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1、(10)申请公布号 CN 104250856 A (43)申请公布日 2014.12.31 CN 104250856 A (21)申请号 201410334135.1 (22)申请日 2014.07.14 CGMCC No.9120 2014.05.04 D01C 1/04(2006.01) (71)申请人 东华大学 地址 201620 上海市松江区松江新城人民北 路 2999 号 申请人 浙江省萧山棉麻研究所 (72)发明人 丁若垚 孔德枝 郁崇文 张兴群 金关荣 骆霞虹 陈常理 张家强 朱关林 (74)专利代理机构 上海泰能知识产权代理事务 所 31233 代理人 黄志达 (54) 发明名。
2、称 一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备 红麻纤维的方法 (57) 摘要 本发明涉及一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌 株沤麻制备红麻纤维的方法， 包括 ： (1) 将保存的 赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株于牛肉膏蛋白胨培养基 中培养， 添加冻存缓冲液 ； (2) 在红麻麸皮培养基 中接入步骤 (1) 所得的菌一环， 摇瓶培养 ； (3) 将 步骤 (2) 所得的培养基接种入红麻麸皮发酵培养 基， 摇瓶培养得到发酵菌液 ； (4) 制作沤麻池 ； (5) 将步骤 (3) 中制备的发酵菌液使用喷淋法送入沤 麻池做沤麻处理， 沤麻后制得红麻纤维。 本发明工 艺简单、 生产流程短、 适合大规模。
3、工业化生产。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 序列表 1 页 附图 11 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图11页 (10)申请公布号 CN 104250856 A CN 104250856 A 1/1 页 2 1. 一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方法， 包括 ： (1) 将保存的赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株于牛肉膏蛋白胨培养基中培养， 添加冻存缓冲 液 ； (2) 在红麻麸皮培养基中接入步骤 (1) 所得的菌一环， 摇瓶培养 ； (3) 将步骤 。
4、(2) 所得的培养基接种入红麻麸皮发酵培养基， 摇瓶培养得到发酵菌液 ； (4) 制作沤麻池 ； (5) 将步骤 (3) 中制备的发酵菌液使用喷淋法送入沤麻池做沤麻处理， 沤麻后制得红 麻纤维。 2. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中的赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株的 16Sr DNA 序列如 SEQ ID NO:1 所示。 3. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中的牛肉膏蛋白胨培养基的组成为 ： 每 1000ml 。
5、培养基包括 牛肉膏 3g、 蛋白胨 10g、 氯化钠 5g 和水 1000ml。 4. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中的冻存缓冲液的组成为 ： 每 100ml 冻存缓冲液包括甘油 50ml 和水 50ml ； 加入量为每 1000ml 菌液加入 1ml。 5. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中的菌株保存条件为 -80， pH 自然 ； 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 12 小时。 6. 根据权利要求。
6、 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (2) 中的红麻麸皮培养基的组成为 ： 每 1000ml 培养基包括红麻 皮 200g， 麸皮 50g， 麦芽汁 50ml 和水 950ml ； 步骤 (3) 中的红麻麸皮发酵培养基的组成为 ： 每1000ml培养基包括红麻皮100g， 麸皮100g， 麦芽汁200ml和水800ml， 接种量为每1000ml 菌液接种入 30L 红麻麸皮发酵培养基。 7. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (2) 和 (3) 中的。
7、培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 24 小时。 8. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (4) 中的沤麻池的麻趟间距为 15-20 厘米， 麻层厚度为 2-2.5 厘 米。 9. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤(5)中的沤麻条件为自然温度， pH自然， 沤麻时间10-20天 ； 喷淋 法的工艺具体为每 48 小时向沤麻区域喷洒菌液 6 10ml。 10. 根据权利要求 1 所述的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红。
8、麻纤维的方 法， 其特征在于 ： 所述步骤 (5) 中的制得的红麻纤维应用于制作麻袋、 麻布、 地毯、 绳索、 纸 张、 纤维板或建筑材料。 权 利 要 求 书 CN 104250856 A 2 1/3 页 3 一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方 法 技术领域 0001 本发明属于沤麻领域， 特别涉及一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻 纤维的方法。 背景技术 0002 麻是纺织原料之一， 其品种主要有亚麻、 苎麻、 大麻、 红麻、 黄麻、 罗布麻、 剑麻、 蕉 麻、 荨麻和苘麻等。 麻纤维是从各种麻植物取得的纤维的统称， 具有吸湿、 透气、 散热和抗菌 等其。
9、他天然纤维无法比拟的优点。我国作为世界上麻类资源最丰富的国家之一， 每年生产 的麻纤维及其制品除满足国内市场的需求， 还作为大宗商品出口美国、 西欧及东南亚国家， 年均创汇近百亿美元。在国家节能减排政策和消费者回归自然、 追求绿色的消费观念推动 下， 麻类纤维绿色加工技术已经成为纺织领域的研究热点。 0003 沤麻利用细菌和水分对植物的作用， 溶解或腐蚀包围在韧皮纤维束外面的大部分 蜂窝状结缔组织和胶质， 从而促使纤维与麻茎分离的加工过程。 在广泛应用的水沤法中， 麻 茎浸没在水中， 水渗透到麻茎的中央部分， 使内部细胞膨胀， 胀破最外层， 从而增加对水分 和细菌的吸收。沤麻法是生产优质纤维的。
10、加工工艺， 沤麻过程的菌种选择是沤麻的关键。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备 红麻纤维的方法， 该方法简单、 生产流程短、 适合大规模工业化生产。 0005 本发明的一种利用赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株沤麻制备红麻纤维的方法， 包括 ： 0006 (1) 将保存的赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株于牛肉膏蛋白胨培养基中培养， 添加冻存 缓冲液 ； 0007 (2) 在红麻麸皮培养基中接入步骤 (1) 所得的菌一环， 摇瓶培养 ； 菌一环的加入量 为每 1000ml 菌液加入 200mg ； 0008 (3) 将步骤 (2) 所得的培养基。
11、接种入红麻麸皮发酵培养基， 摇瓶培养得到发酵菌 液 ； 0009 (4) 制作沤麻池 ； 0010 (5) 将步骤 (3) 中制备的发酵菌液使用喷淋法送入沤麻池做沤麻处理， 沤麻后制 得红麻纤维。 0011 所述步骤 (1) 中的赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株的 16Sr DNA 序列如 SEQ ID NO:1 所 示。 0012 所述步骤 (1) 中的牛肉膏蛋白胨培养基的组成为 ： 每 1000ml 培养基包括牛肉膏 3g、 蛋白胨 10g、 氯化钠 5g 和水 1000ml。 0013 所述步骤(1)中的冻存缓冲液的组成为 ： 每100ml冻存缓冲液包括甘油50ml和水 50ml ； 加入量。
12、为每 1000ml 菌液加入 1ml。 说 明 书 CN 104250856 A 3 2/3 页 4 0014 所述步骤 (1) 中的菌株保存条件为 -80， pH 自然 ； 培养条件为 37， pH 自然， 培 养时间 12 小时。 0015 所述步骤 (2) 中的红麻麸皮培养基的组成为 ： 每 1000ml 培养基包括红麻皮 200g， 麸皮 50g， 麦芽汁 50ml 和水 950ml ； 步骤 (3) 中的红麻麸皮发酵培养基的组成为 ： 每 1000ml 培养基包括红麻皮100g， 麸皮100g， 麦芽汁200ml和水800ml， 接种量为每1000ml菌液接种 入 30L 红麻麸皮发。
13、酵培养基。 0016 所述步骤 (2) 和 (3) 中的培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 24 小时。 0017 所述步骤 (4) 中的沤麻池的麻趟间距为 15-20 厘米， 麻层厚度为 2-2.5 厘米。 0018 所述步骤 (5) 中的沤麻条件为自然温度 ( 约 20-30 摄氏度 )， pH 自然， 沤麻时间 10-20 天 ； 喷淋法的工艺具体为每 48 小时向沤麻区域喷洒菌液 6 10ml。 0019 所述步骤 (5) 中的制得的红麻纤维应用于制作麻袋、 麻布、 地毯、 绳索、 纸张、 纤维 板或建筑材料。 0020 本发明所采用的赖氨酸芽孢杆菌 DY2 菌株的保藏号为 C。
14、GMCC No.9120， 保藏日为 2014 年 5 月 4 日， 建议分类命名为 ： 赖氨酸芽孢杆菌 (Lysinibacillus sp.), 保藏单位名 称 ： CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏地址 ： 北京市朝阳区北辰 西路 1 号院 3 号中国科学院微生物研究所。 0021 根据 16sR DNA 测序 Blast 及聚类分析结果， 该菌与赖氨酸芽孢杆菌相似性为 99， 结合镜检分析， 命名此菌株为赖氨酸芽孢杆菌 (Lysinibacillus sp.)DY2 菌株。16S rDNA 测序中， 所采用的正向引物 27F， 反向引物 1492R， 均为国。
15、际通用引物， 由上海生工生物 工程技术服务有限公司合成。 0022 该菌株培养条件粗放， 耐热性好， 生长繁殖快， 可以有效去除红麻纤维中的非纤维 素胶质， 且酶活稳定， 菌、 酶均无毒性。该菌株及培养系统能够直接用于红麻沤麻。 0023 有益效果 0024 (1) 本发明所采用的菌株及培养系统， 经检测能够直接用于红麻沤麻， 具有沤麻周 期短， 沤麻效果良好等特点， 菌种不易被污染， 处理成本低， 纤维质量好， 沤麻条件温和， 抗 污染能力强， 耐热性能好， 无环境污染等优点 ； 0025 (2) 本发明的制备方法具有工艺简单、 适合大规模工业化生产等特点 ； 利用该体 系进行亚麻脱胶具有沤。
16、麻时间短视天气情况， 一般可缩短 2-3 天 ( 正常收获季节 ) 等特点。 附图说明 0026 图 1 为本发明所用菌株显微镜染色照片 ( 油镜 ) ； 0027 图 2a-j 为本发明采用引物 27F 产生的细菌 DNA 图谱 ； 0028 图 3a-j 为本发明采用引物 1492R 产生的细菌 DNA 图谱。 具体实施方式 0029 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。 此外应理解， 在阅读了本发明讲授的内容之后， 本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。。
17、 说 明 书 CN 104250856 A 4 3/3 页 5 0030 实施例 1 0031 沤麻时间据红麻收获时间定， 一般为 9 月中下旬至 10 月中下旬。 0032 沤麻方法 ： 0033 (1)将保存的赖氨酸芽孢杆菌DY2菌株于牛肉膏蛋白胨培养基(每1000ml培养基 包括牛肉膏 3g、 蛋白胨 10g、 氯化钠 5g 和水 1000ml) 中培养， 添加冻存缓冲液 ( 每 100ml 冻 存缓冲液包括甘油 50ml 和水 50ml)， 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 12 小时 ； 0034 (2)在红麻麸皮培养基(每1000ml培养基包括红麻皮200g， 麸皮50g。
18、， 麦芽汁50ml 和水 950ml)1000ml 中接入菌一环， 摇瓶培养， 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 24 小时 ； 0035 (3) 将培养基接种入红麻麸皮发酵培养基 ( 每 1000ml 培养基包括红麻皮 100g， 麸 皮 100g， 麦芽汁 200ml 和水 800ml)， 摇瓶培养得到发酵菌液， 培养条件为 37， pH 自然， 培 养时间 24 小时 ； 0036 (4) 沤麻池的准备 ： 用 4HB-800 型红麻剥皮机将鲜皮从红麻全杆中分离出来 ( 韧 皮部因机械挤压、 打板击打已造成许多伤口， 利于脱胶菌入侵， 但不破坏纤维 ) ； 尾部端齐 ( 以洗麻。
19、时能甩得动为度， 20 根左右为一把 )， 稍部拢齐、 直， 顺折成三至四层 ( 沤麻池深度 相仿， 浸水时正好淹没麻把 ) 或对折， 每把麻中部靠尾处用鲜皮扎把， 把与把之间用扎把的 鲜皮连接， 按顺序排列、 排紧 ； 一般每个沤麻池均分批投放， 便于分批洗麻 ； 投放好麻把后 然后将麻把全部压入水中， 基本上不露出水面为宜。最后用厚型塑料薄膜 ( 透明 ) 将全部 麻把盖住， 再压紧塑料薄膜， 以防麻皮离水。麻趟间距 15-20 厘米。麻层厚度一般在 2-2.5 厘米为宜。 0037 (5) 将制备的发酵菌液使用喷淋法入沤麻池做沤麻处理， 沤麻后制得可供纺织制 品用红麻纤维， 沤麻条件为自。
20、然温度， pH 自然 ； 喷淋法的工艺具体为每 48 小时向沤麻区域 喷洒菌液 8ml。 0038 完成沤制时间 ： 视气温定， 一般 9 月中下旬至 10 月中下旬， 沤制时间逐渐延长， 若 气温变化不大， 则沤制时间基本相同。在红麻正常收获季节约为 10-20 天。 说 明 书 CN 104250856 A 5 1/1 页 6 0001 序 列 表 CN 104250856 A 6 1/11 页 7 图 1 图 2a 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 7 2/11 页 8 图 2b 图 2c 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 8 3/11 页 9 图 2d 。
21、图 2e 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 9 4/11 页 10 图 2f 图 2g 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 10 5/11 页 11 图 2h 图 2i 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 11 6/11 页 12 图 2j 图 3a 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 12 7/11 页 13 图 3b 图 3c 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 13 8/11 页 14 图 3d 图 3e 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 14 9/11 页 15 图 3f 图 3g 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 15 10/11 页 16 图 3h 图 3i 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 16 11/11 页 17 图 3j 说 明 书 附 图 CN 104250856 A 17 。