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1、(10)申请公布号 CN 104341527 A (43)申请公布日 2015.02.11 CN 104341527 A (21)申请号 201310347322.9 (22)申请日 2013.08.09 C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/82(2006.01) C12N 1/21(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 5/00(2006.01) (71)申请人 中国农业科学院作物科学研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12 号 (72)发明人 李宏宇 张传玉 刘斌 赵涛 刘军 林辰涛。
2、 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王朋飞 (54) 发明名称 水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的应 用 (57) 摘要 本发明涉及水稻转录因子 Os03g12350 基 因 CDS 序列的应用， 其是利用转录因子激活基序 VP64 与水稻转录因子 Os03g12350 融合构建得到 组成型转录因子， 并将编码所述组成型转录因子 的基因转化到农作物如水稻中， 从而改良水稻籽 粒性状， 例如增加水稻籽粒宽度。 对于详细阐明调 控种子发育机理具有重要的理论价值， 并且可以 通过转基因手段， 改良水稻的粒型， 因此在生产实 践中也具有重要意义。 。
3、(51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 序列表 18 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 序列表18页 附图3页 (10)申请公布号 CN 104341527 A CN 104341527 A 1/1 页 2 1. 一 种 组 成 型 水 稻 转 录 因 子，其 特 征 在 于，其 为 融 合 蛋 白 （VP16） 4-Linker-Os03g12350 ； 其中， VP16 为来自单纯疱疹病毒的 VP16 蛋白，（VP16） 4是由 4 个 VP16 蛋白的氨基酸 序列以Gly-Ser为间隔形成的融合蛋。
4、白， 其氨基酸序列如SEQ ID No.10所示 ； Linker由39 个柔性氨基酸串联而成， 其氨基酸序列如 SEQ ID No.9 所示 ； Os03g12350 为水稻转录因子 Os03g12350， 其氨基酸序列如 SEQ ID No.2 所示， 或该序列经替换、 缺失或添加一个或几个 氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 2. 编码权利要求 1 所述组成型水稻转录因子的基因。 3. 含有权利要求 2 所述基因的载体。 4. 含有权利要求 2 所述基因的工程菌。 5. 一种转基因水稻植株的构建方法， 其特征在于， 采用农杆菌介导的方法， 将权利要求 3 所述的载体转入水稻愈伤组织中。
5、， 用含诱导剂和农杆菌的 AAM 培养液进行转化， 转化后的 材料经过共培养 - 筛选 - 分化 - 生根 - 转基因苗的锻炼和移栽， 筛选转基因水稻植株。 6. 权利要求 2 所述的基因在改良水稻籽粒性状中的应用。 7. 用 于 扩 增 水 稻 转 录 因 子 Os03g12350 基 因 CDS 序 列 的 引 物 对， 其 特 征 在 于，包 括 正 向 引 物 F ： 5-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGC GCCGGTGGA-3 和 反 向 引 物 R ： 5-CAAGAAAGCTGGGTCTCACA TCTGTCCACTAAATC-3 ； 其中， 水稻转录因子 Os03g1。
6、2350 基因的 CDS 序列为 ： SEQ ID No.1 所示的核苷酸序列。 8. 水稻转录因子 Os03g12350 基因 CDS 序列在调控水稻籽粒性状中的应用。 9. 根据权利要求 8 所述的应用， 其特征在于， 其是利用转录因子激活基序 VP64 与水稻 转录因子 Os03g12350 融合构建得到组成型转录因子， 并将编码所述组成型转录因子的基 因转化水稻， 从而改良转基因水稻籽粒的性状 ； 其中， 所述转录因子激活基序 VP64 的氨基酸序列如 SEQ ID No.10 所示。 10. 根据权利要求 8 所述的应用， 其特征在于， 其是将水稻转录因子 Os03g12350 基因。
7、 的 CDS 序列通过 Gateway 系统构建到转录因子激活基序 VP64 编码基因的下游， 转化水稻， 从而改良转基因水稻籽粒的性状 ； 其中， 所述转录因子激活基序 VP64 编码基因的核苷酸序列如 SEQ ID No.4 所示。 权 利 要 求 书 CN 104341527 A 2 1/5 页 3 水稻转录因子 Os03g12350 基因 CDS 序列的应用 技术领域 0001 本发明涉及基因工程领域， 具体地说， 涉及水稻转录因子 Os03g12350 基因 CDS 序 列的应用。 背景技术 0002 水稻 (Oryza sativa L.) 是我国和全世界重要的粮食作物， 世界 1。
8、/2 以上人口以 水稻为主食， 因此水稻产量性状一直以来倍受科学家们的关注， 而水稻籽粒大小则是影响 产量的主要因素之一。 另外， 水稻作为农作物基因功能研究的模式植物， 与其相关的遗传学 和分子生物学研究一直受到研究者们的重视。水稻籽粒的生长发育是一个有次序的、 选择 性的基因表达过程， 转录因子在其基因表达的精确调控中起到了关键性的作用。 0003 禾谷类作物的产量很大程度上取决于其籽粒的大小， 因此水稻籽粒性状的基因调 控是重要的研究领域。近年来， 已经通过基因克隆、 QTL 等技术手段揭示了至少 8 个基因在 控制粒型方面具有重要作用。 SG1基因编码一个功能未知的蛋白， 主要在水稻根。
9、和发育的穗 中表达， 该蛋白的过量表达出现短粒和矮化表型。SG1 降低了对油菜素内酯 BR 的应答， 通 过减少细胞增殖从而降低诸如种子、 穗轴节间等器官的伸长。SGL1 是一个类 SG1 蛋白， 具 有与 SG1 类似的功能， 通过 RNAi 下调 SG1 及其同源基因 SGL1 的表达， 水稻粒长和穗轴的节 间较野生型变长 (Hitoshi Nakagawa;Atsunori Tanaka;.et al.SHORT GRAIN1 Decreases Organ Elongation and Brassinosteroid Response in Rice.Plant Physiology,。
10、2012, 158(3):1208-1219)。GS3 位点是控制水稻粒重和粒长的主效 QTL， 同时也是控制水稻粒宽 和籽粒充实度的微效 QTL(Fan,C;.Xing,Y;.et al.(2006)GS3,a major QTL for grain length and weight and minor QTL for grain width and thickness in rice,encodes a putative transmembrane protein.Theor Appl Genet.112(6):1164-1171) ； (Hailiang Mao,Shengyuan S。
11、un.et al.(2010)Linking differential domain functions of the GS3protein to natural variation of grain size in rice.PNAS.11(9):19579-19584)。 PGL1 是一个非典型的不结合 DNA 的碱性螺旋 - 环 - 螺旋蛋白 (bHLH)， 过量表达 PGL1 增 加了籽粒长度和重量。APG 是 PGL1 的拮抗性互作因子， 两者都定位在核内。PGL1/APG 介 导的籽粒长度增加是由于内颖细胞长度增加引起的。APG 和 PGL1 不影响已知籽粒长度调 控基因 GS3 。
12、和 SRS3 的表达。PGL1-APG 代表了一个新的籽粒长度和重量调控途径， APG 是 一个负向调节子， 其功能受到 PGL1 的抑制 (Heang,D.Sassa,H.et al.(2012)An atypical bHLH protein encoded by POSITIVE REGULATOR OF GRAIN LENGTH2is involved in controlling grain length and weight of rice through interaction with a typical bHLH protein APG.Breed Sci.62(2):133。
13、-141)。Mi3(t) 基因， 来源于籼型水稻 Y34， 该基 因能使粒长缩短 35.7% 47.4%， 千粒重降低 45.9% 62.4%， 它主要控制籽粒长度， 产生小 粒 ( 刘明伟 .(2005) 水稻显性小粒基因 Mi3（t） 的精细定位与侯选基因克隆分析 . 四川 农业大学 . 博士论文 )。此外， 控制水稻籽粒性状的基因还有 gGL7 和 gGL7-2。转录因子 Os03g12350， 是 ARR-B 家族成员， ARR-B 家族基因在子粒大小方面尚未见报道。总之， 控制 说 明 书 CN 104341527 A 3 2/5 页 4 水稻籽粒发育是一个复杂过程， 涉及到多基因多。
14、条途径的协调控制， 目前发现调控该性状 的基因不多， 调控籽粒发育的分子机理尚未阐明， 因此， 寻找控制籽粒性状发育的基因和新 的发掘手段对作物改良并提高作物产量具有重要意义。 发明内容 0004 本发明的目的是提供水稻转录因子 Os03g12350 基因 CDS 序列的应用。 0005 为了实现本发明目的， 本发明首先提供一种组成型水稻转录因子， 即融合蛋白 （VP16） 4-Linker-Os03g12350。 0006 其中， VP16为来自单纯疱疹病毒的VP16蛋白， 将4个VP16功能域基序融合在一起 可构成一类增强子， 增强转录因子的功能， 从而在转基因植株中出现更明显的表型变化。。
15、 上 述融合蛋白中涉及的 （VP16） 4， 即 VP64 是由 4 个 VP16 蛋白的氨基酸序列以 Gly-Ser 为间隔 形成的融合蛋白， 其氨基酸序列和核苷酸序列分别如 SEQ ID No.10 和 SEQ ID No.4 所示。 0007 上述融合蛋白中涉及的Linker由39个柔性氨基酸串联而成， 其氨基酸序列如SEQ ID No.9 所示， 编码该 Linker 的核苷酸序列如 SEQ ID No.3 所示。 0008 上述融合蛋白中涉及的 Os03g12350 为水稻转录因子 Os03g12350， 其氨基酸序列 如SEQ ID No.2所示， 或该序列经替换、 缺失或添加一个。
16、或几个氨基酸形成的具有同等功能 的氨基酸序列 ； 水稻转录因子 Os03g12350 基因的 CDS 序列为 ： SEQ ID No.1 所示的核苷酸 序列。 0009 本发明还提供编码所述组成型水稻转录因子的基因， 以及在严格条件下， 可与该 基因的核苷酸序列发生杂交的核苷酸序列。 0010 本发明还提供含有编码所述组成型水稻转录因子的基因的载体、 工程菌及细胞 系。 0011 所述载体的构建方法如下 ： 0012 （1）在植物转录因子数据库 （http:/rice.plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml） 中找到Os03g1235。
17、0基因， 根据其序列设计PCR扩增引物对， 其为正向 引物F ： 5-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGCGCCGGTGGA-3和反向引物R ： 5-CAAGAAAGCTGGGTCTCAC ATCTGTCCACTAAATC-3。 0013 （2） 以野生日本晴 kitaake 水稻总 cDNA 为模板， 利用上述引物 F 和 R 进行 PCR， 获得 Os03g12350 基因完整的 CDS 序列。 0014 （3） 将上述 PCR 产物克隆到 pDONER 克隆载体上， 经测序鉴定得到与目的基因完全 相同的序列。 0015 （4） 以植物双元表达载体 pCambia1301-UbiN（。
18、图 6） 左右边界包含的序列为骨架 序列， 通过体外重组， 将 ubi promoter-VP64-Gateway 表达单元、 35S promoter-asRED 表达 单元和35S promoter-hyg表达单元与之融合构建， 得到载体nVP64-hyg-asRED的全序列如 SEQ ID No.5 所示。 0016 （5） 通过 LR 反应将 Os03g12350 基因的 CDS 序列构建到其目的基因的 5 端连有 VP64 编码基因的植物表达载体 nVP64-hyg-asRED 上， 获得携带有编码所述组成型水稻转录 因子VP64-Linker-Os03g12350基因的表达载体ub。
19、i ： VP64-Os03g12350， 其全序列如SEQ ID No.6 所示。 说 明 书 CN 104341527 A 4 3/5 页 5 0017 上述表达载体可通过使用 Ti 质粒、 植物病毒载体、 直接 DNA 转化、 微注射、 电穿 孔等常规生物技术方法导入植物细胞中 （Weissbach， 1998， Method for Plant Molecular Biology VIII， Academy Press， New York， 第 411-463 页 ； Geiserson 和 Corey， 1998， Plant Molecular Biology， 2nd Editio。
20、n） 。 0018 本发明还提供一种转基因水稻植株的构建方法， 具体为 ： 采用农杆菌介导的方法， 将上述表达载体转入水稻愈伤组织中， 用含诱导剂和农杆菌的 AAM 培养液进行转化， 转化 后的材料经过共培养 - 筛选 - 分化 - 生根 - 转基因苗的锻炼和移栽， 筛选转基因水稻植株。 0019 本发明还提供编码所述组成型水稻转录因子的基因在改良水稻籽粒性状 （例如增 加水稻粒宽及千粒重） 中的应用。 0020 本发明还提供了用于扩增水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的引物对， 包括 正向引物F ： 5-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGCGCCGGTGGA-3和反向引物R。
21、 ： 5-CAAGAAAGCTGGGTC TCACATCTGTCCACTAAATC-3。 0021 本发明进一步提供水稻转录因子 Os03g12350 基因 CDS 序列在调控水稻籽粒性状 中的应用。利用转录因子激活基序 VP64 （SEQ ID No.10） 与水稻转录因子 Os03g12350 融合 构建得到组成型转录因子， 并将编码所述组成型转录因子的基因转化到农作物如水稻中， 从而改良转基因水稻籽粒的性状。 0022 前述的应用， 是将水稻转录因子Os03g12350基因的CDS序列构建到转录因子激活 基序VP64编码基因 （SEQ ID No.4） 的下游， 转化水稻， 从而改良转基。
22、因水稻籽粒的性状。 优 选将水稻转录因子 Os03g12350 基因的 CDS 序列通过 Gateway 系统转录因子激活基序 VP64 编码基因的下游。 0023 本发明首次利用转录因子激活基序 VP64（即 4 个转录因子激活基序 VP16） 与水稻 转录因子 Os03g12350 融合构建得到组成型转录因子， 并将编码所述组成型转录因子的基 因转化到农作物如水稻中， 从而改良水稻籽粒性状， 例如水稻籽粒宽度增加。 对于详细阐明 调控种子发育机理具有重要的理论价值， 并且可以通过转基因手段， 改良水稻的粒型， 因此 在生产实践中也具有重要意义。 附图说明 0024 图 1 为本发明实施例 。
23、1 中 nVP64-hyg-asRED 载体图谱。 0025 图 2 为本发明实施例 1 中 ubi ： VP64-Os03g12350 载体图谱。 0026 图 3 为本发明实施例 3 中 PCR 检测 VP64-Os03g12350 转基因阳性株系， 其中 WT 为 野生型水稻 kitaake ， V1638H-03、 V1638H-27 为 VP64-Os03g12350 转基因水稻株系。 0027 图4为本发明实施例4中转基因水稻籽粒性状的表型宽度的比较 ； 其中WT为野生 型水稻 kitaake ， V1638H-03、 V1638H-27 为 VP64-Os03g12350 转基因。
24、水稻株系。 0028 图5为本发明实施例4中转基因水稻籽粒性状的数据统计分析结果 ； 其中WT为野 生型水稻 kitaake ， V1638H-03、 V1638H-27 为 VP64-Os03g12350 转基因水稻株系。 0029 图 6 为本发明实施例 1 中 pCambia1301-UbiN 载体图谱。 具体实施方式 0030 以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 若未特别指明， 实施例 说 明 书 CN 104341527 A 5 4/5 页 6 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段， 所用原料均为市售商品。 0031 实施例 1 0032 Os03g1。
25、2350 基因 CDS 序列的获得及植物表达载体的构建 0033 1Os03g12350 基因 CDS 序列的获得 0034 在 植 物 转 录 因 子 数 据 库 （http:/rice.plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml） 中找到 Os03g12350 基因， 根据其序列设计 PCR 扩增引物， 正向引物 F ： 5-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGCGCCGGTGGA-3 和反向引物 R ： 5-CAAGAAAGCTGGGTCTCACATC TGTCCACTAAATC-3。以野生型日本晴 kitaake 水稻总 cD。
26、NA 为模板， 利用引物 F 和 R 进行 PCR， 获得 Os03g12350 基因完整的 CDS 序列 （如 SEQ ID No.1 所示） 。 0035 2 植物表达载体的构建 0036 将水稻转录因子 Os03g12350 基因的 CDS 序列通过 Gateway 系统构建到 4 个转录 因子激活基序 VP16 编码基因 （如 SEQ ID No.4 所示） 的下游。 0037 2.1 将上述 PCR 产物克隆到 pDONER 克隆载体上 0038 按照 PrimeSTAR 聚合酶扩增体系和反应程序进行 PCR。此过程中包含两轮 PCR， 第一轮 PCR 的引物用加部分 adaptor。
27、 attB 接头的基因引物 （F 和 R） ， 而第二轮的 模板用第一轮的 PCR 产物， 并且引物用完整的 adaptor attB 引物 （attB5adaptor ： 5-GTGGGGACAAGTTTG TACAAAAAAGCAGGCTTC-3，attB3adaptor ： 5-GTGGGGACCAC TTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3） 。将 PCR 产物克隆到 pDONER 克隆载体 （购自 Invitrogen） 上， 经测序鉴定得到与目的基因完全相同的序列。 0039 2.2 植物表达载体的构建 0040 以植物双元表达载体 pCambia1301-UbiN（图 6）。
28、 左右边界包含的序列为骨架序列， 通过体外重组， 将ubi promoter-VP64-Gateway表达单元、 35S promoter-asRED表达单元和 35S promoter-hyg表达单元与之融合构建， 得到载体nVP64-hyg-asRED的全序列如SEQ ID No.5 所示， 载体图谱见图 1。 0041 表达载体 nVP64-hyg-asRED 含有 Gateway 重组系统， pDONR 带有目的基因的质粒 作为入门载体 （Entery vector） ， 通过 LR 反应可完成目的基因表达载体的构建。 0042 通过 LR 反应将 Os05g27980 基因的 CDS。
29、 序列构建到其目的基因的 5 端连有 VP64 编码基因的植物表达载体 nVP64-hyg-asRED 上， 获得携带有编码所述组成型水稻转录因 子 VP64-Linker-Os05g27980 基因的表达载体 ubi ： VP64-Os05g27980， 其全序列如 SEQ ID No.6 所示， 载体图谱见图 2。 0043 LR 反应体系如下 ： 0044 0045 于 25反应过夜。用反应体系转化大肠杆菌 DH5， 筛选阳性克隆。 说 明 书 CN 104341527 A 6 5/5 页 7 0046 实施例 2 转基因水稻植株的获得 0047 取水稻 kitaake 成熟种子， 人工。
30、或机械脱壳， 挑选饱满光洁无菌斑的种子经消毒 之后接种到诱导培养基上进行诱导培养。选择外观良好， 生长力好的水稻愈伤组织为受体 材料， 采用农杆菌介导法将 ubi ： VP64-Os03g12350 转入水稻愈伤组织中， 用含有 100M 的 乙酰丁香酮和 OD 值为 0.7 的农杆菌的 AAM 培养液进行转化， 将转化液浸泡过的愈伤组织置 于共培养基上进行共培养， 25暗培养 3d 后置于筛选培养基上培养约 30d， 每 10d 继代一 次。然后将筛出的抗性愈伤转移到分化培养基上分化约 20d， 每 10d 继代一次。将分化出绿 色小苗的抗性愈伤转移到生根培养基上生根， 待约 7d 长出发达。
31、根系后炼苗， 并计算转化所 获转基因苗数。炼苗 7d 后转移至大田生长。获得 30 株转基因苗。 0048 本实施例中涉及的培养基配方如下 ： 0049 诱导培养基 ： N6 大量 +B5 微量 +NB 有机 + 铁盐 + 铜钴母液 +2.5mg/L2,4D+0.6g/L 酸水解酪蛋白 +2.878g/L 脯氨酸 +0.5g/L 谷氨酰胺 +30g/L 蔗糖， 以水配制， 调 pH 至 5.8 5.9 后加入植物凝胶 4g/L。 0050 共培养基 ： N6 大量 +B5 微量 +NB 有机 + 铁盐 +2.5mg/L2,4D+0.5g/L 谷氨酰胺 +0.6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄。
32、糖+30g/L蔗糖， 以水配制， 调pH至5.2后加入植物凝胶 4g/L。灭菌后， 50左右加入 AS（乙酰丁香酮） 100 200g/mL。 0051 筛选培养基 ： N6 大量 +B5 微量 +NB 有机 + 铁盐 + 铜钴母液 +2.5mg/L2,4D+0.6g/L 酸水解酪蛋白 +2.878g/L 脯氨酸 +0.5g/L 谷氨酰胺 +30g/L 蔗糖， 以水配制， 调 pH 至 5.8 5.9 后加入植物凝胶 4g/L。灭菌后加入 35mg/L 潮霉素 （购自上海纽津生物技术有限公司） 。 0052 分化培养基 ： MS 无机 +MS-B5 微量 +MS 有机 + 铁盐 +MS- 铜钴。
33、母液 +0.05mg/L NAA+2.0mg/L Kinetin（激动素） +30g/L 山梨醇 +2g/L 水解酪蛋白 +30g/L 蔗糖， 以水配制， 调 pH 至 5.8 5.9 后加入植物凝胶 4g/L。 0053 实施例 3 转基因阳性株系的鉴定 0054 为 检 测 实 施 例 2 获 得 的 VP64-Os03g12350 转 基 因 水 稻 株 系 中 ubi ： VP64-Os03g12350 基因在 T2 代转基因水稻 （V1638H-03、 V1638H-27） 中的过表达情况， 本实 施例在载体与目的基因接头处设计引物 （正向引物 ： 5-GTGGGGACAAGTTTG。
34、TACAAAAAAGCAGGC TTC-3 和反向引物 ： 5-GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3） 进行 PCR 检测， 得到了明 显的特异性条带。由图 3 可见， 扩增出的条带大小在 2000bp 以上， 且引物是在载体与目的 基因接头处设计的， 扩增出的片段大小与目的基因 （2076bp） 基本一致。因此可以说明， 实 施例 2 获得的转基因水稻株系 V1638H-03、 V1638H-27 中含有 VP64-Os03g12350 融合基因。 0055 实施例 4 转基因水稻表型分析和考种分析 0056 将实施例2获得的转基因水稻株系V1638H-03、。
35、 V1638H-27和野生型水稻种子进行 比较， 从表型上可以明显的看出， 发现转基因材料的籽粒明显变宽 （图 4） 。考种数据分析表 明 （图 5） ， 本发明获得的 VP64-Os03g12350 转基因水稻籽粒的宽显著大于野生型水稻籽粒。 0057 虽然， 上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述， 但在 本发明基础上， 可以对之作一些修改或改进， 这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进， 均属于本发明要求保护的范围。 说 明 书 CN 104341527 A 7 1/18 页 8 0001 0002 序 列 表 C。
36、N 104341527 A 8 2/18 页 9 0003 序 列 表 CN 104341527 A 9 3/18 页 10 0004 序 列 表 CN 104341527 A 10 4/18 页 11 0005 序 列 表 CN 104341527 A 11 5/18 页 12 0006 序 列 表 CN 104341527 A 12 6/18 页 13 0007 序 列 表 CN 104341527 A 13 7/18 页 14 0008 序 列 表 CN 104341527 A 14 8/18 页 15 0009 序 列 表 CN 104341527 A 15 9/18 页 16 001。
37、0 序 列 表 CN 104341527 A 16 10/18 页 17 0011 序 列 表 CN 104341527 A 17 11/18 页 18 0012 序 列 表 CN 104341527 A 18 12/18 页 19 0013 序 列 表 CN 104341527 A 19 13/18 页 20 0014 序 列 表 CN 104341527 A 20 14/18 页 21 0015 序 列 表 CN 104341527 A 21 15/18 页 22 0016 序 列 表 CN 104341527 A 22 16/18 页 23 0017 序 列 表 CN 104341527 A 23 17/18 页 24 0018 序 列 表 CN 104341527 A 24 18/18 页 25 序 列 表 CN 104341527 A 25 1/3 页 26 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 104341527 A 26 2/3 页 27 图 3 图 4 图 5 说 明 书 附 图 CN 104341527 A 27 3/3 页 28 图 6 说 明 书 附 图 CN 104341527 A 28 。