一种Γ分泌酶抑制剂及其用途.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201210347565.8

申请日:

2012.09.07

公开号:

CN103664904A

公开日:

2014.03.26

当前法律状态:

撤回

有效性:

无权

法律详情:

发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07D 403/12申请公布日:20140326|||公开

IPC分类号:

C07D403/12; A61K31/55; A61P35/00; A61P25/28

主分类号:

C07D403/12

申请人:

李振; 王丽梅

发明人:

王丽梅; 李振

地址:

215125 江苏省苏州市工业园区娄葑镇淞泽家园二区31幢302室

优先权:

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

本发明涉及如式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、旋光纯的对映体、外消旋体、前药或衍生物:其中,R1为H,或者CH3;R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;芳香基、取代芳香基;R3,R4为H,卤素,C1-3烷基。

权利要求书

权利要求书
1.  如下通式的化合物或其药学上可接受的盐、旋光纯的对映体、外消旋体、前药或衍生物:

其中
R1为H,或者CH3;
R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;芳香基、取代芳香基。
R3,R4为H,卤素,C1-3烷基;

2.  根据权利要求1所述的化合物,其中R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,R’,R”任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;或为苯基、取代苯基。

3.  根据权利要求1所述的化合物,其中R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,R’,R”任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;或为苯基、卤素取代苯基。

4.  根据权利要求3所述的化合物,其中该化合物为:


5.  一种药物组合物,其包含权利要求1-4中任一所述的化合物以及可药用载体、稀释剂或赋形剂。

6.  权利要求1-4中任一所述化合物或权利要求5所述药物组合物在制备γ分泌酶参与的疾病的预防、治疗药物中的用途。

7.  权利要求1-4中任一项化合物或权利要求5所述药物组合物在制备治疗肿瘤和阿尔茨海默病的药物中的用途。

说明书

说明书一种γ-分泌酶抑制剂及其用途
技术领域
本发明涉及化合物,是γ分泌酶的抑制剂并且其用于治疗或预防与γ分泌酶有关的疾病如肿瘤。
背景技术
癌症是世界上死亡率最高的疾病之一。对于大部分肿瘤,仍然存在与极差的预后相关的高复发率和转移率。目前可用的药物包括细胞毒性化学治疗、抗血管生成剂和靶向药物。由于治疗过程中出现的耐药性和毒性(例如,血液学毒性、肝脏毒性、肾脏毒性、和神经毒性),使用大部分目前可用的抗癌药物获得的临床益处是有限的。
癌症是一种以不可控的增殖为特征的疾病。在对驱动癌症的信号通路深入研究的过程中,人们发现肿瘤中存在一群具有干细胞特征的细胞,这些细胞不断分化成具有增殖特性的bulk细胞。其中影响干细胞的通路之一为Notch途径。
最早认为,Notch信号通路的功能是维持细胞的未分化状态,使细胞对诱导分化信息的反应变得容易,研究证明它能够抑制T细胞等血细胞的分化。进一步的研究表明Notch信号通路的功能远不止这些,Notch信号通路通过调控细胞的分化、增殖和凋亡从而影响正常组织和细胞生长、发育和疾病发生的很多关键环节,不同种类细胞中的Notch通路能阻止或促进细胞的分化,并且在肿瘤干细胞向肿瘤发展的过程中也发挥重要作用,如van Es等发现在肠道中Notch通路被激活后肿瘤干细胞活性才能增加并形成肠道肿瘤[Nat Commun.2010 May17;1(2)∶1-5]。据文献(Ce11,1991,66∶649-661)报道Notch是通过Akt,P38,STAT3等基本信号通路调节干细胞增殖的。Notch和肿瘤的关系最先是在T细胞白血病中发现的:由点突变或者染色体易位t(7;9)(q34∶q34.3)引起的T细胞白血病中,Notch通路都是持续活化的[Trends Mol Med.2004Dec;10(12)∶591-8]。随后的研究表明,许多肿瘤都与Notch信号通路活性的改变有关。
Notch的活化需要经过两步蛋白酶水解过程剪切全长的Notch受体,从而释放出Notch的胞内段结构域NICD。介导这一过程的蛋白酶之一为γ-分泌酶。γ-分泌酶抑制剂可阻断由γ-分泌酶介导的Notch受体酶切过程,使Notch受体分子无法转变成有效的活性片段,从而抑制Notch信号通路的激活,阻止Notch的活化。γ-分泌酶是抗肿瘤药物开发的一个重要靶点。
因此,医学上非常需要更好的γ-分泌酶抑制剂,从而进一步改善肿瘤患者的治疗现状。
发明内容
本发明提供如下通式的化合物或其药学上可接受的盐、旋光纯的对映体、外消旋体、前药或衍生物、使用这种化合物的方法和包含这种化合物及其盐的药物组合物。

其中
R1为H,或者CH3;
R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;芳香基、取代芳香基;
R3,R4为H,卤素,C1-3烷基;
优选化合物为那些化合物,式I化合物,其中R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,R’,R”任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;或为苯基、取代苯基;
优选化合物为那些化合物,式I化合物,其中R2为C1-3烷基、-(CR’R”)n-CF3、-(CR’R”)n-CHF2、-(CR’R”)n-CH2F、或为-(CH2)n-卤素,n=0-2,R’,R”任选被一个或多个选自卤素或CF3的取代基取代;或为苯基、卤素取代苯基;
优选化合物为那些化合物,例如下列化合物:

在另一些实施方案中,本发明涉及式(I)的任一化合物和可药用载体、稀释剂或赋形剂。
在另一些实施方案中,通过向有患病风险或已患病的对象施用式(I)任一项化合物或其药物组合物在制备γ分泌酶参与的疾病的预防、治疗中的使用。
在另一个实施方案中,提供式(I)的任一化合物或其药物组合物用于治疗肿瘤和阿尔茨海默病的药物中的用途。
定义
本文中使用的术语“卤”和“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。
文中定义的术语“卤烷基”表示具有一个、两个或三个与其连接的卤原子的烷基,这种基团例如氯甲基、溴乙基、三氟甲基等。
附图说明
附图1实施例化合物1-5抑制MCF-7细胞NICD表达情况
附图2实施例化合物抑制HCT-116小鼠异位移植瘤作用
具体实施方式
实施方案

关键中间体:

其中A,B,C直接购买,D由C在氢氧化钠水-甲醇溶液水解获得。
实施例1
1-(二氟甲基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
向50mL单口瓶中加入中间体D1.29g,1.57g溴氟甲烷,2.01g三乙胺,加入10ml二氯甲烷搅拌溶解,室温搅拌过夜,抽滤除去黄色沉淀,水洗,硫酸镁干燥有机相,柱色谱纯化的化合物1.28g化合物1-A.收率80%。
将1.25g化合物B置于50mL单口瓶中,加入10mL溶解,加入1.20g化合物1-A,2.06g二环己基碳二亚胺,0.73g1-羟基苯并三唑,室温搅拌3h,抽滤除去类白色粉末,浓缩滤液,柱色谱纯化,EA∶PE=3∶1,得到类白色固体;
H-NMR:3.670(3H,s),7.2-7.9(8H,ddd),2.251(1H,m),2.122(1H,m,),3.396(1H,ddd),3.349(1H,ddd),6.604(1H,s),4.079(1H,dd),5.927(1H,s)
MS+1:400.14.
实施例2
1-(三氟甲基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氮杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由溴代三氟甲烷替代溴氟甲烷,制备纯化后得标题所示化合物。
H-NMR:7.2-7.9(8H,ddd),5.890(1H,s),4.097(1H,dd),3.670(3H),3.431(1H,ddd),3.391(1H,ddd),2.259(1H,m),2.164(1H,m),
MS+1:418.38
实施例3
1-(五氟乙基)-N-[(10S)-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由A替代B,由1-溴1,1,2,2,2-五氟乙烷替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
[H-NMR:7.2-8.0(8H,ddd),5.985(1H,s),4.067(1H,dd),3.365(1h,ddd),3.305(1h,ddd),2.255(1H,m),2.162(1H,m)
MS+1:454.11
实施例4
1-(三氟甲基甲基)-N-[(10S)-9-氧代-8-氮杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由A替代B,由1-溴2,2,2-三氟乙烷替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.2-8.0(8H,ddd),5.984(1H,s),4.066(1H,dd),3.625(2H,s),3.204 (1H,ddd),3.263(1H,ddd),2.215(1H,m),2.160(1H,m)
MS+1:418.13
实施例5
1-(五氟乙基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由1-溴-1,1,2,2,2-五氟乙烷替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:3.671(3H,s),7.21-7.98(8H,ddd),2.256(1H,m),2.163(1H,m),3.305(1H,ddd),3.365(1H,ddd),4.088(1H,dd),5.929(1H,s)
MS+1:468.13
实施例6
1-苯基-N-[(10S)-9-氧代-8-氮杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由A替代B,由溴苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:6.7-8.2(13H,m),2.20-2.23(2H,m),3.46(1H,ddd),3.65(1H,ddd),3.54(1H,dd),3.62(1H,dd),5.14(1H,dd),4.07(1H,dd)
MS+1:412.16
实施例7
1-(四氟苯基)-N-[(10S)-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由A替代B,由对溴氟苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.0-8.0(12H,m),2.17-2.21(2H,m),3.47(1H,ddd),3.66(1H,ddd),5.99(1H,s),4.08(1H,dd)
MS+1:430.15
实施例8
1-(2,4-二氟苯基)-N-[(10S)-9-氧代-8-氮杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由A替代B,由1-溴-2,4-二氟苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:6.8-8.1(11H,m),2.17-2.24(2H,m),3.47(1H,ddd),3.66(1H,ddd),5.99(1H,s),4.07(1H,dd)
MS+1:448.14
实施例9
1-(3,4-二氨苯基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由1-溴-3,4-二氟苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.2-8.0(11H,m),2.19-2.21(2H,m),3.47(1H,ddd),3.66(4H),5.93(1H,s),4.08(1H,dd)
MS+1:462.16
实施例10
1-(4-三氟甲基苯基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由1-溴-4-(三氟甲基)苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.26-8.0(12H,m),2.19-2.22(2H,m),3.50(1H,ddd),3.66(1H,ddd),5.93(1H,s),4.08(1H,dd),3.672(3H,s)
MS+1:494.16
实施例11
1-(4-三氟甲基-2-氟苯基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由1-溴-2-氟-4-(三氟甲基)苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.22-8.0(11H,m),2.19-2.21(2H,m),3.50(1H,ddd),3.66(1H,ddd),5.92(1H,s),4.08(1H,dd),3.67(3H,s)
MS+1:512.15
实施例12
1-(2,4,5-三氟苯基)-N-[(10S)-8-甲基-9-氧代-8-氨杂三环[9.4.0.0[2,7]]十五-1(11),2(7),3,5,12,14-六烯-10-基]-2-氧代吡咯-3-碳酰胺
实验操作流程同实施例1,由2,4,5-三氟溴苯替代溴氟甲烷,制备纯化得标题所示化合物。
H-NMR:7.21-7.98(10H,m),2.19-2.24(2H,m),3.48(1H,ddd),3.66(1H,ddd),5.93(1H,s),4.10(1H,dd),3.66(3H,s)
MS+1:480.15
测试实施例--生物活性
本发明化合物是gamma-secretase抑制剂,通过降低细胞内NCID的含量,抑制Notch信号通路,发挥抗肿瘤作用。肿瘤细胞NCID表达量可用作Gamma secretase抑制活性的标志物,选择R04929097作为阳性对照(委托江西科技大学药学院合成,批号:1106013)。同时,研究了此类化合物在小鼠异位移植瘤模型(HCT-116)中的抗肿瘤作用。
实施例13
Western blot方法检测化合物对MCF-7细胞NICD表达量的影响MCF-7细胞(ATCC)用DMED培养基(10%胎牛血清,2mM L-glutamine,100Uml-1青霉素,0.1mgml-1链霉素),胰酶消化细胞后,用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔20000个细胞接种到6孔板,每孔体积2mll。同一般培养条件,培养24h后,每孔加10uM化合物(溶于DMS0中),继续孵育24小时,终止培养.小心吸弃孔内培养上清液,细胞经预冷的PBS漂洗3次,加入450μl裂解液,细胞刮刀收集,用移液器转移至离心管中,反复吹打。以上所得的样品置100℃水浴箱里水浴加热10分钟,10000g离心10分钟,取出清液,将其移入另一洁净试管中,10%SDS-聚丙烯酰胺跑电用。Notch 1 intracellular domain的抗体(Abcam生产)和beta-actin(CST生产)抗体检测相应蛋白表达量。结果如表1所示,所测化合物均可不 同程度抑制MCF-7细胞中Gamma secretase的剪切底物的产生,其中化合物3、4、9、10具有比阳性药物更好的抑制活性。
表1.化合物抑制MCF-7细胞NICD表达情况
 实施例  抑制NCID表达  实施例  抑制NCID表达 R04929097  ++  8  ++ 1  +  9  +++ 2  ++  10  +++ 3  +++  11  +++ 4  +++  12  ++ 5  ++ 6  + 7  ++
注:化合物测试的浓度为10uM
“+++”表示抑制率>80%;“++”表示抑制率>50%,<80%;
“+”表示抑制率<50%;“-”表示无抑制作用;
实施例14
裸小鼠HCT-116移植瘤模型评价实验动物为近交系Balb/c Nude小鼠60只,雄性,6-8周龄,体重19-21g,由上海SLAC提供,HCT-116细胞购自中国科学院上海细胞库提供,培养于含10%胎牛血清及双抗(青霉素100IU/mL,链霉素100IU/mL)的DMEM(Gibco公司产品)完全培养液中。取对数生长期的HCT-116细胞,胰酶消化后调节细胞浓度为5×106/m l细胞悬液备用(台盼蓝拒染法测定活细胞数大于95%)。将制备好的HCT-116单细胞悬液接种于小鼠于左侧皮下,每只0.2m l(2.5×107/mL)。接种14d后,挑选肿瘤体积200-350mm3随机分5组,每组10只。Vehicle,R04929094(剂量10mpk),Compound3(剂量30mpk),4(剂量30mpk),9(剂量30mpk),口服给药,每日一次,连续给药28天。按以下公式计算肿瘤体积:肿瘤体积=a×b2/2。第21天断颈处死全部小鼠,解剖小鼠取出肿瘤,去除脂肪纤维组织,称重,计算抑瘤率(IR)=(1-治疗组瘤重/对照组瘤重)×100%。结果如表2和附图2所示,实施例化合物3、4、9均可显著抑制HCT-116裸小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为65.3%,46.3%,40.5%,且动物状态良好,无明显毒副作用。
表2.实施例化合物对HCT-116小鼠异位移植瘤模型的抑制作用

*,P<0.05;**,P<0.01

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1、(10)申请公布号 CN 103664904 A (43)申请公布日 2014.03.26 CN 103664904 A (21)申请号 201210347565.8 (22)申请日 2012.09.07 C07D 403/12(2006.01) A61K 31/55(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (71)申请人 李振 地址 215125 江苏省苏州市工业园区娄葑镇 淞泽家园二区 31 幢 302 室 申请人 王丽梅 (72)发明人 王丽梅 李振 (54) 发明名称 一种 - 分泌酶抑制剂及其用途 (57) 摘要 本发明涉及如。

2、式 (I) 的化合物或其药学上 可接受的盐、 旋光纯的对映体、 外消旋体、 前药或 衍生物 : 其中, R1为 H, 或者 CH3; R2为 C1-3 烷基 、 -(CR R” )n-CF3、 -(CR R” )n-CHF2、 -(CR R” ) n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤素, n 0-2, 任选被一 个或多个选自卤素或 CF3的取代基取代 ; 芳香 基、 取代芳香基 ; R3, R4为 H, 卤素, C1-3 烷基。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书8页。

3、 附图1页 (10)申请公布号 CN 103664904 A CN 103664904 A 1/2 页 2 1. 如下通式的化合物或其药学上可接受的盐、 旋光纯的对映体、 外消旋体、 前药或衍生 物 : 其中 R1为 H, 或者 CH3; R2为 C1-3 烷基、 -(CR R” )n-CF3、 -(CR R” )n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤 素, n 0-2, 任选被一个或多个选自卤素或 CF3的取代基取代 ; 芳香基、 取代芳香基。 R3, R4为 H, 卤素, C1-3 烷基 ; 2. 根据权利要求 1 所述的化合物, 其中 R2为 C1-。

4、3 烷基、 -(CR R” )n-CF3、 -(CR R” ) n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤素, n 0-2, R , R” 任选被一个或多个选自卤素 或 CF3的取代基取代 ; 或为苯基、 取代苯基。 3. 根据权利要求 1 所述的化合物, 其中 R2为 C1-3 烷基、 -(CR R” )n-CF3、 -(CR R” ) n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤素, n 0-2, R , R” 任选被一个或多个选自卤素 或 CF3的取代基取代 ; 或为苯基、 卤素取代苯基。 4. 根据权利要求 3 所述的化。

5、合物, 其中该化合物为 : 权 利 要 求 书 CN 103664904 A 2 2/2 页 3 5. 一种药物组合物, 其包含权利要求 1-4 中任一所述的化合物以及可药用载体、 稀释 剂或赋形剂。 6. 权利要求 1-4 中任一所述化合物或权利要求 5 所述药物组合物在制备 分泌酶参 与的疾病的预防、 治疗药物中的用途。 7.权利要求1-4中任一项化合物或权利要求5所述药物组合物在制备治疗肿瘤和阿尔 茨海默病的药物中的用途。 权 利 要 求 书 CN 103664904 A 3 1/8 页 4 一种 - 分泌酶抑制剂及其用途 技术领域 0001 本发明涉及化合物, 是 分泌酶的抑制剂并且其。

6、用于治疗或预防与 分泌酶有 关的疾病如肿瘤。 背景技术 0002 癌症是世界上死亡率最高的疾病之一。对于大部分肿瘤, 仍然存在与极差的预后 相关的高复发率和转移率。目前可用的药物包括细胞毒性化学治疗、 抗血管生成剂和靶向 药物。由于治疗过程中出现的耐药性和毒性 ( 例如, 血液学毒性、 肝脏毒性、 肾脏毒性、 和神 经毒性 ), 使用大部分目前可用的抗癌药物获得的临床益处是有限的。 0003 癌症是一种以不可控的增殖为特征的疾病。 在对驱动癌症的信号通路深入研究的 过程中, 人们发现肿瘤中存在一群具有干细胞特征的细胞, 这些细胞不断分化成具有增殖 特性的 bulk 细胞。其中影响干细胞的通路之。

7、一为 Notch 途径。 0004 最早认为, Notch 信号通路的功能是维持细胞的未分化状态, 使细胞对诱导分化信 息的反应变得容易, 研究证明它能够抑制T细胞等血细胞的分化。 进一步的研究表明Notch 信号通路的功能远不止这些, Notch 信号通路通过调控细胞的分化、 增殖和凋亡从而影响 正常组织和细胞生长、 发育和疾病发生的很多关键环节, 不同种类细胞中的 Notch 通路能 阻止或促进细胞的分化, 并且在肿瘤干细胞向肿瘤发展的过程中也发挥重要作用, 如 van Es 等发现在肠道中 Notch 通路被激活后肿瘤干细胞活性才能增加并形成肠道肿瘤 Nat Commun.2010 Ma。

8、y17 ; 1(2) 1-5。据文献 (Ce11, 1991, 66 649-661) 报道 Notch 是通过 Akt, P38, STAT3 等基本信号通路调节干细胞增殖的。Notch 和肿瘤的关系最先是在 T 细胞 白血病中发现的 : 由点突变或者染色体易位t(7 ; 9)(q34q34.3)引起的T细胞白血病中, Notch 通路都是持续活化的 Trends Mol Med.2004Dec ; 10(12) 591-8。随后的研究表 明, 许多肿瘤都与 Notch 信号通路活性的改变有关。 0005 Notch 的活化需要经过两步蛋白酶水解过程剪切全长的 Notch 受体, 从而释放出。

9、 Notch 的胞内段结构域 NICD。介导这一过程的蛋白酶之一为 - 分泌酶。- 分泌酶抑制 剂可阻断由 - 分泌酶介导的 Notch 受体酶切过程, 使 Notch 受体分子无法转变成有效的 活性片段, 从而抑制 Notch 信号通路的激活, 阻止 Notch 的活化。- 分泌酶是抗肿瘤药物 开发的一个重要靶点。 0006 因此, 医学上非常需要更好的 - 分泌酶抑制剂, 从而进一步改善肿瘤患者的治 疗现状。 发明内容 0007 本发明提供如下通式的化合物或其药学上可接受的盐、 旋光纯的对映体、 外消旋 体、 前药或衍生物、 使用这种化合物的方法和包含这种化合物及其盐的药物组合物。 000。

10、8 说 明 书 CN 103664904 A 4 2/8 页 5 0009 其中 0010 R1为 H, 或者 CH3; 0011 R2为 C1-3 烷基、 -(CR R” )n-CF3、 -(CR R” )n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2) n- 卤素, n 0-2, 任选被一个或多个选自卤素或 CF3的取代基取代 ; 芳香基、 取代芳香基 ; 0012 R3, R4为 H, 卤素, C1-3 烷基 ; 0013 优 选 化 合 物 为 那 些 化 合 物, 式 I 化 合 物, 其 中 R2为 C1-3 烷 基、 -(CR R” ) n-CF3、 -(CR。

11、 R” )n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤素, n 0-2, R , R” 任选被一 个或多个选自卤素或 CF3的取代基取代 ; 或为苯基、 取代苯基 ; 0014 优 选 化 合 物 为 那 些 化 合 物, 式 I 化 合 物, 其 中 R2为 C1-3 烷 基、 -(CR R” ) n-CF3、 -(CR R” )n-CHF2、 -(CR R” )n-CH2F、 或为 -(CH2)n- 卤素, n 0-2, R , R” 任选被一 个或多个选自卤素或 CF3的取代基取代 ; 或为苯基、 卤素取代苯基 ; 0015 优选化合物为那些化合物, 例如。

12、下列化合物 : 0016 说 明 书 CN 103664904 A 5 3/8 页 6 0017 在另一些实施方案中, 本发明涉及式 (I) 的任一化合物和可药用载体、 稀释剂或 赋形剂。 0018 在另一些实施方案中, 通过向有患病风险或已患病的对象施用式 (I) 任一项化合 物或其药物组合物在制备 分泌酶参与的疾病的预防、 治疗中的使用。 0019 在另一个实施方案中, 提供式 (I) 的任一化合物或其药物组合物用于治疗肿瘤和 阿尔茨海默病的药物中的用途。 0020 定义 0021 本文中使用的术语 “卤” 和 “卤素” 是指选自氟、 氯、 溴和碘的原子。 0022 文中定义的术语 “卤烷。

13、基” 表示具有一个、 两个或三个与其连接的卤原子的烷基, 这种基团例如氯甲基、 溴乙基、 三氟甲基等。 附图说明 0023 附图 1 实施例化合物 1-5 抑制 MCF-7 细胞 NICD 表达情况 0024 附图 2 实施例化合物抑制 HCT-116 小鼠异位移植瘤作用 说 明 书 CN 103664904 A 6 4/8 页 7 具体实施方式 0025 实施方案 0026 0027 关键中间体 : 0028 0029 其中 A, B, C 直接购买, D 由 C 在氢氧化钠水 - 甲醇溶液水解获得。 0030 实施例 1 0031 1-( 二 氟 甲 基 )-N-(10S)-8- 甲 基 。

14、-9- 氧 代 -8- 氨 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0032 向50mL单口瓶中加入中间体D1.29g, 1.57g溴氟甲烷, 2.01g三乙胺, 加入10ml二 氯甲烷搅拌溶解, 室温搅拌过夜, 抽滤除去黄色沉淀, 水洗, 硫酸镁干燥有机相, 柱色谱纯化 的化合物 1.28g 化合物 1-A. 收率 80。 0033 将 1.25g 化合物 B 置于 50mL 单口瓶中, 加入 10mL 溶解, 加入 1.20g 化合物 1-A, 2.06g 二环己基碳二亚胺, 0。

15、.73g1- 羟基苯并三唑, 室温搅拌 3h, 抽滤除去类白色粉末, 浓缩 滤液, 柱色谱纯化, EA PE 3 1, 得到类白色固体 ; 0034 H-NMR : 3.670(3H, s), 7.2-7.9(8H, ddd), 2.251(1H, m), 2.122(1H, m, ), 3.396(1H, ddd), 3.349(1H, ddd), 6.604(1H, s), 4.079(1H, dd), 5.927(1H, s) 0035 MS+1 : 400.14. 0036 实施例 2 说 明 书 CN 103664904 A 7 5/8 页 8 0037 1-( 三 氟 甲 基 )-。

16、N-(10S)-8- 甲 基 -9- 氧 代 -8- 氮 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0038 实验操作流程同实施例 1, 由溴代三氟甲烷替代溴氟甲烷, 制备纯化后得标题所示 化合物。 0039 H-NMR : 7.2-7.9(8H, ddd), 5.890(1H, s), 4.097(1H, dd), 3.670(3H), 3.431(1H, ddd), 3.391(1H, ddd), 2.259(1H, m), 2.164(1H, m), 0040 MS+1 : 41。

17、8.38 0041 实施例 3 0042 1-( 五氟乙基 )-N-(10S)-9- 氧代 -8- 氨杂三环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0043 实验操作流程同实施例 1, 由 A 替代 B, 由 1- 溴 1, 1, 2, 2, 2- 五氟乙烷替代溴氟甲 烷, 制备纯化得标题所示化合物。 0044 H-NMR : 7.2-8.0(8H, ddd), 5.985(1H, s), 4.067(1H, dd), 3.365(1h, ddd), 3.305(1h, ddd), 2.255。

18、(1H, m), 2.162(1H, m) 0045 MS+1 : 454.11 0046 实施例 4 0047 1-( 三 氟 甲 基 甲 基 )-N-(10S)-9- 氧 代 -8- 氮 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0048 实验操作流程同实施例 1, 由 A 替代 B, 由 1- 溴 2, 2, 2- 三氟乙烷替代溴氟甲烷, 制 备纯化得标题所示化合物。 0049 H-NMR : 7.2-8.0(8H, ddd), 5.984(1H, s), 4.066(1H, d。

19、d), 3.625(2H, s), 3.204(1H, ddd), 3.263(1H, ddd), 2.215(1H, m), 2.160(1H, m) 0050 MS+1 : 418.13 0051 实施例 5 0052 1-( 五 氟 乙 基 )-N-(10S)-8- 甲 基 -9- 氧 代 -8- 氨 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0053 实验操作流程同实施例1, 由1-溴-1, 1, 2, 2, 2-五氟乙烷替代溴氟甲烷, 制备纯化 得标题所示化合物。 0054 。

20、H-NMR : 3.671(3H, s), 7.21-7.98(8H, ddd), 2.256(1H, m), 2.163(1H, m), 3.305(1H, ddd), 3.365(1H, ddd), 4.088(1H, dd), 5.929(1H, s) 0055 MS+1 : 468.13 0056 实施例 6 0057 1- 苯基 -N-(10S)-9- 氧代 -8- 氮杂三环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0058 实验操作流程同实施例1, 由A替代B, 由溴苯替代溴氟甲烷,。

21、 制备纯化得标题所示 化合物。 0059 H-NMR : 6.7-8.2(13H, m), 2.20-2.23(2H, m), 3.46(1H, ddd), 3.65(1H, ddd), 3.54(1H, dd), 3.62(1H, dd), 5.14(1H, dd), 4.07(1H, dd) 0060 MS+1 : 412.16 说 明 书 CN 103664904 A 8 6/8 页 9 0061 实施例 7 0062 1-( 四氟苯基 )-N-(10S)-9- 氧代 -8- 氨杂三环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 。

22、基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0063 实验操作流程同实施例1, 由A替代B, 由对溴氟苯替代溴氟甲烷, 制备纯化得标题 所示化合物。 0064 H-NMR : 7.0-8.0(12H, m), 2.17-2.21(2H, m), 3.47(1H, ddd), 3.66(1H, ddd), 5.99(1H, s), 4.08(1H, dd) 0065 MS+1 : 430.15 0066 实施例 8 0067 1-(2, 4- 二 氟 苯 基 )-N-(10S)-9- 氧 代 -8- 氮 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 。

23、六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0068 实验操作流程同实施例 1, 由 A 替代 B, 由 1- 溴 -2, 4- 二氟苯替代溴氟甲烷, 制备 纯化得标题所示化合物。 0069 H-NMR : 6.8-8.1(11H, m), 2.17-2.24(2H, m), 3.47(1H, ddd), 3.66(1H, ddd), 5.99(1H, s), 4.07(1H, dd) 0070 MS+1 : 448.14 0071 实施例 9 0072 1-(3, 4- 二氨苯基 )-N-(10S)-8- 甲基 -9- 氧代 -8- 氨杂三环 9.4.0.02, 7 十五 -1(1。

24、1), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0073 实验操作流程同实施例1, 由1-溴-3, 4-二氟苯替代溴氟甲烷, 制备纯化得标题所 示化合物。 0074 H-NMR : 7.2-8.0(11H, m), 2.19-2.21(2H, m), 3.47(1H, ddd), 3.66(4H), 5.93(1H, s), 4.08(1H, dd) 0075 MS+1 : 462.16 0076 实施例 10 0077 1-(4- 三氟甲基苯基 )-N-(10S)-8- 甲基 -9- 氧代 -8- 氨杂三环 9.4.0.02, 7 十五 。

25、-1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0078 实验操作流程同实施例 1, 由 1- 溴 -4-( 三氟甲基 ) 苯替代溴氟甲烷, 制备纯化得 标题所示化合物。 0079 H-NMR : 7.26-8.0(12H, m), 2.19-2.22(2H, m), 3.50(1H, ddd), 3.66(1H, ddd), 5.93(1H, s), 4.08(1H, dd), 3.672(3H, s) 0080 MS+1 : 494.16 0081 实施例 11 0082 1-(4- 三 氟 甲 基 -2- 氟 苯 基 )-N-。

26、(10S)-8- 甲 基 -9- 氧 代 -8- 氨 杂 三 环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0083 实验操作流程同实施例 1, 由 1- 溴 -2- 氟 -4-( 三氟甲基 ) 苯替代溴氟甲烷, 制备 纯化得标题所示化合物。 0084 H-NMR : 7.22-8.0(11H, m), 2.19-2.21(2H, m), 3.50(1H, ddd), 3.66(1H, ddd), 5.92(1H, s), 4.08(1H, dd), 3.67(3H, s) 说 明 书 CN 10。

27、3664904 A 9 7/8 页 10 0085 MS+1 : 512.15 0086 实施例 12 0087 1-(2, 4, 5- 三氟苯基 )-N-(10S)-8- 甲基 -9- 氧代 -8- 氨杂三环 9.4.0.02, 7 十五 -1(11), 2(7), 3, 5, 12, 14- 六烯 -10- 基 -2- 氧代吡咯 -3- 碳酰胺 0088 实验操作流程同实施例 1, 由 2, 4, 5- 三氟溴苯替代溴氟甲烷, 制备纯化得标题所 示化合物。 0089 H-NMR : 7.21-7.98(10H, m), 2.19-2.24(2H, m), 3.48(1H, ddd), 3.。

28、66(1H, ddd), 5.93(1H, s), 4.10(1H, dd), 3.66(3H, s) 0090 MS+1 : 480.15 0091 测试实施例 - 生物活性 0092 本发明化合物是 gamma-secretase 抑制剂, 通过降低细胞内 NCID 的含量, 抑制 Notch信号通路, 发挥抗肿瘤作用。 肿瘤细胞NCID表达量可用作Gamma secretase抑制活性 的标志物, 选择R04929097作为阳性对照(委托江西科技大学药学院合成, 批号 : 1106013)。 同时, 研究了此类化合物在小鼠异位移植瘤模型 (HCT-116) 中的抗肿瘤作用。 0093 实。

29、施例 13 0094 Western blot 方法检测化合物对 MCF-7 细胞 NICD 表达量的影响 MCF-7 细胞 (ATCC) 用 DMED 培养基 (10胎牛血清, 2mM L-glutamine, 100Uml-1 青霉素, 0.1mgml-1 链 霉素 ), 胰酶消化细胞后, 用含 10胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液, 以每孔 20000 个细胞接种到 6 孔板, 每孔体积 2mll。同一般培养条件, 培养 24h 后, 每孔加 10uM 化合物 ( 溶于 DMS0 中 ), 继续孵育 24 小时, 终止培养 . 小心吸弃孔内培养上清液, 细胞经预冷的 PBS漂洗3次, 。

30、加入450l裂解液, 细胞刮刀收集, 用移液器转移至离心管中, 反复吹打。 以 上所得的样品置 100水浴箱里水浴加热 10 分钟, 10000g 离心 10 分钟, 取出清液, 将其移 入另一洁净试管中, 10 SDS- 聚丙烯酰胺跑电用。Notch 1 intracellular domain 的抗 体 (Abcam 生产 ) 和 beta-actin(CST 生产 ) 抗体检测相应蛋白表达量。结果如表 1 所示, 所测化合物均可不同程度抑制 MCF-7 细胞中 Gamma secretase 的剪切底物的产生, 其中化 合物 3、 4、 9、 10 具有比阳性药物更好的抑制活性。 009。

31、5 表 1. 化合物抑制 MCF-7 细胞 NICD 表达情况 0096 实施例 抑制 NCID 表达 实施例 抑制 NCID 表达 R04929097 + 8 + 1 + 9 + 2 + 10 + 3 + 11 + 4 + 12 + 5 + 说 明 书 CN 103664904 A 10 8/8 页 11 6 + 7 + 0097 注 : 化合物测试的浓度为 10uM 0098 “+” 表示抑制率 80 ;“+” 表示抑制率 50, 80 ; 0099 “+” 表示抑制率 50 ;“-” 表示无抑制作用 ; 0100 实施例 14 0101 裸小鼠HCT-116移植瘤模型评价实验动物为近交系。

32、Balb/c Nude小鼠60只, 雄性, 6-8 周龄, 体重 19-21g, 由上海 SLAC 提供, HCT-116 细胞购自中国科学院上海细胞库提供, 培养于含 10胎牛血清及双抗 ( 青霉素 100IU/mL, 链霉素 100IU/mL) 的 DMEM(Gibco 公司 产品 ) 完全培养液中。取对数生长期的 HCT-116 细胞, 胰酶消化后调节细胞浓度为 5106/ m l 细胞悬液备用 ( 台盼蓝拒染法测定活细胞数大于 95 )。将制备好的 HCT-116 单细 胞悬液接种于小鼠于左侧皮下, 每只 0.2m l(2.5107/mL)。接种 14d 后, 挑选肿瘤体积 200-3。

33、50mm3随机分 5 组, 每组 10 只。Vehicle, R04929094( 剂量 10mpk), Compound3( 剂量 30mpk), 4( 剂量 30mpk), 9( 剂量 30mpk), 口服给药, 每日一次, 连续给药 28 天。按以下公式 计算肿瘤体积 : 肿瘤体积 ab2/2。第 21 天断颈处死全部小鼠, 解剖小鼠取出肿瘤, 去除 脂肪纤维组织, 称重, 计算抑瘤率 (IR) (1- 治疗组瘤重 / 对照组瘤重 )100。结果如 表 2 和附图 2 所示, 实施例化合物 3、 4、 9 均可显著抑制 HCT-116 裸小鼠移植瘤的生长, 抑瘤 率分别为 65.3, 46.3, 40.5, 且动物状态良好, 无明显毒副作用。 0102 表 2. 实施例化合物对 HCT-116 小鼠异位移植瘤模型的抑制作用 0103 0104 *, P 0.05 ; *, P 0.01 说 明 书 CN 103664904 A 11 1/1 页 12 图 1. 图 2. 说 明 书 附 图 CN 103664904 A 12 。

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