壳聚糖提高指甲生长速率的用途 本发明涉及壳聚糖、壳聚糖衍生物和/或其生理学可接受的盐提高指甲生长速率的用途及其用于指甲生长紊乱治疗的用途。本发明进一步涉及壳聚糖明显缩短指甲病、指甲营养不良或其它指甲病况的特异疗法时间的用途。
【发明背景】
指甲是由角质硬组织制备的皮肤附件，是一种基于死亡的角化细胞并由角蛋白组成的材料，角蛋白是一种富含硫酸化氨基酸和S-S键的蛋白。指甲生长在表皮的口袋样凹陷处，恰好处于手指和脚趾的末端顶部的表皮上。用于指甲板的指甲材料的形成首先表现为从甲母质中挤出，甲母质是一种占据指甲袋近端至新月的下部的特化组织。母质的最近端组成提供了指甲背部表面的角化细胞。这些通常提供有光泽的表面。当该母质被疾病所改变或指甲表面遭受创伤时，这一光泽会消失。甲母质区域接近甲床，通过它指甲板牢固地附着于甲床。甲床是处于甲床和指垫之间的表皮的背侧区域。
指甲板的生长速率，例如超过其游离缘的长度的增长，取决于甲母质中的指甲细胞再生的程度。在那里形成的细胞材料分化为板样角质结构，它被被动地推向远端方向。指甲在组织的整个生命周期不断地生长，生长速率在老年时期和在如外周循环受损、指甲感染、银屑病甲以及其它指甲疾病的一定条件下会减少。老年人的指甲变化主要涉及减少组织修复以及远端指间关节的炎症性或变性性改变。这些影响同纵向指甲生长速率的减少、指甲板变薄以及纵脊增强有关。
老年人趾甲的厚度和硬度发生着变化并且主要归因于外周循环的变化。
具有健康外观的指甲应该是光滑、弯曲、没有任何斑点，并且应当没有空洞或隆起。处于不好状况下的指甲对个人可能是十分有害的，如果被忽视可以引起慢性感染，并同长期持续的紊乱和病痛相关。值得注意的是，它们可能被认为是社会问题和/或职业病。由于尤其指甲但是也包括趾甲持续地同环境接触，它们容易遭受大量较小的并且有时较大的创伤。
指甲平均每月增加的长度在1-3mm之间，并且除了年龄之外，循环和特殊疾病、饮食和生理应激可以影响这一数值。据报道优势手的指甲生长的更快。趾甲明显比指甲生长的更慢，因此当拇指指甲需要6个月去完成再生长时，大脚趾甲或其它脚趾甲需要至少12个月用于它们的完全再生长。
指甲生长在甲癣和其它指甲病的治疗方面起到关键作用，因为健康指甲完全再生长是每个治疗方案首要研究终点的一部分：因此，可以增加指甲生长的因素可能在缩短指甲病的治疗方面有决定性的作用。
在本领域，壳聚糖衍生物如羟烷基壳聚糖和/或羧基烷基壳聚糖被称为水溶性薄膜形成剂。它们的用途例如在EP1303249中被公开，它公开了含有至少一种抗真菌药的指甲油组合物，以及在WO2004/112814中被公开，它公开了一种基于来自木贼属的一种草本提取物同羟丙基壳聚糖组合的指甲重构组合物，其用作薄膜形成剂。壳聚糖作为薄膜形成剂的用途也在WO2006111426和WO2007042682中公开；壳聚糖的用途也公开在Wenk，Myfungar Nagellak，Haut，Viavital Verlag，Essen，德国，15卷，7期，2004，307-308页；RU2108114；EP10679383；Monti等，Drug Development and Industrial Pharmacy，2005，美国，31卷，1期，2005，11-17页；WO03051376中。
现在已经发现可以通过含有壳聚糖或壳聚糖衍生物产品单独或同一种或多种活性成分联合用于指甲板以促进指甲的生长。
发明描述
本发明的目的表示为壳聚糖、壳聚糖衍生物和/或其生理学可接受的盐用于促进指甲生长的用途。
优选的壳聚糖衍生物为水溶性的并且选自分子量高于50000Da，优选100000至500000Da的氨基多糖壳聚糖；在它们中间有羟烷基壳聚糖，例如羟丙基壳聚糖，以及尤其优选羧基烷基壳聚糖。更详细地，它表示为不仅在例如甲癣、银屑病甲、扁平苔癣或特应性皮炎的指甲病也在甲营养不良和各种原因地指甲生长紊乱的治疗中，壳聚糖、壳聚糖衍生物或其生理学可接受的盐用于促进指甲生长的用途。
以指甲胶、霜剂、软膏剂、凝胶、洗剂或起泡剂的形式，含0.1至10wt.％，更优选0.2至5wt.％，最优选0.3至2％壳聚糖的壳聚糖或壳聚糖衍生物液体或半固体制剂当有规则地用于指甲表面时适用于促进指甲生长。
药物组合物将根据常规技术使用合适的赋形剂以及药学可接受载体制得，并且可以含有、结合一种或多种具有互补或无论如何都具有有用活性的活性成分。可以用在组合物中同本发明壳聚糖组合的活性物质包括但不限于皮质类固醇、抗牛皮癣剂、免疫抑制剂、抗真菌药物、防腐剂、湿润剂和/或指甲强化药物。
皮质类固醇的例子包括21-乙酸孕烯醇酮、阿氯米松或它的二丙酸盐、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松或它的二丙酸盐、倍他米松及其盐、包括例如苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、倍他米松磷酸钠和醋酸倍他米松以及倍他米松戊酸酯；氯倍他索或它的丙酸盐、氯可托龙戊酸酯、氢化可的松及其盐、包括例如醋酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、磷酸氢化可的松、氢化可的松磷酸酯钠、氢化可的松琥珀酸钠、叔丁醋酸氢化可的和戊酸氢化可的松；醋酸可的松、地奈德、去羟米松、地塞米松及其盐，例如醋酸盐和磷酸钠；双醋二氟拉松、醋酸氟氢可的松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟米龙、丙酮缩氟氢羟龙、氯氟舒松、甲羟松、甲泼尼龙及其盐、例如醋酸盐、琥珀酸钠；糠酸莫米松、醋酸对氟米松、泼尼松龙及其盐、例如醋酸盐、二乙基氨基乙酸盐、磷酸钠、琥珀酸钠、叔丁乙酸盐、三甲基醋酸盐；泼尼松、曲安西龙及其衍生物、曲安奈德、苯曲安奈德、醋酸曲安西龙、己曲安奈德。
抗牛皮癣药的例子包括：蒽衍生物，例如地蒽酚；补骨脂素类，像三甲沙林或甲氧沙林；维生素D3类似物，像骨化三醇，卡泊三醇或他卡西醇；维生素a酸类，像他扎罗汀，阿曲汀或阿维a酯；富马酸及其酯，例如单甲基酯、二甲基酯。
免疫抑制剂的例子包括环孢素、他克莫司、吡美莫司和西罗莫司。
抗真菌药的例子包括：1-羟基-2-吡啶酮类化合物以及他们的盐，例如环吡酮、利洛吡司、吡罗克酮、环吡酮胺；咪唑类衍生物以及它们的盐，例如克霉唑、益康唑、异康唑、酮康唑、咪康唑、噻康唑、联苯苄唑、芬替康唑和奥昔康唑；多烯类衍生物和它们的盐，例如制霉菌素、那他霉素和两性霉素；烯丙胺类衍生物和它们的盐，例如萘替芬和特比萘芬；三唑类衍生物和它们的盐，例如氟康唑、伊曲康唑、特康唑和伏立康唑；吗啉类衍生物和它们的盐，例如在US-A-5,120,530中公开的阿莫罗芬和吗啉类；灰黄霉素和相关化合物，例如灰黄霉素；十一烯酸和它的盐，具体地，十一烯酸的锌盐和钙盐；托萘酯和它的盐；以及氟胞嘧啶和它的盐。
抗真菌药也可以选自天然材料来源，尤其是植物提取物。这些提取物的例子包括茶树油(互叶白千层)、熏衣草油(薰衣草)以及楝树的叶提取物(印度楝树)。
防腐剂的例子包括：洁尔灭、苄索氯铵、西曲溴铵、氯己定、地喹氯铵、三氯卡班、三氯生、水杨酸、苯甲酸以及它们的盐、对羟苯甲酸以及它的酯。
根据本发明制备得到的组合物的例子包括：指甲胶、霜剂、软膏剂、凝胶、洗剂或起泡剂，任意地应用于指甲表面或处于半闭合或闭合治疗之下。
本发明的药物组合物以及用途现在将通过下面的实施例进行更充分的描述。然而，应该注意到所述实施例是以具体说明但并非限制的方式给出。
实施例1
制备具有下列wt./wt.％组成的溶液：
1.纯净水 21.0％
2.乙醇 73.0％
3.乙酸乙酯 4.0％
4.羟丙基壳聚糖(HPCH) 1.0％
5.十八醇十六醇混合物 1.0％
制备
通过使用带有搅拌器的闭式容器制备得到该制剂。往这一容器中加入乙醇、去离子水和乙酸乙酯以形成混合物。其后，加入十八醇十六醇混合物。最后，加入羟丙基壳聚糖并且将制得的混合物搅拌24小时或直到溶解。
获得的组合物甚至在长期保存后都具有澄清和均质的外观。此外，当用于指甲时，该液体可以形成非粘性和弹性的薄膜，它可以牢固地附着于指甲表面。
实施例2
进行一个开放性、比较性的临床研究以评价根据实施例1所述的溶液对健康志愿受试者指甲的生长促进效能以及溶液的安全性。该实验以单中心进行，在皮肤病学对照下进行4周的治疗。
具体而言，根据随机选择的名单以及遵循研究者的指令，将该研究产品一天一次用于左或右手的5个指甲；在基线诊断期间，研究者指定每个包括的受试者的研究产品应用侧。另一侧手的指甲被用做对照区域(未处理的指甲)。
试验期间，进行下列随访：
·基线T0a(产品使用前)
·基线延长诊断T0b(T0a3天后)
·最终诊断T4a(治疗25天后)
·最终延长诊断T4b(4周治疗结束时)。
该研究在22个健康志愿受试者中进行(1个男性和21个女性)，已经得到他们的知情许可，年龄处于18 50的范围(平均年龄＝43)。所有的受试者如每一治疗方案指导的那样结束试验。
在研究期间没有发生可能时测试结果产生干扰的重要事件。
数据处理通过描述性和推理性分析进行。
该产品的活性以绝时值和相对于非治疗对照区域的相对术语进行表达。具体地，如下所示进行实验数据的统计分析：
治疗和非治疗指甲相对于基本条件的T4结果的比较(Student t检验)。
治疗指甲相对于非治疗指甲时间对时间的比较(方差分析)。
比较治疗和非治疗手的拇指指甲的数字图像来测定每个受试者的指甲生长速度(mm/天)，在基线条件(T0a vs T0b)和实验结束后(T4a vsT4b)进行。
所获得的结果表明研究产品决定了指甲生长速度在统计学上对应于15％(从0.071mm/天的基础平均值至0.082的最终平均值)的显著增加(Student t检验p＜0.01vs T0)。
非治疗指甲突出变现为指甲生长速度没有变化；在T0和T4时所获得的实际平均值为0.075mm/天。
除了指甲生长速度的增加外，甲光滑度的重要增加在治疗指甲组与对照的非治疗指甲组对比中也测量到有显著性。
此外，该治疗耐受性非常好并且没有报告副作用。
实施例3
制备具有下列wt./wt.％组成的溶液：
1.纯净水 13.0％
2.乙醇 73.0％
3.环吡酮 8.0％
4.乙酸乙酯 4.0％
5.羟丙基壳聚糖(HPCH) 1.0％
6.十八醇十六醇混合物 1.0％
制备
通过使用带有搅拌器的闭式容器制备得到该制剂。往这一容器中加入乙醇、去离子水和乙酸乙酯以形成混合物。其后，加入十八醇十六醇混合物和环吡酮。最后，加入羟丙基壳聚糖并且将制得的混合物搅拌24小时或直到溶解。
获得的组合物甚至在长期保存后都具有澄清和均质的外观。此外，当用于指甲时，该液体可以形成非粘性和弹性的薄膜，它可以牢固地附着于指甲表面。
实施例4
在对患有皮肤癣菌所引起的甲癣的患者进行对照临床研究的框架下测量根据实施例3(命名为P-3051)和1(用作安慰剂)所述溶液的指甲生长促进效能。
该研究为多中心、随机、长期、双盲/盲目评价、平行组、三组：如在实施例3中的P-3051溶液，含有作为组成部分的羟丙基壳聚糖以及作为活性抗真菌药的环吡酮；如在实施例1中的安慰剂溶液，含有作为组成部分的羟丙基壳聚糖，但没有任何活性抗真菌药，以及作为参考的来自美国市场的指甲胶含有作为抗真菌药的8％环吡酮以及作为其它成分的水、异丙醇、单酯树脂。参考溶液与受试P-3051溶液的不同在于在参考溶液中不含有壳聚糖。全部的467名患者在P-3051、参考产品和安慰剂中以2∶2∶1的比率随机地分配。他们经过4-8周的准备期，48周的治疗以及12周的随访。在效能研究终点中，在治疗和随访期间测量转阴的真菌培养物、有≥90％干净指甲的患者百分比、健康指甲的生长速率。健康指甲的生长速率为一种参数，其中抗真菌效力和指甲生长促进效力起到特殊的作用。
如所期望的那样，P-3051和参考产品对真菌发现物直接疗法的作用是相类似的，治疗结束时约有90％转阴的真菌培养物。转阴的真菌培养物的比率在安慰剂组中显著较低(70％)，并且这一结果也是预料中的。
结果以指甲生长速率的方式在表1中进行概述。
表1：分别使用P-3051，一种含有8％环吡酮以及1％羟丙基壳聚糖的指甲胶；安慰剂，一种含有1％羟丙基壳聚糖的指甲胶；参考产品Penlac，一种含有8％环吡酮的指甲胶研究治疗期间的健康指甲生长速率。
健康指甲的生长安慰剂(n＝94)P-3051(n＝175)Penlac(n＝185)24周平均值±标准差(N)4.89+16.21(88)6.29+17.19(167)4.73+16.91(177)36周平均值±标准差(N)6.56+18.25(77)9.17+18.01(162)5.93+19.51(170)48周平均值±标准差(N)7.3+20.83(74)11.6+21.84(157)8.28+19.4(156)
含有8％环吡酮但不含壳聚糖的市售参考物在治疗24、36和48周时，有健康指甲生长的持续增加。含有羟丙基壳聚糖但不含活性抗真菌药的安慰剂类似于市售参考物也表现出健康指甲生长的持续增加。正如所认为的那样，含有壳聚糖和8％环吡酮(活性抗真菌药)两者的P-3051明显比市售参考物在健康指甲生长速率方面更具活性。
可以得出这样的结论，在根据实施例3制得的P-3051的组成中，壳聚糖的存在对指甲生长速率具有直接的作用，改善了抗真菌药在健康指甲生长方面的作用。
实施例5
制备具有下列wt./wt.％组成的溶液：
1.纯净水 29.375％
2.乙醇96° 70.0％
3.布地奈德 0.025％
4.羟丙基壳聚糖(HPCH) 0.5％
5.Peg-40氢化蓖麻油 0.1％
制备
如同实施例1和3，该制剂通过加入羟丙基壳聚糖作为最终成分并搅拌24小时或直至溶解制备得到。
实施例6
制备具有下列wt./wt.％组成的溶液：
1.丙二醇 13.0％
2.异丙醇 82.497％
3.骨化三醇 0.003％
4.乙酸乙酯 4.0％
5.壳聚糖 0.5％
制备
将壳聚糖溶入丙二醇，随后加入先前已经溶于异丙醇的骨化三醇。然后加入乙酸乙酯并且随后搅拌所得到的混合物直至溶解。
实施例7
进行一个开放性、比较性的临床研究去评价根据实施例3得到的溶液对24名健康男性志愿受试者指甲的生长促进效能，受试者年龄为21-40岁(平均31.8±标准差4.6岁)并已经得到他们的知情同意。在这一试验中，将根据实施例3得到的溶液的指甲生长促进效能与作为参考的市售指甲胶(罗每乐-法国)的效能进行比较，市售指甲胶含有下列成分：阿莫罗芬HCl 5.574％，甲基丙烯酸(metachrilic acid)共聚物，三醋酸甘油酯，乙酸丁酯，乙酸乙酯，乙醇。试验与参考产品随机自行施用于任意手的所有手指甲上28天。通过刷子一天一次地使用该试验产品；通过使用软膏刀，如每一认可的标记那样每周两次使用市售参考产品。试验与参考产品两者均在晚间使用。在应用每一试验产品前，指导受试者用清水和肥皂清洗他们的手并正确地干燥；在应用每一参考产品前，受试者必须用带有异丙醇的拭子除去先前的产品涂层。
使用与实施例2相同的时间和方法评价所促进的指甲生长活性。
所得到的结果表明根据实施例3得到的试验溶液决定了指甲生长速度在统计学上显著地增加(Student t检验p＜0.01vs T0)达到34％(从0.094mm/天的基础平均值到0.126的最终平均值)。
正好相反，应用了参考指甲胶的指甲的生长从基线(0.104mm/天)到试验的结束(0.117mm/天，不显著)并没有很明显的区别。
实施例8
制备具有下列wt./wt.％组成的溶液：
1.丙二醇 13.0％
2.异丙醇 82.5％
3.乙酸乙酯 4.0％
4.壳聚糖 0.5％
制备
将壳聚糖溶入丙二醇，随后加入异丙醇和乙酸乙酯并且搅拌所得到的混合物直至溶解。
实施例9
进行一个开放性、比较性的临床研究去评价根据实施例8得到的溶液对6名健康男性志愿受试者指甲的生长促进效能，受试者年龄为22-40岁(平均32.2±标准差7.9岁)并已经得到他们的知情同意。在这一试验中，在睡觉前晚间，将根据实施例8得到的溶液的指甲生长促进效能随机地自行施用于一只手所有手指甲上28天。在实施每一试验前，指导受试者用清水和肥皂清洗他们的手并正确地干燥。
使用与实施例2相同的时间和方法评价所促进的指甲生长活性。未治疗的手指甲作为参考指甲。
所得到的结果概括在图1中。根据实施例8得到的试验溶液决定了指甲生长速度在统计学上显著增加(Student t检验p＜0.01vs T0)达到48％(从0.083mm/天的基础平均值到0.123的最终平均值)。
正好相反，作为参考的未治疗指甲的生长从基线(0.087mm/天)到试验的结束(0.081mm/天)并没有很明显的区别。