一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法 技术领域 ：
本发明涉及一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法。 背景技术 ：
鹰嘴豆 (Cicer arietinum L.) 起源于西亚、 地中海沿岸， 现全球播种面积已有 1.5 亿亩， 是目前世界上第二大食用豆类作物， 维吾尔族名为诺胡提， 在新疆有 2500 年的生长 历史， 是维吾尔医常用药材， 已收载在中华人民共和国卫生部 《药品标准》 维吾尔药分册和 《维吾尔药志》 ， 具有清除异常体液， 开通体液闭阻， 调节机体等作用。用于身体瘦弱， 性欲低 下， 食欲不振， 皮肤瘙痒及糖尿病等疾病。
鹰嘴豆中富含皂苷类成分， P.A.Ireland 等研究表明鹰嘴豆中含有 0.23-6％的总 皂苷。鹰嘴豆中皂苷类主要是三萜类大豆皂苷。皂苷具有多种药理作用， 如抗癌、 防治心 血管疾病、 抗病毒、 保肝以及抗血栓等作用， 研究发现， B 类和 DDMP 类大豆皂苷具有很强的 α- 葡萄糖苷酶抑制作用， 且表现为非竞争性抑制作用。 鹰嘴豆皂苷被认为与降血脂作用有 关。可能因与食物中的胆固醇结合 (Gestener et al.1972) 阻止吸收， 也可能与胆汁酸结 合干扰肝肠循环， 增加粪排 (Sidhu & Oakenful， 1986). 而且胆汁酸的粪排增加就会引起肝 内补偿性胆汁酸合成， 消耗胆固醇， 从而降低血浆胆固醇。 鹰嘴豆抗癌作用的有效成分可能 是三萜皂苷。因此对鹰嘴豆总皂苷进行纯化研究， 使其在保健和医药行业中得到应用。
传统的皂苷分离精制方法有分段沉淀法、 铅盐沉淀法、 胆甾醇沉淀法、 吉拉尔试剂 法和色谱分离法。分段沉淀法、 铅盐沉淀法、 胆甾醇沉淀法和吉拉尔试剂法纯化皂苷， 均需 使用大量的化学试剂， 不适用于工业化生产， 且皂苷纯度较低。 目前常用色谱分离法有吸附 色谱法、 分配色谱法、 高效液相色谱法、 液滴逆流色谱法 (DCCC) 和大孔树脂法。吸附色谱 法、 分配色谱法、 高效液相色谱法、 液滴逆流色谱法 (DCCC) 等方法可纯化出纯度很高的皂 苷和单一化合物， 但其操作复杂， 费用高， 也不适用于工业化生产。 利用大孔树脂纯化皂苷， 该法具有耗费溶剂量少， 回收率较高的特点， 且大孔树脂价格便宜， 可反复使用， 适用于生 产化需求。因此， 本研究采用大孔树脂纯化鹰嘴豆提取物， 可以提高皂苷活性成分纯度， 使 其在保健和医药行业中得到应用。 发明内容
本发明的目的在于提供了一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法， 该方法是将鹰嘴豆粉 碎， 过筛， 加溶剂油， 加热回流脱脂， 加热回流提取， 收集提取液， 减压回收乙醇， 浓缩， 再将 浓缩液用大孔树脂进行纯化， 真空干燥， 即可得到鹰嘴豆总皂苷的质量含量达到 22-25％的 纯化产品。 通过本发明所述方法获得的鹰嘴豆总皂苷产品经体外降糖实验——对蛋白酪氨 酸磷酸酶 1B 的抑制作用， 结果表明有很好的活性。同时， 本发明所述方法重现性好， 树脂可 重复使用。
本发明所述的一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法， 按下列步骤进行 ：
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40-50 目筛， 取粉碎的鹰嘴豆， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热回流脱脂， 加热温度 40-70℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 5-15 倍量的 30％ -80％ 乙醇采用电热套加热回流提取 1-4 次， 时间 1-3h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用大孔树脂进行纯 化， 上样时间为 1-6h， 水洗脱体积为 1-3BV， 水洗流速为 1-4BV/h， 洗脱剂为乙醇， 洗脱用乙 醇浓度为 50％ -80％， 乙醇洗脱量为 1-4BV， 乙醇洗脱速度为 1-4BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 30-45℃， 即可得到 鹰嘴豆总皂苷质量含量 22-25％产品。
步骤 b 中的大孔树脂为 HPD100、 HPD300、 SA-1、 SA-3、 DM131、 D101、 XAD-2 或 ADS-7 型。
本发明所述的一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法， 该方法经过对不同型号大孔树脂对 纯化物总皂苷含量的影响 ； 大孔树脂不同上样浓度对纯化物总皂苷含量的影响 ； 大孔树脂 柱径高比对纯化物总皂苷含量的影响 ； 大孔树脂不同吸附速度对纯化物总皂苷含量的影 响； 大孔树脂解吸剂对纯化物总皂苷含量的影响 ； 80％乙醇的动态解吸 ； 水洗脱用量和吸 附泄露的测试如下 ：
八种大孔树脂对鹰嘴豆总皂苷的静态吸附与解析试验 取不同型号的抽干树脂各 1g， 分别装入 30mL 一定质量浓度的提取液中， 恒温震 荡 (37℃， 250r/min)13.5h， 测上清液的平衡皂苷质量浓度 ρe(mg/mL)， 滤去提取液后树脂 经 50mL 纯水清洗， 再放入 50mL80％乙醇中， 于相同条件下解吸， 测定解析液的皂苷质量浓 度 ρd(mg/mL)， 分别按下式计算吸附量、 解析量、 解析率， 从中筛选出性能最好的树脂进行 后续实验， 结果见图 1 ；
吸附量 (mg/g 干树脂 ) ＝ (ρ0-ρe)×V0/m
解析量 (mg/g 干树脂 ) ＝ ρd×Vd/m
解析率＝解析量 ×100/ 吸附量
其中 ： ρ0- 提取液中皂苷质量浓度 (mg/mL)， V0- 提取液体积 (mL)， Vd- 解析液体积 (mL)， m- 树脂质量 (g)。
结果显示 ( 图 1)， 8 种大孔树脂中， 吸附量和解析量都较高的是 XAD-2， 但 XAD-2 大 孔树脂价格昂贵， 不适于生产用， HPD100 大孔树脂解析量较 XAD-2 次之， 解析率最高， 但吸 附量较少， SA-3 大孔树脂吸附量较 HPD100 大孔树脂高， 但解吸量次之， HPD100 大孔树脂皂 苷纯度 (22％ ) 比 SA-3 大孔树脂 (19％ ) 高， 比较后选择 HPD100 型号大孔树脂。
上样溶液的浓度筛选试验 ：
取 20mL 树脂， 湿法装柱 ( 柱长径比 8 ∶ 1)， 将质量浓度为 0.29、 0.58、 0.87、 1.16 和 1.74g 生药 /mL 的提取物溶液以 3.0BV/h 的流速分别过柱， 分别吸附 4、 6、 8、 12、 24 倍柱 体积后， 用 60mL 纯水洗树脂至流出液无色， 再用 80mL 体积分数 70％的乙醇溶液以 2BV/h 洗 柱， 收集解吸液， 测定其 Pd。结果见图 2 ：
如结果显示 ( 图 2)， 不同浓度， 上样量相同的情况下， 上样液浓度为 0.87g 生药 / mL 的解析量最大， 浓度继续减小其解析率开始降低， 这可能是因为上样液浓度太低， 上样体 积加大， 吸附时间过长， 导致先吸附的皂苷被洗脱下来， 所以， 选择浓度 0.87g 生药 /mL 为最 佳上样浓度。
树脂柱径高比例的考察试验 ：
分别装树脂床径高比为 1 ∶ 2、 1 ∶ 4、 1 ∶ 6、 1 ∶ 8 的大孔树脂 ( 柱长径比 8 ∶ 1)， 以 3BV/h 流速上样 ( 总皂苷浓度为 0.199mg/mL)， 吸附后用 5BV 水快速洗脱， 以 2BV/h 流速 4BV70％乙醇洗脱， 收集解吸液， 测定其 Pd。结果见图 3 ：
从图 3 可以看出， 径高比在 1 ∶ 4 时解析量最多， 径高比从 1 ∶ 6 开始解析量开始 下降， 这是因为树脂柱过高， 随之吸附时间过长， 导致先吸附的皂苷被洗脱下来。 因此， 径高 比选择为 1 ∶ 4。
吸附速率的筛选 ：
装填树脂床径高比为 1 ∶ 4 的大孔树脂， 湿法装柱 ( 柱长径比 8 ∶ 1)， 以 1.0BV/ h、 2.0BV/h、 3.0BV/h 和 4BV/h 的流速上样 ( 总皂苷浓度为 0.199mg/mL)， 12 倍柱体积吸附 后， 用 5BV 纯水洗树脂， 再用体积分数 70％的乙醇溶液以 2BV/h 洗柱 4BV， 收集解吸液， 测定 其 Pd。结果见图 4 ：
结果显示 ( 图 4)， 吸附速率为 1BV/h 时， 总皂苷解析量最大， 2BV/h 和 3BV/h 解析 量无太大差异， 当吸附速率为 4BV/h， 树脂解吸量明显减少， 考虑到工作效率， 因此， 选择吸 附率为 3BV/h。
解吸剂的筛选试验 ：
取 20mL 大孔树脂， 湿法装柱 ( 柱长径比 8 ∶ 1)， 将一定浓度的提取物溶液 ( 总皂 苷浓度为 0.199mg/mL)， 以 3.0BV/h 流速过柱， 饱和吸附后， 用 100mL 纯水洗树脂至流出液无 色， 再依次用体积分数 20％、 40％、 60％、 80％和 100％的乙醇溶液以 2BV/h 洗柱， 收集解吸 液， 测定其 Pd。结果如图 5 ：
从图 5 结果可以看出， 皂苷洗脱主要集中在 20％ -60％乙醇之间， 再分别用 20％、 50％、 60％、 70％、 80％乙醇洗脱饱和吸附提取液的大孔树脂， 测各洗脱液中皂苷纯度， 80％ 洗脱液中皂苷纯度最高， 因此， 洗脱剂选择 80％乙醇。
解吸剂用量体积的筛选试验 ：
以一定质量浓度的提取液上样， 30mL 树脂柱达饱和吸附后， 以体积分数 80％的乙 醇溶液洗脱， 每 10mL 解析液收集一次， 3 倍体积后每 30mL 收集一次， 其动态解吸曲线见图 6：
结果显示， 体积分数 80％的乙醇溶液洗脱液中皂苷纯度最高， 且洗脱峰窄且集中， 无拖尾， 被解吸的皂苷主要集中于 0.7-1.8BV 段， 解吸剂用量为 3BV 时， 皂苷的洗脱率达到 平衡， 故此解吸剂具有洗脱效率高、 用量少和安全性高的特点其作为适宜的解吸剂。
水洗脱用量体积的考察试验 ：
将吸附饱和的树脂用纯净水快速洗脱树脂， 洗去树脂间未吸附的提取液和蛋白、 糖等杂质， 测定皂苷含量。结果见图 7 ：
从图 7 可以看出， 当水洗至 3BV 时， 将树脂未吸附的提取液都被洗脱下来， 而流出 液接近无色， 因此， 水洗量选择为 3BV。
提取液上样量考察试验 ：
取 鹰 嘴 豆 提 取 液 ( 总 皂 苷 质 量 浓 度 为 0.53mg/mL， 即 0.87g 生 药 /mL)， 上 30mLHPD100 大孔树脂上， 以 3BV/h 流速进行吸附后， 收集流出液， 测定中皂苷含量， 结果见 图8：
从图 8 泄露曲线来看， 上样量从 14BV 开始， 泄露趋于稳定， 即 9-16BV 之间达到一个动态平衡， 从 17BV 开始， 泄露曲线由直线上升， 因此， 确定上样量为 16BV 时， 树脂柱达到 吸附饱和。
本发明所述的一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法， 鹰嘴豆脱脂用的 6# 溶剂油， 是目前 市场上生产食用油所用的萃取溶剂， 提取物使用食用乙醇提取， 无毒， 真空干燥， 对活性成 分损害小。本发明得到的总皂苷产品经体外降糖实验——对蛋白酪氨酸磷酸酶 1B 的抑制 作用， 结果表明有很好的活性。
本发明所述的一种鹰嘴豆总皂苷的制备方法， 具有以下优点 ： 所述方法中以乙醇 为溶剂和洗脱剂， 价廉、 无毒 ； 脱脂采用的溶剂为目前市场上生产食用油用的萃取剂 6# 溶 剂油， 安全、 价廉 ； 采用的大孔树脂价格较低， 且安全性较高， 是目前国内药品行业常用的大 孔树脂。通过本发明所述方法获得的鹰嘴豆总皂苷的质量含量可达 22-25％。 附图说明 ：
图 1 为本发明不同型号大孔树脂对纯化物总皂苷含量的影响， 其中□为吸附率， 为解析率。
图 2 为本发明大孔树脂不同上样浓度对纯化物总皂苷含量的影响图。 图 3 为本发明大孔树脂柱径高比对纯化物总皂苷含量的影响图。 图 4 为本发明大孔树脂不同吸附速度对纯化物总皂苷含量的影响图。 图 5 为本发明大孔树脂解吸剂对纯化物总皂苷含量的影响图。 图 6 为本发明 80％乙醇的动态解吸曲线图。 图 7 为本发明水洗脱用量图。 图 8 为本发明吸附泄露曲线图。具体实施方式 ：
本发明将结合具体实施例作进一步说明， 但不限于本实施例范围。
实施例 1
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热回 流脱脂， 加热温度 40℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 5 倍量的 30％乙醇采用电热套加 热回流提取 1 次， 时间 1h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 HPD100 大孔树 脂进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 1h， 控制流出液流速为 3BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 1BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 1BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂 质， 用 3BV 的浓度 80％乙醇洗脱， 流速为 1BV/h ；
c、 收集乙醇洗脱液， 减压浓缩， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度为 30℃， 即得干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量为 22％。
实施例 2
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 50 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 55℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 10 倍量的 50％乙醇采用电热 套加热回流提取 3 次， 时间 2-3h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 HPD300 大孔树脂进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 3h， 控制流出液流速为 1BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 3BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 3BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂 质， 用 1BV 的浓度 50％乙醇洗脱， 流速为 3BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 40℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 23％。
实施例 3
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 70℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 15 倍量的 80％乙醇采用电热 套加热回流提取 4 次， 时间 3h， 提取温度 95℃， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 SA-3 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 6h， 控制流出液流速为 4BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 3BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 4BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 4BV 的浓度 80％乙醇洗脱， 流速为 4BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 45℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 25％产品。 实施例 4
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 50 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 50℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 8 倍量的 40％乙醇采用电热套 加热回流提取 2 次， 时间 1h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 SA-1 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 2h， 控制流出液流速为 1BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 3BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 3BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 4BV 的浓度 40％乙醇洗脱， 流速为 2BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 32℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 23％产品。
实施例 5
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 60℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 12 倍量的 50％乙醇采用电热 套加热回流提取 3 次， 时间 2h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 DM131 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 5h， 控制流出液流速为 2BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 1BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 2BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 2BV 的浓度 60％乙醇洗脱， 流速为 2BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 30℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 24％产品。
实施例 6
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 50 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 55℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 14 倍量的 65％乙醇采用电热 套加热回流提取 4 次， 时间 2h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 D101 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 4h， 控制流出液流速为 3BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 1BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 1BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 2BV 的浓度 70％乙醇洗脱， 流速为 4BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 38℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 25％产品。
实施例 7
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 65℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 6 倍量的 70％乙醇采用电热套 加热回流提取 1 次， 时间 3h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 XAD-2 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 5h， 控制流出液流速为 2BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 2BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 2BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 3BV 的浓度 75％乙醇洗脱， 流速为 3BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 40℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 25％产品。 实施例 8
a、 将鹰嘴豆粉碎， 过 40 目筛， 取 500g 鹰嘴豆粉， 加入 6# 溶剂油， 采用水浴锅加热 回流脱脂， 加热温度 45℃， 脱脂后的鹰嘴豆粉， 用质量体积比 9 倍量的 75％乙醇采用电热套 加热回流提取 3 次， 时间 3h， 收集提取液， 减压回收乙醇 ；
b、 将步骤 a 提取液浓缩至质量浓度 0.87g 生药 /mL， 再将浓缩液用 ADS-7 大孔树脂 进行纯化， 装填树脂床径高比为 1 ∶ 4， 上样时间为 6h， 控制流出液流速为 1BV/h， 静置 2h， 让其充分吸收， 用 4BV 纯净水洗树脂床， 水洗流速为 3BV/h， 除去未被树脂吸附部分和杂质， 用 4BV 的浓度 80％乙醇洗脱， 流速为 3BV/h ；
c、 收集步骤 b 的乙醇洗脱液， 真空干燥， 真空度 20Pa， 加热温度 42℃， 即可得到干 燥的鹰嘴豆纯化产物 209.4mg， 总皂苷质量含量 24％产品。
实施例 9
鹰嘴豆总皂苷提取物降糖体外筛选—蛋白酪氨酸磷酸酶 1B(PTP1B) 抑制实验
纯化的总皂苷提取物溶于 DMSO， 初始浓度为 100mM×L-1， DMSO 稀释， 分别配成浓度 -1 -1 为 10， 1， 0.1， 0.01mm×L 的样品溶液， 阳性对照药 ： NaVO3， IC50 ： 4μg×mL 。
蛋白酪氨酸磷酸酶 1B 活性测定采用微量法。测试反应体系 ： 样品溶液 1μL， 再加 -1 -1 入 179μL 含 0.09μmol×L 蛋白酪氨酸磷酸酶 1B 的缓冲液 (20mmol×L 4- 羟乙基哌嗪 乙磺酸 ； N-(2- 羟乙基 ) 哌嗪 -N’ -2- 乙烷磺酸， 150mmol×L-1NaCl， 和 1mmol×L-1 乙二胺四 乙酸， pH ＝ 7.0)， 室温孵育 10min， 然后加入 20μL 35mmol×L-1 对硝基苯磷酸二钠盐， 总体 -1 积为 200μL， 室温孵育 30min 后， 用 10μL 3mol×L 的 NaOH 溶液终止反应， 在 405nm 处测 定吸收值， 以不含酶的溶液体系为空白。
按上述活性测试方法， 化合物样品按不同剂量加入， 405nm 处测定吸收值， 每个实 验重复 3 次， 抑制率＝ (OD405 空白 -OD405 样品 )/OD405 空白 ×100％。
表 3 鹰嘴豆提取物和纯化物对蛋白酪氨酸磷酸酶 1B 抑制活性筛选
8101991635 A CN 101991637
说样品 鹰嘴豆提取物 树脂纯化物明书IC50(μg/mL) 347 16 47/7 页阳性对照 ( 钒酸钠 )
由表 3 中可以看出， 树脂纯化后的总皂苷对蛋白酪氨酸磷酸酶 1B(PTP1B) 抑制率 明显高于纯化前的鹰嘴豆提取物的活性， 表明该纯化方法确实可行。