作为TRPV1受体拮抗剂的O取代二苄基脲衍生物.pdf

本发明涉及式(I)的组合物，其中R选自卤素、烷基、烷氧基、芳基和杂芳基；R1选自2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2，2-二羟基乙基、3，3-二羟基丙基、1，3-二氧戊环-乙基、1，3-二噁烷-甲基、1，3-二氧戊环-甲基、1，3-二噁烷-乙基、3-氟-2-羟基丙基、3-羧基-2-羟基-丙基、3-氯-2-羟基丙基、2-羟基丙基、2-羟基-丙烯-2-基、吗啉代乙基、哌嗪-1-基乙基、羟基甲基、苄基、4-(羟基甲基)苄基、4-氯苄基、4-氟苄基和4-羟基苄基；R2是叔丁基或三氟甲基；R3独立地选自氢、羧基、氰基、烷基或羟基烷基，式(I)的组合物可用于制备用来治疗炎性状态，例如慢性神经性痛、膀胱过度活动综合征、肿瘤疼痛、痔、炎性痛觉过敏、介入术后疼痛、拔牙、呼吸道与胃肠道疾病的药物组合物。

1.  式(I)的化合物

其中：
R选自卤素、烷基、烷氧基、芳基和杂芳基；
R₁选自2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2，2-二羟基乙基、3，3-二羟基丙基、1，3-二氧戊环-乙基、1，3-二噁烷-甲基、1，3-二氧戊环-甲基、1，3-二噁烷-乙基、3-氟-2-羟基丙基、3-羧基-2-羟基-丙基、3-氯-2-羟基丙基、2-羟基丙基、2-羟基-丙烯-2-基、吗啉代乙基、哌嗪-1-基乙基、羟基甲基、苄基、4-(羟基甲基)苄基、4-氯苄基、4-氟苄基和4-羟基苄基；
R₂是叔丁基或三氟甲基；
R₃独立地选自氢、羧基、氰基、烷基或羟基烷基，包括其所有可能的旋光异构体和非对映异构体，
其中：
“卤素”是选自氟、氯、溴和碘的卤素原子；
“烷基”是直链或支链(C₁-C₄)烷基；
“烷氧基”是直链或支链(C₁-C₄)烷氧基；
“芳基”是苯基，其任选地被一个或多个如上文所定义的卤素、烷基、烷氧基，氰基或氨基取代，其彼此可以相同或不同；并且
“杂芳基”是包含一个或多个氮、氧或硫原子的5-或6-元杂环，其彼此可以相同或不同。

2.  根据权利要求1所述的化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是2-羟基乙基；
R₂是叔丁基或三氟甲基；
R₃是氢。

3.  根据权利要求1所述的化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。

4.  权利要求1所述的化合物，其中：
R是甲基、苯基、吡啶或4-(取代的)-苯基；
R₁是(R)-(-)-2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。

5.  权利要求1所述的化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是(R)-(-)-2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。

6.  化合物，选自：
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(叔丁基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(叔丁基)-苄基]脲；
1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-苯基-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-(吡啶-3-基)-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-(4-氯苯基)-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲。

7.  用作药物的如权利要求1至6中的任意一项所述的式(I)的化合物。

8.  如权利要求1至6中任意一项所述的式(I)的化合物作为香草素TRPV1受体拮抗剂的应用。

9.  如权利要求1至6中任意一项所述的式(I)的化合物用于制备用来治疗炎性状态的药物组合物的应用。

10.  根据权利要求9所述的应用，其中所述炎性状态选自慢性神经性疼痛、膀胱过度活动综合征、肿瘤疼痛、痔、炎性痛觉过敏、介入术后疼痛、拔牙、呼吸道与胃肠道疾病。

11.  包含与适合的赋形剂和/或载体混合的权利要求1至6中任意一项所述的式(I)的化合物的药物组合物。

作为TRPV1受体拮抗剂的O-取代-二苄基脲衍生物
发明领域
本发明涉及香草素受体拮抗剂，特别涉及拮抗香草素TRPV1受体的O-羟基烷基二苄基脲衍生物。
技术背景
最近的试验证据表明，在炎性状态过程中，香草素TRPV1受体(瞬时受体电位通道)的表达增加。这表明香草素受体拮抗剂能够用于治疗炎性疼痛状态，例如慢性神经性疼痛、膀胱过度活动综合征、痔、炎性痛觉过敏、介入术后疼痛、拔牙、呼吸道与胃肠道疾病。
许多香草素受体拮抗剂为已知的；其中一些衍生于辣椒素，并被称为辣椒素拮抗剂。
发明描述
本发明涉及式(I)的化合物，其中：

R选自卤素、烷基、烷氧基、芳基和杂芳基；
R₁选自2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基、3-羟基丙基、2，2-二羟基乙基、3，3-二羟基丙基、1，3-二氧戊环-乙基、1，3-二噁烷-甲基、1，3-二氧戊环-甲基、1，3-二噁烷-乙基、3-氟-2-羟基丙基、3-羧基-2-羟基-丙基、3-氯-2-羟基丙基、2-羟基-丙烯-2-基、吗啉代乙基、哌嗪-1-基乙基、羟基甲基、苄基、4-(羟基甲基)苄基、4-氯苄基、4-氟苄基和4-羟基苄基；
R₂是叔丁基或三氟甲基；
R₃独立地选自氢、羧基、氰基、烷基或羟基烷基，包括其所有可能的旋光异构体和非对映异构体。
为了本申请的目的：
术语“卤素”是指选自氟、氯、溴或碘的卤素原子；
术语“烷基”是指直链或支链(C₁-C₄)烷基；
术语“烷氧基”是指直链或支链(C₁-C₄)烷氧基；
术语“芳基”是指苯基，其任选地被一个或多个如上文所定义的卤素、烷基、烷氧基，氰基或氨基取代，其彼此可以相同或不同；
术语“杂芳基”是指包含一个或多个氮、氧或硫原子的5或6元杂环，其彼此可以相同或不同，例如吡咯、噻吩、呋喃、咪唑、噻唑、异噻唑、噁唑、吡啶或嘧啶。
第一组优选的式(I)的化合物是下述化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是2-羟基乙基；
R₂是叔丁基或三氟甲基；
R₃是氢。
第二组优选的式(I)的化合物是下述化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。
第三组优选的式(I)的化合物是下述化合物，其中：
R是甲基、苯基、吡啶或4-(取代的)-苯基；
R₁是(R)-(-)-2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。
第四组优选的式(I)的化合物是下述化合物，其中：
R是氯或溴；
R₁是(R)-(-)-2，3-二羟基丙基；
R₂是三氟甲基；
R₃是氢。
特别优选的化合物的实例是：
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(叔丁基)-苄基]脲；
1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(叔丁基)-苄基]脲；
1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-苯基-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-(吡啶-3-基)-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-(4-氯苯基)-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲；
1-[4-((R)-(-)-2，3-二羟基丙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲。
通式(I)的化合物能以常规方法制备，例如式(II)的化合物(其中R、R₁和R₃如上文所定义)

与式(III)的化合物(其中R₂和R₃如上文所定义)的反应：

式(I)的化合物、它们的异构体和盐能够抑制香草素TRPV1受体，并且能够用于治疗炎性状态、慢性神经性疼痛、膀胱过度活动综合征、痔、炎性痛觉过敏、介入术后疼痛、拔牙、呼吸道与胃肠道疾病和肿瘤疼痛的药物组合物的制备。
这些制剂可通过常规方法和赋形剂制备，例如在Remington的Pharmaceutical Sciences Handbook，XVII版.Mack出版，纽约，美国.中公开的那些。
本发明在下文流程图1和实施例中被更详细地说明。
流程图1

试剂和条件：(i)乙酸酐，吡啶；(ii)NBS或NCS，DMF，0℃；(iii)10％HCl水溶液，二噁烷；(iv)当R＝Br，Pd(PPh₃)₄，Na₂CO₃，硼酸，DME，90℃；(v)羟基烷基卤化物，K₂CO₃，DMF，100℃；(vi)HCl 37％，EtOH，Rfx；(vii)三光气，4-(取代的)苄胺，DIEA，CH₂Cl₂，10分钟。
取代基：6a：R＝Cl，R₁＝2-羟基乙基；R₂＝叔丁基，R₃＝H；6b：R＝Br，R₁＝2-羟基乙基；R₂＝叔丁基，R₃＝H；6c：R＝Cl，R₁＝2，3-二羟基丙基；R₂＝三氟甲基，R₃＝H；6d：R＝Br，R₁＝2，3-二羟基丙基；R₂＝三氟甲基，R₃＝H；6e：R＝Cl，R₁＝3-羟基丙基；R₂＝三氟甲基，R₃＝H；6f：R＝Cl，R₁＝3-羟基丙基；R₂＝叔丁基，R₃＝H；6g：R＝Cl，R₁＝2-羟基乙基；R₂＝三氟甲基，R₃＝H；6h：R＝Br，R₁＝2-羟基乙基；R₂＝三氟甲基，R₃＝H；6i：R＝苯基，R₁＝2，3-二羟基丙基；R₂＝三氟甲基；R₃＝H；6l：R＝吡啶-3-基，R₁＝2，3-二羟基丙基；R₂＝三氟甲基；R₃＝H；6m：R＝4-(氯)-苯基，R₁＝2，3-二羟基丙基；R₂＝三氟甲基；R₃＝H。
实施例：
各反应通过硅胶薄层色谱(TLC)(预包被F₂₄₅Merck板)进行常规监测，产物以碘或高锰酸钾溶液显色。¹H NMR谱用Varian VXR 200波谱仪在CDCl₃、CF₃COOD或DMSO-d₆中记录。峰位置在作为内标的四甲基硅烷的低场以百万分之几(δ)表示，J值以Hz表示。IR光谱使用KBr压片技术在Pye Unicam SP 300光谱仪上记录。质谱用Shimadzu QP5050 DI 50质谱仪得到。“轻质石油醚”的表述是指在40-60℃沸腾的石油馏分。熔点(M.p.)在Buchi-Tottoli测量仪测定，并且为未经校正。色谱使用Merck60-200目硅胶进行。合成的化合物显示与指定的结构一致的¹H NMR谱。元素分析为C、H和N理论值±0.4％之内。
实施例1
1.1.4-乙酰氧基-3-甲氧基-N-乙酰基-苄胺的合成
将乙酸酐(1ml，10.5mmol)加入4-羟基-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(0.5g，2.63mmol)在吡啶(5ml)中的溶液，并在室温搅拌该混合物6小时。减压蒸发除去溶剂，并将残余物悬浮于水中(100ml)。水层用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，将合并的有机相脱水(Na₂SO₄)并减压蒸发以得到白色固体状的标题化合物(0.45g，收率75％)。
¹H-NMR(CDCl₃)δ2.01(s，3H，CH₃)，2.31(s，3H，CH₃)，3.81(s，3H，OCH₃)，4.38(d，2H，J＝6，CH₂)，5.90(bs，1H，NH)，6.90(m，3H，芳族的)。
MS：m/z 238.1(M⁺C₁₂H₁₅NO₄)。
1.2.2-溴-4-乙酰氧基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
将N-溴代琥珀酰亚胺(6.3mmol，1.1g)加入实施例1.1的4-乙酰氧基-3-甲氧基-N-乙酰基-苄胺(1.5g，4.2mmol)在干燥DMF(8ml)中的溶液，并在0℃搅拌该混合物30分钟，然后在室温搅拌16小时。
当将水(40ml)加入该反应物中时，观察到白色沉淀物的形成。
将固体滤出并用冷水洗涤两次(2×20ml)，然后用P₂O₅干燥，得到白色固体状标题化合物(1.4g，99％收率)。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.89(s，3H)，2.24(s，3H)，3.76(s，3H，OCH₃)，4.27(d，2H，CH₂，J＝8)，7.09(s，1H，芳族的)，7.25(s，1H，芳族的)，8.35(t，1H，NH)。
二维NOESY(DMSO-d₆)：2.24ppm处的单峰和7.25ppm处的单峰之间偶合了确证溴位于芳族环的2-位。
MS：m/z 316(M⁺C₁₂H₁₄BrNO₄)。
实施例2
2.2-(苯基/吡啶-3-基/4-(氯)苯基)-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺合成的通用方法
通过将N₂通过混合物5分钟来将2-溴-4-乙酰氧基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺(600mg，1.9mmol)在DME(15mL)中的溶液除氧。然后加入Pd(PPh₃)₄(0.09mol eq)和适宜的硼酸(1.4mol eq)在无水乙醇(3mL)中的溶液。搅拌该混合物10分钟。然后加入2M Na₂CO₃水溶液(9mL)，并在90℃加热该反应物12小时。减压蒸发溶剂，加入水(60mL)，水相用EtOAc(3×30mL)萃取。重新合并的有机相用Na₂SO₄脱水，蒸发，残余物经色谱(6:4EtOAc:石油醚)纯化，得到固体状的标题化合物。
2.1.2-苯基-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
固体，收率95％。
¹H NMR(CDCl₃)δ1.89(s，3H)，3.92(s，3H)，4.33(d，2H，J＝4.4)，5.41(bs，1H)，5.75(s，1H)，6.84(s，1H)，6.94(s，1H)，7.41-7.29(m，5H)。
MS：m/z 271(M⁺C₁₆H₁₇NO₃)。
2.2.2-(吡啶-3-基)-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
淡黄色固体，收率68％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.79(s，3H)，3.79(s，3H)，4.04(d，2H，J＝4)，6.65(s，1H)，6.98(s，1H)，7.42(m，1H)，7.71(m，1H)，8.41(bt，1H)，8.54(m，1H)，9.19(s，1H)。
MS：m/z 272(M⁺C₁₅H₁₆N₂O₃)。
2.2.2-(4-氯)苯基-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
淡黄色固体，收率78％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.81(s，3H)，3.79(s，3H)，4.08(d，2H，J＝4)，6.01(t，1H)，6.79(s，1H)，6.98(s，1H)，7.44(dd，4H)，8.15(s，1H)。
MS：m/z 305(M⁺C₁₆H₁₆ClNO₃)。
实施例3
3.1.2-溴-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
将10％盐酸水溶液(2.5ml)加入2-溴-4-乙酰氧基-5-甲氧基-N-乙酰基-苄胺2(0.45g，1.66mmol)在二噁烷(15ml)中的溶液，并将该混合物回流2小时，然后冷却，真空浓缩溶剂，残余物用10％NaOH水溶液碱化。得到的固体通过过滤收集，用冷水洗涤并干燥，得到定量收率的白色固体状标题化合物。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ2.18(s，3H，CH₃)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.00(d，2H，CH₂)，6.91(s，1H，芳族的)，7.32(s，1H，芳族的)，8.46(t，3H，NH₂)，9.80(bs，1H，OH)。
M.p.：＞300℃。
3.2.2-溴-4-(2-羟基乙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
向化合物3(0.4g，1.46mmol)在干燥DMF(15ml)中的溶液中加入干燥K₂CO₃(2mol eq)和2-碘乙醇(2mol eq)。将该混合物回流6小时，然后减压蒸发除去溶剂。加入水后，水层用EtOAc(3×25ml)萃取，有机相用Na₂SO₄脱水并减压蒸发，得到淡黄色固体状标题化合物(0.38g，81％收率)。
¹H NMR(CDCl₃)δ2.00(s，3H)，3.84(s，3H)，3.92(t，2H，J＝2)，4.09(t，2H，J＝2.1)，4.44(d，2H，J＝4)，5.21(t，1H)，5.90(bs，1H)，6.96(s，1H)，7.07(s，1H)。
3.3.2-溴-4-(2-羟基乙氧基)-5-甲氧基-苄胺盐酸盐的合成
将37％盐酸(0.2ml)加入2-溴-4-(2-羟基乙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺4(0.1g，0.31mmol)在无水乙醇(5ml)中的溶液，并将该混合物回流12小时。冷却后，减压蒸发除去溶剂，残余物用甲醇/乙醚混合液重结晶，得到定量收率的淡黄色固体状标题化合物。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.95(s，3H)，4.14(t，2H，J＝2)，4.19(m，2H，)，5.01(m，2H，)，5.44(t，1H)，7.02(s，1H)，7.27(s，1H)，7.38(m，3H)。
实施例4
2-(苯基/吡啶-3-基/4-(氯)苯基)-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺合成的通用方法
向2-(苯基/吡啶-3-基/4-(氯)苯基)-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺(1.1mmol)在干燥DMF(10ml)中的溶液中加入干燥K₂CO₃(2mol eq)和3-氯-1，2-二羟基丙烷(2mol eq)。将该混合物回流12小时，然后减压蒸发除去溶剂。加入水后，水层用EtOAc(3×25ml)萃取，有机相用3％NaOH(20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥并减压蒸发除去溶剂，在用Et₂O重结晶后得到固体状标题化合物。
4.1.2-苯基-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
淡黄色固体，收率72％
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.83(s，1H)，3.44(t，2H)，3.79(s，1H)，3.95(m，7H)，4.10(d，2H，J＝4.2)，4.62(t，1H)，4.92(d，1H)，6.79(s，1H)，6.98(s，1H)，7.36(m，5H)，8.16(t，1H)。
4.2.2-(吡啶-3-基)-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
淡黄色固体，收率60％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.80(s，3H)，3.44(t，2H)，3.80(s，3H)，3.96(m，3H)，4.08(d，2H)，4.62(t，1H)，4.93(d，1H)，6.84(s，1H)，7.02(s，1H)，7.44(m，1H)，7.77(m，1H)，8.20(bt，1H)，8.56(m，2H)。
4.3.2-(4-氯)-苯基-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺
淡黄色固体，收率65％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.81(s，3H)，3.42(d，3H)，3.79(s，3H)，3.90(m，4H)，4.08(d，2H)，6.79(s，1H)，6.98(s，1H)，7.45(dd，4H)，8.20(bt，1H)。
实施例5
5.1.2-溴-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
向2-溴-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺3(0.3g，1.1mmol)在干燥DMF(10ml)中的溶液加入干燥K₂CO₃(2mol eq)和3-氯-1，2-二羟基丙烷(2moleq)。将该混合物回流6小时，然后减压蒸发除去溶剂。加入水后，水层用EtOAc(3×25ml)萃取，有机相用Na₂SO₄脱水并减压蒸发，得到淡黄色固体状标题化合物(0.35g，84％收率)。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.88(s，3H)，3.44(t，2H)，3.74(s，3H)，3.88-3.96(m，3H)，4.22(d，2H，J＝6)，4.66(t，1H)，4.96(d，1H，J＝6)，6.93(s，1H)，7.14(s，1H)，8.25(t，1H)。
5.2.2-溴-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-苄胺盐酸盐的合成
将37％盐酸(0.3ml)加入2-溴-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺4(0.3g，0.86mmol)在无水乙醇(12ml)中的溶液，并将该混合物回流12小时。冷却后，减压蒸发除去溶剂，残余物用甲醇/乙醚混合液重结晶，得到定量收率的浅橙色固体状标题化合物。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.42(t，2H)，3.74(s，3H)，3.74-3.95(m，4H)，4.21(d，2H，J＝6)，4.98(m，4H)，7.13(s，1H)，7.38(s，1H)。
实施例6
2-(苯基/吡啶-3-基/4-(氯)苯基)-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-苄胺盐酸盐合成的通用方法
将37％盐酸(5ml)加入2-(苯基/吡啶-3-基/4-(氯)苯基)-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺(8mmol)在无水乙醇(25ml)中的溶液，并将该混合物回流12小时。冷却后，减压蒸发除去溶剂，残余物用甲醇/乙醚混合液重结晶，得到定量收率的标题化合物固体。
6.1.2-氯-4-乙酰氧基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
将N-氯代琥珀酰亚胺(3.15mmol，0.42g)加入实施例1.1的4-乙酰氧基-3-甲氧基-N-乙酰基-苄胺(0.5g，2.1mmol)在干燥DMF(6ml)中的溶液，并在0℃搅拌该混合物30分钟，然后在室温搅拌16小时。
当将水加入反应物(40ml)中时，观察到白色沉淀的形成。
将固体滤出并用冷水洗涤两次(2×20ml)，然后用P₂O₅干燥，得到白色固体状标题化合物(0.45g，83％收率)。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.85(s，3H)，2.21(s，3H)，3.74(s，3H，OCH₃)，4.21(d，2H，CH₂，J＝8)，7.01(s，1H，芳族的)，7.22(s，1H，芳族的)，8.32(t，1H，NH)。
二维NOESY(DMSO-d₆)：2.21ppm处的单峰和7.22ppm处的单峰之间偶合确证了氯位于芳族环的2-位。
MS：m/z 272.1(M⁺C₁₂H₁₄ClNO₄)。
6.2.2-氯-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
将10％盐酸水溶液(2.5ml)加入2-氯-4-乙酰氧基-5-甲氧基-N-乙酰基-苄胺2(0.45g，1.66mmol)在二噁烷(15ml)中的溶液，并将该混合物回流2小时。冷却后，在真空下蒸发使溶剂减少，残余物用10％NaOH水溶液碱化。通过过滤收集得到的固体，用冷水洗涤并干燥，得到定量收率的白色固体状标题化合物。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ2.15(s，3H，CH₃)，3.82(s，3H，OCH₃)，3.99(d，2H，CH₂)，6.86(s，1H，芳族的)，7.30(s，1H，芳族的)，8.41(t，3H，NH₂)，9.77(bs，1H，OH)。
M.p.：＞300℃。
6.3.2-氯-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺的合成
将干燥K₂CO₃(2mol eq)和2-碘乙醇(2mol eq)加入2-氯-4-羟基-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺3(0.4g，1.46mmol)在干燥DMF(15ml)中的溶液。将该混合物回流6小时，然后减压蒸发除去溶剂。加入水后，水层用EtOAc(3×25ml)萃取，有机相用Na₂SO₄脱水并减压蒸发，得到淡黄色固体状标题化合物(0.38g，81％收率)。
¹H NMR(CDCl₃)δ2.00(s，3H)，3.84(s，3H)，3.92(t，2H，J＝2)，4.09(t，2H，J＝2.1)，4.44(d，2H，J＝4)，5.21(t，1H)，5.90(bs，1H)，6.96(s，1H)，7.07(s，1H)。
6.4.2-氯-4-(2，3-二羟基丙氧基)-5-甲氧基-苄胺盐酸盐的合成
将37％盐酸(0.2ml)加入2-溴-4-(2-羟基乙氧基)-5-甲氧基-N-乙酰基苄胺4(0.1g，0.31mmol)在无水乙醇(5ml)中的溶液，并将混合物回流12小时。冷却后，减压蒸发除去溶剂，残余物用甲醇/乙醚混合物重结晶，得到定量收率的淡黄色固体状标题化合物。
实施例7
合成化合物6a-6m的通用步骤
将三光气(0.37mol eq)溶于CH₂Cl₂(3ml)中。将4-叔丁基/三氟甲基苄胺(0.33mmol)和DIEA(2.2mol eq)在CH₂Cl₂(2ml)中的混合物使用注射泵历经30分钟缓慢加入搅拌着的三光气溶液中。5分钟后，一次性加入适宜的胺盐酸盐5(0.33mmol)的溶液。在室温搅拌反应该混合物2-4小时，减压蒸发，用EtOAc(20ml)稀释，用10％KHSO₄水溶液、5％NaHCO₃水溶液和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥并蒸干。残余物经快速色谱(100％EtOAc)纯化，得到固体状标题化合物。
7.1.1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(叔丁基)-苄基]脲6b
¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.26(s，9H)，3.37(s，3H)，3.70(m，4H)，3.98(t，2H，J＝2)，4.61(bs，4H)，4.87(t，1H，J＝2.1)，6.98(bs，1H)，7.21(s，1H)，7.23(d，2H，J＝7.8)，7.34(d，2H，J＝8)，7.80(bs，1H)，8.00(bs，1H)。
Mp：138℃。
MS：m/z 481.4(M⁺C₂₂H₂₉BrN₂O₃S)。
7.2.1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-氯-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6c
白色固体，收率80％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.44(t，2H，J＝6)，3.68(s，1H)，3.74-4.00(m，5H)，4.22(d，2H，J＝6)，4.32(d，2H，J＝6)，4.67(t，1H)，4.94(d，1H)，6.45(bt，1H)，6.65(bt，1H)，6.90(s，1H)，7.00(s，1H)，7.48(d，2H，J＝7.8)，7.69(d，2H，J＝8)。
MS：m/z 462(M⁺C₂₀H₂₂ClF₃N₂O₅)。
Mp：154-5℃。
(R)-(-)6c：[α]_D²⁰＝-8.33(95％EtOH)。
7.3.1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6d
白色固体，收率84％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.41(t，2H，J＝6)，3.74(s，1H)，4.00-3.85(m，5H)，4.19(d，2H，J＝6)，4.32(d，2H，J＝6)，4.62(t，1H)，4.95(d，1H)，6.49(bt，1H)，6.68(bt，1H)，6.90(s，1H)，7.13(s，1H)，7.45(d，2H，J＝7.8)，7.65(d，2H，J＝8)。
MS：m/z 507(M⁺C₂₀H₂₂BrF₃N₂O₅)。
Mp：164℃。
(R)-(-)6d：[α]_D²⁰＝-8.5(95％EtOH)。
7.4.1-[4-(2-羟基乙氧基)-2-溴-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6h
白色固体，收率73％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.67(s，3H)，3.47(m，2H)，3.94(t，2H，J＝4)，4.16(d，2H，J＝6)，4.32(d，2H，J＝6)，4.85(t，1H，J＝2)，6.52(bt，1H)，6.68(bt，1H)，6.90(s，1H)，7.14(s，1H)，7.49(d，2H，J＝8)，7.65(d，2H，J＝8)。
MS：m/z 477(M⁺C₁₉H₂₀BrF₃N₂O₄)。
Mp：162℃。
7.5.1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-苯基-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6i
白色固体，收率35％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.41(t，2H)，3.78(s，3H)，4.06(m，3H)，4.23(d，2H)，4.26(d，2H)，4.61(t，1H)，4.95(d，1H)，6.40(t，1H)，6.51(t，1H)，6.80(s，1H)，6.99(s，1H)，7.36(m，7H)，7.68(d，2H)。
MS：m/z 504(M⁺C₂₆H₂₇F₃N₂O₅)。
Mp：168℃。
7.6.1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-(吡啶-3-基)-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6l
淡黄色固体，收率30％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.44(t，2H)，3.75(s，3H)，3.91(m，4H)，4.05(d，2H，J＝4.3)，4.29(d，2H，J04.2)，4.61(t，1H)，4.92(d，1H)，6.51(m，2H)，6.84(s，1H)，7.03(s，1H)，4.45(m，3H)，7.68(d，2H)，7.77(m，1H)，8.56(m，1H)。
MS：m/z 505(M⁺C₂₅H₂₆F₃N₃O₅)。
Mp：201℃。
7.7.1-[4-(2，3-二羟基丙氧基)-2-(4-氯)苯基-5-甲氧基苄基]-3-[4-(三氟甲基)-苄基]脲6m
白色固体，收率45％。
¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.44(t，2H)，3.74(s，3H)，3.93(m，4H)，4.07(d，2H)，4.30(d，2H)，4.62(t，1H)，4.92(d，1H)，6.41(m，2H)，6.78(s，1H)，6.98(s，1H)，7.43(m，6H)，7.69(d，2H)。
MS：m/z 538(M⁺C₂₆H₂₆ClF₃N₂O₅)。
Mp：174℃。
生物学试验
动物
体内实验由PharmEste srl(费拉拉，意大利)和费拉拉大学根据费拉拉大学动物管理和使用委员会批准的规程进行。
放射性配体结合试验
使用体重在250至350g之间的雄性Sprague-Dawley大鼠。对于结合试验而言，使大鼠在麻醉下断头，取出脊髓并使用Polytron组织匀浆仪在包含5mM KCl、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl₂、2mM MgCl₂、320mM蔗糖、10mM Hepes、pH 8.6(Szallasi和Blunberg，1992；1993)的冰冷的缓冲液中破碎。在竞争实验中，在37℃将膜与[³H]RTX(0.4nM)和在0.1nM至3μM范围内浓度增加的检测化合物孵育60分钟。在存在1μM RTX的情况下评价非特异性结合。饱和和竞争研究利用Ligand程序(Bradford，1976；Munson和Rodbard，1980)分析。
培养的大鼠三叉神经节中的Ca²⁺荧光检测
使用包含Fura-2-AM-ester和确定浓度的游离Ca²⁺的缓冲液确定标准曲线。然后此曲线用于将从F₃₄₀/F₃₈₀比率得到的数据转换成[Ca²⁺]_i(nM)(Kudo，Y)。研究了用化合物6a-6m预处理对由30nM辣椒素诱导的[Ca²⁺]_i的增加的影响。
辣椒素诱导的大鼠继发性异常性疼痛
将辣椒素(5nmol/50μl/爪)注射入用乙醚麻醉的大鼠右爪无毛皮肤的趾面(Chaplan等，1994)。在注射辣椒素2小时前，口服施用化合物6c和6d。辣椒素刺激后90分钟评价触觉异常性疼痛。
试剂
在无水乙醇中配制储存浓度的辣椒素(10mM)。在50％DMSO和50％Tween 80中配制化合物6a-6m。将Fura-2-AM-ester和离子霉素溶于100％DMSO中。将所有其他药物溶于蒸馏水中。然后，用Krebs缓冲液配制适宜的稀释液。
结果
放射性配体结合试验
如表1中所报导的K_i值所示，化合物6a-6m在低浓度将[³H]RTX从其在大鼠脊髓膜中的结合位点上置换出来。
Ca²⁺荧光检测
辣椒素(30nM)增加了绝大多数(95％)大鼠三叉神经元细胞中的[Ca²⁺]_i，因此，其被确定是TRPV1-表达神经元。抑制辣椒素诱发的[Ca²⁺]_i活化的IC₅₀值汇总于表1中。
表1：本发明一些代表性化合物的K_i和IC₅₀值。