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1、(10)申请公布号 CN 102450525 A (43)申请公布日 2012.05.16 CN 102450525 A *CN102450525A* (21)申请号 201010529052.X (22)申请日 2010.10.25 A23K 3/03(2006.01) (71)申请人 董志国 地址 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 克拉玛依东街 151 号 (72)发明人 董志国 李学森 郝兴明 张学洲 雷志刚 (54) 发明名称 一种豆科牧草的青贮复合菌添加剂 (57) 摘要 本发明是一种生物技术领域的豆科牧草复合 菌添加剂。该复合菌剂由产酸及青贮效果优良的 植物乳杆菌、 戊糖乳。
2、杆菌和乳酸链球菌组成。 用其 制作青贮， 提高了乳酸菌作为优势菌群的数量， 抑 制了丁酸发酵及其他腐败菌的作用， 提高青贮稳 定性， 青贮料风味好， 营养损失少， 能较好地保持 青贮料的营养品质。 该添加剂高效、 无毒、 安全、 无 副作用， 对指导农牧区豆科牧草青贮的制作意义 重大， 市场前景广阔。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种青贮复合菌添加剂。其特征是 ： 由 3 株乳酸菌混合组成复合菌剂， 能促进乳酸 发酵， 抑制其它腐败菌的作用， 防。
3、止蛋白质和其它营养物的水解， 青贮料风味好， 保证青贮 发酵品质优质稳定。 2. 根据权利要求 1 的复合菌添加剂， 其特征是 ： 复合菌剂由西北农牧结合区 5 种主栽 豆科牧草的青贮发酵物分离筛选驯化出， 由植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)、 戊糖 乳杆菌(Lactobacillus pentosus)和乳酸链球菌(Streptococcus lactis)， 其在添加剂中 分别按602020的重量百分比混合组成。 产酸及青贮效果优良产酸、 抑菌防腐能 力强， 是一种高效、 无毒、 安全、 无副作用的天然生物添加剂。 3. 根据权利要求 1 的复合菌添加剂， 其。
4、特征是 ： 复合菌剂纯培养后稀释 3-5 倍， 按青贮 原料重量的 0.2添加。能有效提高豆科牧草青贮的稳定性， 改善青贮料的品质。 权 利 要 求 书 CN 102450525 A 2 1/3 页 3 一种豆科牧草的青贮复合菌添加剂 所属技术领域 0001 本发明是一种生物技术领域的豆科牧草复合菌添加剂。由西北农牧结合区 5 种 主栽豆科牧草的绿汁发酵液和自然发酵的优质青贮饲料分离筛选纯化而来的植物乳杆 菌 (Lactobacillus plantarum)、 戊糖乳杆菌 (Lactobacillus pentosus) 和乳酸链球菌 (Streptococcus lactis) 组成高活性。
5、微生物青贮复合菌剂， 具有高效稳定、 产酸性能强的 特点。不仅能迅速降低青贮料的 pH 值， 而且具有抑菌防腐作用。用其制作的青贮料蛋白质 和其它营养物的水解很少， 较好地保持青贮料的营养品质。该添加剂无腐蚀、 无污染和无 毒副作用， 解决了豆科牧草青贮中不易控制的技术难题， 对西北农牧结合区人工栽培豆科 牧草均有效， 是较为理想的青贮添加剂， 对指导豆科牧草青贮的制作意义重大， 市场前景广 阔。 背景技术 0002 豆科牧草是家畜重要的蛋白质饲料来源， 是发展节粮型畜牧业的物质基础， 在我 国西北地区三元种植结构中具有重要作用。随着人工饲草料基地建设的蓬勃发展， 饲草在 种植和产量都有大规模。
6、的增长， 于是饲草出路成了问题， 如何对饲草进行调制加工， 实现草 产品合理利用、 转化成为关键。豆科牧草由于所处的重要位置， 其矛盾显得尤为突出。由于 青贮饲料具有干草不具备的生产特点和营养优点， 又是家畜冬春季不可或缺的饲料类型， 正成为饲草产品市场新宠， 因此， 研究开发豆科牧草青贮技术就显得很重要。 常用的青贮方 法有鲜贮， 凋萎青贮， 添加剂青贮和混合青贮。理想的青贮原料应该具备可溶性糖分多， 低 的缓冲能， 高于20的干物质含量等条件。 然而生产中豆科牧草不具备上述条件， 按常规青 贮方法难以成功， 必须采取诸如田间萎蔫、 精细切短或添加入一些必要的添加剂来满足。 而 且， 通过添。
7、加有益的青贮微生物菌剂对提高青贮稳定性和品质， 改善青贮料菌群结构， 提高 其风味和消化率以及饲喂效益， 效果明显， 作用巨大， 正成为青贮调制必不可少的手段。 0003 在欧美、 日本等发达国家， 牧草青贮实践中经常使用的商品乳酸菌制剂属于特定 的乳酸菌菌种， 并不是对所有牧草种都适用， 常常出现效果不稳定现象。 近年来绿汁发酵液 对改善豆科牧草青贮料的品质效果明显而受到重视， 但由于缺乏严谨的技术和理论支持， 不便于保存和商品化等缺陷， 尚未推广应用。针对目前青贮添加剂种类繁多而效果不一的 现象， 有必要探索和获得促进本地豆科牧草青贮的低成本高效微生物添加剂， 有所针对地 开发牧草青贮添加。
8、剂， 促进豆科饲草青贮技术的提高和农牧民增收致富。 0004 青贮能否成功， 在很大程度上取决于乳酸菌能否迅速而大量地繁殖。促进青贮发 酵的乳酸菌为原料上附着的野生乳酸菌种的繁殖而产生的。 由于原料中附着的在青贮发酵 过程起重要作用的野生乳酸菌数量和种类很少， 严重削弱乳酸菌的青贮发酵效果。针对此 种情况， 本发明从农牧结合区主栽豆科牧草的绿汁发酵液和自然发酵的优质青贮饲料样品 中分离筛选出性状优良的乳酸菌， 通过纯培养及添加处理， 使附着在牧草表面的乳酸菌群 增殖， 提高乳酸菌作为优势菌群的数量， 实现豆科牧草青贮的高效和稳定。 0005 本专利技术就是适应新时期市场对青贮添加剂的需要， 因。
9、地制宜低开发新型豆科 说 明 书 CN 102450525 A 3 2/3 页 4 牧草青贮添加剂， 指导和促进西北地区农牧结合区的牧草青贮生产技术。 发明内容 0006 针对自然发酵的青贮饲料中乳酸菌的种类和菌数都很少的情况， 发明从农牧结合 区 5 种主栽豆科牧草青贮饲料中分离得到多种乳酸菌。对初步入选的菌株进行生理生化特 征分析、 产酸性能、 活菌数及青贮效果比较， 从中筛选出性状优良的乳酸菌菌株进行 DNA 测 序鉴定， 确定其种名， 为制备青贮菌剂奠定基础。 0007 1. 青贮饲料样品及绿汁发酵液制备 0008 取 5 种主栽豆科牧草， 初花期同时刈割、 晾晒至萎蔫状态 ( 水分 。
10、55左右 )， 将 5 种豆科草切成约 1cm 长度按重量等比例混合， 紧密压实装入 1L 塑料瓶密封贮存， 50d 后开 瓶取料， 用于分离乳酸菌。将 5 种初花期豆科草新鲜植株绿色汁液按重量等比例混合， 加糖 后， 在发酵罐中常温下密闭厌氧发酵 2d， 得到绿汁发酵液， 备用。 0009 2. 乳酸菌分离 0010 在无菌室中取混合青贮饲料样品及绿汁发酵液， 用 MRS 液体培养基增菌培养， 生 理盐水稀释， 吸取培养液涂布平板， 然后挑取典型菌落 MRS 琼脂平板划线， 37厌氧培养 48h， 进行革兰氏染色、 镜检。通过对菌体形态、 菌落、 部分生理生化特征及生物学活性的分 析， 凡是。
11、革兰氏阳性的菌株， 继续分离纯化培养， 纯化后的菌株进行斜面保存， 备用。 初步分 离得到 5 株乳酸菌， 进行编号并鉴定。 0011 3. 筛选 0012 根据不同菌株的产酸能力、 产酸速率以及活菌计数来进行比较， 筛选适宜用作青 贮饲料的菌株。 0013 将分离的 5 株乳酸菌分别按 3的接种量转入 MRS 液体培养基中， 37恒温培养。 每隔 2h 测定不同菌株发酵液 pH 值和乳酸菌活菌数， 对 pH 值和乳酸菌活菌数进行比较， 选 出 pH 值降低快和活菌数多的性状优良的菌株 3 株。这些菌株发酵 48h 以上， 能迅速降低 pH 值， 乳酸菌活菌数达到 109CFU/ml。 001。
12、4 用 3 种乳酸菌按 1的接种量转入各青贮原料， 通过感官评定， 营养分析及青贮效 果进行综合评定。与不添加组作对照， 青贮料的颜色、 气味和状态表现俱佳 ； 乳酸含量高， pH 值以下， 丁酸及氨态氮含量极低， 粗蛋白质损失小， 较好保持青贮料的营养品质， 有效提 高了饲草的青贮品质并提高了青贮的稳定性。 0015 4. 鉴定 0016 对 3 株菌进行 DNA 测序， 基因库检索， 确定其为植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)、 戊 糖 乳 杆 菌 (Lactobacillus pentosus) 和 乳 酸 链 球 菌 (Streptococcus lacti。
13、s)。三株菌产酸能力强， 产生的细菌素等代谢产物具有抑菌防腐、 促进营养物质吸收 及提高机体免疫力作用。细菌素可被蛋白酶降解， 不会在机体残留， 安全而稳定， 是一种高 效、 无毒、 安全、 无副作用的天然饲料防腐剂。 0017 5. 使用 0018 植物乳杆菌、 戊糖乳杆菌和乳酸链球菌按 60 20 20的重量百分比混合 组成复合菌剂后， 产酸能力和青贮效果最好。纯培养菌剂用生理盐水稀释 3-5 倍后， 按青贮 原料重的 0.2添加， 可以促进青贮发酵效果， 提高青贮稳定性。 说 明 书 CN 102450525 A 4 3/3 页 5 0019 本发明的有益效果 ： 0020 本发明可以促进豆科牧草青贮发酵效果， 提高青贮稳定性， 改善青贮饲料风味。 本 添加剂改善了青贮料内部菌群结构， 提高了乳酸菌作为优势菌群的数量， 提供了青贮所需 的酸性环境， 抑制了丁酸发酵及其他腐败菌的作用， 防止蛋白质和其它营养物的水解， 较好 保持青贮料的营养品质， 有效提高了饲草的青贮品质， 是一种高效、 无毒、 安全、 无副作用的 理想的青贮添加剂， 对豆科牧草青贮加工调制具有重要指导作用。 说 明 书 CN 102450525 A 5 。