 号筛制粒， 60干燥， 2 号筛整粒， 加入适量硬脂酸镁混匀， 分 装于空胶囊中， 即得茅莓总皂苷胶囊剂。 0018 实施例 7、 茅莓总皂苷咀嚼片的制备 分别取实施例 14 制得的茅莓总皂苷， 加入适量淀粉、 蔗糖、 糊精、 甘露醇和薄荷香精 混匀， 湿法制粒， 60干燥， 整粒， 加入适量硬脂酸镁混匀， 压片， 即得茅莓总皂苷咀嚼片。 0019 最后说明的是， 以上实施例仅用于说明本发明的技术方案， 并不构成对本发明内 容的限制。尽管通过上述实施例已经对本发明做了较为详细的例举， 但本领域技术人员仍 然可以根据发明内容部分和实施例部分所描述的技术内容， 在形式上和细节上对其作出各 种各样的改变， 而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。 说 明 书 CN 102488764 A 6 。