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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410751063.0 (22)申请日 2014.12.10 A23K 1/18(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A23K 1/175(2006.01) (71)申请人 苏州埃瑞特生物技术有限公司 地址 215433 江苏省苏州市太仓市太仓港经 济技术开发区银港路 52 号 (72)发明人 宋增福 许维素 (74)专利代理机构 上海卓阳知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 31262 代理人 李阳 (54) 发明名称 一种对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种对虾促生长制剂的液体。
2、制剂 的制备方法， 包括以下步骤 ： 将枯草芽孢杆菌、 啤 酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行液体发酵培养获 得相应的液体发酵菌液， 将所述的液体发酵菌液 与维生素C-2-聚磷酸酯、 维生素E、 硫酸镁和硫酸 锌混合， 制得所述的液体制剂。本发明优点在于 ： 本发明制备的对虾促生长制剂液体制剂能够显著 增加对虾的肝胰脏和肠道中的蛋白酶、 淀粉酶和 脂肪酶的活性， 明显地降低饵料系数， 促进对虾生 长， 从而缩短养殖周期， 减少养殖成本和风险， 同 时还能够显著提高对虾非特异性免疫功能， 从而 显著的提高其对疾病的防御能力。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明。
3、专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 104397432 A (43)申请公布日 2015.03.11 CN 104397432 A 1/1 页 2 1. 一种对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的液体制剂的制备 方法包括以下步骤 ： 将枯草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行液体发酵培养获得 相应的液体发酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤 酒酵母菌的活菌数为 108-109cfu/g， 将所述的液体发酵菌液与维生素 C-2- 聚磷酸酯、 维生 素 E、 硫酸镁和硫酸锌混合， 制得所述的液。
4、体制剂， 所述的液体制剂中各原料重量份 ： 枯草 芽孢杆菌 22-25 份、 啤酒酵母菌 18-20 份、 嗜酸乳杆菌 3-5 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 10-12 份、 维生素 E 5-8 份、 硫酸镁 0.1-0.3 份、 硫酸锌 0.2-0.4 份。 2. 根据权利要求 1 所述的液体制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的液体制剂中各原 料重量份 ： 枯草芽孢杆菌 25 份、 啤酒酵母菌 19 份、 嗜酸乳杆菌 4 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 12 份、 维生素 E 6 份、 硫酸镁 0.2 份、 硫酸锌 0.3 份。 3. 根据权利要求 1 所述的液体制剂的制备方法， 其。
5、特征在于， 所述的枯草芽孢杆 菌的液体发酵培养基配方为 ： 蔗糖 4， 豆饼粉 8， 玉米浆 1， MgSO47H2O 0.03， CaCl20.5， KH2PO40.2。 4. 根据权利要求 1 所述的液体制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的啤酒酵母菌的发 酵培养基各原料和重量百分比为 ： 糖蜜 15， 硫酸铵 3， 磷酸二氢钾 0.5。 5. 根据权利要求 1 所述的液体制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的嗜酸乳杆菌的发 酵培养基各原料和重量百分比为 ： 豆粕 3， 葡萄糖 2， 酵母浸膏 2， 磷酸二氢钾 0.5， 七水硫酸镁 0.05。 6. 根据权利要求 1-5 任一所述的液体制。
6、剂的制备方法， 其特征在于， 所述的液体制剂 作为对虾饲料添加剂的应用。 7. 根据权利要求 6 所述的液体制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的液体制剂在对虾 饲料中的添加量为 0.5 -1。 权 利 要 求 书 CN 104397432 A 2 1/5 页 3 一种对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及水产养殖领域， 具体地说， 是一种对虾促生长制剂的液体制剂的制备 方法。 背景技术 0002 对虾饲料作为南美白对虾养殖中最重要的生产资料之一 ( 占到了总成本的 50-70 份 )， 其品质性能对对虾机体的免疫抗病力、 生长速度、 饲料系数、 养殖成活率、 养殖。
7、效益等 都具有重要的影响。由于药物残留和细菌性耐药性等问题， 国际上限制使用抗生素的呼声 越来越高， 如果在养殖期间， 在对虾饲料中通过添加生长促进剂来提高其对饲料的利用程 度， 满足其对营养物质的需求， 就可以提高对虾的生长速度、 机体抗病力， 从而提高对虾的 成活率和活力， 就可以减少甚至是杜绝育苗过程中使用抗生素。 发明内容 0003 本发明的目的是针对现有技术中的不足， 提供一种对虾促生长制剂的液体制剂的 制备方法。 0004 为实现上述目的， 本发明采取的技术方案是 ： 一种对虾促生长制剂的液体制剂 的制备方法， 包括以下步骤 ： 将枯草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行液。
8、体 发酵培养获得相应的液体发酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤酒酵母菌的活菌数为 108-109cfu/g， 将所述的液体发酵菌液与维生素 C-2- 聚磷酸酯、 维生素 E、 硫酸镁和硫酸锌混合， 制得所述的液体制剂， 所述的液体制剂中 各原料重量份 ： 枯草芽孢杆菌 22-25 份、 啤酒酵母菌 18-20 份、 嗜酸乳杆菌 3-5 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 10-12 份、 维生素 E 5-8 份、 硫酸镁 0.1-0.3 份、 硫酸锌 0.2-0.4 份。 0005 所述的液体制剂中各原料重量份 ： 枯草芽孢杆菌 25 份、 啤。
9、酒酵母菌 19 份、 嗜酸乳 杆菌 4 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 12 份、 维生素 E 6 份、 硫酸镁 0.2 份、 硫酸锌 0.3 份。 0006 所述的枯草芽孢杆菌的液体发酵培养基配方为 ： 蔗糖 4， 豆饼粉 8， 玉米浆 1， MgSO47H2O 0.03， CaCl20.5， KH2PO40.2。 0007 所述的啤酒酵母菌的发酵培养基各原料和重量百分比为 ： 糖蜜 15， 硫酸铵 3， 磷酸二氢钾 0.5。 0008 所述的嗜酸乳杆菌的发酵培养基各原料和重量百分比为 ： 豆粕 3， 葡萄糖 2， 酵母浸膏 2， 磷酸二氢钾 0.5， 七水硫酸镁 0.05。 0009 所。
10、述的液体制剂作为对虾饲料添加剂的应用。 0010 所述的液体制剂在对虾饲料中的添加量为 0.5 -1。 0011 本发明优点在于 ： 0012 本发明制备的对虾促生长制剂液体制剂能够显著增加对虾的肝胰脏和肠道中的 蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶的活性， 明显地降低饵料系数， 促进对虾生长， 从而缩短养殖周期， 减少养殖成本和风险， 同时还能够显著提高对虾非特异性免疫功能， 从而显著的提高其对 说 明 书 CN 104397432 A 3 2/5 页 4 疾病的防御能力。 具体实施方式 0013 下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。 0014 本发明提供一种对虾促生长制剂的液体制剂的制。
11、备方法， 包括以下步骤 ： 将枯 草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行液体发酵培养获得相应的液体发酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤酒酵母菌的活菌数为 108-109cfu/g， 将所述的液体发酵菌液与维生素 C-2- 聚磷酸酯、 维生素 E、 硫酸镁和硫酸锌 混合， 制得所述的液体制剂， 所述的液体制剂中各原料重量份 ： 枯草芽孢杆菌 22-25 份、 啤 酒酵母菌 18-20 份、 嗜酸乳杆菌 3-5 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 10-12 份、 维生素 E 5-8 份、 硫酸镁 0.1-0.3 份、 硫酸锌 0.2-0.。
12、4 份。 0015 实施例 1 枯草芽孢杆菌液体发酵 0016 将枯草芽抱杆菌 (Bacillus subtilis) 菌株按斜面、 液体种子、 液体发酵的顺 序培养， 斜面培养基为常规营养琼脂培养基， 液体种子培养基为常规营养肉汤液体培养 基 ； 液体发酵培养基配方 (W/V) ： 蔗糖 4， 豆饼粉 8， 玉米浆 1， MgSO47H2O 0.03， CaCl20.5， KH2PO40.2， 发酵温度 30， 通风培养 24-48h。得到高浓度的发酵菌液， 其中 活菌数 109-1011cfu/g。 0017 实施例 2 啤酒酵母菌液体发酵 0018 将啤酒酵母菌(Saccharomyce。
13、s cerevisiae)接种到啤酒酵母培养基中培养， 其中 啤酒酵母培养基中各原料和重量百分比为 ： 糖蜜15， 硫酸铵3， 磷酸二氢钾0.5， pH值 5.5， 培养温度 30。得到高浓度的发酵菌液， 其中活菌数 108-109cfu/g。 0019 实施例 3 嗜酸乳杆菌液体发酵 0020 将嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus) 接种到嗜酸乳杆菌培养基中培养， 其中嗜酸乳杆菌培养基中各原料和重量百分比为 ： 豆粕 3， 葡萄糖 2， 酵母浸膏 2， 磷 酸二氢钾 0.5， 七水硫酸镁 0.05， pH 值 5.5， 培养温度 35。得到高浓度的发酵菌液， 其。
14、中活菌数 109-1011cfu/g。 0021 实施例 4 对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法 0022 将枯草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行发酵培养获得相应的液体发 酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤酒酵母菌的活 菌数为 108-109cfu/g， 将枯草芽孢杆菌 22 份、 啤酒酵母菌 18 份、 嗜酸乳杆菌 3 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 10 份、 维生素 E 5 份、 硫酸镁 0.1 份、 硫酸锌 0.2 份混合， 制得所述的液体制 剂。 0023 实施例 5 对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法 0024 将枯。
15、草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行发酵培养获得相应的液体发 酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤酒酵母菌的活 菌数为 108-109cfu/g， 将枯草芽孢杆菌 25 份、 啤酒酵母菌 19 份、 嗜酸乳杆菌 4 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 12 份、 维生素 E 6 份、 硫酸镁 0.2 份、 硫酸锌 0.3 份混合， 制得所述的液体制 剂。 0025 实施例 6 对虾促生长制剂的液体制剂的制备方法 说 明 书 CN 104397432 A 4 3/5 页 5 0026 将枯草芽孢杆菌、 啤酒酵母菌、 嗜酸乳杆菌分别进行发酵。
16、培养获得相应的液体发 酵菌液， 其中枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌的活菌数分别为 109-1010cfu/g， 啤酒酵母菌的活 菌数为 108-109cfu/g， 将枯草芽孢杆菌 25 份、 啤酒酵母菌 20 份、 嗜酸乳杆菌 5 份、 维生素 C-2- 聚磷酸酯 12 份、 维生素 E 8 份、 硫酸镁 0.3 份、 硫酸锌 0.4 份混合， 制得所述的液体制 剂。 0027 实施例 7 本发明对对虾生长的促进作用及生物安全性评价 0028 取南美白对虾一批， 平均体长8.1cm， 平均体重7.3g。 暂养3天后， 分为对照组(C) 和实验组 (E)， 每组各 150 尾对虾。实验组对虾投喂添加有。
17、 1本发明对虾促生长制剂液体 制剂的商品对虾饲料 (“恒兴牌” 南美白对虾饲料 2 号料 )， 对照组则只投喂上述商品对虾 饲料。对照组和实验组每天投喂 3 次。记录各组的饲料用量。养殖水温 30， 每天换水二 次， 每次换水 50。平均每 15 天取 20 尾虾统计体重， 然后取出肝脏称重， 计算肝体指数。 养殖周期 45 天， 共统计 3 次， 45 天后统计饵料系数。结果见表 1。 0029 表 1 本发明对南美白对虾的促生长效果 0030 0031 由表 1 可见 ： 随着养殖周期增长， 投喂添加了本发明的饲料的实验组与对照组相 比， 体重增加逐渐明显， 肝体指数降低逐渐明显。至实验结。
18、束时， 实验组对虾的平均体重与 对照组相比差异明显 ； 实验组对虾的肝体指数与对照组相比差异明显 ； 计算后饵料系数降 低了 15.4。由此说明， 在对虾的养殖中使用本发明的对虾促生长制剂液体制剂可以明显 地降低饵料系数， 促进对虾生长， 从而缩短养殖周期， 减少养殖成本和风险。本发明制备的 对虾促生长制剂液体制剂的使用也明显改善了对虾的商品品质， 增加了出肉率。 此外， 这个 结果结合溶血实验也表明 ： 本发明制备的对虾促生长制剂液体制剂具有生物安全性。 0032 从不同种类消化酶活性的统计结果看， 淀粉酶活性的影响程度最大， 其次是蛋白 酶， 脂肪酶活性的影响程度最小 ； 从不同器官中的消。
19、化酶活性的统计结果看， 肠道消化酶活 性的影响程度最大， 其次是肝胰脏的消化酶， 胃的消化酶活性的影响程度最小。 试验组肝胰 脏和肠道中蛋白酶和淀粉酶活性都高于对照组 (P0.05) ； 试验组 3 个时间段的采样比较中， 有比较大的差异， 差异极显著 (P0.05) ； 试验组 3 个时间段的采样比较中， 有比较大的差异， 差异极显著 (P0.01)。由以 上数据的分析可得出， 在南美白对虾饲料中添加本发明对虾促生长制剂液体制剂， 能使其 说 明 书 CN 104397432 A 6 5/5 页 7 血清中酚氧化酶的活力得到显著提高。 0049 2.3 本发明对虾促生长制剂液体制剂对南美白对。
20、虾血清中溶菌酶 (LSZ) 活力的影 响 ( 见表 4) 0050 表 4 南美白对虾血清中溶菌酶 (LSZ) 活力 (U/mg*prot) 0051 项目第 0d第 15d第 30d 对照组7.550.0011.223.139.462.21 试验组7.550.0027.131.12*20.51.25* 0052 从表 4 可分析得出， 饲喂含本发明的对虾促生长制剂液体制剂饲料的试验组的南 美白对虾血清中 LSZ 的活力与对照组在第 15d 的采样结果中有非常显著的差异 (P0.01) ； 第 30d 的采样结果中也有明显的差异 (P0.05)。这表明， 添加本发明制备的对虾促生长制 剂液体制。
21、剂能够明显激活对虾血清中溶菌酶的活力。 0053 3 结论 0054 以上实验结果显示， 本发明制备的对虾促生长制剂液体制剂对于对虾肝脏中 SOD 超氧化物歧化酶的活力有明显的作用效果， 可以有效地提高对虾肝脏中的 SOD 的活力 ； 对 于血清中 PO 和 LSZ 的活力的影响也非常显著， 显示本发明以添加剂应用于对虾饲料中， 不 仅能够促进对虾的生长， 还能够显著提高对虾非特异性免疫功能， 从而显著的提高其对疾 病的防御能力。 0055 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员， 在不脱离本发明方法的前提下， 还可以做出若干改进和补充， 这些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。 说 明 书 CN 104397432 A 7 。