康普瑞丁磷酸二钠的冻干制剂及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及康普瑞丁磷酸二钠的稳定制剂，具体是康普瑞丁磷酸二钠的冻干制剂及其制备方法。
背景技术
一百多年前人们就发现，肿瘤组织较正常组织富含血管。1971年Folkman最早提出肿瘤生长是血管依赖性的，这一观点为越来越多的证据所支持，并使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略。以血管生长的各个环节及其发生过程中的生化改变为靶点，研制血管生成抑制剂，控制肿瘤生长和转移，已成为肿瘤防治的一个重要途径。选择合理的治疗时机和治疗方案，将成为其疗效好坏的决定因素，与传统化疗、放疗的联合使用，将是血管生成抑制剂的发展方向。一方面，血管生成抑制剂有可能提高传统化疗、放疗的疗效；另一方面，传统治疗后处于肿瘤消退期的患者，应用血管生成抑制剂有可能使微小转移处于静息状态，从而控制肿瘤的转移和复发。在国外，目前大约有20种血管抑制剂已进入临床试验。康普瑞丁磷酸二钠作为其中的一个，已进入II期临床试验。康普瑞丁磷酸二钠(康普瑞汀A4前药)是由美国OXIGENE公司开发的新型抗肿瘤前体药物，其原药为CA4(Combretastatin A4)，系从非洲灌木Combretum Caffrum的树皮中分离得到的一种多羟基二苯乙烯类天然产物。康普瑞丁磷酸二钠是CA4的磷酸酯二钠盐前药，水溶性良好。
康普瑞丁磷酸二钠具有很强的抗血管效应、抑制癌细胞增长、抑制微管蛋白聚集及放化疗增敏作用，其抗肿瘤作用对瘤体呈现靶向性，康普瑞丁磷酸二钠还因其前体化设计而具有适合临床应用的良好药代动力学性质，被誉为血管靶向剂(Vascular Targeting Agent，VTA)中的佼佼者。
康普瑞丁磷酸二钠亲脂性弱，口服不易吸收，不宜口服给药。故将康普瑞丁磷酸二钠制成注射剂。
【发明内容】
初步稳定性研究表明：康普瑞丁磷酸二钠对光极不稳定，易发生顺反异构，生成无效的反式异构体，其水溶液比固体粉末更不稳定。康普瑞丁磷酸二钠对高温稳定，但其水溶液对高温不稳定，易分解生成CA4，并变色。因此，将康普瑞丁磷酸二钠制成固体制剂是合理的选择。康普瑞丁磷酸二钠亲脂性弱，水溶性良好，口服不易吸收，故将其制成注射剂。注射用无菌粉末分为无菌分装产品和冷冻干燥制品两种，其中无菌分装产品要求原料药流动性好，不易吸湿，而康普瑞丁磷酸二钠易吸湿、流动性差，故将其制成冻干粉针。
为了解决康普瑞丁磷酸二钠水溶液不稳定，容易降解的缺点，本发明的目的是提供一种稳定的康普瑞丁磷酸二钠冻干制剂及其制备方法。
本发明的上述发明目的是通过下述技术方案来实现的，即一种康普瑞丁磷酸二钠冻干制剂，由康普瑞丁磷酸二钠、稳定剂、助溶剂pH调节剂的混合溶液，经冷冻干燥后制得；康普瑞丁磷酸二钠与稳定剂的重量比为5-20∶1-4，与助溶剂的重量比为1.0∶1.0-2.0；所述混合溶液的pH值范围为8.5～9.5；所述稳定剂为醋酸钠；所述助溶剂选自葡萄糖，甘露醇，甘氨酸，乳糖；所述PH调节剂选自盐酸或磷酸。
本发明的制剂的制备方法，经过以下步骤，
a：制备药液：称取处方量的康普瑞丁磷酸二钠、稳定剂、助溶剂，用注射用水溶解，加入康普瑞丁磷酸二钠重量0.01-0.05％的活性炭、混匀；静置30分钟，先用布氏漏斗粗滤，调PH值8.5～9.5，后用0.22μm的微孔滤膜精滤，检测康普瑞丁磷酸二钠的浓度；将精滤液分装于西林瓶中，每一瓶含有相当于50-100mg康普瑞丁磷酸二钠；
b：冷冻，干燥，轧盖，质量检查，即得成品。
本发明提供的上述制剂有效的克服了原水溶液剂型不稳定，容易降解的缺点。稳定性好，适合长期保存。
产品稳定性检测
康普瑞丁磷酸二钠与助溶剂的重量比为1.0∶1.0-2.0，每瓶中含50-100mg康普瑞丁磷酸二钠，醋酸钠5-20mg，康普瑞丁磷酸二钠与水的用量比为1.0∶10-20，再加适量PH调节剂，溶液经灌装，冷冻，干燥、压塞，轧盖，即得。
本发明的药物制剂进行了稳定性实验研究，结果如下：
将本发明制剂康普瑞丁磷酸二钠冻干于温度40℃、湿度75％，加速6个月和温度25℃、湿度60％，长期6个月，随后用高效液相色谱(HPLC)进行含量及有关物质测定。
含量测定方法
照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录VD)测定
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈(50∶49∶1)为流动相；检测波长为288nm，理论板数按康普瑞丁磷酸二钠峰计算应不低于5000。康普瑞丁磷酸二钠与相邻峰的分离度应大于1.5。
测定法 避光操作。取本品适量，精密称定，加流动相溶解，制成每1ml中约含40μg的溶液作为供试品溶液，立即取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取康普瑞丁磷酸二钠对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C18H19O8Na2P的含量
有关物质 避光操作。取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对照品反式康普瑞丁磷酸二钠12.5mg、康普瑞丁25mg，精密称定，置于同一50ml量瓶中，作为已知杂质的对照品溶液。分别精密量取上述两种溶液各1.0ml置同一100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定色谱条件，在波长230nm处检测，取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使最小主峰达满量程的20％，再精密量取上述供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与已知杂质保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，反式康普瑞丁磷酸二钠不得大于0.5％，康普瑞丁不得大于1％，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中主峰面积地1/2(0.5％)，有关物质含量之和应小于2.0％。
表1加速试验研究结果
时间(月) 本发明制剂外观 主药含量(％) 有关物质(％) 0 冻干外观饱满 99.75 0.22
时间(月) 本发明制剂外观 主药含量(％) 有关物质(％) 1 冻干外观饱满 99.93 0.24 2 冻干外观饱满 100.11 0.26 3 冻干外观饱满 99.81 0.25 6 冻干外观饱满 99.72 0.28
表2长期试验研究结果
时间(月) 本发明制剂外观 主药含量(％) 有关物质(％) 0 冻干外观饱满 99.75 0.22 3 冻干外观饱满 99.20 0.24 6 冻干外观饱满 99.11 0.32 9 冻干外观饱满 99.10 0.35
加速6个月和长期9个月结果表明康普瑞丁磷酸二钠冻干制剂质量较稳定，适合长期保存。
【具体实施方式】
以下通过实施例进一步说明本发明。
实施例1：
称取CA4P50g、甘露醇100g及醋酸钠5g，加注射用水溶解，加入康普瑞丁磷酸二钠重量0.02％的活性炭静置吸附30分钟，用0.45μm的复合纤维素微孔滤膜粗滤，加注射用水定容至1000ml，摇匀，用磷酸调节PH约9.0，后用0.22μm的复合纤维素微孔滤膜精滤，检测CA4P的浓度；将精滤液分装于7ml棕色西林瓶中。冷冻，干燥，压塞，轧盖，质量检查，即得成品。
实施例2：
称取CA4P50g、甘氨酸50g及醋酸钠5g，加注射用水溶解，加入康普瑞丁磷酸二钠重量0.05％的活性炭静置吸附30分钟，用0.45μm的复合纤维素微孔滤膜粗滤，加注射用水定容至1000ml，摇匀，用磷酸调节PH至8.5～9.5，后用0.22μm的复合纤维素微孔滤膜精滤，检测CA4P的浓度；将精滤液分装于7ml棕色西林瓶中。冷冻，干燥，压塞，轧盖，质量检查，即得成品。
实施例3：
称取CA4P50g、葡萄糖50g及醋酸钠5g，加注射用水溶解，加入康普瑞丁磷酸二钠重量0.02％活性炭静置吸附30分钟，用0.45μm的复合纤维素微孔滤膜粗滤，加注射用水定容至1000ml，摇匀，用盐酸调节PH至8.5～9.5，后用0.22μm的复合纤维素微孔滤膜精滤，检测CA4P的浓度；将精滤液分装于7ml棕色西林瓶中。冷冻，干燥，压塞，轧盖，质量检查，即得成品。
实施例4：
称取CA4P50g、乳糖50g及醋酸钠5g，加注射用水溶解，加入康普瑞丁磷酸二钠重量0.05％的活性炭静置吸附30分钟，用0.45μm的复合纤维素微孔滤膜粗滤，加注射用水定容至1000ml，摇匀，用盐酸调节PH至8.5～9.5，后用0.22μm的复合纤维素微孔滤膜精滤，检测CA4P的浓度；将精滤液分装于7ml棕色西林瓶中。冷冻，干燥，压塞，轧盖，质量检查，即得成品。