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1、(10)申请公布号 CN 102461481 A (43)申请公布日 2012.05.23 CN 102461481 A *CN102461481A* (21)申请号 201010545972.0 (22)申请日 2010.11.16 A01K 67/033(2006.01) (71)申请人 复旦大学 地址 200433 上海市杨浦区邯郸路 220 号 (72)发明人 杨彬 程训佳 (74)专利代理机构 上海元一成知识产权代理事 务所 ( 普通合伙 ) 31268 代理人 吴桂琴 (54) 发明名称 一种热带无爪螨的长期维持培养方法 (57) 摘要 本发明属生物技术领域， 具体涉及一种热带 无。
2、爪螨的长期维持培养方法。本方法通过毛发针 挑取热带无爪螨后初期小量培养和进行大瓶大量 培养及培养后计数等步骤， 在可控的温度和湿度 下培养热带无爪螨， 达到较好效果。 本方法避免了 传统方法挑取螨类费事、 费时及采用开放式培养 容器易造成污染、 培养物繁殖速度慢， 纯度低的缺 陷 ； 采用的培养基方便易得， 配比合理， 培养物繁 殖速度适中， 适合热带无爪螨的长期培养保种。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在。
3、于， 其包括步骤 ： 1） 初期小量培养， 采用毛发针挑取单头孕螨至盛有培养基的小号玻璃瓶中培养， 保持培养物繁殖速度， 1-2 周后确定增长良好且无杂螨， 转入大瓶大量饲养 ； 所述培养基含有重量配比为 1:1 的酵母粉和动物饲料 ； 2） 大量培养 将动物饲料和酵母粉按质量比 1:1 混合后 140 C 干热烘烤 2 小时， 每天一次， 连续 3 天， 装瓶备用， 大量培养时， 取 50-100 头螨放入含 2-3 克培养基的培养瓶内， 摇匀进行培 养 ； 3） 称重含热带无爪螨的培养基并在解剖镜下检测计数。 2. 按权利要求 1 所述的热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 所述的。
4、毛发针 选自人的头发或睫毛或眉毛或猪鬃， 以棉线固定于竹签制得。 3. 按权利要求 1 所述的热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 所述的动物饲 料磨碎后过 100 目网筛。 4. 按权利要求 1 所述的热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 所述的玻璃培 养瓶采用 Wattman 滤纸封口。 5. 按权利要求 1 所述的热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 所述的培养温 度为 27 C， 湿度为 75。 6. 按权利要求 5 所述的热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 该方法采用饱 和食盐水或雾化器控制培养湿度。 7. 按权利要求 6 所述的热带无爪螨的长期维持。
5、培养方法， 其特征在于， 所述的饱和食 盐水溶液含 0.10.5% 的新洁尔灭。 权 利 要 求 书 CN 102461481 A 2 1/3 页 3 一种热带无爪螨的长期维持培养方法 技术领域 0001 本发明属生物技术领域， 涉及一种热带无爪螨的培养方法， 尤其涉及一种热带无 爪螨的长期维持培养方法。 背景技术 0002 当前， 变应性疾病日趋严重， 尘螨是重要的室内变应原， 在热带和亚热带地区与人 类过敏性疾病关系最密切的是热带五爪螨。 近年来有文献报道热带无爪螨的变应原与户尘 螨和粉尘螨的变应原具有明显的交叉反应性， 研究显示， 对户尘螨和粉尘螨过敏的患者中， 86% 对热带无爪螨皮肤。
6、点刺试验呈阳性反应。作为重要的变应原种类， 热带无爪螨排泄物、 蜕皮物、 分泌物、 虫卵等均可以引起过敏性哮喘、 过敏性鼻炎、 遗传性过敏性皮炎、 荨麻疹等 多种变应性疾病。 0003 研究显示， 热带五爪螨的纯培养为实验室研究螨体或其排泄物的变应原性以及螨 性变应性疾病的疫苗发展提供了物质基础。另外， 目前广泛应用于临床的脱敏治疗所用制 剂亦为稀释的天然抗原。 目前对粉尘螨和户尘螨培养， 各方面条件都比较成熟， 国内亦有相 关文献发表， 但尚未见成功建立起热带无爪螨培养体系的报道。 对于热带无爪螨的培养， 其 温度和湿度的控制与其他尘螨一致， 对不同培养基的选择会有不同的结果。 研究显示， 。
7、一般 的面粉、 米粉不能满足其生长所需条件， 而加入鱼粉、 肝粉、 人皮屑等物后不但成本很高， 而 且热带无爪螨生长速度很快， 3-4 周如不转种， 螨虫在 5-6 周时就死亡殆尽。目前有关热带 无爪螨的长期维持培养条件尚未见报道。 发明内容 0004 本发明的目的是克服现有技术的缺陷， 提供一种热带无爪螨的培养方法， 尤其涉 及一种热带无爪螨的长期维持培养方法。 0005 本方法通过毛发针挑取热带无爪螨后初期小量培养和进行大瓶大量培养及培养 后计数等， 尤其是选用的培养基方便易得， 配比合理， 在可控的温度和湿度下， 对热带无爪 螨进行培养， 能达到较好效果。 0006 具体而言， 本发明的。
8、热带无爪螨的长期维持培养方法， 其特征在于， 其包括步骤 ： 1、 初期小量培养， 传统方法挑取螨类， 一般采用解剖针。但由于解剖针为钢性材质， 螨类爬上以后， 不易 使其落下， 易造成时间浪费 ； 本发明中， 采用毛发针从保存的热带无爪螨中挑取单头孕螨至盛有 2mm 左右培养基的 小号玻璃瓶 ( 底面积 4cm2左右， 高度 1cm 左右 ) 中培养， 保持培养物繁殖速度适中， 1-2 周 后确定增长良好且无杂螨， 可转入大瓶大量饲养 ； 本发明中， 所述的毛发针选自人的头发或睫毛或眉毛或猪鬃， 以棉线固定于竹签。 0007 本发明中， 所述培养基含下述重量配比的组分 : 酵母粉 （日本和光。
9、纯药工业株式 会社 / 国产） : 动物饲料 （市售实验室动物饲料） 为 1:1， 动物饲料磨碎后过 100 目网筛。 说 明 书 CN 102461481 A 3 2/3 页 4 0008 2、 大量培养 将动物饲料和酵母粉按质量比 1:1 混合后 140 C 干热烘烤 2 小时， 每天一次， 连续 3 天， 装瓶备用， 大量培养时， 取 50-100 头螨放入含 2-3 克培养基的培养瓶内， 充分摇匀进行 培养。 0009 本发明的一个实施例中， 小量培养1-2周后确定增长良好， 挑取100头热带无爪螨 转入 2.5g 培养基， 连续培养 6 个月 （每 0.01 克培养基内含 40-80。
10、 头热带无爪螨） 与培养 1 个月后虫体密度近似 （每 0.01 克培养基内含 50-100 头左右热带无爪螨） 。 0010 3、 称重少许含热带无爪螨的培养基并在解剖镜下检测计数。 0011 现有技术中， 一般多采用开放式培养容器培养螨类， 虽然培养过程培养容器加盖， 但需隔两三天取出透气， 还是较难避免杂螨或其它昆虫进入培养系统， 造成污染 ； 或有采用 棉花、 纸塞塞堵瓶口， 该方式虽可以保证空气的进出， 但由于孔隙大小较难控制， 仍然难以 杜绝螨类进出。 0012 本发明中， 选用玻璃材质培养瓶， 瓶口光滑， 高度大于 1cm ； 底面积 4cm2， Wattman 3MM 滤纸封口。
11、， 利于湿热消毒和易镜下观察。 0013 本发明中， 采用培养温度为 27 C， 湿度为 75。 0014 本发明中， 采用饱和食盐水或雾化器控制培养湿度， 所述饱和食盐水溶液含 0.10.5% 的新洁尔灭 （苯扎溴铵） ， 能防止培养系统内霉菌生长。 0015 本发明方法与现有技术比较， 具有如下优点 ： （1） 避免了传统方法挑取螨类费事、 费时及采用开放式培养容器易造成污染、 培养物繁 殖速度慢， 纯度低的缺陷 ； （2） 采用的培养基方便易得， 配比合理， 培养物繁殖速度适中， 适合热带无爪螨的长期 培养保种。 0016 为了便于理解， 以下将通过具体的实施例对本发明的热带无爪螨的长期。
12、维持培养 方法进行详细地描述。 需要特别指出的是， 具体实例仅是为了说明， 显然本领域的普通技术 人员可以根据本文说明， 在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变， 这些修 正和改变也纳入本发明的范围内。 具体实施方式 0017 实施例 1 采用人头发以棉线固定于竹签制成毛发针， 用毛发针挑取一头保存的热带无爪螨孕螨 至盛有 2mm 左右培养基的小号玻璃瓶中培养， 所述玻璃瓶底面积 4cm2， 高度 1cm， 1-2 周后 确定增长良好且无杂螨， 转入大瓶大量饲养， 所述培养瓶选用玻璃材质， 瓶口光滑， Wattman 3MM 滤纸封口。培养温度为 27 C， 有利于湿热消毒和易镜下观。
13、察。 0018 所述培养基含 : 酵母粉 （日本和光纯药工业株式会社 / 国产） 和实验室动物饲料 （市售） ， 动物饲料磨碎后过 100 目网筛。 0019 使用前， 将动物饲料和酵母粉按质量比 1:1 混合后 140 C 干热烘烤 2 小时， 每天 一次， 连续3天， 装瓶备用 ； 大量培养时， 取50-100头螨放入含2-3克培养基的培养瓶内， 充 分摇匀进行培养。 0020 本方法中， 采用饱和食盐水控制培养湿度在 75， 溶液含 0.1 0.5% 的新洁尔灭 说 明 书 CN 102461481 A 4 3/3 页 5 （苯扎溴铵） ， 能防止培养系统内霉菌生长。 0021 本方法中。
14、， 保持培养物繁殖速度适中， 小量培养 1-2 周后确定增长良好， 挑取 100 只热带无爪螨转入 2.5g 培养基， 4 周后检测计数， 结果显示， 每 0.01 克培养基中含 50-100 头左右热带无爪螨 ； 24 周后再次检测计数， 每 0.01 克培养基内含 40-80 头左右热带无爪 螨， 虫体密度近似， 活力无减弱。 0022 实施例 2 采用猪鬃以棉线固定于竹签制成毛发针， 用制得的毛发针挑取一头保存的热带无爪螨 孕螨至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶中培养， 所述玻璃瓶底面积4cm2， 高度1cm， 1-2周 后确定增长良好且无杂螨， 转入大瓶大量饲养。 0023 所述培养基。
15、含酵母粉 （日本和光纯药工业株式会社 / 国产） 和实验室动物饲料 （市 售） ， 动物饲料磨碎后过 100 目网筛。 0024 使用前， 将动物饲料和酵母粉按质量比 1:1 混合后 140 C 干热烘烤 2 小时， 每天 一次， 连续 3 天， 装瓶备用。大量培养时， 取 50-100 头螨放入含 2-3 克培养基的培养瓶内， 充分摇匀进行培养即可。 0025 为利于湿热消毒和易镜下观察， 本方法所述培养瓶选用玻璃材质， 瓶口光滑， Wattman 3MM 滤纸封口。培养温度为 27 C。 0026 采用雾化器控制湿度在 75。 0027 培养物繁殖速度适中， 小量培养1-2周后确定增长良好， 挑取100只热带无爪螨转 入 2.5g 培养基， 4 周后检测计数， 结果显示每 0.01 克培养基中含 50-100 头左右热带无爪 螨 ； 24 周后再次检测计数， 结果显示， 每 0.01 克培养基内含 40-80 头左右热带无爪螨， 虫体 密度近似， 活力无减弱。 说 明 书 CN 102461481 A 5 。