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1、(10)申请公布号 CN 103102337 A (43)申请公布日 2013.05.15 CN 103102337 A *CN103102337A* (21)申请号 201310026336.0 (22)申请日 2013.01.24 C07D 311/30(2006.01) (71)申请人 昆明理工大学 地址 650093 云南省昆明市五华区学府路 253 号 (72)发明人 廖霞俐 杨波 易东 张淼 (54) 发明名称 一种野黄芩素的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种野黄芩素的制备方法， 该 制备方法系以浓硫酸为反应试剂， 将其与灯盏乙 素在室温下混匀， 然后滴加少量水， 静置冷却。
2、后， 将反应体系倒入水中搅拌， 析出的沉淀抽滤后即 得到野黄芩素。 或通过重结晶， 得到更高纯度的野 黄芩素。 与已知的制备方法相比， 本发明提供的方 法反应时间更短、 反应条件较温和且反应过程中 不需使用任何有机溶剂， 产物野黄芩素收率高、 纯 度高。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103102337 A CN 103102337 A *CN103102337A* 1/1 页 2 1. 一种野黄芩素的制备方法， 其特征在于包括。
3、以下制备过程 ： 将灯盏乙素加入到无机酸溶液中， 使灯盏乙素在无机酸溶液中浓度为 0.03 0.08g/ mL， 在室温下搅拌 5 20min ； 往步骤 （1） 所制得溶液中滴加水， 搅拌均匀后， 静置冷却， 其中水的添加量为每 1g 灯盏 乙素滴加 1 15mL 的水 ； 冷却后， 按水与反应液的体积比为 1 10 的比例将反应液滴入水中并同时搅拌， 析出 的沉淀即为产物野黄芩素。 2. 根据权利要求 1 所述的野黄芩素的制备方法， 其特征在于 ： 无机酸为浓硫酸、 浓盐酸 或浓磷酸。 3.根据权利要求1所述的野黄芩素的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （3） 所述的水的温度 为 5 60。
4、。 4.根据权利要求1所述的野黄芩素的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （3） 所述的搅拌速率 为 500 2000 转 / 分。 5. 根据权利要求 1 所述的野黄芩素的制备方法， 其特征在于 ： 所得的沉淀产物野黄芩 素用醇液重结晶， 得更高纯度的野黄芩素。 6. 根据权利要求 5 所述的野黄芩素的制备方法， 其特征在于 ： 重结晶所用的醇液为质 量百分比浓度为 80 95% 的乙醇或质量百分比浓度为 50 70% 的甲醇。 权 利 要 求 书 CN 103102337 A 2 1/4 页 3 一种野黄芩素的制备方法 技术领域 0001 本发明属于中药化学成分的制备方法领域， 具体涉及一种。
5、以黄酮类化合物灯盏乙 素为原料通过直接酸水解制备野黄芩素的方法。 背景技术 0002 灯盏花素 （breviscapine）是菊科植物灯盏细辛 （Erigeron breviscapus）的提 取物， 主要由灯盏乙素和灯盏甲素组成， 其公认的有效化学成分是灯盏乙素， 又名野黄芩 苷 （Scutellarin） ， 即 5， 6， 4- 三羟基黄酮 -7-D- 葡萄糖醛酸苷。灯盏乙素具有抗血小 板聚集、 抗脑缺血和再灌注损伤、 抗心肌缺血和再灌注损伤、 松弛血管、 抑制血管平滑肌肌 细胞的增殖、 抗肺动脉高压、 抗氧化、 抗糖尿病等药理作用， 临床主要用于治疗冠心病、 心绞 痛、 脑血管疾病、 。
6、胎儿宫内生长迟缓、 肺心病、 糖尿病神经病变、 药物性肝损伤等疾病， 疗效 确切。从 20 世纪 70 年代初期起就已开始灯盏乙素的药用研究， 但由于其溶解性差， 口服生 物利用度低， 使得其临床应用受到较大限制。 0003 目前， 灯盏乙素的新剂型的种类已有几十种， 但上市的新剂型不多， 说明改变剂型 并不能真正改变灯盏乙素的溶解性差、 吸收差以及生物利用度低的问题。 另外， 灯盏乙素的 结构具有较大的刚性， 若水解掉葡萄糖醛酸基团， 降低其刚性， 可能会改变溶解性， 有利于 吸收。居文正等 （中国临床药理学与治疗学 , 2006, 11 (3): 292-295.） 推断， 口服的灯盏 乙。
7、素实为前药， 野黄芩素 （Scutellarein） 才是真正的药效物质基础。同时有研究表明， 野 黄芩素是灯盏乙素在体内的主要代谢产物 （Planta Med., 2007, 73 (4): 363-365.） 。车 庆明等 （中国药学杂志 , 2007, 42 (18): 1418-1421.） 报道， 口服野黄芩素易于吸收， 较之 灯盏乙素， 体内代谢稳定， 其相对生物利用度达到 301.8%。显然， 野黄芩素的生物利用率要 远远高于灯盏乙素。 0004 植物中野黄芩素的含量很低， 而灯盏乙素的含量较高， 因此通过化学反应将灯盏 乙素转化为野黄芩素具有重要的研究价值。通常情况下， 可采用。
8、直接酸或碱水解、 热裂 解和酶水解等方法将来源较广的黄酮苷转化为黄酮苷元。车庆明 （车庆明， 中国专利， CN 1683357A） 使用320%的无机酸水溶液加热回流148小时水解灯盏乙素得到野黄芩素。 李念光等 （李念光等， 中国专利， CN 101824017A） 使用 3 8mol/L 的无机酸醇溶液加热回 流将灯盏乙素水解得到野黄芩素。 周玲等 （周玲等， 中国专利， CN 101586132A ； 101585826A ； 101591320A） 分别使用了酸溶液中加热水解和酸、 碱溶液中消化酶水解的方法对灯盏乙素 进行水解。丘峰等 （丘峰等， 中国专利， CN 102618593A。
9、） 利用黑曲霉对灯盏乙素进行了水 解。但以上方法存在反应温度高、 反应时间长、 收率不高或需要使用有机溶剂等缺点。本发 明旨在提供一种直接酸水解法， 使反应可在较温和的条件下进行， 快速、 高收率地得到目标 产物， 且排除有机溶剂的使用。 发明内容 0005 本发明的目的是克服已有技术的不足， 提供一种简捷、 快速、 高效且环境友好的通 说 明 书 CN 103102337 A 3 2/4 页 4 过酸直接水解灯盏乙素来制备野黄芩素的方法。 0006 本发明制备野黄芩素的方法， 包括以下制备过程 ： （1）将灯盏乙素加入到无机酸溶液中， 使灯盏乙素在无机酸溶液中浓度为 0.03 0.08g/m。
10、L， 在室温下搅拌 5 20min ； （2） 往步骤 （1） 所制得溶液中滴加水， 搅拌均匀后， 静置冷却， 其中水的添加量为每 1g 灯盏乙素滴加 1 15mL 的水 ； （3） 冷却后， 按水与反应液的体积比为110的比例将反应液滴入水中并同时搅拌， 析 出的沉淀即为产物野黄芩素。 0007 本发明中所述无机酸为浓硫酸 （质量百分比浓度为 98%） 、 浓盐酸 （质量百分比浓度 为 37%） 或浓磷酸 （质量百分比浓度为 85%） 。 0008 本发明中所述灯盏乙素在酸性条件下发生水解， 糖苷键断裂， 生成野黄芩素和葡 萄糖醛酸。水解过程中， 酸的量过少或过多均会导致反应产率大大降低。通。
11、过实验筛选， 灯 盏乙素在无机酸溶液中的浓度为 0.03 0.08g/mL 时可获得较满意的收率 ； 本发明中所述步骤 （2） 中水和灯盏乙素的混合比例为水体积 （mL） 与灯盏乙素的质量 （g） 的比为 1 15: 1， 往步骤 （1） 所制得的溶液中滴加水的量太多或太少都会导致野黄芩 素收率的大大降低。 0009 本发明中所述步骤 （3） 中水的体积为反应液体积的 1 10 倍， 室温下冷却后， 将 反应液滴入高速搅拌的水中， 析出沉淀后抽滤， 所得固体即为野黄芩素。 水量的大小会影响 产物的收率高低。 0010 本发明中所述步骤 （3） 中所述水的温度应为 5 60。 0011 本发明中。
12、所述步骤 （3） 中搅拌速度应为 500 2000 转 / 分。 0012 本发明中所制得的所得的沉淀产物野黄芩素可以用醇液重结晶， 得更高纯度的野 黄芩素。 0013 本发明中所述重结晶所用的醇液为乙醇或甲醇的水溶液。一般地， 抽滤得到的产 品已具有较高的纯度， 将其用 80 95%（质量百分比浓度） 的乙醇水溶液或 50 70%（质 量百分比浓度） 的甲醇水溶液重结晶， 可以进一步提高产品的纯度。 0014 本发明反应结构式如下 ： 本发明的优点和效果如下 ： 本发明提出的野黄芩素的制备方法， 解决了之前的制备方法的诸多缺点， 反应时不需 要使用大量的有机溶剂， 反应时间短， 并且反应过程。
13、中不需要加热， 反应条件较温和， 所得 产品野黄芩素产率高、 纯度高。 附图说明 0015 图 1 是本发明方法制得的野黄芩素化学结构质谱图。 说 明 书 CN 103102337 A 4 3/4 页 5 具体实施方式 0016 下面通过实施例对本发明作进一步详细说明， 但本发明保护范围不局限于所述内 容。 0017 实施例 1 ： 本野黄芩素的制备方法， 具体操作如下 ： （1） 将 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 98% 的浓硫酸中， 使灯盏乙素在浓硫酸溶 液中的浓度为 0.04g/mL， 在室温下搅拌 5min ； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶液中缓慢滴加 5mL 蒸馏水， 。
14、边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温下 静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 30mL 快速搅拌 （800 转 / 分） 的水 （5） 中， 析出沉淀后抽 滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 50% 的甲醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收 率 82.4%， 高效液相色谱检测其纯度为 96.5%。 0018 实施例 2 ： 本野黄芩素的制备方法， 具体操作如下 ： （1） 将 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 37% 的浓盐酸中， 使灯盏乙素在浓盐酸溶 液中的浓度为 0.04g/mL， 在室温下搅拌 5min ； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶。
15、液中缓慢滴加 3mL 蒸馏水， 边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温下 静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 100mL 快速搅拌 （500 转 / 分） 的水 （25） 中， 析出沉淀后抽 滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 80% 的乙醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收 率 85.3%， 高效液相色谱检测其纯度为 95.5%。 0019 实施例 3 ： 本野黄芩素的制备方法， 具体操作如下 ： （1） 将 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 98% 的浓硫酸中， 使灯盏乙素在浓硫酸溶 液中的浓度为 0.05g/mL， 在室温下搅拌 20min 。
16、； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶液中缓慢滴加 2mL 蒸馏水， 边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温下 静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 220mL 快速搅拌 （1500 转 / 分） 的水 （25） 中， 析出沉淀后 抽滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 70% 的甲醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收 率 89.9%， 高效液相色谱检测其纯度为 97.4%。 0020 实施例 4 ： 本野黄芩素的制备方法， 具体操作如下 ： （1） 将 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 85% 的浓磷酸中， 使灯盏乙素在浓磷酸溶 液中的浓度为 0.0。
17、6g/mL， 在室温下搅拌 10min ； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶液中缓慢滴加 15mL 蒸馏水， 边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温 下静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 150mL 快速搅拌 （2000 转 / 分） 的水 （60） 中， 析出沉淀后 抽滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 95% 的乙醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收 率 87.6%， 高效液相色谱检测其纯度为 95.2%。 说 明 书 CN 103102337 A 5 4/4 页 6 0021 实施例 5 ： 本野黄芩素的制备方法， 具体操作如下 ： （1） 将。
18、 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 98% 的浓硫酸中， 使灯盏乙素在浓硫酸溶 液中的浓度为 0.07g/mL， 在室温下搅拌 5min ； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶液中缓慢滴加 1mL 蒸馏水， 边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温下 静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 100mL 快速搅拌 （1800 转 / 分） 的水 （40） 中， 析出沉淀后 抽滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 60% 的甲醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收 率 86.4%， 高效液相色谱检测其纯度为 95.8%。 0022 实施例 6 ： 本野黄芩素的制。
19、备方法， 具体操作如下 ： （1） 将 1g 灯盏乙素加入到质量百分比浓度为 85% 的浓磷酸中， 使灯盏乙素在浓磷酸溶 液中的浓度为 0.08g/mL， 在室温下搅拌 20min ； （2） 往步骤 （1） 所制得的溶液中缓慢滴加 12mL 蒸馏水， 边加边搅拌， 搅拌均匀后， 室温 下静置冷却 ； （3） 冷却后， 将反应液滴入 150mL 快速搅拌 （1500 转 / 分） 的水 （5） 中， 析出沉淀后抽 滤， 所得固体即为野黄芩素 ； （4） 取固体用质量百分比浓度为 60% 甲醇溶液重结晶， 得纯度更高的野黄芩素， 总收率 85.7%， 高效液相色谱检测其纯度为 96.4%。 00。
20、23 以上实施例 1 至 6 所得野黄芩素的化学结构表征数据如下 ： 1） 质谱 ： ESI-MS (m/z): 309 M+Na+。 0024 2） 核磁共振氢谱 ： 1H-NMR (DMSO-d 6, 500MHz)， : 12.80 (s, 1H, 5-OH), 10.48 (s, 1H, 7-OH), 10.33 (s, 1H, 4-OH), 8.75 (s, 1H, 6-OH), 7.92 (d, 2H, J = 8.6 Hz, C2, C6-H), 6.92 (d, 2H, J = 8.6 Hz, C3, C5-H), 6.75 (s, 1H, C3-H), 6.58 (s, 1H, C8-H)。与文献 （Xia, H. et al., Biol. Pharm. Bull., 2007, 30 (7): 1308-1316.） 对照基本一致。 0025 3） 红外光谱 ： IR（KBr） , /cm-1： 3442 (4 , 7 位，OH), 3331（6 位，OH） , 3098 (5 位，OH), 1671 (C=O), 1619， 1587 和 1509 ( 野黄芩素芳环骨架的C=C） 。 说 明 书 CN 103102337 A 6 1/1 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 103102337 A 7 。