一种含有发酵虫草和灵芝的保健食品及其制备方法 【技术领域】
本发明属于食品保健技术领域，涉及一种固态粉末保健食品，更具体的说一种增加机体免疫力的含有发酵虫草、灵芝的保健食品及其制备方法。
背景技术
灵芝属于担子菌纲多孔菌科灵芝属(Ganodermataceae)真菌赤芝Ganodermalucidum(W.Curt.Fr.)Karst的干燥子实体，在我国古称瑞草，也叫长生草、仙草、灵草等，是一种珍贵药、食两用真菌，已有二千多年的药用历史。现代药理分析，灵芝含有灵芝多糖、灵芝酸、腺苷、有机锗、生物碱、甾类、三萜类、多种氨基酸、甘露醇等多种生物活性物质，具有增强人体免疫能力及调节内分泌与镇静作用，此外灵芝还具备加强人体微循环，促进新陈代谢，防止衰老，延年益寿的保健作用。目前主要从灵芝子实体中提取，但灵芝野生资源稀缺，人工栽培周期长(2～3个月以上)，生产力低下，又受季节限制。
冬虫夏草据《本草从新》记载：冬虫夏草性味甘、平，归肺、肾经、补精髓，兼止血化痰唠咳。另据《本草纲目拾遗》记载：冬虫夏草治诸虚百损，以其得阴阳气全也。冬虫属阴，夏草属阳，虫草一物独得阴阳之妙用，入肺补肺阴，入肾补肾阳，其性平和，少服不显，多服效宏。野生冬虫夏草虽然滋补功效显著但生长受严格的寄生性和特殊生长地理环境限制，加之国家为保护高原植被已严禁私自采挖野生冬虫夏草，冬虫夏草药材资源紧缺，因此天然冬虫夏草非常稀少而且价格昂贵，大多数人无法获得，目前对寻找冬虫夏草的天然替代物及人工培养冬虫夏草菌丝的研究日益受到人们重视。蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgces hepialicjen ACCC3.0355)是从冬虫夏草中分离的一种丝状真菌，其发酵液富含虫草素、虫草多糖、甘露醇、腺苷等生物活性物质，现代医学研究证明其具有明显的免疫调节功能具有抗癌症、抗炎和抗菌作用，具有提高肾上腺胆固醇含量抗疲劳作用，并且能滋肾、祛痰平喘、抗心律失常作用。目前，以虫草菌粉为主要原料，已开发的产品有药品、保健品与营养食品等。如：宁心宝胶囊、虫草精胶囊、虫草王胶囊、心肝宝胶囊、虫草丸、虫草花粉胶囊、虫草蜂胶胶囊、虫草鸡精、虫草洋参口服液、虫草雪莲口服液、灭澳灵胶囊、肾康胶囊、虫草补酒、冬虫夏草健康饮料、虫草茶、虫草冲剂等。
【发明内容】
本发明一个目的是公开了一种增加机体免疫力的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，为制备多种制剂方式提供了可能。
本发明另一个目的是公开了含有发酵虫草、灵芝的保健食品的制备方法
本发明再一个目的是公开了蝙蝠蛾拟青霉发酵生产工艺，包括培养基和培养的条件。
本发明还一个目的是公开了赤芝发酵生产工艺，包括培养基和培养的条件。
本发明还一个目的是公开了蝙蝠蛾拟青霉发酵和赤芝发酵后发酵液和菌丝的干燥制粒方法。
本发明通过利用蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgces hepialicjen ACCC3.0355)和赤芝(Ganoderma lucidum As.5.616)分别液体深层发酵获得大量菌丝体和发酵液，再利用喷雾旋转流化干燥造粒工艺制成粉末冲剂，通过工业化生产，制造出有效成分含量稳定，具有提高人们自身免疫功能、提高机体免疫力，抑制肿瘤，而且对一些毒副作用较大的抗肿瘤化疗药物有增效减毒作用、滋肾补气作用的保健品，并且保护了野生冬虫夏草资源。实现上述目的，本发明公开了如下的技术方案：
一种含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其特征在于虫草发酵粉与灵芝发酵粉的重量份数比为1∶1-4∶1；所述的虫草、灵芝发酵粉为：蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgceshepialicjen ACCC3.0355)、赤芝(Ganoderma lucidum As.5.616)分别经液体深层发酵获得菌丝体和发酵液，再经喷雾旋转流化干燥造粒制成；其中所述的保健食品中虫草素含量≥1.5mg/g，虫草多糖≥2.0mg/g，腺苷≥4.0mg/g，灵芝多糖≥1.5mg/g。
本发明所述的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其中蝙蝠蛾拟青霉培养基的培养条件为：将蝙蝠蛾拟青霉用斜面培养基进行培养，把新鲜斜面菌种接种到摇瓶内，用摇瓶培养基进行培养，25-30℃培养3-4日，再把摇瓶培养的菌种接种到200-300L种子罐内，用种子罐培养基25-30℃培养3日；把种子罐培养的菌种接种到4吨发酵罐内，接种量5-15％，温度25-30℃，搅拌速度180-240转/min，通风0.6-1.0％V/V，罐压0.02-0.08Mpa，pH 5.0-6.0，每隔4小时取样检查虫草菌生长情况，发酵3-4天。培养4天后即得到虫草的菌丝体和发酵液。
本发明所述的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其中赤芝培养基的培养条件为：将保存的斜面赤芝菌种接种到新鲜的斜面培养基上，于28℃培养4d，进行菌种活化，将活化后的菌种移接到盛有80mL培养液的250mL三角瓶中，在160r/min摇床于28℃培养3d，为一级摇瓶种子；将一级摇瓶种子移接到盛有200mL培养液的500mL三角瓶中，接种量10％，于28℃，160r/min的摇床培养3d，为二级摇瓶种子；将二级摇瓶种子移接到300立升种子罐中，接于28℃，培养3d；将种子罐中的三级种子接种到4吨发酵罐中，种量10％，28℃培养5-6天，通过搅拌转速和调节通气量使发酵起始溶解氧达到90％，并在发酵过程中保持恒定的转速和通气量。种子罐和发酵罐的控制条件分别为搅拌速度200-260转/min，通风0.8-1.1％V/V，罐压0.04-0.09Mpa，每4小时测定发酵过程中赤芝菌丝生长情况、pH、胞外灵芝多糖。培养5-6天后即得到灵芝发酵液和菌丝体。
本发明所述的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其中所述的蝙蝠蛾拟青霉、赤芝经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液经喷雾旋转流化干燥造粒的方法为：
(1)首先设备预热，空气经三级空气过滤灭菌，去湿后经加热器加热，然后进入设备系统；
(2)高温灭菌，使140℃干燥空气在内系统循环40分钟，实现系统内的灭菌；
(3)灭菌后原料输入，将待处理的菌丝和发酵液输送入系统，原料经雾化器喷入干燥造粒器，同时从底部吹入直径300-400μm淀粉载体，菌丝体和发酵液吸附到300-400μm载体颗粒表面直接干燥成颗粒；
(4)干燥后细粉经二级捕集器收集循环后再进入干燥造粒器附聚造粒；微颗粒经分选系统分选后经设备系统底部出料口连续出料，微颗粒直径在500-800微米之间。
本发明所述含有发酵虫草、灵芝保健食品的方法，其特征在于，按重量份数比为1∶1-4∶1，称取虫草发酵粉和灵芝发酵粉，混合均匀，过80目筛，110-140℃干热灭菌1-2小时，加入药用辅料，常规工艺制成所需制剂。
本发明所述的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其中蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgceshepialicjen ACCC3.0355)经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液的培养基为：
斜面培养基每升水中加入：土豆淀粉17-26g、蔗糖17-26g、K2HPO42.6-3.9g、MgSO47H2O 1.3-2.0g、琼脂15-20g、VB1 500mg pH 5.5-6.0；
种子罐培养基每升水中加入：葡萄糖15-30g、蔗糖10-20g、麸皮20-60g、豆粕5-20g、K2HPO4 1-4g、MgSO4 7H2O 0.5-1.2g、VB1500mg。
发酵罐培养基每升水中加入：玉米粉20-80g、蔗糖10-50g、CaHPO4 2-7g、MgSO47H2O1.5-2.3g、酵母粉4-9g、VB1500mg。
本发明所述的含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其中赤芝(Ganoderma lucidumAs.5.616)经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液的培养基为：
斜面培养基每升水中加入：土豆淀粉15-20g、葡萄糖20-30g、K2HPO43.6-4.9g、MgSO47H2O 1.0-2.0g、琼脂15-20g、VB1，VB2各300mg pH 6.5；
摇瓶培养基每升中加入：葡萄糖20-40g、酵母粉15-20g、K2HPO43.6-4.9g、MgSO41.5-2.5、VB1，VB2各400mg pH 6.5；
种子罐培养基每升水中加入：葡萄糖20-40g、玉米粉10-20g、麸皮20-30g、蛋白胨5-20g、K2HPO4 3-6g、MgSO4 7H2O 2.5-3.5g、VB1，VB2各400mg pH 6.5；
发酵罐培养基每升水中加入：玉米粉20-80g、葡萄糖10-50g、麸皮20-30g酵母粉5-20g、(NH4)2SO4 3.5-5.5g、K2HPO4 2-7g、MgSO47H2O 1.5-2.3g、VB1，VB2各500mg，pH 6.5。
本发明所述地含有发酵虫草、灵芝的保健食品，其特征在于与药用辅料混合制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、糖浆剂。其中药用辅料包括：硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。
下面是本发明的发酵虫草和灵芝保健食品的急性毒性与药理研究：
采用昆明种小鼠(中国军事医学科学院动物中心提供)于天津卫生防病中心进行增强免疫力作用实验检验，150只小鼠(雌、雄各半)随机分成15组，按体重比例采用不同剂量每日给予发酵虫草、灵芝粉溶液一次，连续30天，人体推荐量7g/60Kg.日，小鼠灌服1.17g/Kg，3.50g/Kg即相当于人体推荐量的10倍、30倍，结果显示ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验中光密度值，小鼠半数溶血值测定值，抗体生成细胞数，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验中吞噬百分率等结构均高于对照组且差异显著(P＜0.05)，未见免疫抑制现象，具有增强免疫力功能作用。
发酵虫草、灵芝粉用于人体免疫调节的服用剂量以7g/60Kg每天为最佳，水溶性好且稳定，没有毒副作用，不仅可以提高机体免疫力，抑制肿瘤，而且对一些毒副作用较大的抗肿瘤化疗药物有增效减毒作用。不仅可添加于多种形式的食品载体中赋予食品保健功能，在保健食品领域有广阔的应用前景，而且有可能将其开发为口服液，用于肿瘤和癌症的预防与治疗，产生显著的经济效益及社会效益。
本发明提供的含有发酵虫草、灵芝保健食品所具有的积极效果在于：
(1)本发明采用液体发酵菌丝体培养，可缩短发酵周期，提高产量，并进行工业化大规模生产，并保持了灵芝和虫草的功效，制成各种口服制剂使人们能获得到灵芝和虫草的滋补保健功效。
(2)本发明提供的保健食品，配方合理，工艺科学，具有冬虫夏草，灵芝的甜香味，颜色淡黄色，对增强人体免疫力，对肾虚、气虚、肺虚和咳喘有显著的功效，能强筋骨，祛疫劳，安神，抗肿瘤等的作用。
(3)本发明采用喷雾旋转流化干燥造粒，能够将发酵液和菌丝体完全地保留在产品，无需浓缩提取，工艺简单，并避免了营养物质的浪费，且无废液和废渣产生，同时先进的附聚、整粒、分选工艺使成品不但外形好同时粒度分布均匀，而且强度与溶解性均十分优良。
附图说明：
图1为含有发酵虫草、灵芝保健食品的工艺流程图。
具体实施方式：
为了简单和清楚的目的，下文恰当的省略了公知技术的描述，以免那些不必要的细节影响对本技术方案的描述。以下结合检测实例对本发明做进一步的说明。其中虫草采用蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgces hepialicjen ACCC3.0355)是从新鲜冬虫夏草中分离的一种丝状真菌，灵芝采用赤芝(Ganoderma lucidum As.5.616)经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液。蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgces hepialicjen ACCC3.0355)和赤芝(Ganoderma lucidum As.5.616)购于(国家菌种保藏中心)。
实施例1
(1)虫草发酵粉的制备：
其中蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomgces hepialicjen ACCC3.0355)经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液的培养基为：
斜面培养基每升水中加入：土豆淀粉17-26g、蔗糖17-26g、K2HPO42.6-3.9g、MgSO47H2O 1.3-2.0g、琼脂15-20g、VB1500mg pH 5.5-6.0；
摇瓶培养基每升中加入：蛋白胨15-20g、葡萄糖20-70g、K2HPO4 1.5-2.3g、MgSO4 1.05-2.0g、活蚕蛹5-13g、生长素3.29-4.55ug、pH5.0；
种子罐培养基每升水中加入：葡萄糖15-30g、蔗糖10-20g、麸皮20-60g、豆粕5-20g、K2HPO4 1-4g、MgSO47H2O 0.5-1.2g、VB1500mg，加水至100％。
发酵罐培养基每升水中加入：玉米粉20-80g、蔗糖10-50g、CaHPO4 2-7g、MgSO47H2O1.5-2.3g、酵母粉4-9g、VB1500mg。
培养条件为：将蝙蝠蛾拟青霉用斜面培养基进行培养，把新鲜斜面菌种接种到摇瓶内，用摇瓶培养基进行培养，25-30℃培养3-4日，再把摇瓶培养的菌种接种到200-300L种子罐内，用种子罐培养基25-30℃培养3日；把种子罐培养的菌种接种到发酵罐内，接种量5-15％，温度25-30℃，搅拌速度180-240转/min，通风0.6-01.0％V/V，罐压0.02-0.08Mpa，pH 5.0-6.0，每隔4小时取样检查虫草菌生长情况，发酵3-4天。培养4天后即得到虫草的菌丝体和发酵液。
(2)赤芝(Ganoderma lucidum As.5.616)经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液的培养基为：
斜面培养基每升水中加入：土豆淀粉15-20g、葡萄糖20-30g、K2HPO43.6-4.9g、MgSO47H2O 1.0-2.0g、琼脂15-20g、VB1，VB2各300mg pH 6.5；
摇瓶培养基每升中加入：葡萄糖20-40g、酵母粉15-20g、K2HPO43.6-4.9g、MgSO41.5-2.5、VB1，VB2各400mg pH 6.5；
种子罐培养基每升水中加入：葡萄糖20-40g、玉米粉10-20g、麸皮20-30g、蛋白胨5-20g、K2HPO4 3-6g、MgSO47H2O 2.5-3.5g、VB1，VB2各400mg pH 6.5；
发酵罐培养基每升水中加入：玉米粉20-80g、葡萄糖10-50g、麸皮20-30g酵母粉5-20g、(NH4)2SO43.5-5.5g、K2HPO42-7g、MgSO47H2O 1.5-2.3g、VB1，VB2各500mg，pH 6.5。
赤芝培养基的培养条件为：将保存的斜面赤芝菌种接种到新鲜的斜面培养基上，于28℃培养4d，进行菌种活化，将活化后的菌种移接到盛有80mL培养液的250mL三角瓶中，在160r/min摇床于28℃培养3d，为一级摇瓶种子；将一级摇瓶种子移接到盛有200mL培养液的500mL三角瓶中，接种量10％，于28℃，160r/min的摇床培养3d，为二级摇瓶种子；将二级摇瓶种子移接到700立升种子罐中，接于28℃，培养3d；将种子罐中的三级种子接种到7吨发酵罐中，种量10％，28℃培养5-6天，通过搅拌转速和调节通气量使发酵起始溶解氧达到90％，并在发酵过程中保持恒定的转速和通气量。种子罐和发酵罐的控制条件分别为搅拌速度200-260转/min，通风0.8-1.1％V/V，罐压0.04-0.09Mpa，每4小时测定发酵过程中赤芝菌丝生长情况、pH、胞外灵芝多糖。培养5-6天后即得到灵芝发酵液和菌丝体。
(3)喷雾旋转流化干燥
蝙蝠蛾拟青霉、赤芝经液体深层发酵获得的菌丝体和发酵液经喷雾旋转流化干燥造粒的方法为：
①首先设备预热，空气经三级空气过滤灭菌，去湿后经加热器加热，然后进入设备系统；
②高温灭菌，使140℃干燥空气在内系统循环40分钟，实现系统内的灭菌；
③灭菌后原料输入，将待处理的菌丝和发酵液输送入系统，原料经雾化器喷入干燥造粒器，同时从底部吹入淀粉载体，菌丝体和发酵液吸附到载体颗粒表面直接干燥成颗粒。
④干燥后细粉经二级捕集器收集循环后再进入干燥造粒器附聚造粒；微颗粒直径在500-800微米之间。
(4)保健食品的制备：
按配方量称取虫草发酵粉、灵芝发酵粉，1∶1的比例混合均匀，过80目筛，110-140℃干热灭菌1-2小时，加入药用蜂蜜，常规工艺制成冲剂，经仪器测定保健食品中虫草素含量1.7mg/g，虫草多糖2.0mg/g，腺苷4.0mg/g，灵芝多糖1.5mg/g。
实施例2
胶囊、片剂的制备
按实施例1中的(1)-(3)的方法得到虫草发酵粉、灵芝发酵粉。然后虫草发酵粉、灵芝发酵粉按1∶1的比例混合均匀，过80目筛，110-140℃干热灭菌1-2小时备用，
(1)将虫草发酵粉、灵芝发酵粉100份加入乙醇5份混匀制粒，再加入硬脂酸镁0.5份，混合均匀，压片，再薄膜包衣。
(2)将虫草发酵粉、灵芝发酵粉100份，加入二氧化硅2份混匀，灌装胶囊。经仪器测定保健食品中虫草素含量1.8mg/g，虫草多糖2.1mg/g，腺苷4.1mg/g，灵芝多糖1.6mg/g。
实施例3
按实施例1(1)-(3)的方法得到虫草发酵粉、灵芝发酵粉。然后将2份虫草发酵粉与1份灵芝发酵粉混合均匀，过80目筛，110-140℃，干热灭菌1-2小时，再加入阿司巴甜2份，焦亚硫酸钠0.003份，甘露醇9.4份，香精0.1份辅料充分混合，再加入粘合剂制软材，20目筛制粒，55℃干燥，20目筛整粒，筛出细粉，包装，经仪器测定保健食品中虫草素含量1.8mg/g，虫草多糖2.1mg/g，腺苷4.1mg/g，灵芝多糖1.6mg/g。
实施例4
按实施例1(1)-(3)的方法得到虫草发酵粉、灵芝发酵粉。然后取虫草发酵粉50g、灵芝发酵粉50g，混合均匀，用液体硬胶囊填充机灌装于4号明胶胶囊壳中并予以套合，然后在套合处包涂上环形明胶封口材料即得胶囊。经仪器测定保健食品中虫草素含量1.8mg/g，虫草多糖2.1mg/g，腺苷4.1mg/g，灵芝多糖1.6mg/g。
实施例5
按实施例1(1)-(3)的方法得到虫草发酵粉、灵芝发酵粉。然后取虫草发酵粉100g、灵芝发酵粉50g，混合均匀，加入蔗糖粉以70％乙醇制软材，制粒，干燥，整粒，分剂量，包装即得。经仪器测定保健食品中虫草素含量1.5mg/g，虫草多糖20mg/g，腺苷4.1mg/g，灵芝多糖1.6mg/g。
实施例6
按实施例1(1)-(3)的方法得到虫草发酵粉、灵芝发酵粉。然后取虫草发酵粉1000g、灵芝发酵粉120g，混合均匀，加乙醇至含醇量达65％，溶解，冷藏24h，取上清液，回收乙醇，浓缩至适量，加上述芳香水液，混匀，加苯甲酸钠，加水至规定量，搅匀，滤过，灌封，灭菌，即得口服液。经仪器测定保健食品中虫草素含量1.8mg/g，虫草多糖2.0mg/g，腺苷4.0mg/g，灵芝多糖1.8mg/g。
在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。