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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410705301.4 (22)申请日 2014.11.27 A61K 36/85(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (71)申请人 普正药业股份有限公司 地址 343100 江西省吉安市井冈山经济技术 开发区普正药业股份有限公司 (72)发明人 肖军平 吴永忠 杨伟庆 陈金德 李小锋 (74)专利代理机构 北京精金石专利代理事务所 ( 普通合伙 ) 11470 代理人 刘晔 (54) 发明名称 一种具有抗炎作用的裸花紫珠组分中药组合 物 (57) 摘要 本发明属于中药领域， 具体涉及一种具有抗 炎作用的中药。
2、组合物， 该组合物的成分均来自中 药裸花紫珠， 其具体由重量百分比为2080的 裸花紫珠总黄酮和 20 80的裸花紫珠总苯丙 素苷组成。所述的中药组合物的重量百分比优选 为3050的裸花紫珠总黄酮和5070的裸 花紫珠总苯丙素苷。 该组合物具有疗效明确， 协同 作用明显等优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 104435386 A (43)申请公布日 2015.03.25 CN 104435386 A 1/1 页 2 1.一种具有抗炎作用的中药组合物， 其特征在于， 该组合物的成分均来自。
3、中药裸花紫 珠， 该组合物的成分均来自中药裸花紫珠， 其具体由重量百分比为 20 80的裸花紫珠总 黄酮和 20 80的裸花紫珠总苯丙素苷组成。 2.根据权利要求 1 所述的中药组合物， 其特征在于， 所述的中药组合物的重量百分比 优选为 30 50的裸花紫珠总黄酮和 50 70的裸花紫珠总苯丙素苷。 3.一种包含权利要求 1 所述中药组合物的药物制剂， 其特征在于， 所述中药组合物可 以根据需要和药学上可接受的辅料制备成合适的药物制剂。 4.根据权利要求 3 所述的药物制剂， 其特征在于， 所述药物制剂优选为口服制剂。 5.根据权利要求 4 所述的药物制剂， 其特征在于， 所述口服制剂所选用。
4、的辅料选自淀 粉、 预胶化淀粉、 淀粉浆、 - 环糊精、 卡波姆、 微晶纤维素、 羟丙基甲基纤维素、 低取代羟丙 基纤维素、 羧甲基纤维素钙、 聚乙二醇 (PEG)、 羧甲基纤维素钠、 甲基纤维素、 乙基纤维素、 甘 露醇、 十二烷基硫酸钠、 交联羧甲基纤维素钠、 乳糖、 聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、 交联聚乙烯吡 咯烷酮、 硬脂酸镁、 滑石粉、 微粉硅胶、 阿斯巴甜、 甜橙香精、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 肠溶包衣粉 中的一种或几种。 权 利 要 求 书 CN 104435386 A 2 1/8 页 3 一种具有抗炎作用的裸花紫珠组分中药组合物 技术领域 0001 本发明属于中药领域， 具体涉及。
5、一种裸花紫珠组分的中药组合物。 背景技术 0002 炎症是宿主生理防御的一个重要组成部分。为对各种刺激 ( 例如感染或组织损 伤 ) 应答， 免疫系统会向受影响的区域释放白细胞。然后这些白细胞通过各种机制攻击侵 入的病原体， 所述机制包括吞噬、 释放毒性中间体(例如过氧基团)和特异性细胞介导的杀 灭。 0003 炎症是对损伤、 毒素、 瘤形成或微生物侵入的局部化响应， 其特征在于包括发红、 发热、 肿胀和疼痛在内的症状。炎症包括细胞、 滲出和分子组分。细胞组分涉及从血管运动 到发炎的组织中的白细胞。滲出组分涉及包含蛋白质例如纤维蛋白、 细胞因子和抗体的流 体的移动。 分子组分包括多个系列的分子。
6、， 包括细胞因子、 前列腺素、 一氧化氮、 免疫球蛋白 和细胞粘附分子。分子水平的炎症症状包括 ： 1) 细胞组分和代谢物的变化， 包括离子通道、 细胞因子、 趋化因子、 受体、 细胞粘附分子、 固有的结合分子、 转录因子和包括氧化氮在内 的信号转导分子 ； 和2)循环中炎症性标记物的水平升高， 包括 ： 白细胞、 红细胞沉降率、 C反 应蛋白、 类风湿因子、 免疫球蛋白 E 和包括肿瘤坏死因子 和白细胞介素 6 在内的细胞因 子。 0004 过度的炎症或长的炎性过程可以引起相关器官的炎症性紊乱和功能异常。 炎症性 紊乱包括多种疾病 ： 糖尿病、 肥胖症、 动脉粥样硬化、 病毒病、 白内障、 。
7、再灌注损伤、 癌症和肉 状瘤病 ； 感染后的脑膜炎和风湿热 ； 风湿病， 包括系统性红斑狼疮、 骨关节炎、 类风湿性关 节炎 ； 皮肤炎症性病症， 包括各种形式的痤疮和红斑痤疮 ； 和肠炎症性病症， 包括肠易激综 合征和克罗恩氏病。在这些各种疾病过程中的炎症性响应的向心性使得其调节是预防、 控 制或医治人类疾病中的主要因素。 0005 数十年来， 治疗炎症疾病已经是全球制药工业的一个主要目标， 并且已经开发出 了众多类型的有用的治疗。例子包括皮质类固醇 ( 范围包括天然、 半合成和合成的药物， 设 计用于模拟皮质醇的作用， 包括泼尼松龙、 甲泼尼龙、 地塞米松、 倍他米松、 氟替卡松等 )、 。
8、环 氧合酶抑制剂 ( 非选择性的或 COX-1 选择性的， 例如吲哚美辛、 柳氮磺吡啶和阿司匹林， 近 来则是COX-2选择性的， 例如塞来考昔)、 白三烯阻断剂(例如孟鲁司特)和抗-TNFs(例如 改性的单克隆中和抗体， 包括英夫利昔单抗 (RemicadeTM) 和阿达木单抗 (HumiraTM)， TNF 受 体融合蛋白例如依那西普 (EnbrelTM)， 以及小分子 TNF- 合成抑制剂例如沙利度胺 )。 0006 但是， 不可避免的是， 这些药物平衡了对病理学炎症的有益效果与对宿主防御的 不希望有的免疫抑制作用之间的关系。 一般而言， 药物的抗炎效果越强， 非故意的免疫抑制 副作用 。
9、就越大。 例如， 皮质类固醇一般显示比其他药物例如环氧合酶抑制剂更大的抗炎效 力， 是很多严重的炎性疾病 ( 例如， 哮喘、 牛皮癣、 湿疹、 肠易激综合征和其他很多疾病 ) 的 第一线治疗药。必须慎重衡量这种优良的抗炎效力与较大的副作用负担之间的利害关系， 必须小心监测治疗的持续时间， 以对患者实现净效益。 鉴于西药抗炎会带来的明显副作用， 说 明 书 CN 104435386 A 3 2/8 页 4 提供副作用小的抗炎药物为大众所需。 0007 裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫 珠属植物， 主产于我国海南，。
10、 是一种海南地道药材， 我国广东、 广西也有分布。 目前有研究表 明裸花紫珠药材的主要成分为黄酮类、 鞣质、 萜类、 挥发油类等， 其中萜类和黄酮能增加血 小板的数量， 缩短出血和凝血时间， 对纤溶系统具有显著的抑制作用， 收缩血管、 止血效果 显著， 对炎症早期的渗出、 肿胀有明显的抑制作用， 加快创面渗出的吸收， 促进伤口的愈合， 对金黄色葡萄球菌、 伤寒沙门氏菌、 肺炎双球菌、 绿脓杆菌等均有较强的抑菌作用 ； 而鞣质 能使创面的微血管收缩， 具有局部止血作用。 临床上常用于治疗细菌感染引起的炎症， 急性 传染性肝炎， 消化道出血等疾病。 0008 国内外对紫珠属植物包括裸花紫珠化学成分。
11、研究的报道较少， 其化学成分主要有 黄酮类、 萜类、 鞣质和挥发油类等。 目前技术是将裸花紫珠叶采用水煎煮提取的方法得到浸 膏后加入辅料制成片剂或者胶囊等口服制剂， 用于治疗细菌感染引起的炎症， 急性传染性 肝炎， 呼吸道及消化道等腔道出血等症， 疗效确切。 但存在服用剂量大， 有效成分不明确、 质 量标准可控性差等缺点， 难于满足药物 “安全、 有效、 可控、 稳定” 的要求。目前， 尽管有多种 剂型方便了患者的使用， 但仅是简单的剂型转换， 在技术上未有实质上的创新之处， 尚不能 用科学的方法揭示其药效物质基础与作用机理， 难于被国际市场所接受。 发明内容 0009 为解决该成药存在的上述。
12、缺陷， 本发明对裸花紫珠叶中的有效部位进行了提取。 并分别对不同组分的化学成分进行了分析， 并进行了活性试验。根据各个组分活性试验的 结果， 对裸花紫珠提取物中的各个组分含量进行了优化， 从而得到一种疗效明确， 协同作用 明显的源自裸花紫珠提取物的中药组合物。 0010 本发明的一个目的是提供一种具有抗炎作用的中药组合物， 该组合物的成分均来 自中药裸花紫珠， 其具体由重量百分比为 20 80的裸花紫珠总黄酮和 20 80的裸花 紫珠总苯丙素苷组成。 0011 在本发明进一步地实施方案中， 所述的中药组合物的重量百分比优选为 30 50的裸花紫珠总黄酮和 50 70的裸花紫珠总苯丙素苷。 00。
13、12 本发明的中药有效部位提取物可用现有技术获得， 也可本发明列出的方法进行制 备。 0013 裸花紫珠总黄酮的制备 ： 取 5kg 裸花紫珠药材， 加稀酮 100kg， 浸泡 40 分钟， 加热 煮沸 60 分钟， 取出煎液， 药渣再煎 2 次， 每次加水 50kg， 煮沸 60 分钟， 合并三次煎液， 过滤， 滤液通过比表面积为 350 450m2/g、 骨架密度为 1 1.2g/ml， 平均孔径为 35 65nm， 空 隙率为6068的AB-8型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱， 树脂柱的径高比为110， 弃去流 出液， 用 6 倍柱体积的水洗涤柱体， 弃去洗涤液， 用 90乙醇洗脱至洗脱液中无。
14、黄酮检出。 收集洗脱液， 回收乙醇后减压浓缩至相对密度为 1.08， 冷冻干燥， 检验分装即得裸花紫珠总 黄酮。 0014 裸花紫珠总苯丙素苷的制备 ： 裸花紫珠药材切段， 取 5kg， 投入微波提取罐， 加 40kg 水微波提取 30 分钟， 提取两次， 合并提取液滤过用截留分子量 2000 的中空纤维素膜 超滤， 收集透过液加入截留分子量为 300 的中空纤维素膜系统浓缩。浓缩液加入活性炭柱 说 明 书 CN 104435386 A 4 3/8 页 5 ( 装 300g 颗粒活性炭 )， 吸附结束后， 取 4BV50的乙醇溶液洗脱杂质， 再用 5BV90乙醇洗 脱目标成分， 收集目标成分，。
15、 减压浓缩， 真空干燥得总苯丙素苷。 0015 本发明的另一个目的是提供一种含有所述中药组合物的药物制剂， 本发明中药组 合物可以根据需要和药学上可接受的辅料制备成合适的药物制剂用于炎症的治疗， 如口服 制剂、 注射制剂等。 0016 所述药物制剂优选为口服制剂， 所述口服制剂选自片剂、 胶囊、 缓释片剂、 丸剂、 颗 粒剂、 分散片、 散剂。所述口服制剂所选用的辅料选自淀粉、 预胶化淀粉、 淀粉浆、 - 环糊 精、 卡波姆、 微晶纤维素、 羟丙基甲基纤维素、 低取代羟丙基纤维素、 羧甲基纤维素钙、 聚乙 二醇 (PEG)、 羧甲基纤维素钠、 甲基纤维素、 乙基纤维素、 甘露醇、 十二烷基硫酸。
16、钠、 交联羧甲 基纤维素钠、 乳糖、 聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、 交联聚乙烯吡咯烷酮、 硬脂酸镁、 滑石粉、 微粉硅 胶、 阿斯巴甜、 甜橙香精、 碳酸氢钠、 碳酸钠、 肠溶包衣粉中的一种或几种。上述制剂的所用 辅料及制备方法均可采用其常规的辅料和制备方法制得。 0017 本发明还提供所述中药有效部位组合物的用途， 即该中药有效部位组合物在制备 治疗消炎止血药物中的应用。所述的医药用途中， 根据动物病情以及用药部位可以将上述 药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药， 这在本领域技术人员掌握的技术范围之 内。 例如， 将对小鼠痛经的治疗方案应用于人身上， 所有药物对人的有效剂量可以通过该药 。
17、物对小鼠的有效剂量进行换算， 这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。 0018 一般来讲， 目前现有技术中均采用裸花紫珠单一有效部位作为药物应用于临床 ； 而本发明发现采用单一有效部位在活性试验及临床的疗效上有时不如药材的水提物 ； 这是 因为单一有效部位虽然通过现代分离手段富集了中药中结构类似的相关化合物， 但是忽略 了药材中不 同类型物质可能发生的协同作用， 本发明通过大量的活性试验研究， 对裸花紫 珠不同有效部位的重量比进行适当调整， 从而使最后获得的药物组合物在抗炎方面达到最 佳的协同作用， 从而获得更高的疗效。 采用上述技术方案后， 本发明的中药组合物具有有效 物质明确、 疗效。
18、确切， 副作用小、 服用方便等优点。 具体实施方式 0019 下面将进一步通过举例的详细说明本发明。需要指出的是， 以下说明仅仅是对本 发明要求保护的技术方案的举例说明， 并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范 围以所附权利要求书记载的内容为准。 0020 实施例 1 裸花紫珠各有效部位的制备 0021 裸花紫珠总黄酮的制备 ： 取 5kg 裸花紫珠药材， 加稀酮 100kg， 浸泡 40 分钟， 加热 煮沸 60 分钟， 取出煎液， 药渣再煎 2 次， 每次加水 50kg， 煮沸 60 分钟， 合并三次煎液， 过滤， 滤液通过比表面积为 350 450m2/g、 骨架密度为 1 1.2。
19、g/ml， 平均孔径为 35 65nm， 空 隙率为6068的AB-8型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱， 树脂柱的径高比为110， 弃去流 出液， 用 6 倍柱体积的水洗涤柱体， 弃去洗涤液， 用 90乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。 收集洗脱液， 回收乙醇后减压浓缩至相对密度为 1.08， 冷冻干燥， 检验分装即得裸花紫珠总 黄酮 159g。 0022 裸花紫珠总苯丙素苷的制备 ： 裸花紫珠药材切段， 取 5kg， 投入微波提取罐， 加 40kg 水微波提取 30 分钟， 提取两次， 合并提取液滤过用截留分子量 2000 的中空纤维素膜 说 明 书 CN 104435386 A 5 4/8 页 6 。
20、超滤， 收集透过液加入截留分子量为 300 的中空纤维素膜系统浓缩。浓缩液加入活性炭柱 ( 装 300g 颗粒活性炭 )， 吸附结束后， 取 4BV50的乙醇溶液洗脱杂质， 再用 5BV90乙醇洗 脱目标成分， 收集目标成分， 减压浓缩， 真空干燥得总苯丙素苷 101g。 0023 实施例 2-7 中药组合物的制备 0024 将实施例 1 制备的各有效部位按下表比例混匀即可。 0025 ( ) 实施例 2 实施例 3 实施例 4 实施例 5 实施例 6 实施例 7 裸花紫珠总黄酮 10 20 30 40 80 90 裸花紫珠总苯丙素苷 90 80 70 60 20 10 0026 实施例 6 。
21、药效学实验 0027 ( 一 ) 裸花紫珠组合物对 LPS 诱导的系统性炎症应答中产生的细胞因子的调控 0028 使用不到致死量的 LPS- 诱导的内毒素血症分析裸花紫珠组分组合物的体内全面 化的抗炎 性质。在该分析中， 使用细菌性内毒素 (LPS) 给予小鼠非特异性促炎症攻击， 通 过测定中枢促炎症细胞因子 TNF-、 IL-1 和 IL-2 的血清水平来确定药物对系统性炎症应 答的影响程度， TNF-、 IL-1 和 IL-2 正常情况下在血中是含量较低， 但是在对各种各样的 炎症刺激子应答时迅速增多。尽管它本身不是任何人炎性疾病的特别贴切的模型， 但我们 仍然选择了该模型， 因为上述细胞。
22、因子已知在很多炎症疾病中是非常重要的。因此， 抑制 TNF-、 IL-1 和 IL-2 产生的药物已经在临床中用于治疗各种各样的这些疾病。因此， 在该 模型中证明细胞因子抑制活性在临床中在各种各样的疾病中用于抗炎效果是高度可预示 的。 0029 对小鼠(成年雌性CD-1小鼠， 每组6只)进行灌胃给药， 给药七天。 在LPS攻击前 30 分钟最后一次给药， 然后用腹膜内注射 750g 的细菌 LPS 来攻击小鼠的免疫反应， 2 小 时后处死。通过心脏穿刺从末端出血中制得血清， 通过 ELISA(R&D Systems) 确定 TNF-、 IL-1 和 IL-2 的浓度。在各实验中， 6 只小鼠的。
23、一组不接受 LPS， 作为阴性对照， 另一组仅接 受 LPS( 模型组 )， 各给药组的抑制率按如下公式计算 ： 0030 抑制率 ( 模型组细胞因子浓度 - 给药组细胞因子浓度 )/( 模型组细胞因子浓 度 - 对照组细胞因子浓度 )100 0031 具体结果如下 ： 0032 说 明 书 CN 104435386 A 6 5/8 页 7 0033 0034 所述的裸花紫珠提取物是通过专利文献 CN102205000B 所公开的方法获得的， 具 体参见其说明书中的实施例 1。 0035 协同作用计算方法 ： 采用金正均 q 值法进行判定， q 值由以下的公式求得 ： q PA+B/(PA+P。
24、B-PAPB)。式中 PA、 PB和 P A+B分别为 A 药组、 B 药组和两药联用组治疗率。q 1 说明两药合用后产生拮抗作用 ； q 1， 说明两药合用后产生协同作用， q 1 说明两药合用 后产生相加作用。具体结果如下 ： 0036 q 值 TNF- IL-1 IL-2 实施例 2 1.01 1.05 1.12 实施例 3 1.34 1.33 1.54 实施例 4 1.46 1.52 1.87 说 明 书 CN 104435386 A 7 6/8 页 8 实施例 5 1.49 1.51 1.93 实施例 6 1.37 1.32 1.32 实施例 7 1.10 1.08 1.06 003。
25、7 ( 二 ) 药物对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的影响 0038 C57BL/6J 小鼠 ( 雄性， 18-22g) 经乙醚麻醉后， 经鼻给予 30l 金葡菌悬液 ( 金葡 菌 8325-4)， 小鼠平躺直至苏醒， 建立小鼠金葡菌肺炎的模型。致死试验给予 4108CFUs 的 金葡菌， 分别记录小鼠感染金葡菌 24h、 48h 和 72h 后的死亡率 0039 0040 说 明 书 CN 104435386 A 8 7/8 页 9 0041 ( 三 ) 药物对体外炎症细胞因子的抑制活性研究 0042 小鼠巨噬细胞 RAW264.7 培养于含 10热灭活 (56， 30min) 胎牛血清 (FBS)。
26、、 100U/mL 青霉素钠、 100g/mL 链霉素的 RPMI1640 培养液中， 37 (CO2) 5的恒温培养 箱中孵育生长。用 RPMI1640 培养液将小鼠巨噬细胞 RAW264.7 稀释至 5105cells/mL， 接 种于 96 孔细胞培养板中， 每孔加入 200L 细胞悬浮液。CO2培养箱中培养 1h 后， 每孔加入 LPS(1g/mL) 和不同浓度的测试药物 0.4L， 同时设 LPS 组 ( 不加入被测试样品 ) 和空白 对照组 (DMSO)， 每个样品设 3 个平行孔。在 37 CO2恒温培养箱中培养 6h 后吸取培养液 上清， 按照 ELISA 试剂盒 说明书方法进行标准曲线绘制和样品测定。具体结果如下 ： 0043 抑制率 ( 模型组细胞因子浓度 - 给药组细胞因子浓度 )/( 模型组细胞因子浓 度 - 对照组细胞因子浓度 )100 0044 说 明 书 CN 104435386 A 9 8/8 页 10 0045 0046 本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案， 其中一个或更多个技 术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合， 这些经组合而得到 的技术方案也在本申请保护范围内， 就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开 内容中具体记载一样。 说 明 书 CN 104435386 A 10 。