2’氟4’叠氮核苷类似物或其盐的药物应用.pdf

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1、10申请公布号CN102000103A43申请公布日20110406CN102000103ACN102000103A21申请号201010506595X22申请日20101008200910227556320091221CNA61K31/7068200601A61P35/00200601A61P35/0220060171申请人郑州大学地址450001河南省郑州市科学大道100号72发明人常俊标王庆瑞江金花宋传君郑立运王强赵志鸿祁秀香张艳王宁74专利代理机构郑州联科专利事务所普通合伙41104代理人时立新54发明名称2氟4叠氮核苷类似物或其盐的药物应用57摘要本发明公开了2氟4叠氮核苷类似物的药。

2、物应用，属药物化学领域。其具有如下结构将其应用于制备治疗结肠癌、肝癌、胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴瘤等肿瘤药物中，具有很好的活性及较低的毒副作用，开发应用前景良好。66本国优先权数据51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书10页附图3页CN102000113A1/1页21具有如下结构的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其用于制备治疗肿瘤药物中。2如权利要求1所述的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其用于制备治疗结肠癌、肝癌，胃癌、食管癌、肺癌、乳腺癌，宫颈癌、白血病或淋巴瘤药物。

3、中。3如权利要求1或2所述的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其制成注射剂、口服药剂。4如权利要求3所述的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其制成静脉用药小针注射剂、大输液注射剂、冻干粉针剂。5如权利要求3所述的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其制成片剂、胶囊剂或滴丸。6如权利要求5所述的2氟4叠氮核苷类似物或其盐在制备药物方面的应用，其特征在于，将其制成缓释剂或纳米制剂。权利要求书CN102000103ACN102000113A1/10页32氟4叠氮核苷类似物或其盐的药物应用技术领域0001本发明涉及核苷类。

4、似物的应用，尤其涉及2氟4叠氮核苷类似物或其盐的药物应用，属药物化学领域。背景技术0002核苷类似物是一类重要的具有抗HIV活性的化合物，已成为国内外研究热点。但这些药物均存在一定的缺陷，一方面是药效有限，另一方面是长期服用有严重的毒副作用，并且会产生耐药性。因此，新型核苷类似物的合成、研究依然是一个重要的研究方向，含有氟的核苷类似物即为其中的一类，国外也有相关研究报道CLARK，JPCTPATENTAPPL，WO2005003174；ISMAILI，HMAPCTPATENTAPPL，WO0160315A22001。本发明人长期从事核苷类似物的相关研究，于2007年8月申请了发明专利“2氟4取。

5、代核苷类似物、其制备方法及其应用”ZL2007101375480，目前已授权，该类化合物经证实有抗HIV和抗HBV及HCV活性，具有制备抗HIV和抗HBV及HCV病毒药物的开发应用前景，但未发现此类药物具有抗肿瘤活性。治疗肿瘤的药物种类繁多，普遍存在毒副作用较大、容易对患者产生耐药性的缺点，目前急需开发寻找活性高、毒副作用小、不易对患者产生耐药性的新型抗肿瘤药物。发明内容0003本发明目的在于提供一种活性高、毒副作用小、不易对患者产生耐药性的含2氟4叠氮核苷类似物在制备肿瘤药物方面的应用，为含氟核苷类似物的研究开发奠定基础，同时对提升我国自主知识产权药物的开发具有重要意义。0004为实现本发明。

6、目的，本发明研究人员在专利“2氟4取代核苷类似物、其制备方法及其应用”ZL2007101375480的基础上又进一步对此类化合物进行了大量的活性筛选试验，发现2氟4叠氮核苷类似物具有较好的抗肿瘤活性，可以应用于抗肿瘤药物的制备。该2氟4叠氮核苷类似物具有如下结构00050006该化合物ESIMS287MH，性质浅黄色固体，熔点100101。0007该化合物或其5磷酸酯可以与有机酸或无机酸反应形成盐，以盐的形式存在。0008本发明核苷类似物FNC或其盐在制备抗肿瘤药物中的应用，将其应用于制备治疗结肠癌HT29，肝癌HEPG2、SMMC7721，胃癌SGC7901、肺癌A549，乳腺癌MCF7、说。

7、明书CN102000103ACN102000113A2/10页4宫颈癌HELA、食管癌ECA109、急性白血病HL60、慢性白血病K562、B细胞淋巴瘤G519、淋巴瘤REN等抗肿瘤药物中。通过初步动物体内外试验结果表明FNC对多种人癌细胞及动物移植性肿瘤均具有明显的抑制作用。在相同条件下FNC的抗肿瘤作用与5FU、DDP相比疗效较好。FNC在有效剂量的情况下对动物骨髓造血功能无明显影响，而5FU及DDP则有明显的抑制作用，骨髓抑制是导致临床肿瘤化疗失败的最重要因素之一。本发明FNC属高效低毒的新型抗肿瘤药物，FNC水溶性较好，可制成注射剂，也可制成口服途径给药剂型。剂型包括静脉用药小水针剂、。

8、大输液、冻干粉针、片剂、胶囊剂普通胶囊、微型胶囊、软胶囊、滴丸、缓释制剂及纳米制剂等剂型。0009以本发明核苷类似物FNC或其盐为活性成分，与医学上可接受的药用辅料、赋形剂等混配、组合，制成上述各种剂型；也可以与其他抗肿瘤药物共同作为活性成份，与医学上可接受的药用辅料、赋形剂等混配、组合，制成上述各种剂型。0010静脉用药小水针剂将100G本发明核苷类似物FNC或其盐加碳酸氢钠、苯甲醇、亚硫酸氢钠与注射用水以14比例混配，消毒分装成针剂，制成注射剂。规格3MG/2ML。临床拟用量6MG/日，2次/日。0011大输液将12MG本发明核苷类似物FNC或其盐与注射用水以48MG100ML比例混配，再。

9、加015的活性炭脱色，过滤至澄明，灌装封口制成大输液，热压灭菌。规格12MG/250ML，临床拟用量12MG/日。0012注射用冻干粉针将100MG本发明核苷类似物FNC或其盐加水解明胶、甘露醇、葡萄糖酸钙、半胱氨酸等用注射用水溶解后，无菌过滤，分装于安瓿中，每支10ML，冷冻干燥后封口，临用前用氯化钠注射液或5葡萄糖注射液溶解后滴注。规格100MG含量12MG。临床拟用量12MG/日。0013片剂将本发明核苷类似物FNC或其盐与微晶纤维素、乳糖、硬脂酸镁等稀释剂、润滑剂混配，按公知的制片技术和装备，经过标准的凹冲压成片，制成片剂。规格01G/片含量10MG/片。临床拟用量20MG/日，2次/。

10、日。0014胶囊剂普通胶囊、软胶囊、微型胶囊0015普通胶囊将本发明核苷类似物FNC或其盐粉末与硬脂酸镁等以19的比例混合均匀后，填入空胶囊中，即得。规格01G/粒含量10MG/粒。临床拟用量20MG/日，2次/日。0016软胶囊将本发明核苷类似物FNC或其盐水溶液与甘油、水、明胶加热熔化后混匀，加入滴丸机滴制，即得。规格10MG/粒含量5MG/粒，临床拟用量20MG/日，2次/日。0017微型胶囊将本发明核苷类似物FNC或其盐粉末分散在明胶材料中，加入硫酸钠水溶液，PEG甲醛以单凝聚法凝聚成囊。规格02MG/粒含量01MG/粒，临床拟用量20MG/日，2次/日。0018滴丸将1份本发明核苷类。

11、似物FNC或其盐与9份PEG6000以19比例混合，以固体分散技术，制成滴丸剂。规格10MG/粒含量5MG/粒，临床拟用量20MG/日，2次/日。0019缓释制剂将本发明核苷类似物FNC或其盐与羟甲基纤维素混匀，枸橼酸钠溶于乙醇中作润湿剂制成软材，制粒，干燥，整粒，加硬脂酸，乳糖混匀，压片即得。规格03G/说明书CN102000103ACN102000113A3/10页5片含量60MG/片，临床拟用量60MG/3日。0020纳米制剂将本发明核苷类似物FNC或其盐与磷脂、助乳化剂和水以纳米乳化法制成纳米乳或亚微乳，再倒入冰水中冷却即得到纳米粒或亚微乳。规格12MG/2ML，临床拟用量12MG/日。

12、。0021本发明2氟4叠氮核苷类似物的制备反应路径如下00220023B为0024具体通过如下步骤也可以参考专利ZL2007101375480中所描述方法0025化合物II的合成将化合物ID核糖或L核糖866MMOL溶于312MLHCL/MEOH02MMOL/L中，在27水浴下保温密闭搅拌3H，加入78ML吡啶终止反应，减压抽干，得浅黄色糖浆状物质化合物II96；0026化合物III的合成将化合物II792MMOL溶于21ML干燥的吡啶中，冰盐浴下缓慢滴加52ML苯甲酰氯00447MOL，室温下搅拌17H后将反应液倒入39ML冰水中，氯仿提取。有机层用冰水、预冷的3MOL/L硫酸、饱和碳酸氢钠。

13、依次洗涤至水层呈弱碱性，再用冰水洗至水层呈中性，无水硫酸钠干燥4H以上，减压抽干得浅黄色糖浆状物质化合物III800。1HNMRCDCL3PPM728810M，15H，OBZ，587M，1H，H3，568D，1H，H2，516S，1H，H1，472M，2H，H5，452Q，1H，H4，342S，3H，OCH3。0027化合物IV的合成将苯甲酰化物化合物III00027MMOL溶于13MOL氯仿中，加入红磷390MG，00126MOL冰水浴搅拌下缓慢滴加溴13ML，0025MMOL，搅拌30MIN后，说明书CN102000103ACN102000113A4/10页6缓慢滴加冰水13ML，室温搅拌。

14、4H，然后加入7G碎冰搅融，再将反应液倒入14ML冰水中，氯仿提取。有机层饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性，冰水洗至水层呈中性，无水硫酸钠干燥4H以上，减压抽干得深黄色糖浆，用硅胶柱分离石油醚丙酮梯度洗脱得白色干糖浆化合物IV642。1HNMRCDCL3PPM732810M，15H，OBZ，590M，1H，H3，570D，1H，H2，563S，1H，H1，455479M，3H，H5，H4。0028化合物V的合成将化合物IV273MMOL溶解在5ML干燥的吡啶中，冰水浴下缓慢滴加醋酐00276MOL，搅拌30MIN后，撤去冰水浴，室温搅拌7H，升温到40保持1H。加入65G碎冰搅融后，将反应液倒入1。

15、3ML冰水中，氯仿提取。有机层用冰水、预冷的3MOL/L硫酸、饱和碳酸氢钠依次洗至水层呈弱碱性，冰水洗至水层呈中性，无水硫酸钠干燥4H以上，减压抽干得浅黄色糖浆状化合物V921。1HNMRCDCL3PPM730810M，15H，OBZ，643S，1H，H1，590M，1H，H3，580D，1H，H2，450480M，2H，H5，200S，3H，CH3COO。0029化合物VI的合成将化合物V257MMOL溶于26ML干燥的二氯甲烷中，冰水浴下缓慢通入干燥的HCL气体25H，加入冰水195ML洗涤，分出有机层，用饱和碳酸氢钠洗至水层呈弱碱性，冰水洗至水层呈中性，无水硫酸钠干燥4H以上，减压抽干得。

16、浅黄色糖浆。用正己烷、二氯甲烷混合溶剂重结晶得白色固体化合物VI651。1HNMRCDCL3PPM736814M，15H，OBZ，668D，J44HZ，1H，H1，559DD，1H，H3，464480M，4H，H2，H4ANDH5。MP139140。0030化合物VII的合成将化合物VI281MMOL溶于13ML干燥的二氯甲烷中和35ML干燥的DMF中，15搅拌下缓慢加入SO2CL200079MMOL，15搅拌30MIN后，自然升至室温，反应3H，在0下分3次加入咪唑00407MMOL，混合液室温搅拌15H，反应液加入CH2CL226ML稀释，用冰水35ML洗涤，水层用CH2CL2提取，有机层。

17、合并后用无水硫酸钠干燥4H以上，减压抽干溶剂得浅黄色糖浆。用硅胶柱分离纯化石油醚丙酮梯度洗脱得白色固体化合物VII760。1HNMRCDCL3PPM700810M，15H，OBZ，671D，J44HZ，1H，H1，559DD，1H，H3，525DD，1H，H2，456481M，3H，H4，H5。MP128129。0031化合物VIII的合成将化合物VII22MMOL溶于乙酸乙酯54ML中，搅拌下加入ET3N3HF208ML，0013MMOL，升温至60搅拌3H，70搅拌15H。加入冰盐水10ML终止反应，然后用二氯甲烷提取，有机层合并后依次用盐水、水、饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥4H以上，。

18、减压抽干溶剂得深黄色糖浆。用硅胶漏斗5CM5CM纯化二氯甲烷洗脱得浅黄色糖浆868，粗品在95的乙醇溶液中结晶得白色晶体化合物VIII664。1HNMRCDCL3PPM731810M，15H，OBZ，671D，J90HZ，1H，H1，568DD，J1944HZ，1H，H3，532D，J482HZ，1H，H2，465477M，3H，H4，H5。MP8082。0032化合物IX的合成将化合物VIII60MMOL溶解于无水二氯甲烷20ML中，加入HBRACOH45，V/V，46ML，25MMOL的混合溶液，室温搅拌反应20H。将混合物蒸干，用二氯甲烷50ML溶解剩余物，并用碳酸氢钠330ML洗涤二氯。

19、甲烷溶液，将二氯甲烷蒸去，得到糖浆状物。同时，将保护过的胞嘧啶15MMOL和NH42SO401G在HMDS30ML中氮气保护下回流反应17H，减压蒸去溶剂，得到甲硅烷基化的胞嘧啶。将上述反应中得到的糖说明书CN102000103ACN102000113A5/10页7浆状物溶于二氯乙烷25ML中，加入到甲硅烷基化的胞嘧啶中，混合物在N2保护下回流反应15H。用冰终止反应，用二氯甲烷345ML萃取，二氯甲烷层依次用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。干燥后蒸除溶剂，得到白色固体，柱色谱分离1MEOHCHCL3纯化，得到化合物IX71。1HNMRCDCL3PPM807D，J986HZ，1H，74。

20、5D，J982HZ，1H，726810M，10H，OBZ，603D，J90HZ，1H，H1，564DD，J1944HZ，1H，H3，526D，J482HZ，1H，H2，465477M，3H，H4，H5。0033化合物X的合成将化合物IX360MMOL溶于饱和的NH3CH3OH30ML室温搅拌反应15H。将溶剂蒸干，所得剩余物通过柱色谱151CHCL3MEOH纯化，得到化合物X80。1HNMRCDCL3PPM810D，J986HZ，1H，740D，J982HZ，1H，603D，J90HZ，1H，H1，564DD，J1944HZ，1H，H3，526D，J482HZ，1H，H2，450M，1H，H4。

21、，370377M，2H，H5。0034化合物XI的合成将化合物X946MMOL，咪唑1893MMOL、三苯基膦1419MMOL，溶解在四氢呋喃50ML中，向其中缓慢加入溶解有碘1418MMOL的四氢呋喃溶液15ML。室温搅拌反应3H。蒸除溶剂，向剩余物中加入乙酸乙酯100ML，过滤。蒸除乙酸乙酯，剩余物柱色谱分离得到化合物XI839。1HNMRCDCL3PPM806D，J986HZ，1H，743D，J982HZ，1H，601D，J90HZ，1H，H1，566DD，J1944HZ，1H，H3，522D，J482HZ，1H，H2，457M，1H，H4，358369M，2H，H5。0035化合物XI。

22、I的合成将化合物XI588MMOL溶解在四氢呋喃50ML中，向其中加入DBU644MMOL。在60搅拌3H。蒸干溶剂，剩余物柱色谱分离得到化合物XII751。直接用于下一步反应。0036化合物XIII的合成在0，将溶有ICL139MMOL的15MLDMF溶液加入到溶有NAN3975MMOL的DMF15ML溶液中，0搅拌10分钟，将溶有化合物XII68MMOL的DMF20ML缓慢加入到上述溶液。0反应1小时。向混合溶液中加入亚硫酸钠，直到碘的颜色完全消失。减压蒸除溶剂，剩余物用柱色谱分离纯化，得到化合物XII776。直接用于下一步反应。0037化合物XIV的合成将化合物XIII5MMOL溶于DM。

23、F15ML中，搅拌下加入醋酸银6MMOL，室温反应8H，过滤。在减压下移除溶剂50以下，剩余物用柱色谱纯化，得到化合物XIV713。1HNMRDMSOD6，300MHZ812D，1H，740D，1H，726BR，2H，612DD，1H，587D，1H，509T，1H，490DT，1H，418DT，1H，374387M，2H，212S，3H，CH3。0038化合物XV的合成将化合物XIV5MMOL溶于5的三乙胺甲醇溶液100ML中，室温搅拌12H，蒸除溶剂，剩余物用柱色谱纯化，得到化合物XV890。ESIMS287MH。1HNMRDMSOD6，300MHZ814D，1H，732D，1H，721B。

24、R，2H，608DD，1H，582D，1H，511T，1H，492DT，1H，416DT，1H，362369M，2H。附图说明0039图1本发明FNC作用72H对A549的增值抑制作用；0040图2本发明FNC作用72H对HL60的增值抑制作用；0041图3本发明FNC作用96H对REN、G519的增值抑制作用，横坐标表示药剂量UM，说明书CN102000103ACN102000113A6/10页8纵坐标表示肿瘤细胞的存活率；0042图4本发明FNC对不同淋巴瘤细胞凋亡的影响；0043图5本发明FNC作用72H对GRANTA519PARP蛋白的影响。具体实施方式0044采用如下实验证实本发明2。

25、氟4叠氮核苷类似物FNC抗肿瘤活性。0045一、体外试验0046一本发明FNC对几种人癌细胞的增殖抑制试验00471本发明FNC对HT29、HEPG2、SMMC7721、SGC7901、A549、MCF7、HELA、ECA109等细胞均由中科院上海细胞所提供的增殖抑制试验MTT法。0048取对数生长期的上述细胞接种于96孔细胞培养板中，细胞浓度为2104个/孔，培养24小时后去除上清，每孔加入200L含本发明FNC的新鲜培养基，FNC的浓度分别为001M、01M、1M、10M、100M、每个浓度设6个复孔，并设调零孔和空白对照孔。放入细胞培养箱中5CO2，37孵育72H后，每孔加入20LMTT。

26、34，5二甲基噻唑22，5二苯基四氮唑溴盐溶液5MG/ML，即浓度为05MTT，继续培养4H后，弃去上清液，每孔加入DMSO二甲基亚砜150L，振荡10MIN，酶标仪检测波长570NM测定各孔OD值，用细胞存活率对剂量作图并按作图法求出IC50值。004900502本发明FNC对REN、G519、HL60、K562细胞的增殖抑制试验SRB法0051取对数生长期的上述细胞接种于96孔细胞培养板中，细胞浓度为25105个/孔，本发明FNC对REN、G519细胞的作用浓度分别为0001M、001M、01M、05M、1M、25M、5M、75M、10M、20M，本发明FNC对HL60、K562细胞的作用。

27、浓度分别为001M、01M、1M、10M、100M，每个浓度设6个复孔，并设调零孔和空白对照孔。放入细胞培养箱中5CO2，37孵育72HHL60、K562细胞96HREN、G519细胞后，每孔加入预冷的80三氯醋酸固定1H。96孔板以去离子水洗5遍，空气干燥。每孔加入100L磺酰罗丹明染色法SRB工作液04SRB，室温放置染色10MIN，以1醋酸溶液洗5遍，洗去未与蛋白结合的SRB染液，空气干燥。每孔加入150L10MMOLL1非缓冲TRIS碱，溶解与蛋白结合的SRB，用酶标仪在490NM波长处测定各孔OD值，用细胞存活率对剂量作图并按作图法求出IC50值。00520053试验结果表明本发明F。

28、NC对人癌细胞HT29、HEPG2、SMMC7721、SGC7901、A549、MCF7、HELA、ECA109、REN、G519、HL60、K562等均具有明显的细胞毒作用。附图1本发明FNC作用72H后，随着药物浓度的增加，对A549细胞的抑制率明显增加，IC50值为122M。附图2本发明FNC作用72H后，随着药物浓度的增加，对HL60细胞的抑制率明显增加，IC50值为330M。附图3本发明FNC作用96H后，随着药物浓度的增加，REN和G519细胞的存说明书CN102000103ACN102000113A7/10页9活率明显下降，表明本发明FNC对REN和G519细胞的增殖有明显的抑制。

29、作用。0054二流式细胞术检测本发明FNC对三种淋巴瘤细胞凋亡的影响00551不同浓度的本发明FNC05UM、10UM、20UM作用24个小时。00562细胞收集将细胞收集到10ML的离心管中，每样本细胞数为1106个/ML1000R/MIN离心5MIN，弃去培养液。00573用孵育缓冲液洗涤1次，1000R/MIN离心5MIN。00584用100UL的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育15MIN。005951000R/MIN离心5MIN，将沉淀细胞用孵育缓冲液洗涤1次。00606加入荧光SAFLOUS溶液4下孵育20MIN，避光并不时振动。00617流式细胞仪分析流式细胞仪激发光波长用488N。

30、M，用一波长为515NM的通带滤器检测FITC荧光，另一波长大于560NM的滤器检测PI。0062从附图4可以看出，本发明FNC作用后，三种淋巴瘤细胞GRANTA519、HUDHL6、RL的凋亡率均较正常对照组明显增加。0063三WESTERNBLOTTING检测本发明FNC对细胞PARP蛋白的影响00641取对数生长期的GRANTA519细胞，以每孔7105的细胞浓度接种于6空培养板，培养过夜后，分别加入1UM、2UM、4UM、6UM、8UM和10UM的本发明FNC，作用72小时，同时设不加药的细胞对照组。00652弃细胞上清液，用PBS磷酸盐缓冲液洗涤细胞2次，每空加入1ML胰酶消化细胞，。

31、将细胞制成细胞悬液，转移至15MLEP管中，12000RPM离心5分钟，收集上清，得总蛋白。00663蛋白定量后，将蛋白质样品加入到SDSPAGE胶十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离，进一步转移至硝酸纤维素膜上，并进行染色及脱色。00674将蛋白膜放置于洗涤液中，洗去转膜液，加入封闭液，室温封闭60分钟。00685分别加入一抗兔抗人PARP多克隆抗体和二抗辣根过氧化物酶标记羊抗人IGA进行孵育，并用洗涤液洗涤。00696显色法检测PARP的含量。0070从附图5可以看出，本发明FNC作用后，与正常对照相比，套细胞淋巴瘤细胞GRANTA519内113KD的完整PARP多聚ADP核糖聚合酶。

32、减少，89KD的裂解片段增加。表明本发明FNC作用后，GRANTA519细胞DNA修复功能降低，细胞发生凋亡。0071二、体内试验0072一对小鼠移植性肿瘤的影响S180、H22、LEWIS、B160073二对人癌裸小鼠移植瘤模型的影响00741试验材料007511受试药本发明合成的2氟4叠氮核苷类似物FNC，纯度达985以上，供试验用。007612阳性对照药5氟脲嘧啶，批号090904，由旭东海普药业有限公司生产，规格250MG/10ML。007713阳性对照药卡培他滨片，批号SH0246，上海罗氏制药有限公司生产，规格05G/片。说明书CN102000103ACN102000113A8/1。

33、0页10007814人癌细胞株肝癌SMMC7721、胃癌SGC7901、食管癌ECA109、结肠癌HT29、肺癌A549、乳腺癌MCF7、宫颈癌HELA、急性白血病HL60、慢性白血病K562，均由中科院上海细胞所提供。007915动物移植性肿瘤肝癌H22；肉瘤180S180；LEWIS肺癌，黑色素瘤B16等，均由中科院上海细胞所提供。008016实验用动物昆明种小鼠、C57小鼠均为SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，体重202G，动物合格证号0062355、0064494等，供动物移植性肿瘤实验用。裸小鼠，SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，体重202G，动物合格证号。

34、0073254、0064462等，供人癌细胞试验用。00812试验分组及用药剂量008221空白对照组灭菌生理盐水或蒸馏水02ML/10G，静脉IV或灌胃IG给药。008322阳性对照组5氟脲嘧啶，用量15MG/KG，试验前用氯化钠注射液配成浓度为0075溶液，用药体积02ML/10G，IV。008423阳性对照组卡培他滨片，用量600MG/KG裸鼠为400MG/KG，试验前用蒸馏水配成浓度为3裸鼠为2的溶液，用药体积02ML/10G，IG。008524受试药本发明合成的2氟4叠氮核苷类似物FNC，用量分为高、中、低三个剂量组即20MG/KG、10MG/KG、05MG/KG，试验前用氯化钠注射。

35、液分别依次配成浓度为001、0005、00025溶液，用药体积02ML/10G，IV或IG。00863试验方法008731动物移植性肿瘤试验，取传代后7天的瘤细胞，给每只动物右前肢腋下接种1107个细胞，接种后随机分为不同剂量组，24H后开始IV或IG给药，每日一次，连用8天，停药后，处死动物，剖瘤称重，计算瘤重抑制率，评价其疗效。008832人癌细胞裸鼠体内试验；将人癌细胞在体外进行近20天的培养，扩增，配成浓度为1107个/ML的肿瘤单细胞悬液，给每只裸鼠背部右侧皮下接种02ML，待裸鼠瘤体形成约58MM平均直径时，随机分为不同的剂量组，每日IV或IG给药一次，连用20天，停药后，剖瘤称重。

36、，计算瘤重抑制率，评价其疗效。008933外周血白细胞计数待以上体内试验停药后24H，自动物尾静脉取血20L，按常规白细胞计数法进行计数，了解其受试药物对动物骨髓造血功能的影响情况。00904试验结果009141本发明FNC对动物移植性肿瘤生长的影响，试验结果表明，本发明FNC不同剂量对H22、S180、LEUIS肺癌、黑色素瘤B16等肿瘤的生长均具有明显的抑制作用，抑瘤率达5070。与5FU相比无明显差异，且对骨髓造血功能无明显影响。但5FU则有明显的抑制作用。009242本发明FNC对人癌裸鼠试验试验结果表明，本发明FNC对上述人癌细胞均具有明显的抑制作用，抑制率均达60以上；本发明FNC。

37、不同剂量组裸小鼠的外周血白细胞数虽较空白对照组低，但数值均在正常范围内，表明本发明FNC在治疗剂量下对裸小鼠的白细胞无明显影响。0093本发明FNCIV对动物移植性肿瘤H22、S180生长的影响0094说明书CN102000103ACN102000113A9/10页110095本发明FNCIG对动物移植性肿瘤H22、S180生长的影响00960097本发明FNCIG对人癌裸小鼠移植瘤模型的影响0098说明书CN102000103ACN102000113A10/10页120099本发明FNCIG对人胃癌SGC7901裸小鼠移植瘤模型白细胞计数的影响01000101与空白对照组相比P0050102。

38、另外通过本发明FNC原料药给小鼠灌胃给药的急性毒性试验及本发明FNC原料药给大鼠单次灌胃给药的药代动力学试验，结果表明01031、FNC原料药给小鼠灌胃给药的急性毒性试验LD50574462135MG/KG；01042、FNC原料药给大鼠单次灌胃给药的药代动力学试验试验结果显示给大鼠灌胃5MG/KG的FNC后，血药浓度呈二房室模型，从药代参数可知，FNC的分布半衰期为0829小时，在血浆中达峰时间为174小时，表明FNC在大鼠体内分布较缓慢，FNC的消除半衰期为1856小时，清除率为1169LH1，表明FNC在血中消除比较迅速。FNC在大鼠体内的表观分布容积为3131MG/KG，表明FNC分布广泛，组织渗透性强。总之FNC在大鼠体内的药代动力学特征是吸收较缓慢，消除迅速，分布广泛，组织渗透性强。说明书CN102000103ACN102000113A1/3页13图1图2说明书附图CN102000103ACN102000113A2/3页14图3图4说明书附图CN102000103ACN102000113A3/3页15图5说明书附图CN102000103A。