一种高效的DPPIV抑制剂.pdf

本发明属于医药技术领域，涉及一种高效的DPP-IV抑制剂，具体地涉及一种以脲嘧啶为母核的化合物或其盐、其制备方法、组合物以及这类化合物作为二肽基肽酶(DPP-IV)抑制剂在预防或治疗受益于DPP-IV抑制的疾病中的用途。本发明化合物对DPP-IV具有非常好的选择性抑制作用，心脏毒性也非常低，是非常有前景的DPP-IV抑制剂类药物。

权利要求书一种式I的化合物或其可药用盐，

其中，R1选取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基；取代基选自烷基、烷氧基、卤素、氰基、氨基、羟基、硝基、羰基、磺酰基烷基、酰氨基、羰基烷基、芳基、芳氧基、杂环烷基、杂芳基、杂芳氧基、环烷基、环烷基烷基、磺酰基或亚磺酰基；
R2选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)未取代或取代的烷基；
(4)未取代或由1‑5个各自独立的取代基取代的苯基，取代基选自卤素、氰基、OH、烷基、烷氧基、NHSO2R3、N(烷基)SO2R3、SO2R3、SO2NR4R5、NR4R5、CONR4R5、COOH、和羧基烷基；
(5)OH；
(6)烷氧基；
(7)NR4R5；
R3选自取代或未取代的烷基，取代基选自1‑5个各自独立的卤素或COOH；
R4和R5个各自独立的选自：
(1)氢，
(2)未取代或取代的苯基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基，
(3)未取代或由各自独立的取代基取代的C3‑6环烷基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基，
(4)未取代或取代的烷基，取代基选自：
(a)卤素，或
(b)未取代或由1‑5个各自独立的取代基取代的苯基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基。
权利要求1所述的化合物或其可药用盐，R1选自取代或未取代的芳基或杂芳基，取代基选自烷基、烷氧基、卤素、氰基、氨基、羟基、硝基或羰基。
权利要求2所述的化合物或其可药用盐，其中，R2选自氢、烷基或烷氧基。
权利要求3所述的化合物或其可药用盐，其中，R1选自取代或未取代的芳基或杂芳基，取代基选自烷基、烷氧基或卤素，R2选自氢。
权利要求4所述的化合物或其可药用盐，其中，R1选自取代或未取代的苯基、喹唑啉基、苯并咪唑基、喹啉基、嘧啶基、吲哚基、喹喔啉基、异喹啉或氮杂菲。
权利要求5所述的化合物或其可药用盐，其中，例如R1选自苯基、4‑甲基喹唑啉‑2基、苯并咪唑‑2‑基、喹啉‑2‑基、6‑溴喹啉‑2‑基、6‑氯喹啉‑2‑基、6‑氟喹啉‑2‑基、6‑甲基喹啉‑2‑基、7‑氯喹啉‑2‑基、7‑氟喹啉‑2‑基、6‑甲氧基喹啉‑2‑基、4‑氯喹啉‑2‑基、3‑甲基喹喔啉‑2‑基、喹啉‑4‑基、喹啉‑3‑基、嘧啶‑2‑基、吲哚‑3‑基、喹喔啉‑2‑基、异喹啉‑1‑基或1‑氮杂菲‑2‑基。
权利要求6中任一项所述的化合物或其可药用盐，选自下列化合物或其盐：

权利要求1‑7中任一项所述的化合物或其可药用盐在制备治疗或预防受益于DPP‑IV抑制的疾病的药物中的用途。
权利要求8所述的受益于DPP‑IV抑制的疾病选自II型糖尿病、糖尿病性脂血异常、葡萄糖耐量减低(IGT)症、禁食血浆葡萄糖减低(IFG)症、代谢性酸中毒、酮症、食欲调节、肥胖症、各种癌症、神经系统病症、免疫系统病症等，优选地包括II型糖尿病和肥胖症。
一种药物组合物，包括权利要求1‑7中任一项所述的化合物或其可药用盐和一种或几种药学上可接受的辅料。

说明书一种高效的DPP‑IV抑制剂
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体地涉及一种以脲嘧啶为母核的化合物或其盐、其制备方法、组合物以及这类化合物作为二肽基肽酶(DPP‑IV)抑制剂在预防或治疗受益于DPP‑IV抑制的疾病中的用途。
背景技术
糖尿病是由于胰岛素的绝对或相对不足造成血糖升高，从而引发严重的并发症，最终导致病人的致残或致死。临床上将糖尿病分为I型与II型。I型糖尿病是由于胰岛β‑细胞被破坏，缺乏胰岛素分泌，从而引发血糖升高，这类患者只能依赖于外源性胰岛素；II型糖尿病是由于胰岛素分泌相对不足或胰岛素作用环节不健全引发高血糖，它的发病率约占所有糖尿病患者人数的90％以上。目前的药物研究主要是针对于II型糖尿病展开的。
传统的降糖药物种类繁多，主要分为胰岛素增敏剂(如双胍类，噻唑烷二酮类等)和胰岛素促分泌剂(如磺酰脲类和非磺酰类药物)，等等。但这些药物并不能阻止糖尿病的恶化，而且存在着体重增加，低血糖等毒副作用以及药效最终丧失的问题。因而，开发新型的抗糖尿病药物，克服以上诸多不足，阻止甚至逆转病情恶化是迫在眉睫的任务。
二肽基肽酶(DPP‑IV)是一种广泛分布于人体内的糖蛋白，其功能类似于丝氨酸蛋白酶，通过对多肽的剪切使其失活，从而达到调节生理功能的作用。DPP‑IV对底物的剪切部位恒定，均为其N端倒数第二位的脯氨酸或丙氨酸。胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)是一种内源性的激素，随着餐后血糖的升高，由小肠中的L细胞分泌产生，进而刺激胰岛素的分泌。因此，GLP‑1的分泌与血糖的摄入量密切相关。基于GLP‑1的治疗方案可以有效地控制血糖而不增加体重，不会产生低血糖等不良反应。但是GLP‑1作为DPP‑IV的底物，半衰期很短，分泌后1‑2分钟之内就会被DPP‑IV迅速剪切、失活。因此基于GLP‑1的作用机制可以采用两种新药开发的策略：开发DPP‑IV耐受的GLP‑1类似物和开发DPP‑IV抑制剂。本发明人根据这一思路，发现脲嘧啶类化合物是一种有效的DPP‑IV抑制剂，能够有效降低血糖，同时不引起体重增加和低血糖等风险，并基于此完成本发明。
发明内容
本发明一方面提供一种式I的化合物或其可药用盐

其中，R1选取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环烷基；取代基选自烷基、烷氧基、卤素、氰基、氨基、羟基、硝基、羰基、磺酰基烷基、酰氨基、羰基烷基、芳基、芳氧基、杂环烷基、杂芳基、杂芳氧基、环烷基、环烷基烷基、磺酰基或亚磺酰基；R1优选取代或未取代的芳基或杂芳基；
R2选自：
(1)氢；
(2)氰基；
(3)未取代或取代的烷基；
(4)未取代或由1‑5个各自独立的取代基取代的苯基，取代基选自卤素、氰基、OH、烷基、烷氧基、NHSO2R3、N(烷基)SO2R3、SO2R3、SO2NR4R5、NR4R5、CONR4R5、COOH、和羧基烷基；
(5)OH；
(6)烷氧基；
(7)NR4R5；
R2优选氢、烷基或烷氧基；
R3选自取代或未取代的烷基，取代基选自1‑5个各自独立的卤素或COOH；
R4和R5个各自独立的选自：
(1)氢，
(2)未取代或取代的苯基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基，
(3)未取代或由各自独立的取代基取代的C3‑6环烷基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基，
(4)未取代或取代的烷基，取代基选自：
(a)卤素，或
(b)未取代或由1‑5个各自独立的取代基取代的苯基，取代基选自卤素、OH、烷基或烷氧基。
本发明的式I化合物，R1优选取代或未取代的芳基或杂芳基，取代基选自烷基、烷氧基、卤素、氰基、氨基、羟基、硝基或羰基；
R2优选氢、烷基或烷氧基，更优选氢。
例如本发明提供的式I化合物优选，R1选自取代或未取代的芳基或杂芳基，取代基选自烷基、烷氧基或卤素，R2选自氢。
R1进一步优选取代或未取代的苯基、喹唑啉基、苯并咪唑基、喹啉基、嘧啶基、吲哚基、喹喔啉基、异喹啉或氮杂菲。
例如R1选自苯基、4‑甲基喹唑啉‑2基、苯并咪唑‑2‑基、喹啉‑2‑基、6‑溴喹啉‑2‑基、6‑氯喹啉‑2‑基、6‑氟喹啉‑2‑基、6‑甲基喹啉‑2‑基、7‑氯喹啉‑2‑基、7‑氟喹啉‑2‑基、6‑甲氧基喹啉‑2‑基、4‑氯喹啉‑2‑基、3‑甲基喹喔啉‑2‑基、喹啉‑4‑基、喹啉‑3‑基、嘧啶‑2‑基、吲哚‑3‑基、喹喔啉‑2‑基、异喹啉‑1‑基或1‑氮杂菲‑2‑基，R2选自氢。
术语“烷基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和的脂肪烃基团，其通过单键与分子的其余部分连接，其通常具有1‑6个碳原子也可表示为C1‑6烷基，优选具有1‑4个碳原子的C1‑4烷基。所述烷基可以是非取代的或是被一个或多个选自烷基、烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、硝基或羧基等的取代基所取代。非取代的烷基的非限制性实例包括但不限于诸如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔‑丁基、正‑戊基、2‑甲基丁基、新戊基、正己基、或2‑甲基己基等。
术语“烷氧基”是指具有烷基取代的含氧部分，即‑O‑烷基基团，通常由氧和含有1‑6个碳原子的烷基组成，即‑O‑C1‑6烷基，优选‑O‑C1‑4烷基，具体的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2‑甲基丁氧基、新戊氧基、正己氧基或2‑甲基己氧基等。
术语“杂环烷基”是指带有一个或两个氮、氧、硫等杂原子的五元或六元的取代的或未取代的单环非芳香族环基，具体的例子包括但不限于哌嗪、哌啶、四氢吡咯或吗啉等，取代基可以选自氰基、卤素、羟基、氨基或酰氨基等。
术语“芳基”是指含有6‑10个碳原子的全碳单环或双环碳环芳香环体系，具有完全共轭的π电子体系，芳基的非限制性实例如苯基、联苯基或萘基等。芳基可以是取代的或未取代的，取代基选自烷基、烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、硝基或羧基等。
术语“杂芳基”是指有5‑14个原子的单环、双环或三环芳基，其至少含有1个选自N、O或S的杂原子，其余的原子是C。杂芳基可以是取代的或未取代的，取代基选自烷基、烷氧基、芳基、羟基或氨基等。未取代的杂芳基的非限制性实例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、吡唑、吡啶、嘧啶、吲哚、喹啉、异喹啉、噁唑啉、苯并咪唑、喹喔啉、氮杂菲或喹唑啉等。
术语“卤素“是指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”是指‑NH2基团、‑NH(烷基)基团或‑N(烷基)2。氨基的具体例子包括但不限于‑NH2、‑NHCH3、‑N(CH3)2、‑NHC2H5或‑N(C2H5)2等。
术语“磺酰基烷基”是指被磺酰基取代的含有1‑6个碳原子的直链或支链的烷基，如磺酰基甲基，磺酰基乙基或1‑磺酰基‑2‑甲基乙基等，烷基可以是取代的或未取代的，取代基选自烷基、烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、硝基或羧基等。
术语“环烷基”是指含有3‑6个碳原子的饱和环烃，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基或环己基，环烷基可以是取代的或未取代的，取代基选自烷基、烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、羧基、酰氨基或氰基等。
术语“环烷基烷基”是指被环烷基取代的含有1‑6个碳原子的直链或支链烷基基团，如环丙甲基、环戊乙基或1‑环己基‑3‑乙基丁基等。
术语“烯基”是指含有2‑6个碳原子以及至少含有1个双键的直链或支链的不饱和烃基，烯基可以是非取代的或者被选自如下的取代基所取代：烷基、烷氧基、羟基、氨基或卤素等，非取代的烯基的具体例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、2‑丙烯基、1‑丁烯基、2‑丁烯基、1‑戊烯基或1‑己烯基等。
术语“炔基”是指是指含有2‑6个碳原子以及至少1个三键的直链或支链不饱和烃基，炔基可以是非取代的或者被选自如下的取代基所取代：烷基、烷氧基、羟基、氨基或卤素等，非取代的炔基的具体例子例如包括但不限于乙炔基、1‑丙炔基、2‑丙炔基、1‑丁炔基或2‑丁炔基等。
术语“羧基”是指含‑COO‑基团的1‑7碳原子的直链或支链基团，包括但不限于HOOC‑、CH3OOC‑或CH3CH2OOC‑等
本发明所提供的具体化合物举例如下，但并不限于下列化合物或其可药用盐：

本发明再一方面提供式I化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)式A化合物与式B化合物在碱的存在下，在有机溶剂中反应生成式C化合物：

(2)式C化合物与R‑3‑氨基哌啶双盐酸盐反应生成式I化合物：

其中，R1、R2同上述式I化合物中的定义相同，Hal为氯或溴。
步骤(1)中，碱选自氢化钠、碳酸钾或碳酸钠；优选氢化钠；有机溶剂选自乙二醇二甲醚和N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶剂。
在本发明的一个具体实施方式中，反应方法举例为：
(1)将碱与乙二醇二甲醚和N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶剂混合，0℃下搅拌10分钟，加入式A化合物，0℃下搅拌20分钟，加入无水溴化锂，室温搅拌30分钟，加入式B化合物，室温搅拌过夜。反应完毕，加入碎冰，二氯甲烷萃取，所得有机相用饱和食盐水洗涤后干燥，浓缩，柱层析纯化后即得到式C化合物；
(2)将式C化合物与R‑3‑氨基哌啶双盐酸盐混合后加入乙醇，混合均匀后加入碳酸氢钠，油浴加热回流6小时。反应完毕，将反应液浓缩，残余物经柱层析纯化即得到式I化合物。
其中，步骤(1)中所述的碱选自氢化钠、碳酸钾或碳酸钠；优选氢化钠；乙二醇二甲醚和N，N‑二甲基甲酰胺均为无水溶剂，二者体积比为2∶1。
其中，式A化合物可以采用本领域中常用的方法制备得到。比如，当R2为H时，式A可以从下列方法制备得到：

式A化合物的具体制备方法举例为：
6‑氯脲嘧啶中加入N，N‑二甲基甲酰胺(DMF)，溶解后加入N，N‑二异丙基乙胺(DIEA)，搅拌均匀后滴加1‑溴‑2‑丁炔，反应液25℃搅拌过夜。反应完全后加入水，析出固体，抽滤，滤饼经水、乙醚洗后干燥既得目标物。
其中，6‑氯脲嘧啶与1‑溴‑2‑丁炔摩尔比为1∶1.05‑1∶2，优选1∶1.1；反应时间为3‑36小时，优选24小时；反应温度10‑40℃，优选25℃。
式B化合物可以从市场上买到或采用本领域中常用的方法合成得到，非限制性地举例如下：

具体反应方法举例为：未取代的或取代的甲基化合物与N‑溴代丁二酰亚胺(NBS)混合后加入偶氮二异丁腈(AIBN)，加入四氯化碳，油浴加热反应。反应完毕，滤除不溶物，滤液旋干后经柱层析纯化即得到目标物。
其中，未取代的或取代的甲基化合物与N‑溴代丁二酰亚胺摩尔比为1∶1‑1∶2，优选1∶1；反应时间为1‑12小时，优选6小时；反应温度50‑80℃，优选80℃。未取代的或取代的甲基化合物与偶氮二异丁腈摩尔比为1∶0.01‑1∶0.1，优选1∶0.02。
在本发明的具体实施方式中，制备方法举例如下：
(1)式A’化合物与式B化合物在氢化钠的存在下，在乙二醇二甲醚和N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶剂中反应生成式C’化合物：

(2)式C’化合物与R‑3‑氨基哌啶双盐酸盐反应生成式I’化合物：

其中，R1同上述式I化合物中的定义相同，Hal为氯或溴。
在本发明的一个具体实施方式中，反应方法举例为：
(1)将氢化钠与乙二醇二甲醚/N，N‑二甲基甲酰胺的混合溶剂混合，0℃下搅拌10分钟，加入式A’化合物，0℃下搅拌20分钟，加入无水溴化锂，室温搅拌30分钟，加入式B化合物，室温搅拌过夜。反应完毕，加入碎冰，二氯甲烷萃取，所得有机相用饱和食盐水洗涤后干燥，浓缩，柱层析纯化后即得到式C’化合物。
(2)将式C’化合物与R‑3‑氨基哌啶双盐酸盐混合后加入乙醇，混合均匀后加入碳酸氢钠，油浴加热回流6小时。反应完毕，将反应液浓缩，残余物经柱层析纯化即得到式I’化合物。
其中，乙二醇二甲醚和N，N‑二甲基甲酰胺均为无水溶剂，二者体积比为2∶1。
本发明提供的脲嘧啶类化合物可以以其游离或盐的形式存在，当本发明化合物具备游离碱的形式时，使化合物的游离碱形式与药学上可接受的无机或有机酸反应，可以制备本发明化合物的酸加成盐，这些盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐和水杨酸盐、丙二酸盐、己二酸盐、己酸盐、精氨酸盐、富马酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐、草酸盐等。
本发明再一方面提供式I化合物在制备治疗或预防受益于DPP‑IV抑制的疾病的药物中的用途。所述的受益于DPP‑IV抑制的疾病选自II型糖尿病、糖尿病性脂血异常、葡萄糖耐量减低(IGT)症、禁食血浆葡萄糖减低(IFG)症、代谢性酸中毒、酮症、食欲调节、肥胖症、各种癌症、神经系统病症、免疫系统病症等，优选地包括II型糖尿病和肥胖症，更优选地包括II型糖尿病。
本发明再一方面提供一种药物组合物，包括本发明的式I化合物或其可药用盐和一种或几种药学上可接受的辅料。本发明所述的组合物可以是液体、半液体或固体形式，按照适合于所用的给药途径的方式配制。本发明所述的组合物可以按照下列给药方式给药：口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、口腔、鼻内、脂质体等方式。
口服组合物可以是固体、凝胶或液体。固体制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。这些制剂可以选择地含有粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂和矫味剂等。粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸；稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、磷酸二钙；助流剂的实例包括但不限于二氧化硅；崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。
以肠胃外给予本发明组合物，一般以注射为主，包括皮下、肌内或静脉内注射。注射剂可以被制成任何常规形式，如液体溶液或悬液、适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中的固体形式或者乳剂。可用于本发明注射剂的药学上可接收的载体的实例包括但不限于水性载体、非水性载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、悬浮与分散剂、乳化剂、螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性载体的实例包括氯化钠注射液、林格式注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖与乳酸化林格氏注射液；非水性载体的实例包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油；抗微生物剂的实例包括间甲酚、苄醇、氯丁醇、苯扎氯铵等；等渗剂的实例包括氯化钠和葡萄糖；缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。
本发明组合物还可以制备成无菌的冻干粉针剂，将化合物溶于磷酸钠缓冲溶液，其中含有葡萄糖或其他适合的赋形剂，随后在本领域技术人员已知的标准条件下将溶液无菌过滤，继之以冷冻干燥，得到所需的制剂。
本发明提供的上述杂环并嘧啶酮类化合物制备工艺简单，原料易得，适合工业化大规模生产，并且经体外和体内实验验证，本发明化合物对DPP‑IV具有非常好的选择性抑制作用，在有效抑制DPP‑IV活性的同时，对DPP‑VIII和DPP‑IX的活性几乎没有影响，可以预见本发明化合物开发成药后毒性将比较低，具有非常好的应用前景。
具体实施方式
本发明提供的化合物可以通过多种制备方法来合成，实施例中仅提供了合成这些化合物的代表性方法。这里要说明的是，不管以何种方式开发的本发明化合物的游离酸和/或碱形式，还是盐的形式，均属于本发明的范围。具体实施例的目的是进一步说明本发明内容但不意味着对本发明进行限制。
本发明具体实施例中使用的初始原料、反应试剂等均为市售产品。
本发明中使用的试剂缩写字母为本领域常用的表达方式，含义如下：
DME：乙二醇二甲醚
DMF：N，N‑二甲基甲酰胺
DIEA：N，N‑二异丙基乙胺
实施例1.化合物4的合成

化合物4‑0的合成：
在500mL茄形瓶中加入6‑氯脲嘧啶(15g，102.4mmol)和250mL DMF，溶解后加入15mL DIEA，搅拌均匀后滴加1‑溴‑2‑丁炔(9.85mL，112.64mmol)，反应液25℃搅拌过夜。反应完全，加入冰水，抽滤，滤饼经水、乙醚洗后晾干即为目标物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，5.91(s，1H)，4.75(d，J＝2.0Hz，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 199.82[M+H]+.
化合物4‑1的合成：
氮气保护下，在100mL茄形瓶中加入60％NaH(54mg，3.78mmol)，0℃下加入无水DME/DMF(2∶1)溶液，0℃搅拌10分钟后，加入1‑(2‑丁炔)‑6‑氯脲嘧啶(500mg，2.52mmol)的10ml无水DME/DMF(2∶1)溶液。加毕，0℃搅拌20分钟后加入无水溴化锂(263mg，3.02mmol)，室温搅拌30分钟后加入2‑氯甲基‑4‑甲基喹唑啉(534mg，2.77mmol)，反应液室温搅拌过夜。反应完全，加入碎冰，二氯甲烷萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗涤，洗涤后的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1洗脱，UV显色)纯化即得到化合物4‑1。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.03(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，7.80(t，J＝7.2Hz，1H)，7.55(t，J＝8.0Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.47(s，2H)，4.83(d，J＝2.0Hz，2H)，2.90(s，3H)，1.83(t，J＝2.4Hz，3H).MS 355.80[M+H]+.
化合物4的合成：
在50mL茄形瓶中加入化合物4‑1(306mg，0.86mmol)，碳酸氢钠(361mg，4.30mmol)，R‑3‑氨基哌啶双盐酸盐(224mg，1.29mmol)和25mL乙醇，油浴加热至回流搅拌6小时。反应完全，反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇＝15/1+1％氨水洗脱，UV显色)纯化即得到化合物4。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(t，J＝7.2Hz，1H)，7.45(t，J＝7.2Hz，1H)，5.41(s，2H)，5.26(s，1H)，4.52(d，J＝1.6Hz，2H)，3.33(m，1H)，3.22(m，1H)，3.00(m，1H)，2.81(s，3H)，2.72(m，1H)，2.50(m，1H)，1.92(m，1H)，1.82(m，1H)，1.74(s，3H)，1.64(m，1H)，1.26(m，1H).MS 419.50[M+H]+.
实施例2.化合物3的合成

化合物3‑1的合成：
以溴化苄为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物3‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43‑7.19(m，5H)，5.97(s，1H)，5.42(s，2H)，4.60(s，2H)，1.77(s，3H).MS 289.07[M+H]+.
化合物3的合成：
以上一步骤中得到的化合物3‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物3.
1H NMR(400MHz，CDC l3)δ7.46‑7.22(m，5H)，5.33(s，2H)，5.20(s，1H)，4.40(s，2H)，3.22(m，3H)，2.96(m，1H)，2.62(m，1H)，2.42(m，1H)，1.90(m，1H)，1.77(s，3H)，1.60(m，1H)，1.22(m，1H).MS  353.2[M+H]+.
实施例3.化合物5的合成

化合物5‑1的合成：
以2‑氯甲基苯并咪唑为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物5‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58(m，2H)，7.23(m，2H)，5.99(s，1H)，5.40(s，2H)，4.75(d，J＝2.4Hz，2H)，1.79(t，J＝2.4Hz，3H).MS 329.10[M+H]+.
化合物5的合成：
以上一步骤中得到的化合物5‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物5.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.47(m，2H)，7.14(m，2H)，5.31(s，2H)，5.18(s，1H)，4.40(s，2H)，3.21(m，3H)，2.95(m，1H)，2.61(m，1H)，2.43(m，1H)，1.92(m，1H)，1.75(s，3H)，1.61(m，1H)，1.21(m，1H).MS 393.45[M+H]+.
实施例4.化合物6的合成

化合物6‑1的合成：
以2‑氯甲基喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物6‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.4Hz，1H)，8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.65(m，1H)，7.48(m，1H)，7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，6.05(s，1H)，5.43(s，2H)，4.81(m，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 340.90[M+H]+.
化合物6的合成：
以上一步骤中得到的化合物6‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物6.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(d，J＝8.8Hz，1H)，8.00(d，J＝8.8Hz，1H)，7.73(d，J＝8.0Hz，1H)，7.62(t，J＝7.2Hz，1H)，7.44(t，J＝7.2Hz，1H)，7.29(t，J＝8.4Hz，1H)，5.40(s，2H)，5.28(s，1H)，4.53(d，J＝2.4Hz，2H)，3.34(m，1H)，3.23(m，1H)，3.00(m，1H)，2.72(m，1H)，2.50(m，1H)，1.95(m，1H)，1.77(m，1H)，1.72(s，3H)，1.66(m，1H)，1.27(m，1H).MS 404.49[M+H]+.
实施例5.化合物7的合成

化合物7‑1的合成：
以2‑氯甲基嘧啶为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物7‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.56(d，J＝4.8Hz，2H)，7.09(t，J＝4.8Hz，1H)，5.94(s，1H)，5.28(s，2H)，4.72(m，2H)，1.73(t，J＝2.4Hz，3H).MS 291.78[M+H]+.
化合物7的合成：
以上一步骤中得到的化合物7‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物7.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.59(d，J＝4.8Hz，2H)，7.09(t，J＝4.8Hz，1H)，5.32(s，2H)，5.25(s，1H)，4.51(d，J＝2.0Hz，2H)，3.35(m，1H)，3.24(m，1H)，2.99(m，1H)，2.72(m，1H)，2.50(m，1H)，1.95(m，1H)，1.84(m，1H)，1.76(s，3H)，1.64(m，1H)，1.28(m，1H).MS 355.45[M+H]+.
实施例6.化合物8的合成

化合物8‑1的合成：
以3‑溴甲基吲哚为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物8‑1.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.55(m，2H)，7.28(m，2H)，7.22(s，1H)，5.97(s，1H)，5.41(s，2H)，4.74(d，J＝2.4Hz，2H)，1.80(t，J＝2.4Hz，3H).MS 328.08[M+H]+.
化合物8的合成：
以上一步骤中得到的化合物8‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物8.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，7.22(m，2H)，7.20(s，1H)，5.34(s，2H)，5.19(s，1H)，4.41(s，2H)，3.25(m，3H)，2.97(m，1H)，2.61(m，1H)，2.42(m，1H)，1.93(m，1H)，1.73(s，3H)，1.62(m，1H)，1.25(m，1H).MS 392.2[M+H]+.
实施例7.化合物9的合成

化合物9‑1的合成：
以2‑溴甲基喹喔啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物9‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(s，1H)，8.07(m，1H)，8.00(m，1H)，7.71(m，2H)，6.04(s，1H)，5.47(s，2H)，4.79(m，2H)，1.81(t，J＝2.4Hz，3H).MS 341.78[M+H]+.
化合物9的合成：
以上一步骤中得到的化合物9‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物9.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，7.98(m，2H)，7.64(m，2H)，5.41(s，2H)，5.25(s，1H)，4.49(d，J＝1.2Hz，2H)，3.31(m，1H)，3.20(m，1H)，2.96(m，1H)，2.68(m，1H)，2.47(m，1H)，1.91(m，1H)，1.80(m，1H)，1.74(s，3H)，1.63(m，1H)，1.23(m，1H).MS 405.50[M+H]+.
实施例8.化合物10的合成

化合物10‑1的合成：
以4‑溴甲基喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物10‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.82(d，J＝4.8Hz，1H)，8.18(d，J＝8.4Hz，1H)，8.13(d，J＝8.4Hz，1H)，7.73(m，1H)，7.61(m，1H)，7.16(d，J＝4.4Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.61(s，2H)，4.79(m，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 340.90[M+H]+.
化合物10的合成：
以上一步骤中得到的化合物10‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物10.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(d，J＝4.4Hz，1H)，8.19(d，J＝8.4Hz，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(t，J＝7.2Hz，1H)，7.57(t，J＝7.2Hz，1H)，7.16(d，J＝4.4Hz，1H)，5.58(s，2H)，5.28(s，1H)，4.52(d，J＝2.0Hz，2H)，3.33(m，1H)，3.23(m，1H)，2.99(m，1H)，2.71(m，1H)，2.51(m，1H)，1.95(m，1H)，1.86(m，1H)，1.78(s，3H)，1.67(m，1H)，1.88(m，1H).MS 404.50[M+H]+.
实施例9.化合物11的合成

化合物11‑1的合成：
以3‑溴甲基喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物11‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.04(d，J＝2.0Hz，1H)，8.25(d，J＝1.2Hz，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.76(t，J＝8.0Hz，1H)，7.66(m，1H)，7.49(m，1H)，6.00(s，1H)，5.24(s，2H)，4.72(d，J＝2.4Hz，2H)，1.77(t，J＝2.4Hz，3H).MS 340.78[M+H]+.
化合物11的合成：
以上一步骤中得到的化合物11‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物11.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.05(d，J＝2.0Hz，1H)，8.28(d，J＝1.6Hz，1H)，8.03(d，J＝8.4Hz，1H)，7.76(t，J＝8.0Hz，1H)，7.64(m，1H)，7.47(m，1H)，5.24(s，2H)，5.22(s，1H)，4.48(d，J＝1.6Hz，2H)，3.29(m，1H)，3.18(m，1H)，2.97(m，1H)，2.66(m，1H)，2.47(m，1H)，1.94(m，1H)，1.84(m，1H)，1.77(s，3H)，1.64(m，1H)，1.27(m，1H).MS 404.51[M+H]+.
实施例10.化合物12的合成

化合物12‑1的合成：
以1‑溴甲基异喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物12‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(d，J＝5.6Hz，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.63(m，1H)，7.52(d，J＝6.0Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.78(s，2H)，4.82(m，2H)，1.84(t，J＝2.4Hz，3H).MS 340.90[M+H]+.
化合物12的合成：
以上一步骤中得到的化合物12‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物12.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(d，J＝5.6Hz，1H)，8.14(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，7.63(m，1H)，7.58(m，1H)，7.47(d，J＝5.6Hz，1H)，5.75(s，2H)，5.30(s，1H)，4.54(d，J＝2.4Hz，2H)，3.35(m，1H)，3.25(m，1H)，2.98(m，1H)，2.72(m，1H)，2.49(m，1H)，1.93(m，1H)，1.83(m，1H)，1.77(t，J＝2.0Hz，3H)，1.65(m，1H)，1.26(m，1H).MS 404.49[M+H]+.
实施例11.化合物13的合成

化合物13‑1的合成：
以2‑溴甲基‑6‑溴喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物13‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(d，J＝8.8Hz，1H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，1H)，7.71(m，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，6.05(s，1H)，5.40(s，2H)，4.81(m，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 419.77[M+H]+.
化合物13的合成：
以上一步骤中得到的化合物13‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物13.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(m，2H)，7.67(m，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，1H)，5.37(s，2H)，5.28(s，1H)，4.54(d，J＝2.4Hz，2H)，3.35(m，1H)，3.24(m，1H)，3.01(m，1H)，2.72(m，1H)，2.53(m，1H)，1.96(m，1H)，1.86(m，1H)，1.77(t，J＝2.4Hz，3H)，1.69(m，1H)，1.30(m，1H).MS 483.48[M+H]+.
实施例12.化合物14的合成

化合物14‑1的合成：
以2‑溴甲基‑6‑氯喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物14‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(d，J＝8.8Hz，1H)，7.74(d，J＝2.4Hz，1H)，7.57(m，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.40(s，2H)，4.80(m，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 357.21[M+H]+.
化合物14的合成：
以上一步骤中得到的化合物14‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物14.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.91(d，J＝8.8Hz，1H)，7.70(d，J＝2.4Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，5.37(s，2H)，5.28(s，1H)，4.53(d，J＝2.4Hz，2H)，3.34(m，1H)，3.23(m，1H)，3.00(m，1H)，2.71(m，1H)，2.52(m，1H)，1.95(m，1H)，1.85(m，1H)，1.76(t，J＝2.4Hz，3H)，1.67(m，1H)，1.29(m，1H).MS438.80[M+H]+.
实施例13.化合物15的合成

化合物15‑1的合成：
以2‑溴甲基‑6‑氟喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物15‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(d，J＝8.4Hz，1H)，7.99(dd，J＝5.2Hz，1H)，7.39(m，3H)，6.05(s，1H)，5.41(s，2H)，4.81(m，2H)，1.82(t，J＝2.0Hz，3H).MS 358.78[M+H]+.
化合物15的合成：
以上一步骤中得到的化合物15‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物15.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(m，2H)，7.35(m，3H)，5.37(s，2H)，5.28(s，1H)，4.53(d，J＝2.4Hz，2H)，3.34(m，1H)，3.23(m，1H)，3.01(m，1H)，2.71(m，1H)，2.51(m，1H)，1.95(m，1H)，1.85(m，1H)，1.77(t，J＝2.0Hz，3H)，1.66(m，1H)，1.28(m，1H).MS 422.50[M+H]+.
实施例14.化合物16的合成

化合物16‑1的合成：
以2‑溴甲基‑6‑甲基喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物16‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.87(d，J＝1.6Hz，1H)，7.79(m，1H)，7.26(d，J＝8.4Hz，1H)，5.99(s，1H)，5.25(s，2H)，4.72(m，2H)，2.72(s，3H)，1.80(t，J＝2.4Hz，3H).MS 354.89[M+H]+.
化合物16的合成：
以上一步骤中得到的化合物16‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物16.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89(m，2H)，7.81(m，1H)，7.21(d，J＝8.4Hz，1H)，5.23(m，3H)，4.49(d，J＝1.2Hz，2H)，3.30(m，1H)，3.19(m，1H)，2.98(m，1H)，2.68(s，3H)，2.47(m，1H)，1.94(m，1H)，1.83(m，1H)，1.78(t，J＝2.4Hz，3H)，1.64(m，2H)，1.28(m，1H).MS 418.66[M+H]+.
实施例15.化合物17的合成

化合物17‑1的合成：
以2‑溴甲基‑6‑甲氧基喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物17‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.98(d，J＝8.4Hz，1H)，7.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.29(m，2H)，7.03(d，J＝2.8Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.39(s，2H)，4.80(m，2H)，3.90(s，3H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 370.89[M+H]+.
化合物17的合成：
以上一步骤中得到的化合物17‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物17.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89(d，J＝9.2Hz，1H)，7.26(m，2H)，7.00(d，J＝2.4Hz，1H)，5.37(s，2H)，5.28(s，1H)，4.53(d，J＝1.6Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.33(m，1H)，3.23(m，1H)，3.01(m，1H)，2.71(m，1H)，2.52(m，1H)，1.96(m，1H)，1.85(m，1H)，1.78(s，3H)，1.67(m，1H)，1.28(m，1H).MS 434.49[M+H]+.
实施例16.化合物18的合成

化合物18‑1的合成：
以2‑溴甲基‑7‑氟喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物18‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(d，J＝8.8Hz，1H)，7.75(m，1H)，7.61(m，1H)，7.27(m，2H)，6.05(s，1H)，5.41(s，2H)，4.82(m，2H)，1.83(t，J＝2.4Hz，3H).MS 358.78[M+H]+.
化合物18的合成：
以上一步骤中得到的化合物18‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物18.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(d，J＝8.8Hz，1H)，7.73(m，1H)，7.63(m，1H)，7.25(m，2H)，5.40(s，2H)，5.31(s，1H)，4.56(d，J＝1.6Hz，2H)，3.37(m，1H)，3.26(m，1H)，3.04(m，1H)，2.75(m，1H)，2.55(m，1H)，1.99(m，1H)，1.88(m，1H)，1.80(s，3H)，1.74(m，1H)，1.32(m，1H).MS 422.50[M+H]+.
实施例17.化合物19的合成

化合物19‑1的合成：
以2‑溴甲基‑7‑氯喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物19‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.69(d，J＝8.8Hz，1H)，7.42(m，1H)，7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.40(s，2H)，4.81(m，2H)，1.83(t，J＝2.4Hz，3H).MS 375.21[M+H]+.
化合物19的合成：
以上一步骤中得到的化合物19‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物19.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.03(d，J＝8.4Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.40(m，1H)，7.30(d，J＝8.4Hz，1H)，5.39(s，2H)，5.30(s，1H)，4.56(d，J＝2.0Hz，2H)，3.37(m，1H)，3.26(m，1H)，3.04(m，1H)，2.75(s，3H)，2.55(m，1H)，1.98(m，1H)，1.88(m，1H)，1.79(s，3H)，1.73(m，1H)，1.32(m，1H).MS 438.98[M+H]+.
实施例18.化合物20的合成

化合物20‑1的合成：
以2‑氯甲基‑4‑氯喹啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物20‑1.
1H NMR(400MHz，CDC13)δ8.17(d，J＝8.0Hz，1H)，8.02(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.58(m，1H)，7.41(s，1H)，6.05(s，1H)，5.39(s，2H)，4.81(m，2H)，1.82(t，J＝2.4Hz，3H).MS 375.21[M+H]+.
化合物20的合成：
以上一步骤中得到的化合物20‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物20.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.13(d，J＝8.4Hz，1H)，8.02(d，J＝8.4Hz，1H)，7.68(t，J＝7.6Hz，1H)，7.55(t，J＝7.6Hz，1H)，7.38(s，1H)，5.37(s，2H)，5.30(s，1H)，4.55(s，2H)，3.37(m，1H)，3.25(m，1H)，3.03(m，1H)，2.74(m，1H)，2.53(m，1H)，1.97(m，1H)，1.88(m，1H)，1.79(s，3H)，1.70(m，1H)，1.30(m，1H).MS 438.90[M+H]+.
实施例19.化合物21的合成

化合物21‑1的合成：
以2‑氯甲基‑3‑甲基喹喔啉为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物21‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.69(m，1H)，7.57(m，1H)，6.00(s，1H)，5.41(s，2H)，4.82(m，2H)，1.80(t，J＝2.4Hz，3H).MS 354.09[M+H]+.
化合物21的合成：
以上一步骤中得到的化合物21‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物21.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.16(d，J＝8.4Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(m，1H)，7.55(m，1H)，5.37(s，2H)，5.32(s，1H)，4.58(s，2H)，3.37(m，1H)，3.25(m，1H)，3.03(m，1H)，2.74(m，1H)，2.53(m，1H)，2.43(s，3H)，1.95(m，1H)，1.86(m，1H)，1.78(s，3H)，1.73(m，1H)，1.32(m，1H).MS 419.2[M+H]+.
实施例20.化合物22的合成

化合物22‑1的合成：
以1‑氮杂‑2‑氯甲基菲为原料，参考实施例1中化合物4‑1的合成方法，制备得到化合物22‑1.
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(m，1H)，8.21(m，1H)，8.06(m，1H)，7.88(m，1H)，7.69(m，2H)，7.57(m，2H)，5.99(s，1H)，5.38(s，2H)，4.83(m，2H)，1.79(t，J＝2.4Hz，3H).MS 390.10[M+H]+.
化合物22的合成：
以上一步骤中得到的化合物22‑1为原料，参考实施例1中化合物4的合成方法，制备得到化合物22.
1H NMR(400MHz，CDCl3)8.35(m，1H)，8.23(m，1H)，8.08(m，1H)，7.89(m，1H)，7.70(m，2H)，7.58(m，2H)，6，00(s，1H)，5.36(s，2H)，4.81(m，2H)，3.37(m，1H)，3.25(m，1H)，3.01(m，1H)，2.76(m，1H)，2.53(m，1H)，2.41(s，3H)，1.94(m，1H)，1.86(m，1H)，1.79(s，3H)，1.72(m，1H)，1.31(m，1H).MS 454.2[M+H]+.
实施例21.体外活性实验
本发明提供的化合物对DPP‑IV的抑制率可以用DPP‑IV‑Glo蛋白水解酶的均相发光检测系统(DPP‑IV‑Glo Protease Assay，Promega cat#G8350)测定。该系统含有DPP‑IV底物Gly‑Pro‑氨基萤光素和萤光素酶活性检测的缓冲液系统，DPPIV‑Glo被DPP‑IV切割后会激活萤光素酶反应，产生“glow‑type”型发光信号，再用Turner Veritas微孔板发光光度计检测发光信号即可表征DPP‑IV的活性。
1、实验目的
测定本发明化合物对DPP‑IV酶的抑制活性以及选择性抑制作用。
2、实验材料
本发明实施例化合物；
DPP‑IV酶、DPP‑VIII酶、DPP‑IX酶、GP‑AMC(BioMol)、黑色96孔板、超级酶标仪；
DPP‑IV和DPP‑VIII的分析缓冲液：100mmol/l Tris/HCl buffer，pH 8.0，0.1mg/ml BSA；
DPP‑IX的分析缓冲液：100mmol/l Tris/HCl buffer，pH 7.4，0.1mg/mlBSA。
3、实验方法
a、酶活性的确定：
将GP‑AMC稀释于各自的缓冲液中，浓度为100umol/L，每孔25ul；酶梯度稀释，起始浓度分别为DPP‑VIII、DPP‑IX：0.01ug/ul，DPP‑IV：0.01mU/ul，按5倍稀释，每孔25ul，混匀；37℃，360/460nm测定荧光值的动态变化，测定30分钟；以吸光度呈直线上升、S/B≥5的酶浓度为使用浓度。
b、抑制剂活性测定：
所有酶、抑制剂、GP‑AMC均用分析缓冲液配制，设置无化合物对照、无酶液对照。
按酶的使用浓度配制酶液，每孔25ul；梯度稀释抑制剂(10倍或5倍稀释)，每孔25ul，混匀；加入稀释好的GP‑AMC溶液50ul，混匀；37℃反应20分钟，360/460nm测定荧光值。
c、数据分析：用GraphPad‑Prism软件分析。
4、实验结果
本发明实施例化合物3‑22对三种酶的抑制活性数据如下表一所示。
表一体外活性与选择性数据




普通DPP‑IV抑制剂在抑制DPP‑IV活性的同时，将一些DPP‑IV相关酶，如DPP‑II、DPP‑VIII、DPP‑IX的活性也抑制了，其中DPP‑VIII和DPP‑IX被认为是细胞溶质酶，他们的作用被抑制可能会引起一些DPP‑IV抑制剂的毒性作用，如秃顶，血小板减少(症)，贫血，脾肿大及多组织病变等。较理想状态是开发出对DPP‑IV有高度选择性抑制作用，同时对DPP‑VIII和DPP‑IX的活性没有影响的化合物。
实验结果说明：本发明实施例化合物对DPP‑IV具有非常好的选择性抑制作用，在有效抑制DPP‑IV活性的同时，对DPP‑VIII和DPP‑IX的活性几乎没有影响，可以预见本发明化合物开发成药后副作用比较低，具有非常好的应用价值。实施例22.体外对hERG的抑制作用
非心脏类药物有可能通过抑制hERG(IKr)通道引起心肌动作电位时程的延长，增加威胁生命的尖端扭转性(TdP)室性心律失常发生的可能性。本实验采用无内源性IKr电流的HEK293细胞系为宿主细胞，该细胞系被广泛应用于hERG的检测。
hERG细胞系常规培养，传代在含有10％胎牛血清和250g/ml G418的DMEM培养基中。每次实验取出一个培养皿，用细胞外液清洗两次，放置于倒置显微镜载物台上。全细胞膜片钳实验在室温下进行，所用硼硅玻璃微电极尖端电阻为3‑5MΩ。
形成全细胞记录模式后，将膜电位钳制在‑80mV，每隔30s给予细胞+50mV去极化电压刺激，持续2s后复极化至‑50mV，持续3s，即可引出hERG尾电流。去极化电压刺激前，先给予细胞50ms，‑50mV复极化电压，该电压下记录的电流作为计算hERG尾电流的基线。加入化合物前，hERG尾电流在细胞外液中至少稳定记录3分钟。灌流给药后当hERG尾电流幅值变化小于5％时，被认为药物作用达到稳态。如果电流在6分钟内未达到稳态，则亦结束该浓度化合物检测。
待测化合物对hERG电流的抑制率依据以下方程进行计算：％抑制率＝{1‑(电流剩余幅值)/(对照电流幅值)}*100
依据上述计算方法得到本发明实施例化合物多个浓度对hERG电流的抑制率，使用logistic方程对数据进行拟合，得到IC50值。本发明实施例化合物对hERG的抑制率和IC50数据如表二所示。
表二.体外对hERG的抑制作用
  化合物名称  最高检测浓度  最高浓度抑制率  IC50值  标准差  化合物4  300μM  79.0±1.2％  114.2μM  7.3μM  化合物6  300μM  91.7±1.6％  47.9μM  4.5μM  化合物9  300μM  84.9±8.3％  62.7μM  9.2μM
本研究在外源性表达hERG钾离子通道的HEK293细胞观察了化合物对hERG电流的作用。实验结果表明，化合物4、化合物6和化合物9对hERG的抑制较弱，提示各化合物通过抑制hERG(IKr)通道引起心肌动作电位时程的延长，增加威胁生命的尖端扭转性(TdP)室性心律失常发生的可能性很低，即本发明开发成治疗糖尿病的药物后，心脏毒性将较低。