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本发明公开了一种工业用大麻籽分离蛋白粉,该蛋白粉中蛋白纯度超过92。还提供了一种制备工业用大麻籽分离蛋白粉的方法,包括以下步骤:(1)将工业用大麻籽分级除杂脱壳后,采用二氧化碳超临界萃取,制得低温蛋白粕,(2)将脱溶蛋白粕溶解于碱液中,调pH值至810,制成蛋白乳液,过滤除去不溶性残渣及纤维;(4)取上清液加入酸液调pH值至4.55,离心分离取沉淀;(5)加入碱液调pH值至67,经喷雾干燥后制得工。