一种桃胶多糖及其提取物,及其制备方法和应用.pdf

上传人:Y0****01 文档编号:528542 上传时间:2018-02-21 格式:PDF 页数:22 大小:3.83MB
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摘要
申请专利号:

CN201010261558.7

申请日:

2010.08.25

公开号:

CN102372789A

公开日:

2012.03.14

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情:

专利权的转移IPC(主分类):C08B 37/00登记生效日:20160705变更事项:专利权人变更前权利人:上海辉文生物技术股份有限公司变更后权利人:上海辉文生物技术股份有限公司变更事项:地址变更前权利人:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更后权利人:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更事项:专利权人变更前权利人:骆峰|||专利权的转移IPC(主分类):C08B 37/00变更事项:专利权人变更前权利人:上海辉文生物技术股份有限公司变更后权利人:上海辉文生物技术股份有限公司变更事项:地址变更前权利人:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更后权利人:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更事项:专利权人变更前权利人:唯一食品株式会社 骆峰变更后权利人:骆峰登记生效日:20150129|||专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):C08B 37/00变更事项:专利权人变更前:上海辉文生物技术有限公司变更后:上海辉文生物技术股份有限公司变更事项:地址变更前:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更后:201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2变更事项:专利权人变更前:唯一食品株式会社 骆峰变更后:唯一食品株式会社 骆峰|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C08B 37/00申请日:20100825|||公开

IPC分类号:

C08B37/00; C08L5/00; A23L1/03; A61K47/36; A61K8/73; A61Q19/00

主分类号:

C08B37/00

申请人:

上海辉文生物技术有限公司; 唯一食品株式会社; 骆峰

发明人:

骆峰; 刘桂云; 周自华; 杨海延

地址:

201210 上海市浦东新区沔北路185号F-2

优先权:

专利代理机构:

上海智信专利代理有限公司 31002

代理人:

薛琦;朱水平

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内容摘要

本发明公开了一种桃胶多糖,其主要由70~98wt%的中性总糖组成;且不含核酸、蛋白、鞣质、糊精和淀粉等杂质;该中性总糖中含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的5~30%,该桃胶多糖的平均分子量为3000道尔顿以上,该桃胶多糖水溶液的动力粘度为0.5~4.0帕·秒,pH值为4.0~6.5;比旋度为本发明还提供了该桃胶多糖的提取物,以及它们的制备方法和作为稳定剂的应用。本发明桃胶多糖及其提取物的制备方法能够确保桃胶多糖的各项物化性质满足食品、药品、化妆品以及轻化工领域的使用要求,且保持了桃胶多糖的天然状态,不影响桃

权利要求书

1: 一种桃胶多糖, 其特征在于 : 其主要由 70 ~ 98wt%的中性总糖组成 ; 且不含核酸、 蛋白、 鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 该中性总糖中含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的 5 ~ 30 %, 该桃胶多糖的平均分子量为 3000 道尔顿以上, 浓度为 10wt %的该桃胶多糖水溶液 25℃的动力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕·秒 ; 浓度为 10wt%的桃胶多糖水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5 ; 浓度为 1wt%的该桃胶多糖水溶液的比旋度为
2: 如权利要求 1 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖的含量为 90 ~ 98% ; 所 述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20%; 百分比皆为相对于所述桃胶多糖的重量百分比 ; 所述的 平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000 ; 浓度为 10wt%的该桃胶 多糖水溶液 25℃的动力粘度为 1.4 ~
3: 4 帕·秒。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖主要包括下列含量 的糖基 : 阿拉伯糖 30 ~ 60%, 较佳的为 50 ~ 55%; 葡萄糖 0.1 ~ 35%, 较佳的为 30 ~ 35%; 木糖 5 ~ 30%, 较佳的为 5 ~ 10%; 鼠李糖 1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2%; 半乳糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2% ; 以及甘露糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 0.5 ~ 1.5% ; 上述含量为相对于所述 桃胶多糖的重量百分比。 4. 一种桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 其主要由下述重量百分比的组分组成 : 如权利 要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖 80 ~ 99.8%; 氮元素 0.01 ~ 0.2%; 以及灰分 0.2 ~ 3% ; 该桃胶多糖提取物中不含鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量 为桃胶多糖提取物重量的 5 ~ 28% ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动 力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕·秒 ; 该桃胶多糖提取物的平均分子量为 3000 道尔顿以上 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5。 5. 如权利要求 4 所述的桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 所述桃胶多糖的含量为 87 ~ 99% ; 所述灰分的含量为 0.3 ~ 2% ; 所述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20% ; 含量皆为相对 于桃胶多糖提取物重量的百分比 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动力 粘度为 1.4 ~ 3.4 帕· 秒; 所述的平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000。 6. 如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 其包括如下步 骤: (1) 粉碎或研磨 : 将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉, 并将其溶散于纯水中得桃胶 混悬液 ; 或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液 ; (2) 生物酶解 : 将该桃胶混悬液加热至 40℃~ 60℃, 在生物酶的作用下, 在保温和搅拌 条件下进行酶解, 得料液 1 ; 所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为 0.005 ~ 0.05g/ml ; (3) 低温水解 : 于 40℃~ 60℃, 将该料液 1 与氢氧化钠混合, 在保温和搅拌条件下进行 水解, 得料液 2 ; 该氢氧化钠在该料液 1 中的浓度为 0.03 ~ 0.6g/ml。 (4) 调节 pH : 在 40℃~ 60℃下, 在保温和搅拌条件下, 将该料液 2 与纯水混合形成透明 溶液, 用 pH 调节剂将 pH 值调节至 6.0 ~ 6.5, 过滤, 得精滤液 ; (5) 纯化 : 利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离, 得到 纯化液, 用活性炭或活性白土进行脱色处理, 得料液 3 ; (6) 浓缩 : 减压浓缩该料液 3, 至其固含量≥ 5.0wt%, 得浓缩液 ; 2 (7) 干燥 : 将该浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。 7. 如权利要求 6 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (1) 中, 所述的桃胶粗粉的粒径为 20 ~ 40 目 ; 所述纯水的用量为 5 ~ 60ml/g 桃 胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的研磨用胶体磨进行 ; 所述溶胀的温度为 40℃~ 60℃, 溶胀时间以 使湿桃胶充分溶胀即可 ; 步骤 (2) 中, 所述的生物酶为糖蛋白酶, 较佳的为碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合蛋白 酶和胰酶中的一种或多种 ; 所述的酶解时间以使酶解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (3) 中, 所述的氢氧化钠以纯固体的形式或水溶液的形式与料液 1 混合, 氢氧化钠 在料液 1 中的浓度为 0.1 ~ 0.4g/ml ; 当以水溶液形式混合时, 氢氧化钠水溶液的重量浓度 较佳的为 5%~ 50% ; 所述的水解时间以使水解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (4) 中, 所述纯水的用量为 20 ~ 120ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的溶解时间 以使料液 2 能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可, 较佳的为 0.5 ~ 2 小时, 更佳的为 0.5 ~ 1 小时 ; 所述的 pH 调节剂为醋酸和 / 或稀盐酸 ; 步骤 (5) 中, 所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子交换树脂 ; 所述的阳离子交换树 脂较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂 ; 所述的阴离子交换树脂较佳的为弱碱性阴离子交 换树脂 ; 所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂, 较佳的为 D 101、 AB-8、 NK-109、 H-103、 NKA-9 或 ADS-17 ; 所述活性炭或活性白土的用量为所 述纯化液体积的 0.5%~ 3% ; 所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为 : 将所 述精滤液上阳离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至 无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上阴离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集 洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再 用大孔吸附树脂进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反 应时停止收集, 得纯化液 ; 步骤 (6) 中, 所述的减压浓缩的温度为 50℃~ 80℃, 压力为 -0.085Mpa ~ -0.050Mpa。 8. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 其包括下述 步骤 : (1) 根据权利要求 6 或 7 的方法制备桃胶多糖提取物 ; (2) 纯化。 9. 如权利要求 8 所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (2) 的纯化采用 Sevag 法及透析法来实现, 该纯化的具体步骤较佳地按下述步骤进行 : ①将桃胶多糖提取物与纯水混合, 得桃胶多糖提取物水溶液 ; 其中, 所述纯水的用量较 佳的 400ml/g ~ 600ml/g 桃胶多糖提取物 ; ②加入所述水溶液体积 1/3 ~ 1/5 的三氯甲烷, 再加入所述三氯甲烷体积 1/3 ~ 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 15 ~ 30 分钟, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ; ③重复步骤②, 直至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中, 重复步骤②时, 再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤②的水相中 ; ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液, 将该浓缩液与 95%乙醇充分混合, 离心得 沉淀物 1 ; 将该沉淀物 1 与纯水混合, 离心, 去除不溶物, 得清液 1 ; 将清液 1 于透析袋内进行 透析, 用纯水冲洗 12 ~ 16 小时, 收集透析袋中透析后的清液 2 ; 将该清液 2 与无水乙醇混 合, 再次离心得沉淀物 2 ; 用无水乙醇对该沉淀物 2 进行脱水后于 60℃~ 80℃真空干燥, 即 得桃胶多糖 ; 其中, 95%乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的 3 倍~ 5 倍 ; 该沉淀 3 物 1 与纯水的混合比例较佳的为质量比 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 500, 更佳的为 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 200 ; 该透析袋为能够透过分子量小于 3000 道尔顿的物质的透析袋 ; 该清液 2 与无水乙醇的混合 比例较佳的为体积比 1 ∶ 3 ~ 1 ∶ 5。 10. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖或如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖 提取物作为稳定剂的应用 ; 其中, 所述的稳定剂较佳的为药品、 食品、 化妆品、 轻化工领域中 使用的稳定剂, 更佳的为蛋白稳定剂, 最佳的为液体乳制品稳定剂, 所述的液体乳制品较佳 的为牛奶、 酸奶或含乳饮料 ; 所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、 发酵型含乳饮料和乳酸 菌饮料, 较佳的为果乳饮料或调味奶。
4: 0 帕·秒 ; 浓度为 10wt%的桃胶多糖水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5 ; 浓度为 1wt%的该桃胶多糖水溶液的比旋度为 2. 如权利要求 1 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖的含量为 90 ~ 98% ; 所 述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20%; 百分比皆为相对于所述桃胶多糖的重量百分比 ; 所述的 平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000 ; 浓度为 10wt%的该桃胶 多糖水溶液 25℃的动力粘度为 1.4 ~ 3.4 帕·秒。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖主要包括下列含量 的糖基 : 阿拉伯糖 30 ~ 60%, 较佳的为 50 ~ 55%; 葡萄糖 0.1 ~ 35%, 较佳的为 30 ~ 35%; 木糖 5 ~ 30%, 较佳的为 5 ~ 10%; 鼠李糖 1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2%; 半乳糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2% ; 以及甘露糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 0.5 ~ 1.5% ; 上述含量为相对于所述 桃胶多糖的重量百分比。 4. 一种桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 其主要由下述重量百分比的组分组成 : 如权利 要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖 80 ~ 99.8%; 氮元素 0.01 ~ 0.2%; 以及灰分 0.2 ~ 3% ; 该桃胶多糖提取物中不含鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量 为桃胶多糖提取物重量的 5 ~ 28% ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动 力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕·秒 ; 该桃胶多糖提取物的平均分子量为 3000 道尔顿以上 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5。
5: 如权利要求 4 所述的桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 所述桃胶多糖的含量为 87 ~ 99% ; 所述灰分的含量为 0.3 ~ 2% ; 所述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20% ; 含量皆为相对 于桃胶多糖提取物重量的百分比 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动力 粘度为 1.4 ~ 3.4 帕· 秒; 所述的平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000。 6. 如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 其包括如下步 骤: (1) 粉碎或研磨 : 将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉, 并将其溶散于纯水中得桃胶 混悬液 ; 或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液 ; (2) 生物酶解 : 将该桃胶混悬液加热至 40℃~ 60℃, 在生物酶的作用下, 在保温和搅拌 条件下进行酶解, 得料液 1 ; 所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为 0.005 ~ 0.05g/ml ; (3) 低温水解 : 于 40℃~ 60℃, 将该料液 1 与氢氧化钠混合, 在保温和搅拌条件下进行 水解, 得料液 2 ; 该氢氧化钠在该料液 1 中的浓度为 0.03 ~ 0.6g/ml。 (4) 调节 pH : 在 40℃~ 60℃下, 在保温和搅拌条件下, 将该料液 2 与纯水混合形成透明 溶液, 用 pH 调节剂将 pH 值调节至 6.0 ~ 6.5, 过滤, 得精滤液 ; (5) 纯化 : 利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离, 得到 纯化液, 用活性炭或活性白土进行脱色处理, 得料液 3 ; (6) 浓缩 : 减压浓缩该料液 3, 至其固含量≥ 5.0wt%, 得浓缩液 ; 2 (7) 干燥 : 将该浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。 7. 如权利要求 6 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (1) 中, 所述的桃胶粗粉的粒径为 20 ~ 40 目 ; 所述纯水的用量为 5 ~ 60ml/g 桃 胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的研磨用胶体磨进行 ; 所述溶胀的温度为 40℃~ 60℃, 溶胀时间以 使湿桃胶充分溶胀即可 ; 步骤 (2) 中, 所述的生物酶为糖蛋白酶, 较佳的为碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合蛋白 酶和胰酶中的一种或多种 ; 所述的酶解时间以使酶解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (3) 中, 所述的氢氧化钠以纯固体的形式或水溶液的形式与料液 1 混合, 氢氧化钠 在料液 1 中的浓度为 0.1 ~ 0.4g/ml ; 当以水溶液形式混合时, 氢氧化钠水溶液的重量浓度 较佳的为 5%~ 50% ; 所述的水解时间以使水解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (4) 中, 所述纯水的用量为 20 ~ 120ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的溶解时间 以使料液 2 能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可, 较佳的为 0.5 ~ 2 小时, 更佳的为 0.5 ~ 1 小时 ; 所述的 pH 调节剂为醋酸和 / 或稀盐酸 ; 步骤 (5) 中, 所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子交换树脂 ; 所述的阳离子交换树 脂较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂 ; 所述的阴离子交换树脂较佳的为弱碱性阴离子交 换树脂 ; 所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂, 较佳的为 D 101、 AB-8、 NK-109、 H-103、 NKA-9 或 ADS-17 ; 所述活性炭或活性白土的用量为所 述纯化液体积的 0.5%~ 3% ; 所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为 : 将所 述精滤液上阳离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至 无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上阴离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集 洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再 用大孔吸附树脂进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反 应时停止收集, 得纯化液 ; 步骤 (6) 中, 所述的减压浓缩的温度为 50℃~ 80℃, 压力为 -0.085Mpa ~ -0.050Mpa。 8. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 其包括下述 步骤 : (1) 根据权利要求 6 或 7 的方法制备桃胶多糖提取物 ; (2) 纯化。 9. 如权利要求 8 所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (2) 的纯化采用 Sevag 法及透析法来实现, 该纯化的具体步骤较佳地按下述步骤进行 : ①将桃胶多糖提取物与纯水混合, 得桃胶多糖提取物水溶液 ; 其中, 所述纯水的用量较 佳的 400ml/g ~ 600ml/g 桃胶多糖提取物 ; ②加入所述水溶液体积 1/3 ~ 1/5 的三氯甲烷, 再加入所述三氯甲烷体积 1/3 ~ 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 15 ~ 30 分钟, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ; ③重复步骤②, 直至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中, 重复步骤②时, 再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤②的水相中 ; ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液, 将该浓缩液与 95%乙醇充分混合, 离心得 沉淀物 1 ; 将该沉淀物 1 与纯水混合, 离心, 去除不溶物, 得清液 1 ; 将清液 1 于透析袋内进行 透析, 用纯水冲洗 12 ~ 16 小时, 收集透析袋中透析后的清液 2 ; 将该清液 2 与无水乙醇混 合, 再次离心得沉淀物 2 ; 用无水乙醇对该沉淀物 2 进行脱水后于 60℃~ 80℃真空干燥, 即 得桃胶多糖 ; 其中, 95%乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的 3 倍~ 5 倍 ; 该沉淀 3 物 1 与纯水的混合比例较佳的为质量比 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 500, 更佳的为 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 200 ; 该透析袋为能够透过分子量小于 3000 道尔顿的物质的透析袋 ; 该清液 2 与无水乙醇的混合 比例较佳的为体积比 1 ∶ 3 ~ 1 ∶ 5。 10. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖或如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖 提取物作为稳定剂的应用 ; 其中, 所述的稳定剂较佳的为药品、 食品、 化妆品、 轻化工领域中 使用的稳定剂, 更佳的为蛋白稳定剂, 最佳的为液体乳制品稳定剂, 所述的液体乳制品较佳 的为牛奶、 酸奶或含乳饮料 ; 所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、 发酵型含乳饮料和乳酸 菌饮料, 较佳的为果乳饮料或调味奶。
6: 5 ; 浓度为 1wt%的该桃胶多糖水溶液的比旋度为 2. 如权利要求 1 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖的含量为 90 ~ 98% ; 所 述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20%; 百分比皆为相对于所述桃胶多糖的重量百分比 ; 所述的 平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000 ; 浓度为 10wt%的该桃胶 多糖水溶液 25℃的动力粘度为 1.4 ~ 3.4 帕·秒。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的桃胶多糖, 其特征在于 : 所述中性总糖主要包括下列含量 的糖基 : 阿拉伯糖 30 ~ 60%, 较佳的为 50 ~ 55%; 葡萄糖 0.1 ~ 35%, 较佳的为 30 ~ 35%; 木糖 5 ~ 30%, 较佳的为 5 ~ 10%; 鼠李糖 1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2%; 半乳糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2% ; 以及甘露糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 0.5 ~ 1.5% ; 上述含量为相对于所述 桃胶多糖的重量百分比。 4. 一种桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 其主要由下述重量百分比的组分组成 : 如权利 要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖 80 ~ 99.8%; 氮元素 0.01 ~ 0.2%; 以及灰分 0.2 ~ 3% ; 该桃胶多糖提取物中不含鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量 为桃胶多糖提取物重量的 5 ~ 28% ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动 力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕·秒 ; 该桃胶多糖提取物的平均分子量为 3000 道尔顿以上 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5。 5. 如权利要求 4 所述的桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 所述桃胶多糖的含量为 87 ~ 99% ; 所述灰分的含量为 0.3 ~ 2% ; 所述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20% ; 含量皆为相对 于桃胶多糖提取物重量的百分比 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动力 粘度为 1.4 ~ 3.4 帕· 秒; 所述的平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000。 6. 如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 其包括如下步 骤: (1) 粉碎或研磨 : 将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉, 并将其溶散于纯水中得桃胶 混悬液 ; 或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液 ; (2) 生物酶解 : 将该桃胶混悬液加热至 40℃~ 60℃, 在生物酶的作用下, 在保温和搅拌 条件下进行酶解, 得料液 1 ; 所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为 0.005 ~ 0.05g/ml ; (3) 低温水解 : 于 40℃~ 60℃, 将该料液 1 与氢氧化钠混合, 在保温和搅拌条件下进行 水解, 得料液 2 ; 该氢氧化钠在该料液 1 中的浓度为 0.03 ~ 0.6g/ml。 (4) 调节 pH : 在 40℃~ 60℃下, 在保温和搅拌条件下, 将该料液 2 与纯水混合形成透明 溶液, 用 pH 调节剂将 pH 值调节至 6.0 ~ 6.5, 过滤, 得精滤液 ; (5) 纯化 : 利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离, 得到 纯化液, 用活性炭或活性白土进行脱色处理, 得料液 3 ; (6) 浓缩 : 减压浓缩该料液 3, 至其固含量≥ 5.0wt%, 得浓缩液 ; 2 (7) 干燥 : 将该浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。
7: 如权利要求 6 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (1) 中, 所述的桃胶粗粉的粒径为 20 ~ 40 目 ; 所述纯水的用量为 5 ~ 60ml/g 桃 胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的研磨用胶体磨进行 ; 所述溶胀的温度为 40℃~ 60℃, 溶胀时间以 使湿桃胶充分溶胀即可 ; 步骤 (2) 中, 所述的生物酶为糖蛋白酶, 较佳的为碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合蛋白 酶和胰酶中的一种或多种 ; 所述的酶解时间以使酶解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (3) 中, 所述的氢氧化钠以纯固体的形式或水溶液的形式与料液 1 混合, 氢氧化钠 在料液 1 中的浓度为 0.1 ~ 0.4g/ml ; 当以水溶液形式混合时, 氢氧化钠水溶液的重量浓度 较佳的为 5%~ 50% ; 所述的水解时间以使水解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (4) 中, 所述纯水的用量为 20 ~ 120ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的溶解时间 以使料液 2 能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可, 较佳的为 0.5 ~ 2 小时, 更佳的为 0.5 ~ 1 小时 ; 所述的 pH 调节剂为醋酸和 / 或稀盐酸 ; 步骤 (5) 中, 所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子交换树脂 ; 所述的阳离子交换树 脂较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂 ; 所述的阴离子交换树脂较佳的为弱碱性阴离子交 换树脂 ; 所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂, 较佳的为 D 101、 AB-8、 NK-109、 H-103、 NKA-9 或 ADS-17 ; 所述活性炭或活性白土的用量为所 述纯化液体积的 0.5%~ 3% ; 所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为 : 将所 述精滤液上阳离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至 无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上阴离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集 洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再 用大孔吸附树脂进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反 应时停止收集, 得纯化液 ; 步骤 (6) 中, 所述的减压浓缩的温度为 50℃~ 80℃, 压力为 -0.085Mpa ~ -0.050Mpa。
8: 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 其包括下述 步骤 : (1) 根据权利要求 6 或 7 的方法制备桃胶多糖提取物 ; (2) 纯化。 9. 如权利要求 8 所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (2) 的纯化采用 Sevag 法及透析法来实现, 该纯化的具体步骤较佳地按下述步骤进行 : ①将桃胶多糖提取物与纯水混合, 得桃胶多糖提取物水溶液 ; 其中, 所述纯水的用量较 佳的 400ml/g ~ 600ml/g 桃胶多糖提取物 ; ②加入所述水溶液体积 1/3 ~ 1/5 的三氯甲烷, 再加入所述三氯甲烷体积 1/3 ~ 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 15 ~ 30 分钟, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ; ③重复步骤②, 直至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中, 重复步骤②时, 再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤②的水相中 ; ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液, 将该浓缩液与 95%乙醇充分混合, 离心得 沉淀物 1 ; 将该沉淀物 1 与纯水混合, 离心, 去除不溶物, 得清液 1 ; 将清液 1 于透析袋内进行 透析, 用纯水冲洗 12 ~ 16 小时, 收集透析袋中透析后的清液 2 ; 将该清液 2 与无水乙醇混 合, 再次离心得沉淀物 2 ; 用无水乙醇对该沉淀物 2 进行脱水后于 60℃~ 80℃真空干燥, 即 得桃胶多糖 ; 其中, 95%乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的 3 倍~ 5 倍 ; 该沉淀 3 物 1 与纯水的混合比例较佳的为质量比 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 500, 更佳的为 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 200 ; 该透析袋为能够透过分子量小于 3000 道尔顿的物质的透析袋 ; 该清液 2 与无水乙醇的混合 比例较佳的为体积比 1 ∶ 3 ~ 1 ∶ 5。 10. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖或如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖 提取物作为稳定剂的应用 ; 其中, 所述的稳定剂较佳的为药品、 食品、 化妆品、 轻化工领域中 使用的稳定剂, 更佳的为蛋白稳定剂, 最佳的为液体乳制品稳定剂, 所述的液体乳制品较佳 的为牛奶、 酸奶或含乳饮料 ; 所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、 发酵型含乳饮料和乳酸 菌饮料, 较佳的为果乳饮料或调味奶。
9: 8%; 氮元素 0.01 ~ 0.2%; 以及灰分 0.2 ~ 3% ; 该桃胶多糖提取物中不含鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量 为桃胶多糖提取物重量的 5 ~ 28% ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动 力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕·秒 ; 该桃胶多糖提取物的平均分子量为 3000 道尔顿以上 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5。 5. 如权利要求 4 所述的桃胶多糖提取物, 其特征在于 : 所述桃胶多糖的含量为 87 ~ 99% ; 所述灰分的含量为 0.3 ~ 2% ; 所述葡萄糖醛酸的含量为 10 ~ 20% ; 含量皆为相对 于桃胶多糖提取物重量的百分比 ; 浓度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液 25℃的动力 粘度为 1.4 ~ 3.4 帕· 秒; 所述的平均分子量为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 较佳的为 8000 ~ 150,000。 6. 如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 其包括如下步 骤: (1) 粉碎或研磨 : 将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉, 并将其溶散于纯水中得桃胶 混悬液 ; 或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液 ; (2) 生物酶解 : 将该桃胶混悬液加热至 40℃~ 60℃, 在生物酶的作用下, 在保温和搅拌 条件下进行酶解, 得料液 1 ; 所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为 0.005 ~ 0.05g/ml ; (3) 低温水解 : 于 40℃~ 60℃, 将该料液 1 与氢氧化钠混合, 在保温和搅拌条件下进行 水解, 得料液 2 ; 该氢氧化钠在该料液 1 中的浓度为 0.03 ~ 0.6g/ml。 (4) 调节 pH : 在 40℃~ 60℃下, 在保温和搅拌条件下, 将该料液 2 与纯水混合形成透明 溶液, 用 pH 调节剂将 pH 值调节至 6.0 ~ 6.5, 过滤, 得精滤液 ; (5) 纯化 : 利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离, 得到 纯化液, 用活性炭或活性白土进行脱色处理, 得料液 3 ; (6) 浓缩 : 减压浓缩该料液 3, 至其固含量≥ 5.0wt%, 得浓缩液 ; 2 (7) 干燥 : 将该浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。 7. 如权利要求 6 所述的桃胶多糖提取物的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (1) 中, 所述的桃胶粗粉的粒径为 20 ~ 40 目 ; 所述纯水的用量为 5 ~ 60ml/g 桃 胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的研磨用胶体磨进行 ; 所述溶胀的温度为 40℃~ 60℃, 溶胀时间以 使湿桃胶充分溶胀即可 ; 步骤 (2) 中, 所述的生物酶为糖蛋白酶, 较佳的为碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合蛋白 酶和胰酶中的一种或多种 ; 所述的酶解时间以使酶解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (3) 中, 所述的氢氧化钠以纯固体的形式或水溶液的形式与料液 1 混合, 氢氧化钠 在料液 1 中的浓度为 0.1 ~ 0.4g/ml ; 当以水溶液形式混合时, 氢氧化钠水溶液的重量浓度 较佳的为 5%~ 50% ; 所述的水解时间以使水解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时 ; 步骤 (4) 中, 所述纯水的用量为 20 ~ 120ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶 ; 所述的溶解时间 以使料液 2 能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可, 较佳的为 0.5 ~ 2 小时, 更佳的为 0.5 ~ 1 小时 ; 所述的 pH 调节剂为醋酸和 / 或稀盐酸 ; 步骤 (5) 中, 所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子交换树脂 ; 所述的阳离子交换树 脂较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂 ; 所述的阴离子交换树脂较佳的为弱碱性阴离子交 换树脂 ; 所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂, 较佳的为 D 101、 AB-8、 NK-109、 H-103、 NKA-9 或 ADS-17 ; 所述活性炭或活性白土的用量为所 述纯化液体积的 0.5%~ 3% ; 所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为 : 将所 述精滤液上阳离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至 无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上阴离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集 洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再 用大孔吸附树脂进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反 应时停止收集, 得纯化液 ; 步骤 (6) 中, 所述的减压浓缩的温度为 50℃~ 80℃, 压力为 -0.085Mpa ~ -0.050Mpa。 8. 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 其包括下述 步骤 : (1) 根据权利要求 6 或 7 的方法制备桃胶多糖提取物 ; (2) 纯化。 9. 如权利要求 8 所述的桃胶多糖的制备方法, 其特征在于 : 步骤 (2) 的纯化采用 Sevag 法及透析法来实现, 该纯化的具体步骤较佳地按下述步骤进行 : ①将桃胶多糖提取物与纯水混合, 得桃胶多糖提取物水溶液 ; 其中, 所述纯水的用量较 佳的 400ml/g ~ 600ml/g 桃胶多糖提取物 ; ②加入所述水溶液体积 1/3 ~ 1/5 的三氯甲烷, 再加入所述三氯甲烷体积 1/3 ~ 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 15 ~ 30 分钟, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ; ③重复步骤②, 直至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中, 重复步骤②时, 再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤②的水相中 ; ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液, 将该浓缩液与 95%乙醇充分混合, 离心得 沉淀物 1 ; 将该沉淀物 1 与纯水混合, 离心, 去除不溶物, 得清液 1 ; 将清液 1 于透析袋内进行 透析, 用纯水冲洗 12 ~ 16 小时, 收集透析袋中透析后的清液 2 ; 将该清液 2 与无水乙醇混 合, 再次离心得沉淀物 2 ; 用无水乙醇对该沉淀物 2 进行脱水后于 60℃~ 80℃真空干燥, 即 得桃胶多糖 ; 其中, 95%乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的 3 倍~ 5 倍 ; 该沉淀 3 物 1 与纯水的混合比例较佳的为质量比 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 500, 更佳的为 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 200 ; 该透析袋为能够透过分子量小于 3000 道尔顿的物质的透析袋 ; 该清液 2 与无水乙醇的混合 比例较佳的为体积比 1 ∶ 3 ~ 1 ∶ 5。
10: 如权利要求 1 ~ 3 中任一项所述的桃胶多糖或如权利要求 4 或 5 所述的桃胶多糖 提取物作为稳定剂的应用 ; 其中, 所述的稳定剂较佳的为药品、 食品、 化妆品、 轻化工领域中 使用的稳定剂, 更佳的为蛋白稳定剂, 最佳的为液体乳制品稳定剂, 所述的液体乳制品较佳 的为牛奶、 酸奶或含乳饮料 ; 所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、 发酵型含乳饮料和乳酸 菌饮料, 较佳的为果乳饮料或调味奶。

说明书


一种桃胶多糖及其提取物, 及其制备方法和应用

    技术领域 本发明涉及一种天然植物多糖, 尤其涉及一种桃胶多糖及其提取物, 本发明还涉 及所述桃胶多糖及其提取物的制备方法和应用。
     背景技术 桃胶多糖具有益气、 和血、 止渴的功效, 擅长活血消肿、 通淋止痛, 临床应用表明其 对血淋、 石淋、 痢疾、 腹泻、 疼痛等症均有良效 ; 另外, 桃胶多糖还可作为一种新型的药用辅 料在药物制剂生产中也具有广泛的应用, 可作为混悬剂、 稳定剂、 润滑剂、 微胶囊的包囊材 料和薄膜包衣材料等。桃胶多糖还可食用, 利用桃胶多糖及其提取物的增稠、 乳化、 凝固等 性质来生产糖果、 糕点、 乳制品、 巧克力、 胨胶性食品保鲜膜、 饮料等食品。 在化妆品领域, 桃 胶多糖可作为化妆品的稳定剂、 增粘剂和润肤剂等。在轻、 化工领域, 桃胶多糖可应用于印 刷工业、 印染工业、 农药生产、 文体工业等领域。
     桃胶多糖可以桃或山桃等蔷薇科植物分泌出的胶质半透明物质作为提取原料提 取得到。 但该提取原料至今未见产业化报道, 大量原料被遗弃, 没有使这一丰富的天然资源 得到有效利用。因此, 对桃胶的开发利用就显得十分必要。
     由于天然原桃胶一般只能浸胀, 不易完全溶解, 因此, 天然原桃胶必须经过加工处 理才能满足使用要求。 据文献报道, 目前桃胶的一般加工方法仅仅是采用高温、 强碱水解的 工艺来进行生产。 这种生产工艺相对落后, 常常会造成桃胶多糖在加工过程中的分解, 造成 桃胶产品质量的显著下降, 分子量降低、 粘度下降 (10wt%水溶液, 25℃ ; NDJ-1 动力粘度计 测得约为 11mPa.S) 以及纯度不佳缺陷, 并最终影响产品的使用特性。采用这种工艺生产的 桃胶粉中由于含有较高量的蛋白、 无机盐和鞣质, 因此仅能应用于造纸、 油漆等化工领域, 不能应运用于食品、 化妆品、 药品等领域。
     发明内容
     本发明所要解决的技术问题在于克服了现有技术中桃胶加工工艺落后, 在加工过 程中易造成桃胶多糖分解, 导致桃胶提取物品质下降, 且由该工艺制得的桃胶提取物含有 大量杂质, 应用领域窄, 难以产业化生产等缺陷, 提供了一种桃胶多糖及其提取物, 以及其 制备方法和应用。本发明的桃胶多糖提取物的制备方法能获得高收率的提取物, 且不会破 坏提取物中桃胶多糖的产品性能, 进一步提纯后的桃胶多糖中不含有核酸、 蛋白、 鞣质、 糊 精和淀粉等杂质, 各方面理化性能皆优于现有技术中, 并且能够完全符合食品、 药品和化妆 品领域的应用要求, 使用范围广, 能够产业化生产, 具有广泛的使用前景。
     本发明的目的之一是提供一种桃胶多糖, 其主要由 70 ~ 98wt%, 较佳的为 90 ~ 98wt%的中性总糖组成 ; 且不含核酸、 蛋白、 鞣质、 糊精和淀粉等杂质 ; 其中, 该中性总糖中 含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的 5 ~ 30%, 较佳的为 10 ~ 20%; 该桃胶多糖的平均分 子量为 3000 道尔顿以上, 较佳的为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 更佳的为 8000 ~ 150,000 ; 浓 度为 10wt%的该桃胶多糖水溶液的动力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕· 秒 (Pa.S), 较佳的为 1.4 ~3.4 帕·秒, 该粘度为于 25℃由 NDJ-1 动力粘度计测得 ; 浓度为 10wt%的桃胶多糖水溶液 的 pH 值为 4.0 ~ 6.5 ; 浓度为 1wt%的该桃胶多糖水溶液的比旋度为 其中, 该中性总糖主要包括下列含量的糖基 : 阿拉伯糖 30 ~ 60%, 较佳的为 50 ~ 55% ; 葡萄糖 0.1 ~ 35%, 较佳的为 30 ~ 35% ; 木糖 5 ~ 30%, 较佳的为 5 ~ 10% ; 鼠李 糖 1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2% ; 半乳糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 1 ~ 2% ; 以及甘露糖 0.1 ~ 5%, 较佳的为 0.5 ~ 1.5% ; 上述含量为相对于所述桃胶多糖的重量百分比, 所述的葡萄糖 醛酸包含在所述葡萄糖中。
     本发明的桃胶多糖为浅白色粉末状物体, 具有良好的水溶液稳定性, 高分子量和 高粘度的特点。
     本发明目的之二是提供了一种桃胶多糖提取物, 其主要由下述重量百分比的组分 组成 : 所述桃胶多糖 80 ~ 99.8%, 较佳的为 87 ~ 99% ; 氮元素 0.01 ~ 0.2% ; 以及灰分 0.2 ~ 3%, 较佳的为 0.3 ~ 2%; 该桃胶多糖提取物中不含鞣质、 糊精和淀粉 ; 其中, 所述桃 胶多糖中葡萄糖醛酸的含量为桃胶多糖提取物重量的 5 ~ 28%, 较佳的为 10 ~ 20% ; 浓 度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的动力粘度为 0.5 ~ 4.0 帕· 秒 (Pa.S), 较佳的为 1.4 ~ 3.4 帕· 秒, 该粘度为于 25℃由 NDJ-1 动力粘度计测得 ; 该桃胶多糖提取物的平均分 子量为 3000 道尔顿以上, 较佳的为 3000 ~ 200,000 道尔顿, 更佳的为 8000 ~ 150,000 ; 浓 度为 10wt%的该桃胶多糖提取物水溶液的 pH 值为 4.0 ~ 6.5。
     其中, 所述的灰分为桃胶经高温 (500 ~ 600℃ ) 灼烧后的残留物。灰分是标示食 品中无机成分总量的一项指标。
     其中, 所述鞣质、 糊精和淀粉均存在于天然桃胶中, 这类物质的存在可能会造成桃 胶多糖及其提取物品质的下降, 因此, 必须将其尽可能从产品中去除, 或降低至可接受的程 度。
     其中, 所述的氮元素指桃胶多糖提取物中含有的蛋白质的氮元素。本发明中的氮 元素采用凯式定氮法进行氮元素的测定, 可根据该氮含量计算提取物中蛋白质的含量。
     本发明的目的之三是提供所述桃胶多糖提取物的制备方法, 其包括如下步骤 :
     (1) 粉碎或研磨 : 将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉, 并将其溶散于纯水中得 桃胶混悬液 ; 或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液 ;
     (2) 生物酶解 : 将该桃胶混悬液加热至 40℃~ 60℃, 在生物酶的作用下, 在保温和 搅拌条件下进行酶解, 得料液 1 ; 所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为 0.005 ~ 0.05g/ ml ;
     (3) 低温水解 : 于 40℃~ 60℃, 将该料液 1 与氢氧化钠混合, 在保温和搅拌条件下 进行水解, 得料液 2 ; 该氢氧化钠在该料液 1 中的浓度为 0.03 ~ 0.6g/ml。
     (4) 调节 pH : 在 40℃~ 60℃下, 在保温和搅拌条件下, 将该料液 2 与纯水混合形成 透明溶液, 用 pH 调节剂将 pH 值调节至 6.0 ~ 6.5, 过滤, 得精滤液 ;
     (5) 纯化 : 利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离, 得到纯化液, 用活性炭或活性白土进行脱色处理, 得料液 3 ;
     (6) 浓缩 : 减压浓缩该料液 3, 至其固含量≥ 5.0wt%, 得浓缩液 ;
     (7) 干燥 : 将该浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。
     步骤 (1) 中, 所述的天然原桃胶指水分含量在 15wt%以下的桃胶 ; 所述的天然原
     湿桃胶指新鲜桃胶。所述的桃胶粗粉的粒径较佳的为 20 ~ 40 目。所述纯水的用量较佳的 为 5 ~ 60ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶。所述的研磨较佳的用胶体磨进行。所述溶胀的温度较 佳的为 40℃~ 60℃, 溶胀时间以使湿桃胶充分溶胀即可。
     步骤 (2) 中, 所述的生物酶较佳的为所有能够酶解糖蛋白, 并使其分解成能够用 本发明纯化方法去除的小分子化合物的糖蛋白酶, 更佳的为碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合 蛋白酶和胰酶中的一种或多种。 现有技术中的所有市售碱性蛋白酶、 中性蛋白酶、 复合蛋白 酶和胰酶都能适用于本发明。其中, 所述的酶解时间以使酶解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小 时。
     步骤 (3) 中, 所述的氢氧化钠可以纯固体的形式或水溶液的形式与料液 1 混合, 无 论以何种形式混合, 氢氧化钠在料液 1 中的浓度较佳的为 0.1 ~ 0.4g/ml。其中, 当以水溶 液形式混合时, 氢氧化钠水溶液的重量浓度较佳的为 5%~ 50%。其中, 所述的水解时间以 使水解完成为止, 较佳的为 1 ~ 5 小时。
     步骤 (4) 中, 所述纯水的用量为使料液 2 能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即 可, 较佳的为 20 ~ 120ml/g 桃胶粗粉或湿桃胶。所述的溶解时间以使料液 2 能够完全溶 解于纯水中形成透明溶液即可, 较佳的为 0.5 ~ 2 小时, 考虑到成本与效率问题, 更佳的为 0.5 ~ 1 小时。其中, 所述的 pH 调节剂可选用本领域常规的各种弱酸性 pH 调节剂, 较佳的 为醋酸和 / 或稀盐酸。 步骤 (5) 中, 所述的离子交换树脂法可采用本领域此类方法的常规操作进行, 以 除去精滤液中的无机盐和重金属 ( 如砷、 铅、 铬 ) 等。其中, 所述的离子交换树脂为阳离子 和阴离子交换树脂。所述的阳离子交换树脂可使用本领域常规的各种阳离子交换树脂, 较 佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂。 所述的阴离子交换树脂可选用本领域常规的各种阴离 子交换树脂, 较佳的为弱碱性阴离子交换树脂。所述的大孔树脂吸附法可采用本领域此类 方法的常规操作进行, 以除去精滤液中的色素等非极性的杂质及小分子化合物。所述的大 孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂可选用本领域常规的各种弱极性或非极性大孔吸附 树脂, 较佳的为 D 101、 AB-8、 NK-109、 H-103、 NKA-9 或 ADS-17。所述活性炭或活性白土的用 量为使该纯化液脱色完全为止, 较佳的为纯化液体积的 0.5%~ 3%。所述离子交换树脂法 和大孔树脂吸附法的具体操作为 : 将所述精滤液上阳离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集 洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上 阴离子交换树脂分离柱, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应 时停止收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再用大孔吸附树脂进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得纯化液。
     步骤 (6) 中, 所述的减压浓缩的浓缩条件可根据本领域常识进行选择, 减压温度 较佳的为 50℃~ 80℃, 压力较佳的为 -0.085Mpa ~ -0.050Mpa。所述的减压浓缩较佳地在 旋转蒸发仪中进行。
     本发明的目的之四是提供所述桃胶多糖的制备方法, 其包括如下步骤 :
     (1) 根据上述桃胶多糖提取物的制备方法得到桃胶多糖提取物 ;
     (2) 纯化除去桃胶多糖提取物中的核酸、 蛋白等杂质。
     其中, 步骤 (2) 中的纯化可选用本领域中用于去除所述杂质常用的各种多糖纯化 方法, 如三氯乙酸法、 凝胶色谱法等, 各种纯化的具体操作步骤可根据本领域常识进行选
     择。本发明优选采用 Sevag 法及透析法来实现纯化, 该纯化的具体步骤可根据本领域常识 进行选择, 较佳地按下述步骤进行 :
     ①将桃胶多糖提取物与纯水混合, 得桃胶多糖提取物水溶液 ; 其中, 所述纯水的用 量较佳的 400ml/g ~ 600ml/g 桃胶多糖提取物 ;
     ②加入所述水溶液体积 1/3 ~ 1/5 的三氯甲烷, 再加入所述三氯甲烷体积 1/3 ~ 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 15 ~ 30 分钟, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ;
     ③重复步骤②, 直至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中, 重复步骤② 时, 再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤②的水相中 ;
     ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液 ( 即流浸膏状浓缩液 ), 将该浓缩液与 95%乙醇充分混合, 离心得沉淀物 1 ; 将该沉淀物 1 与纯水混合, 离心, 去除不溶物, 得清液 1; 将清液 1 于透析袋内进行透析, 用纯水冲洗 12 ~ 16 小时, 收集透析袋中透析后的清液 2( 即收集分子量为 3000 道尔顿以上的物质 ) ; 将该清液 2 与无水乙醇混合, 再次离心得沉 淀物 2 ; 用无水乙醇对该沉淀物 2 进行脱水后于 60℃~ 80℃真空干燥, 即得桃胶多糖 ; 其 中, 95%乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的 3 倍~ 5 倍 ; 该沉淀物 1 与纯水的混 合比例较佳的为质量比 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 500, 更佳的为 1 ∶ 100 ~ 1 ∶ 200 ; 该透析袋为能 够透过分子量小于 3000 道尔顿的物质的透析袋 ; 该清液 2 与无水乙醇的混合比例较佳的为 体积比 1 ∶ 3 ~ 1 ∶ 5。 本发明的目的之五是提供上述桃胶多糖以及桃胶多糖提取物作为稳定剂的应用。 其中, 所述的稳定剂较佳的为药品、 食品、 化妆品、 轻化工领域中使用的稳定剂, 更佳的为蛋 白稳定剂, 最佳的为液体乳制品稳定剂。所述的液体乳制品较佳的为牛奶、 酸奶或含乳饮 料; 所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、 发酵型含乳饮料和乳酸菌饮料, 较佳的为果乳饮 料或调味奶。
     进一步的研究发现, 本发明桃胶多糖及桃胶多糖提取物具有稳定剂功能主要与其 结构有关 :
     (1) 桃胶多糖中含有葡萄糖醛酸, 而且百分含量较高 (5%~ 30% ), 葡萄糖醛酸可 以起到稳定蛋白的作用, 因此, 桃胶多糖可以作为一种蛋白稳定剂应用在果乳饮料及乳饮 料中。
     (2) 桃胶多糖及其提取物中蛋白质含量极低, 赋予样品良好的溶解性和稳定性, 使 桃胶多糖和桃胶多糖提取物的具有广泛的应用领域, 且性能可靠。
     本发明中的使用的原料、 试剂和设备皆市售可得。
     本发明中, 上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合, 即得本发明各 较佳实例。
     本发明的积极进步效果在于 :
     一、 本发明桃胶多糖及其提取物的制备方法不同于传统的工艺, 克服了常规桃胶 加工工艺需进行高温、 强碱水解的不足之处, 是一种新的桃胶多糖及其提取物的制备工艺, 采用生物酶法技术、 低温水解技术、 树脂吸附分离控制技术和脱色技术等生产工艺, 能够确 保得到的桃胶多糖以及桃胶多糖提取物的各项物化性质满足食品、 药品、 化妆品以及轻化 工领域的使用要求。
     二、 本发明的制备方法反应条件温和, 能够避免桃胶多糖在反应过程中发生分解,
     保持了桃胶多糖的天然状态, 不影响桃胶多糖的产品性能, 并且去除了与桃胶多糖结合的 糖蛋白, 以及残留农药等杂质, 从而确保产品的安全性、 稳定性、 有效性和可控性。 由此使得 桃胶多糖及其提取物的分子量、 粘度、 外观颜色等使用性能和市场价值完全符合市场要求, 具有广泛的产业化前景和使用前景。
     三、 本发明的桃胶多糖和桃胶多糖提取物可作为稳定剂, 具有优异的应用特性, 可 以广泛作为药品、 食品、 化妆品和轻化工领域中的稳定剂, 尤其能够作为乳制品的稳定剂。 附图说明
     图 1 为桃胶多糖 1 的红外光谱图。
     图 2 为桃胶多糖 1 的紫外光谱图。
     图 3 为效果实施例 2 中, 用显微快速判断法记录的空白对照实验的乳液在放置 30min 后的显微观察图。
     图 4 为效果实施例 2 中, 用显微快速判断法记录的乳液样品在 -18℃保存 5 天后的 显微观察图。
     图 5 为效果实施例 2 中, 用显微快速判断法记录的乳液样品在 8℃保存 5 天后的显 微观察图。
     图 6 为效果实施例 2 中, 用显微快速判断法记录的乳液样品在 30℃保存 5 天后的 显微观察图。
     图 7 为效果实施例 2 中, 用显微快速判断法记录的乳液样品在 40℃保存 5 天后的 显微观察图。 具体实施方式
     下面用实施例来进一步说明本发明, 但本发明并不受其限制。
     实施例中的碱性蛋白酶、 中性蛋白酶和复合蛋白酶购于南宁庞博生物工程有限公 司。
     实施例 4 中的透析袋的型号为 R-25--3.5K, 购于济南浩博生物技术有限公司。
     下述实施例中所涉及的测试方法有 :
     一、 桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量的测定方法为 :
     以木糖为标准品, 采用苯酚 - 硫酸法 ( 张惟杰 . 糖复合物生化研究技术 [M]. 浙江 大学出版社 .2003) 测定桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量。
     (1) 绘制木糖标准曲线 :
     以木糖为标准品, 分别配制标准溶液。 取木糖标准溶液, 加入 6%苯酚溶液, 加入浓 硫酸, 静置 10min, 摇匀, 进行显色反应至溶液呈橙红色。在波长 480nm 处测定吸光度值, 用 经同样显色操作后的水为空白对照。 以吸光度值为纵坐标, 木糖量为横坐标, 绘制标准曲线 (y = ax+b)。
     (2) 桃胶多糖相当于木糖的换算因子的确定 :
     准确称取桃胶多糖, 纯水溶解, 作为待测液 1。取适量待测液 1, 按与标准曲线显色 方法相同的操作进行显色反应后, 测定其在 480nm 处的吸光度值, 按下式计算桃胶多糖相 当于木糖的换算因子 :f = W1/CD 式1
     式1中: f- 桃胶多糖相当于木糖的换算因子
     W1- 反应体系中桃胶多糖的质量 (g)
     C- 根据标准曲线计算所得反应体系中样品相当于木糖的质量 (g, C = (y-b)/a)
     D- 待测液 1 稀释倍数
     (3) 桃胶多糖含量的测定
     准确称取桃胶多糖提取物, 纯水溶解, 作为待测液 2。取适量待测液 2, 按标准曲线 检测方法操作, 测定其在 480nm 处的吸光度值, 根据以下公式计算桃胶多糖含量 : ,
     X = CDf/W2 式2
     式2中: X- 桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量 (wt% )
     W2- 反应体系中桃胶多糖提取物的质量 (g)
     C- 根据标准曲线计算所得反应体系中样品相当于木糖的质量 (g, C = (y-b)/a)
     D- 待测液 2 的稀释倍数
     f- 换算因子
     该桃胶多糖含量的测试方法由于采用的是自身对照的方法, 因此测试结果存在本 领域普遍能够接受的误差。 二、 桃胶多糖的组成确定方法 :
     采用硅胶薄层层析法, 用标准单糖 : 阿拉伯糖、 木糖、 半乳糖、 葡萄糖醛酸、 甘露糖、 葡萄糖、 鼠李糖和岩藻糖作为对照, 对桃胶多糖提取物和桃胶多糖进行薄层层析。
     薄层层析条件 :
     展 开 剂 为 正 丁 醇 ∶ 乙 酸 乙 酯 ∶ 异 丙 醇 ∶ 乙 酸 ∶ 水 ∶ 吡 啶 = 7 ∶ 20 ∶ 12 ∶ 7 ∶ 6 ∶ 6。( 体积比 )
     显色剂 : 茴香胺 1.23g、 邻苯二甲酸 1.66g, 溶于 100ml 85% wt 乙醇溶液, 摇匀, 临 用时配制。
     三、 中性总糖成分含量分析方法 :
     采用气相色谱法, 用标准单糖阿拉伯糖、 木糖、 半乳糖、 甘露糖、 葡萄糖、 鼠李糖作 为对照, 采用三氟乙酸法对桃胶多糖进行水解, 并制备成糖醇乙酸酯后进行气相 - 质谱分 析。
     检测方法 :
     检测仪器 : Agilent GC7890/MS D5973N 气质连用仪。
     色谱条件 : 色谱柱 DB-5MS(30m*0.25nm*0.25μm)。采用程序升温法, 150 ℃升到 220℃, 保持 5min, 再升到 250℃, 保持 5min。
     质谱条件 : 离子化方式 EI, 70eV。
     四、 桃胶多糖及桃胶多糖提取物中葡萄糖醛酸含量的测定方法 :
     方法 : 咔唑硫酸法, 以葡萄糖醛酸内酯为标准。
     五、 桃胶多糖及桃胶多糖提取物中鞣质的检测 : 取待测样品的水溶液 1ml, 加三氯 化铁试液 1 ~ 2 滴, 若溶液呈现绿色、 蓝黑色或暗紫色即说明反应呈阳性, 样品中含鞣质, 反 之则说明不含鞣质。
     六、 桃胶多糖及桃胶多糖提取物中淀粉和糊精的检测 : 将待测样品的水溶液煮沸
     冷却后, 加碘 2 ~ 3 滴, 若溶液呈蓝色、 绿色即说明反应呈阳性, 样品中含淀粉 ; 若溶液呈红 色, 即反应也呈阳性, 说明样品中含有糊精, 反之则说明样品中不含淀粉和糊精, 反应呈阴 性。
     实施例 1 桃胶多糖提取物
     桃胶多糖提取物的制备方法为 :
     (1) 粉碎 : 将天然原桃胶进行粉碎, 全部通过 20 目标准筛, 得到天然原桃胶粗粉, 备用。称上述天然原桃胶粗粉 25g, 倾入 2000ml 三口烧瓶中, 向其中加入纯水 125ml(5ml/g 桃胶粗粉 ), 形成桃胶混悬液 ;
     (2) 生物酶解 : 将桃胶混悬液加热至 40℃, 向其中加入碱性蛋白酶 0.63g(0.005g/ ml 桃胶混悬液 ), 保温并搅拌 1h, 进行生物酶解, 得料液 1 ;
     (3) 低温水解 : 将料液 1 升温至 40℃, 向其中加入固体氢氧化钠 12.5g(0.1g/ml 料 液 1), 保温并搅拌 1h, 进行低温水解, 得料液 2 ;
     (4) 调节 pH : 向料液 2 中加入纯水 500ml(20ml/g 桃胶粗粉 ), 在 40℃条件下, 保温 并搅拌 0.5h, 桃胶全部溶解成透明溶液 ; 用稀盐酸 ( 浓盐酸∶水为体积比 1 ∶ 4) 调节料液 pH = 6.5, 过滤, 得精滤液 ; (5) 纯化 : 上述精滤液上氢型阳离子交换树脂分离柱 ( 型号 : 924, 吸附量 2.4g/ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗 脱液 1 ; 将洗脱液 1 上弱碱性阴离子交换树脂分离柱 ( 型号 : 900, 吸附量为 2.4g/ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得洗脱液 2 ; 洗脱液 2 再用大孔吸附树脂 ( 型号 : AB-8, 对多糖的吸附量为 0.34mg/ml 湿树脂 ) 进行分 离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集, 得纯化 液, 对并用纯化液体积 3%的活性白土对纯化液进行脱色处理, 得料液 3 ;
     (6) 浓缩 : 利用旋转蒸发器对料液 3 进行减压浓缩, 浓缩条件 : 在 60℃、 -0.085Mpa 的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液 3 中固含量达 6.0%时, 停止浓缩, 得浓缩液 ;
     (7) 干燥 : 将浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉, 得桃胶多糖提取物 15.1g, 收率 为 60.4%, 平均分子量为 150,000 道尔顿。
     该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖 87.3wt%, 氮元素 0.056wt%, 鞣质未检出, 糊 精未检出, 淀粉未检出, 灰分 1.9wt% ; 该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重量 的 14.2%。
     该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 3.36Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 6.02。
     薄层层析法显示 : 桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、 葡萄糖、 木糖、 鼠李糖、 半乳 糖、 甘露糖和葡萄糖醛酸。
     实施例 2 桃胶多糖提取物
     桃胶多糖提取物的制备方法为 :
     (1) 研 磨 : 将 树 干 中 采 摘 的 湿 桃 胶 30.0g 剪 切、 粉 碎, 向其中加入纯水 700ml(23.3ml/g 湿桃胶 ), 置于 50℃纯水中溶胀 24h, 研磨, 得桃胶混悬液备用。
     (2) 生物酶解 : 将上述桃胶混悬液倾入 2000ml 三口烧瓶中, 加热至 50℃, 向其中加 入中性蛋白酶 22.5g(0.032g/ml 桃胶混悬液 ), 保温并搅拌 3h, 进行生物酶解, 得料液 1 ;
     (3) 低温水解 : 将料液 1 升温至 50℃, 向其中加入固体氢氧化钠 140g(0.2g/ml 料 液 1), 保温并搅拌 3h, 进行低温水解, 得料液 2 ;
     (4) 调节 pH : 向料液 2 中加入纯水 1500ml(50ml/g 湿桃胶 ), 在 50℃条件下, 保温 并搅拌 0.5h, 桃胶全部溶解成透明溶液 ; 用稀盐酸 ( 浓盐酸∶水为体积比 1 ∶ 4) 调节料液 pH = 6.5, 过滤, 得精滤液 ;
     (5) 纯化 : 将上述精滤液上钠型阳离子交换树脂分离柱 ( 型号 : D001, 吸附量为 2.8g/ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止 收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上弱碱性阴离子交换树脂分离柱 ( 型号 : D301-F, 吸附量为 2.8g/ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止 收集, 得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再用大孔吸附树脂 ( 型号 : NKA-9, 对多糖的吸附量为 0.30mg/ ml 树脂 ) 进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停 止收集, 得纯化液, 对并用纯化液体积 0.5%的活性炭对纯化液进行脱色处理, 得料液 3 ;
     (6) 浓缩 : 利用旋转蒸发器对料液 3 进行减压浓缩, 浓缩条件 : 在 70℃、 -0.085Mpa 的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液 3 中固含量达 8.0%时, 停止浓缩, 得浓缩液 ;
     (7) 干燥 : 将浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉, 得桃胶多糖提取物 13.5g, 收率 为 45.0%, 平均分子量为 70,000 道尔顿。 该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖 98.5wt%, 氮元素 0.073wt%, 鞣质未检出, 糊 精未检出, 淀粉未检出, 灰分 1.6wt% ; 该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重量 的 20.0%。
     该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 2.59Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 5.06。
     薄层层析法显示 : 桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、 葡萄糖、 木糖、 鼠李糖、 半乳 糖、 甘露糖和葡萄糖醛酸。
     实施例 3 桃胶多糖提取物
     桃胶多糖提取物的制备方法为 :
     (1) 粉碎 : 将天然原桃胶进行粉碎, 全部通过 20 目标准筛, 得到天然原桃胶粗粉, 备用。 称上述天然原桃胶粗粉 25g, 倾入 5000ml 三口烧瓶中, 向其中加入纯水 1500ml(60ml/ g 桃胶粗粉 ), 形成桃胶混悬液 ;
     (2) 生物酶解 : 将桃胶混悬液加热至 60℃, 向其中加入复合蛋白酶 75.0g(0.05g/ ml 桃胶混悬液 ), 保温并搅拌 5h, 进行生物酶解, 得料液 1 ;
     (3) 低温水解 : 将料液 1 升温至 60℃, 向其中加入固体氢氧化钠 600g(0.4g/ml 料 液 1), 保温并搅拌 5h, 进行低温水解, 得料液 2 ;
     (4) 调节 pH : 向料液 2 中加入纯水 3000ml(120ml/g 桃胶粗粉 ), 在 60℃条件下, 保 温并搅拌 0.5h, 桃胶全部溶解成透明溶液 ; 用稀盐酸 ( 浓盐酸∶水为体积比 1 ∶ 4) 调节料 液 pH = 6.5, 过滤, 得精滤液 ;
     (5) 纯化 : 将上述精滤液上钠型阳离子交换树脂分离柱 ( 型号 : D001, 吸附量为 2.8g/ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止 收集, 得洗脱液 1 ; 将洗脱液 1 上弱碱性阴离子交换树脂分离柱 ( 型号 : 900, 吸附量为 2.4g/ ml 树脂 ), 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,
     得洗脱液 2 ; 将洗脱液 2 再用大孔吸附树脂 ( 型号 : D 101, 对多糖的吸附量为 0.26mg/ml 树 脂 ) 进行分离, 纯水洗脱, 收集洗脱液, 采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收 集, 得纯化液, 对并用纯化液体积 0.5%的活性炭对纯化液进行脱色处理, 得料液 3 ;
     (6) 浓缩 : 利用旋转蒸发器对料液 3 进行减压浓缩, 浓缩条件 : 在 80℃、 -0.085Mpa 的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液 3 中固含量达 5.0%时, 停止浓缩, 得浓缩液 ;
     (7) 干燥 : 将浓缩液进行喷雾干燥, 收集喷雾干粉, 得桃胶多糖提取物 10.8g, 收率 为 43.2%, 平均分子量为 8,000 道尔顿。
     该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖 101.6wt %, 氮元素 0.067wt %, 鞣质未检出, 糊精未检出, 淀粉未检出, 灰分 0.5wt% ; 该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重 量的 10.6%。由于测试方法的限制, 桃胶多糖含量高于 100%是由实验误差导致的。
     该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 1.42Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 4.31。
     薄层层析法显示 : 桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、 葡萄糖、 木糖、 鼠李糖、 半乳 糖、 甘露糖和葡萄糖醛酸。
     实施例 4 桃胶多糖
     一、 桃胶多糖的制备
     将上述实施例 1 ~ 3 所得的桃胶多糖提取物分别用 Sevag 法和透析法进行纯化, 得到 3 个桃胶多糖 :
     ①用纯水溶解桃胶多糖提取物 ( 纯水用量为 600ml/g 桃胶多糖提取物 ) 得水溶 液;
     ②加入水溶液体积 1/5 的三氯甲烷, 再加入三氯甲烷体积 1/5 的正丁醇, 剧烈振摇 20min, 离心, 分去水相和有机相交界处的变性蛋白质 ;
     ③重复步骤②至水相在 280nm 处的吸光度值不再下降为止 ; 其中三氯甲烷和正丁 醇加入步骤②中的水相中。
     ④将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液, 向该浓缩液中加入浓缩液体积量 3 倍 的 95%乙醇, 充分混合, 离心, 得沉淀物 1。将该沉淀物 1 用其重量 100 倍的去离子水溶解, 离心, 去不溶物, 得清夜 1。将该清液 1 装入透析袋内进行透析, 用去离子水冲洗 12h, 收集 透析袋中透析后的清液 2。将该清液 2 与其 3 倍体积量的无水乙醇充分混合, 再次离心, 得 沉淀物 2。用无水乙醇对该沉淀物 2 脱水后, 于 60℃真空干燥, 得到本发明的桃胶多糖 1 ~ 3, 分别对应实施例 1 ~ 3 中的桃胶多糖提取物。
     二、 桃胶多糖的性质
     1、 桃胶多糖红外光谱分析 :
     红外光谱条件 : 溴化钾压片 ; 样品扫描次数 : 32 次 ; 背景扫描次数 : 32 次 ; 分辨率 : 4.000 ; 样品得率 : 1.0 ; 镜速度 : 0.6329 ; 孔径 : 100.00 ; 检测器 : DTGS KBr ; 光源 : IR。 -1
     结论 : 本发明的桃胶多糖 1 ~ 3 在 4000 ~ 650cm 具有多糖类物质的一般特征, 表现为 : 在 3600 ~ 3300cm-1 区有强峰、 宽峰 (3417cm-1), 对应于缔合羟基的 O-H 键伸缩振 -1 动, 说明是多聚糖 ; 2929cm 有一弱峰, 为 C-H 吸收峰 ; 1616.1cm-1 的吸收峰是羧酸离子的 C = O 非对称伸缩振动, 说明桃胶多糖中含有羧基, 以此推断其中含有葡萄糖醛酸 ; 1400 ~ -1 -1 1200cm 的一些峰为 C-H 的变角振动 ; 1260 ~ 1000cm 区间有 C-O 键的伸缩振动 ; 840.8cm-1为 α- 吡喃糖苷键的特征峰, 894.8cm-1 为 β- 吡喃糖苷键的特征峰, 表明桃胶多糖的结构 中同时有 α- 吡喃糖苷键和 β- 吡喃糖苷键。
     2、 桃胶多糖紫外光谱分析
     桃胶多糖 1 ~ 3 经紫外分光光度仪在 200 ~ 400nm 进行波长扫描, 结果显示在 260nm 和 280nm 处均无紫外吸收峰, 表明该桃胶多糖样品中不含核酸和蛋白质, 多糖纯度很 高, 桃胶多糖 1 的紫外光谱图见图 2, 桃胶多糖 2 和 3 同图 2。
     3、 经检测, 桃胶多糖 1 ~ 3 均不含鞣质、 淀粉和糊精。
     4、 薄层层析法显示 : 桃胶多糖 1 ~ 3 中皆含有阿拉伯糖、 葡萄糖、 木糖、 鼠李糖、 半 乳糖、 甘露糖和葡萄糖醛酸。
     5、 成分和性能数据 :
     桃胶多糖 1 : 桃胶多糖的收率为 97.3%, 平均分子量为 150,000。
     经 GC-MS 检测, 桃胶多糖 1 中, 中性总糖包括下列含量的糖基 : 51.71%阿拉伯糖、 33.29 %的葡萄糖、 9.24 %的木糖、 1.28 %的鼠李糖、 1.29 %的半乳糖和 0.63 %的甘露糖 ; 含量为相对于桃胶多糖 1 重量的百分比。
     经咔唑硫酸法检测, 桃胶多糖 1 中含有葡萄糖醛酸 14.9% ; 含量为相对于桃胶多 糖 1 重量的百分比。
     该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 3.36Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 6.02, 桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 比旋度为 桃胶多糖 2 : 桃胶多糖的收率为 98.6%, 平均分子量为 70,000。
     经 GC-MS 检测, 桃胶多糖 2 中, 中性总糖包括下列含量的糖基 : 50.61%阿拉伯糖、 32.29%的葡萄糖、 10.24%的木糖、 1.98%的鼠李糖、 1.69%的半乳糖和 1.03%的甘露糖 ; 含量为相对于桃胶多糖 1 重量的百分比。
     经咔唑硫酸法检测, 桃胶多糖 2 中含有葡萄糖醛酸 20.1% ; 含量为相对于桃胶多 糖 2 重量的百分比。
     该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 2.59Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 5.06, 桃胶多糖水溶液
     ( 浓度为 1wt% ) 的比旋度为 桃胶多糖 3 : 桃胶多糖的收率为 98.3%, 平均分子量为 8,000。
     经 GC-MS 检测, 桃胶多糖 3 中, 中性总糖包括下列含量的糖基 : 52.03%阿拉伯糖、 32.23 %的葡萄糖、 8.73 %的木糖、 1.05 %的鼠李糖、 1.46 %的半乳糖和 0.57 %的甘露糖 ; 含量为相对于桃胶多糖 1 重量的百分比。
     经咔唑硫酸法检测, 桃胶多糖 3 中含有葡萄糖醛酸 10.8% ; 含量为相对于桃胶多 糖 3 重量的百分比。
     该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的特性粘度为 1.42Pa.S ; 25℃下, 由 NDJ-1 动力粘度计测得。该桃胶多糖水溶液 ( 浓度为 10wt% ) 的 pH 值为 4.32, 该桃胶多糖水溶
     液 ( 浓度为 1wt% ) 的比旋度为
     效果实施例 1 桃胶多糖和桃胶多糖提取物的溶解性和稳定性1、 溶解性 :
     分别称取一定量的实施例 4 中的桃胶多糖 1 ~ 3 和实施例 1 ~ 3 中的桃胶多糖提 取物 ( 简称提取物 1 ~ 3), 溶于一定量的各种溶剂中, 高速均匀搅拌, 待桃胶多糖和桃胶多 糖提取物溶解或均匀分散后, 将溶液离心后观察其状态, 具体方法和结果见表 1。表 1 中乳 化液的制备方法为 : 桃胶多糖或其提取物配制成 5%的水溶液, 用柠檬酸调节其 pH 为 4.0, 加入体积总量 2% (v/v) 的芳香姜油, 16,000r/min 进行剪切乳化, 乳化条件 : 20℃, 20min ; 制成初乳, 然后经高压均质机在 40-70mpa 压力下进行乳化, 即得乳化液。
     表1
     由表 1 可见 :
     (1) 本发明桃胶多糖和桃胶多糖提取物均可以溶解于水、 含可溶性蛋白的水溶液 以及低浓度的有机溶剂 ( 乙醇、 丙二醇、 丁二醇、 甘油等 ) 中, 同时桃胶多糖和桃胶多糖提取 物均可以溶解或分散于乳化液 ( 软磷脂、 油脂等 ) 中。
     (2) 添加了桃胶多糖和桃胶多糖提取物的各类混合液的体系均十分稳定, 无分层 和 / 或沉淀现象发生, 说明桃胶多糖和桃胶多糖提取物对稳定溶液体系具有明显的作用。
     2、 稳定性
     (1) 分别配制 pH = 4.0、 6.0、 8.0、 10.0 的溶液中, 将桃胶多糖 1 ~ 3 和桃胶多糖 提取物 1 ~ 3 溶解于上述 pH 值溶液中, 分别配制成 5.0wt%和 10.0wt%两种浓度。以纯水 溶解桃胶多糖和桃胶多糖提取物作为基础对照数据。在室温保存条件下, 分别于 0h、 1 天、 2 天、 5 天、 15 天、 30 天测定其粘度、 透光率和 pH 值变化。
     试验结果表明 : 桃胶多糖 1 ~ 3 和桃胶多糖提取物 1 ~ 3 经上述测试, 粘度、 透光 率和 pH 均无明显变化, 外观透明、 无分层和沉淀现象, 证明其有良好的稳定性。
     (2) 桃胶多糖和桃胶多糖提取物别配制成浓度为 5.0wt%和 10.0wt%的水溶液, 将上述样品溶液分别置于 -18℃ ( 冰柜冷冻 )、 室温、 40℃、 60℃、 80℃条件下, 放置 0、 5、 10、 15、 20、 30 天, 取样, 测定粘度、 透光率和 pH 值变化。
     试验结果表明 : 桃胶多糖和桃胶多糖提取物经上述测试, 粘度、 透光率和 pH 均无 明显变化, 外观透明、 无分层和沉淀现象, 证明其有良好的稳定性。
     (3) 桃胶多糖和桃胶多糖提取物别配制成 5.0wt% h 和 10.0wt 的溶液, 述样品溶 液分别置于自然光照条件下, 放置 0、 5、 10、 15、 20、 30 天, 取样, 测定粘度、 透光率和 pH 值变 化。
     试验结果表明 : 桃胶多糖和桃胶多糖提取物经上述测试, 粘度、 透光率和 pH 均无 明显变化, 外观透明、 无分层和沉淀现象, 证明其有良好的稳定性。
     (4) 分别取桃胶多糖和桃胶多糖提取物粉末, 用 PE 袋塑封包装, 外套一只 PE 袋用 扎口绳扎口。 将该包装好的样品置于 -18℃ ( 冰柜冷冻 )、 25℃、 40℃和 60℃保存, 分别于第 1、 2、 3、 6 个月取样, 重点考察以下项目 : 外观、 pH 值、 粘度、 分子量、 透光率、 葡萄糖醛酸含量 和桃胶多糖含量。
     试验结果表明 : 桃胶多糖和桃胶多糖提取物经上述测试, 样品粉末色泽均物变化, 无结块现象发生 ; 样品溶解后测定其 pH、 粘度、 分子量和透光率均无明显变化, 外观透明、 无分层和沉淀现象 ; 桃胶多糖提取物中萄糖醛酸含量和桃胶多糖含量均无明显变化。 效果实施例 2 桃胶多糖提取物在乳饮料中的应用
     采用实施 1 的桃胶多糖提取物, 葡萄糖醛酸含量为 14.2%。
     1. 乳液样品的制备方法 :
     (1) 溶液一的配制 (2%全脂奶粉水混悬溶液 ) : 称 6.0g 全脂奶粉溶解于 300ml 纯 水中, 快速搅拌至全部溶解, 备用 ;
     (2) 溶液二的配制 (2 %桃胶多糖提取物溶液 ) : 称 4.0g 桃胶多糖提取物溶解于 200ml 0.1%的尼泊金乙酯水溶液中, 快速搅拌至全部溶解, 备用 ;
     (3) 将 120ml 溶液二在快速搅拌状态下加入溶液一中, 搅拌均匀测乳液 pH = 7.04。向其中加入 5%柠檬酸水溶液 11.5ml 调节乳液 pH = 3.90, 测乳液温度为 : 28.5℃。
     (4) 利用高剪切乳化分散机对上述乳液进行乳化, 乳化条件 : 16000r/min ; 乳化时 间: 20 分钟。乳化结束, 测乳液温度为 : 39.0℃。
     (5) 将上述乳液加热至 80℃, 保温 30 分钟灭菌。灭菌结束后, 静置 30 分钟, 乳液 无沉淀、 絮凝产生, 体系呈乳白色稳定体系, 降温至室温 (30℃ ), 得乳液样品。
     (6) 空白对照实验 : 向溶液一中加入 5 %柠檬酸水溶液 11.5ml 调节乳液 pH = 3.90, 测乳液温度为 : 28.9 ℃ ; 利用高剪切乳化分散机对上述乳液进行乳化, 乳化条件 : 16000r/min ; 乳化时间 : 20 分钟。乳化结束, 测乳液温度为 : 38.3 ℃ ; 将上述乳液加热至 80℃, 保温 30 分钟灭菌。得空白对照乳液, 灭菌结束后, 静置 30 分钟, 降温至室温 (30℃ ), 空白对照乳液体系即产生明显的分层, 有沉淀、 絮凝现象产生, 乳液不稳定, 将乳液置于 100 倍光学显微镜下观察, 具体结果见图 3。
     2. 稳定性测试结果 :
     (1) 离心沉淀法 : 在离心管中加入适量上述乳液样品, 利用低速离心机在 4000r/ min 的转速下离心 30min, 弃去离心管中的乳液, 离心管倒置在滤纸上 30min, 称量底部沉淀
     物重量, 按式 3 计算沉淀率, 沉淀率越小, 说明乳液样品越稳定。
     将乳液样品分别置于冷冻 (-18℃ )、 冷藏 (8℃ )、 恒温恒湿箱 (40℃ )、 室温 (30℃ ) 中放置 5 天, 用离心沉淀法考察在不同温度下放置 5 天前后, 乳液样品的稳定性, 具体数据 如表 2 所示 :
     表 2 离心沉淀率
     初始样品离心沉淀率 (% ) -18℃ 8℃ 室温 (30℃ ) 40℃
     0.99 0.99 0.99 0.99 5 天后样品离心沉淀率 (% ) 1.76 1.44 1.05 0.96(2) 体系稳定常数法 :
     本法是研究乳液稳定性的定量方法, 乳液离心前后光密度变化百分率称为稳定常 数, 用 Ke 表示, 其表达式如式 4 所示 :
     Ke = (Ao-A)/A×100% 式4
     式 4 中, Ke——稳定常数
     Ao——未离心乳液的吸光度
     A——离心后乳液的吸光度
     测定方法 :
     取适量乳液样品于离心管中, 用低速离心机在 4000r/min 的转速下离心 30min, 用 紫外分光光度计在波长 780nm 处测定其吸光度 A, 再与离心前样品吸光度 A0 比较, 带入公式 计算 Ke。Ke 值愈小乳剂愈稳定。同时, 直接以 H = A/A0×100%的比值也可作为乳液体系 稳定性的判断指标。H 值为 : 98%~ 100%说明体系稳定。若低于此值则表明乳液的稳定性 差。
     将乳液样品在不同温度下放置 5 天, 用体系稳定法考察样品稳定性, 具体数据如 表 3 所示 :
     表 3 体系稳定常数
     Ke 值 (% ) -18℃ 8℃ 1.50 0.95 H 值 (% ) 98.51 99.0617102372789 A CN 102372792 室温 (30℃ ) 40℃
     说0.69 0.33明书99.31 99.6614/14 页(3) 显微快速判断法 : 将上述乳液样品置于 100 倍光学显微镜下观察, 如果样品乳 糜颗粒大小均匀, 分散性好, 无聚结现象, 说明体系稳定。
     乳液样品在不同温度条件 : -18℃、 8℃、 40℃和 30℃中放置 5 天, 显微快速判断法 考察体系稳定性, 具体结果见图 4 ~ 7。乳液样品 ( 试验样品 ) 放置 5 天后与 5 天前相比几 乎没有变化。空白对照样品静置 30 分钟后即发生絮凝等现象。
     3. 结论
     从上述稳定性试验来看, 桃胶多糖提取物具有稳定牛奶蛋白的作用 ; 常温、 冷冻、 冷藏或 40℃储藏, 均具有较好的稳定性, 因此桃胶多糖提取物作为牛奶体系中的稳定剂具 有较好的应用前景。

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1、10申请公布号CN102372789A43申请公布日20120314CN102372789ACN102372789A21申请号201010261558722申请日20100825C08B37/00200601C08L5/00200601A23L1/03200601A61K47/36200601A61K8/73200601A61Q19/0020060171申请人上海辉文生物技术有限公司地址201210上海市浦东新区沔北路185号F2申请人唯一食品株式会社骆峰72发明人骆峰刘桂云周自华杨海延74专利代理机构上海智信专利代理有限公司31002代理人薛琦朱水平54发明名称一种桃胶多糖及其提取物,及其制。

2、备方法和应用57摘要本发明公开了一种桃胶多糖,其主要由7098WT的中性总糖组成;且不含核酸、蛋白、鞣质、糊精和淀粉等杂质;该中性总糖中含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的530,该桃胶多糖的平均分子量为3000道尔顿以上,该桃胶多糖水溶液的动力粘度为0540帕秒,PH值为4065;比旋度为本发明还提供了该桃胶多糖的提取物,以及它们的制备方法和作为稳定剂的应用。本发明桃胶多糖及其提取物的制备方法能够确保桃胶多糖的各项物化性质满足食品、药品、化妆品以及轻化工领域的使用要求,且保持了桃胶多糖的天然状态,不影响桃胶多糖的产品性能,并能确保产品的安全性、稳定性、有效性和可控性,具有广泛的产业化前景和使用前。

3、景。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书14页附图4页CN102372792A1/3页21一种桃胶多糖,其特征在于其主要由7098WT的中性总糖组成;且不含核酸、蛋白、鞣质、糊精和淀粉;其中,该中性总糖中含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的530,该桃胶多糖的平均分子量为3000道尔顿以上,浓度为10WT的该桃胶多糖水溶液25的动力粘度为0540帕秒;浓度为10WT的桃胶多糖水溶液的PH值为4065;浓度为1WT的该桃胶多糖水溶液的比旋度为2如权利要求1所述的桃胶多糖,其特征在于所述中性总糖的含量为9098;所述葡萄糖醛酸的含量为1020;百分比皆为相。

4、对于所述桃胶多糖的重量百分比;所述的平均分子量为3000200,000道尔顿,较佳的为8000150,000;浓度为10WT的该桃胶多糖水溶液25的动力粘度为1434帕秒。3如权利要求1或2所述的桃胶多糖,其特征在于所述中性总糖主要包括下列含量的糖基阿拉伯糖3060,较佳的为5055;葡萄糖0135,较佳的为3035;木糖530,较佳的为510;鼠李糖15,较佳的为12;半乳糖015,较佳的为12;以及甘露糖015,较佳的为0515;上述含量为相对于所述桃胶多糖的重量百分比。4一种桃胶多糖提取物,其特征在于其主要由下述重量百分比的组分组成如权利要求13中任一项所述的桃胶多糖80998;氮元素0。

5、0102;以及灰分023;该桃胶多糖提取物中不含鞣质、糊精和淀粉;其中,所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量为桃胶多糖提取物重量的528;浓度为10WT的该桃胶多糖提取物水溶液25的动力粘度为0540帕秒;该桃胶多糖提取物的平均分子量为3000道尔顿以上;浓度为10WT的该桃胶多糖提取物水溶液的PH值为4065。5如权利要求4所述的桃胶多糖提取物,其特征在于所述桃胶多糖的含量为8799;所述灰分的含量为032;所述葡萄糖醛酸的含量为1020;含量皆为相对于桃胶多糖提取物重量的百分比;浓度为10WT的该桃胶多糖提取物水溶液25的动力粘度为1434帕秒;所述的平均分子量为3000200,000道尔顿,较。

6、佳的为8000150,000。6如权利要求4或5所述的桃胶多糖提取物的制备方法,其特征在于其包括如下步骤1粉碎或研磨将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉,并将其溶散于纯水中得桃胶混悬液;或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液;2生物酶解将该桃胶混悬液加热至4060,在生物酶的作用下,在保温和搅拌条件下进行酶解,得料液1;所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为0005005G/ML;3低温水解于4060,将该料液1与氢氧化钠混合,在保温和搅拌条件下进行水解,得料液2;该氢氧化钠在该料液1中的浓度为00306G/ML。4调节PH在4060下,在保温和搅拌条件下,将该料液2与纯水混合形成透明溶液,用P。

7、H调节剂将PH值调节至6065,过滤,得精滤液;5纯化利用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离,得到纯化液,用活性炭或活性白土进行脱色处理,得料液3;6浓缩减压浓缩该料液3,至其固含量50WT,得浓缩液;权利要求书CN102372789ACN102372792A2/3页37干燥将该浓缩液进行喷雾干燥,收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。7如权利要求6所述的桃胶多糖提取物的制备方法,其特征在于步骤1中,所述的桃胶粗粉的粒径为2040目;所述纯水的用量为560ML/G桃胶粗粉或湿桃胶;所述的研磨用胶体磨进行;所述溶胀的温度为4060,溶胀时间以使湿桃胶充分溶胀即可;步骤2中,所述。

8、的生物酶为糖蛋白酶,较佳的为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰酶中的一种或多种;所述的酶解时间以使酶解完成为止,较佳的为15小时;步骤3中,所述的氢氧化钠以纯固体的形式或水溶液的形式与料液1混合,氢氧化钠在料液1中的浓度为0104G/ML;当以水溶液形式混合时,氢氧化钠水溶液的重量浓度较佳的为550;所述的水解时间以使水解完成为止,较佳的为15小时;步骤4中,所述纯水的用量为20120ML/G桃胶粗粉或湿桃胶;所述的溶解时间以使料液2能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可,较佳的为052小时,更佳的为051小时;所述的PH调节剂为醋酸和/或稀盐酸;步骤5中,所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子。

9、交换树脂;所述的阳离子交换树脂较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂;所述的阴离子交换树脂较佳的为弱碱性阴离子交换树脂;所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂,较佳的为D101、AB8、NK109、H103、NKA9或ADS17;所述活性炭或活性白土的用量为所述纯化液体积的053;所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为将所述精滤液上阳离子交换树脂分离柱,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液1;将洗脱液1上阴离子交换树脂分离柱,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液2;将洗脱液2再用。

10、大孔吸附树脂进行分离,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得纯化液;步骤6中,所述的减压浓缩的温度为5080,压力为0085MPA0050MPA。8如权利要求13中任一项所述的桃胶多糖的制备方法,其特征在于其包括下述步骤1根据权利要求6或7的方法制备桃胶多糖提取物;2纯化。9如权利要求8所述的桃胶多糖的制备方法,其特征在于步骤2的纯化采用SEVAG法及透析法来实现,该纯化的具体步骤较佳地按下述步骤进行将桃胶多糖提取物与纯水混合,得桃胶多糖提取物水溶液;其中,所述纯水的用量较佳的400ML/G600ML/G桃胶多糖提取物;加入所述水溶液体积1/31/5的三氯甲烷。

11、,再加入所述三氯甲烷体积1/31/5的正丁醇,剧烈振摇1530分钟,离心,分去水相和有机相交界处的变性蛋白质;重复步骤,直至水相在280NM处的吸光度值不再下降为止;其中,重复步骤时,再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤的水相中;将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液,将该浓缩液与95乙醇充分混合,离心得沉淀物1;将该沉淀物1与纯水混合,离心,去除不溶物,得清液1;将清液1于透析袋内进行透析,用纯水冲洗1216小时,收集透析袋中透析后的清液2;将该清液2与无水乙醇混合,再次离心得沉淀物2;用无水乙醇对该沉淀物2进行脱水后于6080真空干燥,即得桃胶多糖;其中,95乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体。

12、积的3倍5倍;该沉淀权利要求书CN102372789ACN102372792A3/3页4物1与纯水的混合比例较佳的为质量比11001500,更佳的为11001200;该透析袋为能够透过分子量小于3000道尔顿的物质的透析袋;该清液2与无水乙醇的混合比例较佳的为体积比1315。10如权利要求13中任一项所述的桃胶多糖或如权利要求4或5所述的桃胶多糖提取物作为稳定剂的应用;其中,所述的稳定剂较佳的为药品、食品、化妆品、轻化工领域中使用的稳定剂,更佳的为蛋白稳定剂,最佳的为液体乳制品稳定剂,所述的液体乳制品较佳的为牛奶、酸奶或含乳饮料;所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、发酵型含乳饮料和乳酸菌饮料,较。

13、佳的为果乳饮料或调味奶。权利要求书CN102372789ACN102372792A1/14页5一种桃胶多糖及其提取物,及其制备方法和应用技术领域0001本发明涉及一种天然植物多糖,尤其涉及一种桃胶多糖及其提取物,本发明还涉及所述桃胶多糖及其提取物的制备方法和应用。背景技术0002桃胶多糖具有益气、和血、止渴的功效,擅长活血消肿、通淋止痛,临床应用表明其对血淋、石淋、痢疾、腹泻、疼痛等症均有良效;另外,桃胶多糖还可作为一种新型的药用辅料在药物制剂生产中也具有广泛的应用,可作为混悬剂、稳定剂、润滑剂、微胶囊的包囊材料和薄膜包衣材料等。桃胶多糖还可食用,利用桃胶多糖及其提取物的增稠、乳化、凝固等性质。

14、来生产糖果、糕点、乳制品、巧克力、胨胶性食品保鲜膜、饮料等食品。在化妆品领域,桃胶多糖可作为化妆品的稳定剂、增粘剂和润肤剂等。在轻、化工领域,桃胶多糖可应用于印刷工业、印染工业、农药生产、文体工业等领域。0003桃胶多糖可以桃或山桃等蔷薇科植物分泌出的胶质半透明物质作为提取原料提取得到。但该提取原料至今未见产业化报道,大量原料被遗弃,没有使这一丰富的天然资源得到有效利用。因此,对桃胶的开发利用就显得十分必要。0004由于天然原桃胶一般只能浸胀,不易完全溶解,因此,天然原桃胶必须经过加工处理才能满足使用要求。据文献报道,目前桃胶的一般加工方法仅仅是采用高温、强碱水解的工艺来进行生产。这种生产工艺。

15、相对落后,常常会造成桃胶多糖在加工过程中的分解,造成桃胶产品质量的显著下降,分子量降低、粘度下降10WT水溶液,25;NDJ1动力粘度计测得约为11MPAS以及纯度不佳缺陷,并最终影响产品的使用特性。采用这种工艺生产的桃胶粉中由于含有较高量的蛋白、无机盐和鞣质,因此仅能应用于造纸、油漆等化工领域,不能应运用于食品、化妆品、药品等领域。发明内容0005本发明所要解决的技术问题在于克服了现有技术中桃胶加工工艺落后,在加工过程中易造成桃胶多糖分解,导致桃胶提取物品质下降,且由该工艺制得的桃胶提取物含有大量杂质,应用领域窄,难以产业化生产等缺陷,提供了一种桃胶多糖及其提取物,以及其制备方法和应用。本发。

16、明的桃胶多糖提取物的制备方法能获得高收率的提取物,且不会破坏提取物中桃胶多糖的产品性能,进一步提纯后的桃胶多糖中不含有核酸、蛋白、鞣质、糊精和淀粉等杂质,各方面理化性能皆优于现有技术中,并且能够完全符合食品、药品和化妆品领域的应用要求,使用范围广,能够产业化生产,具有广泛的使用前景。0006本发明的目的之一是提供一种桃胶多糖,其主要由7098WT,较佳的为9098WT的中性总糖组成;且不含核酸、蛋白、鞣质、糊精和淀粉等杂质;其中,该中性总糖中含有的葡萄糖醛酸为桃胶多糖重量的530,较佳的为1020;该桃胶多糖的平均分子量为3000道尔顿以上,较佳的为3000200,000道尔顿,更佳的为800。

17、0150,000;浓度为10WT的该桃胶多糖水溶液的动力粘度为0540帕秒PAS,较佳的为14说明书CN102372789ACN102372792A2/14页634帕秒,该粘度为于25由NDJ1动力粘度计测得;浓度为10WT的桃胶多糖水溶液的PH值为4065;浓度为1WT的该桃胶多糖水溶液的比旋度为0007其中,该中性总糖主要包括下列含量的糖基阿拉伯糖3060,较佳的为5055;葡萄糖0135,较佳的为3035;木糖530,较佳的为510;鼠李糖15,较佳的为12;半乳糖015,较佳的为12;以及甘露糖015,较佳的为0515;上述含量为相对于所述桃胶多糖的重量百分比,所述的葡萄糖醛酸包含在所。

18、述葡萄糖中。0008本发明的桃胶多糖为浅白色粉末状物体,具有良好的水溶液稳定性,高分子量和高粘度的特点。0009本发明目的之二是提供了一种桃胶多糖提取物,其主要由下述重量百分比的组分组成所述桃胶多糖80998,较佳的为8799;氮元素00102;以及灰分023,较佳的为032;该桃胶多糖提取物中不含鞣质、糊精和淀粉;其中,所述桃胶多糖中葡萄糖醛酸的含量为桃胶多糖提取物重量的528,较佳的为1020;浓度为10WT的该桃胶多糖提取物水溶液的动力粘度为0540帕秒PAS,较佳的为1434帕秒,该粘度为于25由NDJ1动力粘度计测得;该桃胶多糖提取物的平均分子量为3000道尔顿以上,较佳的为3000。

19、200,000道尔顿,更佳的为8000150,000;浓度为10WT的该桃胶多糖提取物水溶液的PH值为4065。0010其中,所述的灰分为桃胶经高温500600灼烧后的残留物。灰分是标示食品中无机成分总量的一项指标。0011其中,所述鞣质、糊精和淀粉均存在于天然桃胶中,这类物质的存在可能会造成桃胶多糖及其提取物品质的下降,因此,必须将其尽可能从产品中去除,或降低至可接受的程度。0012其中,所述的氮元素指桃胶多糖提取物中含有的蛋白质的氮元素。本发明中的氮元素采用凯式定氮法进行氮元素的测定,可根据该氮含量计算提取物中蛋白质的含量。0013本发明的目的之三是提供所述桃胶多糖提取物的制备方法,其包括。

20、如下步骤00141粉碎或研磨将天然原桃胶干燥后粉碎成桃胶粗粉,并将其溶散于纯水中得桃胶混悬液;或将天然原湿桃胶用纯水溶胀后研磨得桃胶混悬液;00152生物酶解将该桃胶混悬液加热至4060,在生物酶的作用下,在保温和搅拌条件下进行酶解,得料液1;所述生物酶在该桃胶混悬液中的浓度为0005005G/ML;00163低温水解于4060,将该料液1与氢氧化钠混合,在保温和搅拌条件下进行水解,得料液2;该氢氧化钠在该料液1中的浓度为00306G/ML。00174调节PH在4060下,在保温和搅拌条件下,将该料液2与纯水混合形成透明溶液,用PH调节剂将PH值调节至6065,过滤,得精滤液;00185纯化利。

21、用离子交换树脂法和大孔树脂吸附法对该精滤液进行除杂和分离,得到纯化液,用活性炭或活性白土进行脱色处理,得料液3;00196浓缩减压浓缩该料液3,至其固含量50WT,得浓缩液;00207干燥将该浓缩液进行喷雾干燥,收集喷雾干粉即得所述桃胶多糖提取物。0021步骤1中,所述的天然原桃胶指水分含量在15WT以下的桃胶;所述的天然原说明书CN102372789ACN102372792A3/14页7湿桃胶指新鲜桃胶。所述的桃胶粗粉的粒径较佳的为2040目。所述纯水的用量较佳的为560ML/G桃胶粗粉或湿桃胶。所述的研磨较佳的用胶体磨进行。所述溶胀的温度较佳的为4060,溶胀时间以使湿桃胶充分溶胀即可。0。

22、022步骤2中,所述的生物酶较佳的为所有能够酶解糖蛋白,并使其分解成能够用本发明纯化方法去除的小分子化合物的糖蛋白酶,更佳的为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰酶中的一种或多种。现有技术中的所有市售碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰酶都能适用于本发明。其中,所述的酶解时间以使酶解完成为止,较佳的为15小时。0023步骤3中,所述的氢氧化钠可以纯固体的形式或水溶液的形式与料液1混合,无论以何种形式混合,氢氧化钠在料液1中的浓度较佳的为0104G/ML。其中,当以水溶液形式混合时,氢氧化钠水溶液的重量浓度较佳的为550。其中,所述的水解时间以使水解完成为止,较佳的为15小时。0024步骤4。

23、中,所述纯水的用量为使料液2能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可,较佳的为20120ML/G桃胶粗粉或湿桃胶。所述的溶解时间以使料液2能够完全溶解于纯水中形成透明溶液即可,较佳的为052小时,考虑到成本与效率问题,更佳的为051小时。其中,所述的PH调节剂可选用本领域常规的各种弱酸性PH调节剂,较佳的为醋酸和/或稀盐酸。0025步骤5中,所述的离子交换树脂法可采用本领域此类方法的常规操作进行,以除去精滤液中的无机盐和重金属如砷、铅、铬等。其中,所述的离子交换树脂为阳离子和阴离子交换树脂。所述的阳离子交换树脂可使用本领域常规的各种阳离子交换树脂,较佳的为氢型或钠型阳离子交换树脂。所述的阴离子交换。

24、树脂可选用本领域常规的各种阴离子交换树脂,较佳的为弱碱性阴离子交换树脂。所述的大孔树脂吸附法可采用本领域此类方法的常规操作进行,以除去精滤液中的色素等非极性的杂质及小分子化合物。所述的大孔树脂吸附法中使用的大孔吸附树脂可选用本领域常规的各种弱极性或非极性大孔吸附树脂,较佳的为D101、AB8、NK109、H103、NKA9或ADS17。所述活性炭或活性白土的用量为使该纯化液脱色完全为止,较佳的为纯化液体积的053。所述离子交换树脂法和大孔树脂吸附法的具体操作为将所述精滤液上阳离子交换树脂分离柱,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液1;将洗脱液1上阴离子。

25、交换树脂分离柱,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液2;将洗脱液2再用大孔吸附树脂进行分离,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得纯化液。0026步骤6中,所述的减压浓缩的浓缩条件可根据本领域常识进行选择,减压温度较佳的为5080,压力较佳的为0085MPA0050MPA。所述的减压浓缩较佳地在旋转蒸发仪中进行。0027本发明的目的之四是提供所述桃胶多糖的制备方法,其包括如下步骤00281根据上述桃胶多糖提取物的制备方法得到桃胶多糖提取物;00292纯化除去桃胶多糖提取物中的核酸、蛋白等杂质。0030其中,步骤2中的纯。

26、化可选用本领域中用于去除所述杂质常用的各种多糖纯化方法,如三氯乙酸法、凝胶色谱法等,各种纯化的具体操作步骤可根据本领域常识进行选说明书CN102372789ACN102372792A4/14页8择。本发明优选采用SEVAG法及透析法来实现纯化,该纯化的具体步骤可根据本领域常识进行选择,较佳地按下述步骤进行0031将桃胶多糖提取物与纯水混合,得桃胶多糖提取物水溶液;其中,所述纯水的用量较佳的400ML/G600ML/G桃胶多糖提取物;0032加入所述水溶液体积1/31/5的三氯甲烷,再加入所述三氯甲烷体积1/31/5的正丁醇,剧烈振摇1530分钟,离心,分去水相和有机相交界处的变性蛋白质;003。

27、3重复步骤,直至水相在280NM处的吸光度值不再下降为止;其中,重复步骤时,再次加入的三氯甲烷和正丁醇加入步骤的水相中;0034将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液即流浸膏状浓缩液,将该浓缩液与95乙醇充分混合,离心得沉淀物1;将该沉淀物1与纯水混合,离心,去除不溶物,得清液1;将清液1于透析袋内进行透析,用纯水冲洗1216小时,收集透析袋中透析后的清液2即收集分子量为3000道尔顿以上的物质;将该清液2与无水乙醇混合,再次离心得沉淀物2;用无水乙醇对该沉淀物2进行脱水后于6080真空干燥,即得桃胶多糖;其中,95乙醇的用量较佳的为该半流质状浓缩液体积的3倍5倍;该沉淀物1与纯水的混合比例较佳的。

28、为质量比11001500,更佳的为11001200;该透析袋为能够透过分子量小于3000道尔顿的物质的透析袋;该清液2与无水乙醇的混合比例较佳的为体积比1315。0035本发明的目的之五是提供上述桃胶多糖以及桃胶多糖提取物作为稳定剂的应用。其中,所述的稳定剂较佳的为药品、食品、化妆品、轻化工领域中使用的稳定剂,更佳的为蛋白稳定剂,最佳的为液体乳制品稳定剂。所述的液体乳制品较佳的为牛奶、酸奶或含乳饮料;所述的含乳饮料包括配置型含乳饮料、发酵型含乳饮料和乳酸菌饮料,较佳的为果乳饮料或调味奶。0036进一步的研究发现,本发明桃胶多糖及桃胶多糖提取物具有稳定剂功能主要与其结构有关00371桃胶多糖中含。

29、有葡萄糖醛酸,而且百分含量较高530,葡萄糖醛酸可以起到稳定蛋白的作用,因此,桃胶多糖可以作为一种蛋白稳定剂应用在果乳饮料及乳饮料中。00382桃胶多糖及其提取物中蛋白质含量极低,赋予样品良好的溶解性和稳定性,使桃胶多糖和桃胶多糖提取物的具有广泛的应用领域,且性能可靠。0039本发明中的使用的原料、试剂和设备皆市售可得。0040本发明中,上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合,即得本发明各较佳实例。0041本发明的积极进步效果在于0042一、本发明桃胶多糖及其提取物的制备方法不同于传统的工艺,克服了常规桃胶加工工艺需进行高温、强碱水解的不足之处,是一种新的桃胶多糖及其提取物的制备工艺,。

30、采用生物酶法技术、低温水解技术、树脂吸附分离控制技术和脱色技术等生产工艺,能够确保得到的桃胶多糖以及桃胶多糖提取物的各项物化性质满足食品、药品、化妆品以及轻化工领域的使用要求。0043二、本发明的制备方法反应条件温和,能够避免桃胶多糖在反应过程中发生分解,说明书CN102372789ACN102372792A5/14页9保持了桃胶多糖的天然状态,不影响桃胶多糖的产品性能,并且去除了与桃胶多糖结合的糖蛋白,以及残留农药等杂质,从而确保产品的安全性、稳定性、有效性和可控性。由此使得桃胶多糖及其提取物的分子量、粘度、外观颜色等使用性能和市场价值完全符合市场要求,具有广泛的产业化前景和使用前景。004。

31、4三、本发明的桃胶多糖和桃胶多糖提取物可作为稳定剂,具有优异的应用特性,可以广泛作为药品、食品、化妆品和轻化工领域中的稳定剂,尤其能够作为乳制品的稳定剂。附图说明0045图1为桃胶多糖1的红外光谱图。0046图2为桃胶多糖1的紫外光谱图。0047图3为效果实施例2中,用显微快速判断法记录的空白对照实验的乳液在放置30MIN后的显微观察图。0048图4为效果实施例2中,用显微快速判断法记录的乳液样品在18保存5天后的显微观察图。0049图5为效果实施例2中,用显微快速判断法记录的乳液样品在8保存5天后的显微观察图。0050图6为效果实施例2中,用显微快速判断法记录的乳液样品在30保存5天后的显微。

32、观察图。0051图7为效果实施例2中,用显微快速判断法记录的乳液样品在40保存5天后的显微观察图。具体实施方式0052下面用实施例来进一步说明本发明,但本发明并不受其限制。0053实施例中的碱性蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶购于南宁庞博生物工程有限公司。0054实施例4中的透析袋的型号为R2535K,购于济南浩博生物技术有限公司。0055下述实施例中所涉及的测试方法有0056一、桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量的测定方法为0057以木糖为标准品,采用苯酚硫酸法张惟杰糖复合物生化研究技术M浙江大学出版社2003测定桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量。00581绘制木糖标准曲线0059以木糖为标准品,分别配。

33、制标准溶液。取木糖标准溶液,加入6苯酚溶液,加入浓硫酸,静置10MIN,摇匀,进行显色反应至溶液呈橙红色。在波长480NM处测定吸光度值,用经同样显色操作后的水为空白对照。以吸光度值为纵坐标,木糖量为横坐标,绘制标准曲线YAXB。00602桃胶多糖相当于木糖的换算因子的确定0061准确称取桃胶多糖,纯水溶解,作为待测液1。取适量待测液1,按与标准曲线显色方法相同的操作进行显色反应后,测定其在480NM处的吸光度值,按下式计算桃胶多糖相当于木糖的换算因子说明书CN102372789ACN102372792A6/14页100062FW1/CD式10063式1中F桃胶多糖相当于木糖的换算因子0064。

34、W1反应体系中桃胶多糖的质量G0065C根据标准曲线计算所得反应体系中样品相当于木糖的质量G,CYB/A0066D待测液1稀释倍数00673桃胶多糖含量的测定0068准确称取桃胶多糖提取物,纯水溶解,作为待测液2。取适量待测液2,按标准曲线检测方法操作,测定其在480NM处的吸光度值,根据以下公式计算桃胶多糖含量,0069XCDF/W2式20070式2中X桃胶多糖提取物中桃胶多糖含量WT0071W2反应体系中桃胶多糖提取物的质量G0072C根据标准曲线计算所得反应体系中样品相当于木糖的质量G,CYB/A0073D待测液2的稀释倍数0074F换算因子0075该桃胶多糖含量的测试方法由于采用的是自。

35、身对照的方法,因此测试结果存在本领域普遍能够接受的误差。0076二、桃胶多糖的组成确定方法0077采用硅胶薄层层析法,用标准单糖阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、葡萄糖、鼠李糖和岩藻糖作为对照,对桃胶多糖提取物和桃胶多糖进行薄层层析。0078薄层层析条件0079展开剂为正丁醇乙酸乙酯异丙醇乙酸水吡啶72012766。体积比0080显色剂茴香胺123G、邻苯二甲酸166G,溶于100ML85WT乙醇溶液,摇匀,临用时配制。0081三、中性总糖成分含量分析方法0082采用气相色谱法,用标准单糖阿拉伯糖、木糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖、鼠李糖作为对照,采用三氟乙酸法对桃胶多糖进行水解,并制备。

36、成糖醇乙酸酯后进行气相质谱分析。0083检测方法0084检测仪器AGILENTGC7890/MSD5973N气质连用仪。0085色谱条件色谱柱DB5MS30M025NM025M。采用程序升温法,150升到220,保持5MIN,再升到250,保持5MIN。0086质谱条件离子化方式EI,70EV。0087四、桃胶多糖及桃胶多糖提取物中葡萄糖醛酸含量的测定方法0088方法咔唑硫酸法,以葡萄糖醛酸内酯为标准。0089五、桃胶多糖及桃胶多糖提取物中鞣质的检测取待测样品的水溶液1ML,加三氯化铁试液12滴,若溶液呈现绿色、蓝黑色或暗紫色即说明反应呈阳性,样品中含鞣质,反之则说明不含鞣质。0090六、桃胶。

37、多糖及桃胶多糖提取物中淀粉和糊精的检测将待测样品的水溶液煮沸说明书CN102372789ACN102372792A7/14页11冷却后,加碘23滴,若溶液呈蓝色、绿色即说明反应呈阳性,样品中含淀粉;若溶液呈红色,即反应也呈阳性,说明样品中含有糊精,反之则说明样品中不含淀粉和糊精,反应呈阴性。0091实施例1桃胶多糖提取物0092桃胶多糖提取物的制备方法为00931粉碎将天然原桃胶进行粉碎,全部通过20目标准筛,得到天然原桃胶粗粉,备用。称上述天然原桃胶粗粉25G,倾入2000ML三口烧瓶中,向其中加入纯水125ML5ML/G桃胶粗粉,形成桃胶混悬液;00942生物酶解将桃胶混悬液加热至40,向。

38、其中加入碱性蛋白酶063G0005G/ML桃胶混悬液,保温并搅拌1H,进行生物酶解,得料液1;00953低温水解将料液1升温至40,向其中加入固体氢氧化钠125G01G/ML料液1,保温并搅拌1H,进行低温水解,得料液2;00964调节PH向料液2中加入纯水500ML20ML/G桃胶粗粉,在40条件下,保温并搅拌05H,桃胶全部溶解成透明溶液;用稀盐酸浓盐酸水为体积比14调节料液PH65,过滤,得精滤液;00975纯化上述精滤液上氢型阳离子交换树脂分离柱型号924,吸附量24G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液1;将洗脱液1上弱碱性阴离子。

39、交换树脂分离柱型号900,吸附量为24G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液2;洗脱液2再用大孔吸附树脂型号AB8,对多糖的吸附量为034MG/ML湿树脂进行分离,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得纯化液,对并用纯化液体积3的活性白土对纯化液进行脱色处理,得料液3;00986浓缩利用旋转蒸发器对料液3进行减压浓缩,浓缩条件在60、0085MPA的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液3中固含量达60时,停止浓缩,得浓缩液;00997干燥将浓缩液进行喷雾干燥,收集喷雾干粉,得桃胶多糖提取物151G,收率为604,。

40、平均分子量为150,000道尔顿。0100该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖873WT,氮元素0056WT,鞣质未检出,糊精未检出,淀粉未检出,灰分19WT;该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重量的142。0101该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的特性粘度为336PAS;25下,由NDJ1动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的PH值为602。0102薄层层析法显示桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖醛酸。0103实施例2桃胶多糖提取物0104桃胶多糖提取物的制备方法为01051研磨将树干中采摘的湿桃胶300G剪切、粉碎,向其中加入纯水。

41、700ML233ML/G湿桃胶,置于50纯水中溶胀24H,研磨,得桃胶混悬液备用。01062生物酶解将上述桃胶混悬液倾入2000ML三口烧瓶中,加热至50,向其中加入中性蛋白酶225G0032G/ML桃胶混悬液,保温并搅拌3H,进行生物酶解,得料液1;说明书CN102372789ACN102372792A8/14页1201073低温水解将料液1升温至50,向其中加入固体氢氧化钠140G02G/ML料液1,保温并搅拌3H,进行低温水解,得料液2;01084调节PH向料液2中加入纯水1500ML50ML/G湿桃胶,在50条件下,保温并搅拌05H,桃胶全部溶解成透明溶液;用稀盐酸浓盐酸水为体积比14。

42、调节料液PH65,过滤,得精滤液;01095纯化将上述精滤液上钠型阳离子交换树脂分离柱型号D001,吸附量为28G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液1;将洗脱液1上弱碱性阴离子交换树脂分离柱型号D301F,吸附量为28G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液2;将洗脱液2再用大孔吸附树脂型号NKA9,对多糖的吸附量为030MG/ML树脂进行分离,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得纯化液,对并用纯化液体积05的活性炭对纯化液进行脱色处理,得料液3;01。

43、106浓缩利用旋转蒸发器对料液3进行减压浓缩,浓缩条件在70、0085MPA的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液3中固含量达80时,停止浓缩,得浓缩液;01117干燥将浓缩液进行喷雾干燥,收集喷雾干粉,得桃胶多糖提取物135G,收率为450,平均分子量为70,000道尔顿。0112该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖985WT,氮元素0073WT,鞣质未检出,糊精未检出,淀粉未检出,灰分16WT;该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重量的200。0113该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的特性粘度为259PAS;25下,由NDJ1动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的PH值为506。

44、。0114薄层层析法显示桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖醛酸。0115实施例3桃胶多糖提取物0116桃胶多糖提取物的制备方法为01171粉碎将天然原桃胶进行粉碎,全部通过20目标准筛,得到天然原桃胶粗粉,备用。称上述天然原桃胶粗粉25G,倾入5000ML三口烧瓶中,向其中加入纯水1500ML60ML/G桃胶粗粉,形成桃胶混悬液;01182生物酶解将桃胶混悬液加热至60,向其中加入复合蛋白酶750G005G/ML桃胶混悬液,保温并搅拌5H,进行生物酶解,得料液1;01193低温水解将料液1升温至60,向其中加入固体氢氧化钠600G04G/ML料液1,保温。

45、并搅拌5H,进行低温水解,得料液2;01204调节PH向料液2中加入纯水3000ML120ML/G桃胶粗粉,在60条件下,保温并搅拌05H,桃胶全部溶解成透明溶液;用稀盐酸浓盐酸水为体积比14调节料液PH65,过滤,得精滤液;01215纯化将上述精滤液上钠型阳离子交换树脂分离柱型号D001,吸附量为28G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得洗脱液1;将洗脱液1上弱碱性阴离子交换树脂分离柱型号900,吸附量为24G/ML树脂,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,说明书CN102372789ACN102372792A。

46、9/14页13得洗脱液2;将洗脱液2再用大孔吸附树脂型号D101,对多糖的吸附量为026MG/ML树脂进行分离,纯水洗脱,收集洗脱液,采用菲林试剂法检测洗脱液至无多糖反应时停止收集,得纯化液,对并用纯化液体积05的活性炭对纯化液进行脱色处理,得料液3;01226浓缩利用旋转蒸发器对料液3进行减压浓缩,浓缩条件在80、0085MPA的条件下进行减压浓缩。浓缩至料液3中固含量达50时,停止浓缩,得浓缩液;01237干燥将浓缩液进行喷雾干燥,收集喷雾干粉,得桃胶多糖提取物108G,收率为432,平均分子量为8,000道尔顿。0124该桃胶多糖提取物中含有桃胶多糖1016WT,氮元素0067WT,鞣质。

47、未检出,糊精未检出,淀粉未检出,灰分05WT;该桃胶多糖中的葡萄糖醛酸占桃胶多糖提取物重量的106。由于测试方法的限制,桃胶多糖含量高于100是由实验误差导致的。0125该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的特性粘度为142PAS;25下,由NDJ1动力粘度计测得。该桃胶多糖提取物水溶液浓度为10WT的PH值为431。0126薄层层析法显示桃胶多糖提取物中含有阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖醛酸。0127实施例4桃胶多糖0128一、桃胶多糖的制备0129将上述实施例13所得的桃胶多糖提取物分别用SEVAG法和透析法进行纯化,得到3个桃胶多糖0130用纯水溶解桃胶多糖提取物。

48、纯水用量为600ML/G桃胶多糖提取物得水溶液;0131加入水溶液体积1/5的三氯甲烷,再加入三氯甲烷体积1/5的正丁醇,剧烈振摇20MIN,离心,分去水相和有机相交界处的变性蛋白质;0132重复步骤至水相在280NM处的吸光度值不再下降为止;其中三氯甲烷和正丁醇加入步骤中的水相中。0133将所述水相减压浓缩至半流质状浓缩液,向该浓缩液中加入浓缩液体积量3倍的95乙醇,充分混合,离心,得沉淀物1。将该沉淀物1用其重量100倍的去离子水溶解,离心,去不溶物,得清夜1。将该清液1装入透析袋内进行透析,用去离子水冲洗12H,收集透析袋中透析后的清液2。将该清液2与其3倍体积量的无水乙醇充分混合,再次离心,得沉淀物2。用无水乙醇对该沉淀物2脱水后,于60真空干燥,得到本发明的桃胶多糖13,分别对应实施例13中的桃胶多糖提取物。0134二、桃胶多糖的性质01351、桃胶多糖红外光谱分析0136红外光谱条件溴化钾压片;样品扫描次数32次;背景扫描次数32次;分辨率4000;样品得率10;镜速度06329;孔径10000;检测器DTGSKBR;光源IR。0137结论本发明的桃胶多糖13在4000650CM1具有多糖类物质的一般特征,表现为在36003300CM1区。

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