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1、(10)申请公布号 CN 102994609 A (43)申请公布日 2013.03.27 CN 102994609 A *CN102994609A* (21)申请号 201210576350.3 (22)申请日 2012.12.27 C12Q 1/04(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12R 1/36(2006.01) (71)申请人 珠海市银科医学工程有限公司 地址 519090 广东省珠海市金湾区红旗工业 园虹晖二路 20 号 (72)发明人 孙宜峰 龚惠勇 (74)专利代理机构 广州市红荔专利代理有限公 司 44214 代理人 王贤义 (54) 发明名称 一种。
2、淋球菌快速检测试剂及检测试剂盒 (57) 摘要 本发明公开了一种无需任何仪器设备， 操作 简便快速、 灵敏度高且结果易判断的淋球菌检测 试剂盒以及该检测试剂盒中应用到的试剂。所述 淋球菌快速检测试剂由以下组分构成 ： 过氧化氢 8 15% ； 吐温 -800.1 0.2% ； 稳定剂 0.02 0.05% ； 余量为蒸馏水 ； 各组分之和为 100% ； 所述 检测试剂盒包括由透明材质制成的反应管 （1） ， 所述反应管 （1） 带有盖体 （2） 。本发明可应用于淋 球菌检测领域。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 。
3、(12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于， 按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 8 15% ； 吐温 -80 0.1 0.2% ； 稳定剂 0.02 0.05% ； 余量为蒸馏水 ； 各组分之和为 100%。 2. 根据权利要求 1 所述的一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于， 按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 15% ； 吐温 -80 0.2% ； 稳定剂 0.02% ； 蒸馏水 84.78%。 3. 根据权利要求 1 所述的一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于， 按质量百。
4、分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 8% ； 吐温 -80 0.1% ； 稳定剂 0.05% ； 蒸馏水 91.85%。 4. 根据权利要求 1 所述的一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于， 按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 12% ； 吐温 -80 0.15% ； 稳定剂 0.03% ； 蒸馏水 87.82%。 5. 根据权利要求 1 所述的一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于 ： 所述稳定剂为磷酸、 稀硫酸或苯甲酸。 6. 根据权利要求 1 至 5 任一项所述的一种淋球菌快速检测试剂， 其特征在于 ： 所述过 氧化氢的浓度为 5 15%， 所述吐温 -80 的浓度为 。
5、0.1 0.2%。 7. 一种包含如权利要求 6 所述的淋球菌快速检测试剂的检测试剂盒， 其特征在于 ： 该 试剂盒还包括由透明材质制成的反应管 （1） ， 所述反应管 （1） 带有盖体 （2） 。 8.根据权利要求7所述的淋球菌快速检测试剂盒， 其特征在于 ： 所述反应管 （1） 为透明 玻璃管或透明塑料管。 权 利 要 求 书 CN 102994609 A 2 1/3 页 3 一种淋球菌快速检测试剂及检测试剂盒 技术领域 0001 本发明涉及淋球菌的快速检测试剂， 以及包含该试剂的检测试剂盒。该试剂盒用 于检测患者尿液 ( 初段尿 )、 宫颈分泌物 （女性） 或尿道分泌物 （男性） 中的淋。
6、球菌。 背景技术 0002 淋病目前是我国最为常见的性传播疾病之一， 其病原体是淋病奈瑟氏菌 （简称淋 球菌） 。人是淋球菌的惟一自然宿主， 淋球菌通常寄居于粘膜表面的柱状上皮细胞内， 其主 要致病物质包括菌毛、 外膜蛋白、 蛋白酶、 脂多糖等， 主要通过性接触直接感染泌尿生殖道、 口咽部和肛门直肠粘膜， 或在分娩时通过产道感染新生儿， 临床表现为单纯性淋病、 盆腔 炎、 口咽部和肛门直肠病、 淋菌性结膜炎及播散性淋病。因此， 对淋病的早期诊断和治疗十 分重要。 0003 淋球菌感染后约有 1% 男性无任何症状， 75% 的女性患者无症状， 因此， 仅凭有无临 床症状作为判断是否感染淋球菌的依。
7、据， 漏诊率极高， 尤其是女性， 所以建立准确可靠的检 测方法十分必要。目前， 淋病的诊断方法主要有培养法和非培养法。这几种方法从检测灵 敏性， 特异性， 临床实用性都各有优缺点。 0004 一、 细菌培养法 ： 淋球菌为需氧菌， 营养要求高， 常用含多种氨基酸、 血液以及万古 霉素和多粘菌素的选择性培养基培养， 经35， 5%CO2培养箱内培养2448小时。 淋球菌在 不同培养基上所形成菌落的大小， 透明度不尽相同。在巧克力琼脂培养基上， 菌落呈圆形， 凸起、 湿润、 光滑， 半透明或灰白色， 边缘整齐， 直径约0.51.0mm。 继续培养有时可形成表 面粗糙和锯齿状边缘的菌落。细菌分离培养。
8、是目前诊断淋病最可靠的手段， 是诊断淋病的 重要佐证， 培养法对症状很轻或无症状的男性、 女性患者都是比较敏感的方法， 只要培养阳 性就可确诊。因为淋球菌对营养要求高， 对理化因素的抵抗力差， 离体后很快死亡并自溶， 因此细菌分离培养检测淋球菌阳性率低， 另外此法还受操作技术和培养条件等客观因素影 响。 0005 二、 涂片 G 染色 ： 取采集的分泌物立即涂片， 且厚薄均匀适宜， 待自然干燥后进行 革兰染色。在油镜下观察 20 个视野， 淋病奈瑟氏双球菌染成红色或粉红色， 形态为肾形对 称或半圆形对称排列， 以单个或成团位于细胞内或细胞外， 镜检查革兰阴性双球菌。涂片 G 染色镜检， 此方法。
9、受取材、 涂片、 染色等各种因素影响， 且镜下淋病双球菌极易与其它的革 兰氏阴性双球菌混淆， 易发生误诊和漏诊。 0006 三、 PCR 检测法 ： PCR 为聚合酶链反应， 属一种基因诊断技术， 它借助于一种 DNA 扩 增技术， 能将体内微量的淋球菌扩增， 每次实验均做阴阳性对照， 阴阳性结果符合要求， 才 能发出报告， 此方法简便、 快速， 只需2-3小时即可出结果。 PCR技术对标本采集的要求远不 如细菌培养那么严格， 它不管细菌是死是活都可以检测出来， 可克服使用抗生素后其他方 法检测不出的问题， 同时由于 PCR 的放大作用， 也可以克服标本数量少检测不出的问题。由 于 PCR 技。
10、术具有敏感性高的特点， 极微量污染可导致假阳性结果， 敏感性和特异性差异很 大， 故不适于医院常规诊断。总之， 该方法存在操作步骤繁琐、 费用高、 易污染、 假阳性和假 说 明 书 CN 102994609 A 3 2/3 页 4 阴性较多等问题， 为大规模开展淋球菌高危人群的筛查带来不便。 0007 四、 特异性标态酶试验 ： 主要包括 1. 氧化酶试验 ： 淋球菌氧化酶阳性， 但氧化酶阳 性者并不一定是淋球菌。 细菌经培养后形态疑似淋球菌， 若氧化酶试验呈阳性， 可初步鉴定 为淋球菌。2. 过氧化氢酶试验 ： 淋球菌可产生过氧化氢酶。该酶能使过氧化氢迅速分解成 水和氧气， 出现气泡。用作淋。
11、球菌的初步鉴定。 发明内容 0008 本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足， 提供一种无需任何仪器设 备， 操作简便快速、 灵敏度高且结果易判断的淋球菌检测试剂盒以及该检测试剂盒中应用 到的试剂。 0009 本发明中的淋球菌快速检测试剂所采用的技术方案是 ： 所述淋球菌快速检测试剂 按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 8 15% ； 吐温 -80 0.1 0.2% ； 稳定剂 0.02 0.05% ； 余量为蒸馏水 ； 各组分之和为 100%。 0010 具体地， 按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 15% ； 吐温 -80 0.2% ； 稳定剂 0.02%。
12、 ； 蒸馏水 84.78% ； 或者按质量百分比计算， 它包括以下组分 ： 过氧化氢 8% ； 吐温 -80 0.1% ； 稳定剂 0.05% ； 蒸馏水 91.85% ； 或者按质量百分比计算， 它包括以下 组分 ： 过氧化氢 12% ； 吐温 -80 0.15% ； 稳定剂 0.03% ； 蒸馏水 87.82%。 0011 所述稳定剂为磷酸、 稀硫酸或苯甲酸。 0012 所述过氧化氢的浓度为 5 15%， 所述吐温 -80 的浓度为 0.1 0.2%。 0013 所述吐温 -80 即是聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯， 简称聚山梨酯 -80。 0014 本发明中的淋球菌快速检测试剂盒所采用的技术。
13、方案是 ： 该试剂盒包括上述淋球 菌快速检测试剂外， 还包括由透明材质制成的反应管， 所述反应管带有盖体。 0015 所述反应管为透明玻璃管或透明塑料管。 0016 本发明的有益效果是 ： 本发明淋球菌快速检测试剂盒包括淋球菌快速检测试剂和 反应管， 该检测试剂由过氧化氢、 吐温 -80、 稳定剂和蒸馏水按一定质量比例构成， 而临床上 检测到的淋病奈瑟氏菌即淋球菌具有一种特异性酶反应测定系统， 该特异性酶能与过氧化 氢发生生化反应并产生气泡， 若采集的标本怀疑带有淋球菌， 则通过在透明反应管中加入 待检测标本， 再滴加本发明中的检测试剂， 通过透明反应管， 在反应管内滴入待检测标本， 若标本中。
14、含有淋球菌， 在经过一定的时间后， 即可观察到反应管内产生气泡， 从而迅速判定 该标本带有淋球菌， 所以， 本发明所述淋球菌快速检测试剂具有极高的灵敏度， 能快速检测 到淋球菌， 且能用肉眼即可观察到检测结果， 方便快捷， 且无需任何仪器设备， 操作简便， 且 取样方便无痛苦， 适合各级医院及诊所甚至个人使用， 特别适用于大批量体检标本的检测。 附图说明 0017 图 1 是所述淋球菌快速检测试剂盒的简易结构示意图。 具体实施方式 0018 下面就具体实施例对本发明做进一步阐述。 0019 本发明所述淋球菌快速检测试剂盒由检测试剂及反应管组成。 所述反应管由透明 说 明 书 CN 102994。
15、609 A 4 3/3 页 5 材质制成， 容量为 8ml。如图 1 所示， 所述反应管 1 带有盖体 2。所述反应管 1 为透明玻璃 管或透明塑料管。 所述淋球菌快速检测试剂按质量百分比计算， 由以下组分构成 ： 过氧化氢 8 15% ； 吐温 -80 0.1 0.2% ； 稳定剂 0.02 0.05% ； 余量为蒸馏水 ； 各组分之和为 100%。具体可取 ： 过氧化氢 15% ； 吐温 -80 0.2% ； 稳定剂 0.02% ； 蒸馏水 84.78% ； 或者， 过氧化氢 8% ； 吐温 -80 0.1% ； 稳定剂 0.05% ； 蒸馏水 91.85% ； 又或者， 过氧化氢 12%。
16、 ； 吐温-80 0.15% ； 稳定剂 0.03% ； 蒸馏水 87.82%。 所述稳定剂为磷酸、 稀硫酸或苯甲酸等 酸性物质。在本实施例中， 选用苯甲酸。所述过氧化氢的浓度为 5 15%， 所述吐温 -80 的 浓度为 0.1 0.2%。 0020 在配制上述淋球菌快速检测试剂时， 尽量避光、 避热、 避尘埃， 不接触氧化物、 还原 物、 金属物。 上述试剂盒用于检测患者尿液(初段尿)、 宫颈分泌物 （女性） 或尿道分泌物 （男 性） 中的淋球菌。 0021 本发明试剂盒检测步骤为 ： 1、 取一个本发明所配的反应管， 加约2ml待测标本。 标 本若为尿， 直接使用 ； 若为分泌物， 需用。
17、无菌生理盐水洗涮至试剂盒所配的反应管中， 弃去 拭子 ； 2、 垂直滴加反应液 5 6 滴， 盖好盖体， 轻轻摇匀后静置。3、 5 分钟后 ( 轻度病人可 延至 10 分钟 )， 观察反应管内上部气泡形成情况 （20 分钟后观察的结果无效） 。液面上部形 成一层白气泡或液面上层管壁形成一圈细小的白气泡， 即可判断为阳性。液面无气泡或气 泡较少， 未形成一圈， 即可判断为阴性。 0022 为了测试上述试剂盒的检测灵敏度， 用无菌生理盐水将培养好的新鲜淋病奈瑟氏 菌标准菌株制作成 1 号麦氏浊度 （即 3107cfu/ml） ， 再依次 10 倍梯度稀释 4 次， 即稀释至 3106cfu/ml、 3105cfu/ml、 3104cfu/ml、 3103cfu/ml 作为灵敏度参考品。向反应管中 分别加入灵敏度参考品 2ml， 按上述检测步骤进行检测， 结果显示本试剂盒的检测灵敏度为 3104cfu/ml。 0023 本发明中的检测试剂盒具有无需任何仪器设备， 灵敏度高、 操作简便快速、 结果易 判断和取样方便无痛苦等特点， 适合各级医院及诊所甚至个人使用， 特别适用于大批量体 检标本的检测。 0024 本发明可应用于淋球菌检测领域。 说 明 书 CN 102994609 A 5 1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 102994609 A 6 。