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本发明公开一种以查尔酮为主要有效成分的啤酒花提取物，其中啤酒花总查尔酮中含查尔酮类成分含量在20％以上。本发明主要通过醇提、有机溶剂萃取、聚酰胺树脂柱富集等步骤得到提取物。经细胞试验显示本发明提取物有较好的抗乳腺癌和卵巢癌作用。

1、  一种啤酒花提取物，其特征在于该提取物中总查尔酮类含量为20％-25％；其中黄腐酚含量为18％-22％；它是通过下列方法制得：
a)醇提：啤酒花加6～12倍W/V乙醇，乙醇浓度为70％～90％，提取次数为2～4次，合并提取液减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味；
b)萃取：取步骤(a)浓缩液加入0.5～3倍V/V石油醚、戊烷、己烷或庚烷进行萃取，萃取次数为1～3次，保留萃取后的水溶液；
c)富集：取步骤(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺树脂柱，依次用0％～70％浓度的乙醇由低到高浓度的程序梯度洗脱，收集最后的乙醇洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至相对密度1.15～1.20，干燥，得到啤酒花提取物。

2、  一种啤酒花提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
a)醇提：啤酒花加6～12倍W/V乙醇，乙醇浓度为70％～90％，提取次数为2～4次，合并提取液减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃浓缩至无醇味；
b)萃取：取步骤(a)浓缩液加入0.5～3倍V/V石油醚、戊烷、己烷或庚烷进行萃取，萃取次数为1～3次，保留萃取后的水溶液；
c)富集：取步骤(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺树脂柱，依次用0％～70％浓度的乙醇由低到高浓度的程序梯度洗脱，收集最后的乙醇洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃浓缩至相对密度1.15～1.20，干燥，得到啤酒花提取物。

3、  根据权利要求2所述啤酒花提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：
a)醇提：啤酒花加8倍量乙醇，乙醇浓度为80％，提取2次，合并提取液减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味；；
b)萃取：取步骤(a)浓缩液加入1倍量V/V石油醚萃取2次，弃去萃取液，保留萃取后的水溶液；
c)富集：取步骤(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺树脂柱，依次用0％、30％、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至相对密度1.15～1.20，干燥得到啤酒花提取物。

4、  根据权利要求2或3所述啤酒花提取物的制备方法，其特征在于所述步骤c)的干燥条件为：常温干燥：105℃，3小时、真空干燥：-0.1Mpa，80℃，3小时或喷雾干燥：进风口温度120℃，流速10ml/min。

5、  一种如权利要求1所述的啤酒花提取物在制备治疗乳腺癌、卵巢癌、肝癌或肺癌药物中的应用。

6、  一种如权利要求1所述的啤酒花提取物在制备治疗乳腺癌或卵巢癌药物中的应用。

啤酒花提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及植物提取物，具体涉及一种富含查尔酮的啤酒花提取物及其制备方法与应用。
背景技术
啤酒花，记载于《新疆中草药手册》、《中药大辞典》等，来源于桑科植物啤酒花的雌花序，功效利尿安神，抗痨消炎。现代研究认为，啤酒花主要含有苦味酸类、挥发油、黄酮类等成分，其中黄酮类成分包括查尔酮类和二氢黄酮类。药材中查尔酮类含量很低，只有0.3％左右。研究表明，苦味酸类成分葎草酮具有抑制血管生成作用(MARICAL S，TADAHIKO H等，Biochemical and biophysical research communications.2001，289：220-224)，C.L.MIRANDA、J.F.STEVENS等则报道了黄腐酚等5个查尔酮类成分以及异黄腐酚的抗乳腺癌和卵巢癌细胞增殖活性(Food and Chemical Toxicology.1999，37：271-285)，专利02133523.0也介绍了黄腐酚D的抗肿瘤活性，8-异戊烯基柚皮素、6-异戊烯基柚皮素等黄酮类成分显示了较强的雌激素活性(S.R.Milligan等，J.Clin.Endocrinol.Metab.1999，84：2249-2252)。由此，本发明人用不同查尔酮含量的啤酒花提取物进行的细胞试验，结果显示啤酒花提取物抑制肿瘤细胞生长的效果随查尔酮类成分含量的增加而明显提高。目前已有专利02815697.8等提供了啤酒花提取物的制备方法，但这些方法所得提取物查尔酮含量比较低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究设计高含量查尔酮类成分的啤酒花提取物。
本发明提供一种啤酒花提取物，它是通过下列方法制备的：
本发明提供的啤酒花提取物的制备方法，包括醇提、有机溶剂萃取、聚酰胺树脂柱富集等步骤，具体为：
a)醇提：啤酒花加6～12倍W/V乙醇，乙醇浓度为70％～90％，提取次数为2～4次，合并提取液减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味；
b)萃取：取步骤(a)浓缩液加入0.5～3倍V/V石油醚、戊烷、己烷或庚烷进行萃取，萃取次数为1～3次，保留萃取后的水溶液；
c)富集：取步骤(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺树脂柱，依次用0％～70％浓度的乙醇由低到高浓度的程序梯度洗脱，收集最后的乙醇洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩到相对密度1.15～1.20，干燥，得到啤酒花提取物。
本发明优选的啤酒花提取物的制备方法为：
a)醇提：啤酒花加8倍量乙醇，乙醇浓度为80％，提取2次，合并提取液减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味；；
b)萃取：取步骤(a)浓缩液加入1倍量V/V石油醚萃取2次，弃去萃取液，保留萃取后的水溶液；
c)富集：取步骤(b)萃取后的水溶液，上聚酰胺树脂柱，依次用0％、30％、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩到相对密度1.15～1.20，干燥得到啤酒花提取物。
本发明方法所述步骤c)的干燥条件为：常温干燥：105℃，3小时、真空干燥：-0.1Mpa，80℃，3小时或喷雾干燥：进风口温度120℃，流速10ml/min。
本发明所使用的啤酒花为桑科植物啤酒花Humuluslupulus雌花序可以通过市售得到。
本发明提供的啤酒花提取物，富含查尔酮类成分，包括黄腐酚、黄腐酚D等，总查尔酮类含量达20％-25％；其中黄腐酚含量为18％-22％。
本发明针对查尔酮类成分进行富集，使查尔酮类成分含量达到(20％-25％)。
本发明的制备方法比较简单，所用聚酰胺树脂可以重复使用，使成本降低。本发明所提供的提取物是有效部位的高度浓缩，适宜制成各种需要的剂型，服用量少，利于患者。
本发明的又一目的是提供了上述啤酒花提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
为了更好地理解本发明所提供的提取物的作用，本发明人分别制备查尔酮含量为1.2％、5％、20％的啤酒花提取物，以黄腐酚为对照，用四种人肿瘤细胞株进行体外试验，结果见下表。
表1不同含量提取物对4种人肿瘤细胞株生长的半数抑制浓度IC50(ug/ml)

体外试验结果显示，啤酒花提取物抑制肿瘤细胞生长的效果随查尔酮类成分含量的增加而明显提高。
具体实施方式
实施例1
取啤酒花1000g，加80％乙醇提取2次，每次8000ml，合并提取液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味，浓缩液加石油醚萃取2次，每次1000ml，水液部分上聚酰胺树脂柱，先用水洗脱使样品吸附，再用30％乙醇洗脱并弃去洗脱液，最后用60％乙醇洗脱并收集洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至相对密度1.20，真空干燥，压力-0.1Mpa，温度80℃，时间3小时，得到啤酒花提取物6.8g，HPLC测定黄腐酚含量为22％，UV法测定总查尔酮含量为25％，提取物收率为0.68％。
实施例2
取啤酒花1000g，加70％乙醇提取3次，每次12000ml，合并提取液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至无醇味，浓缩液加3000ml庚烷萃取1次，水液部分上聚酰胺树脂柱，先用水洗脱使样品吸附，再依次用20％、40％乙醇洗脱并弃去洗脱液，最后用65％乙醇洗脱并收集洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至相对密度1.20，105℃干燥3小时，得到啤酒花提取物8.0g，HPLC测定黄腐酚含量为18％，UV法测定总查尔酮含量为22％，提取物收率为0.80％。
实施例3
取啤酒花1000g，加90％乙醇提取4次，每次6000ml，合并提取液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃浓缩至无醇味，浓缩液加己烷萃取3次，每次700ml，水液部分上聚酰胺树脂柱，先用水洗脱使样品吸附，再依次用10％、30％、50％乙醇洗脱并弃去洗脱液，最后用70％乙醇洗脱并收集洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃，浓缩至相对密度1.15，喷雾干燥：进风口温度120℃，流速10ml/min喷雾干燥得到啤酒花提取物7.2g，HPLC测定黄腐酚含量为21％，UV法测定总查尔酮含量为23％，提取物收率为0.72％。
实施例4
取啤酒花1000g，加80％乙醇提取3次，每次10000ml，合并提取液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃浓缩至无醇味，浓缩液加戊烷萃取3次，每次1000ml，水液部分上聚酰胺树脂柱，先用水洗脱使样品吸附，再依次用10％、30％、45％乙醇洗脱并弃去洗脱液洗去杂质，最后用65％乙醇洗脱并收集洗脱液，减压浓缩，压力-0.1Mpa，温度80℃浓缩至相对密度1.15，喷雾干燥：进风口温度120℃，流速10ml/min，喷雾干燥得到啤酒花提取物7.3g，HPLC测定黄腐酚含量为20％，UV法测定总查尔酮含量为22％，提取物收率为0.73％。