一类双烷氧苯基丙二醇衍生物、其制备方法和用途.pdf

摘要
申请专利号：	CN201510021521.X	申请日：	2015.01.15
公开号：	CN104478671A	公开日：	2015.04.01
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	专利权质押合同登记的生效IPC(主分类):C07C 43/23登记号:2017990000756登记生效日:20170816出质人:佛山市赛维斯医药科技有限公司质权人:广东南海农村商业银行股份有限公司科创支行发明名称:一类双烷氧苯基丙二醇衍生物和用途申请日:20150115授权公告日:20160309\|\|\|授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07C 43/23申请日:20150115\|\|\|公开
IPC分类号：	C07C43/23; C07C41/26; A61K31/09; A61P3/10	主分类号：	C07C43/23
申请人：	佛山市赛维斯医药科技有限公司
发明人：	蔡子洋
地址：	528000广东省佛山市禅城区惺台公32号首层1636、1637号铺
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内容摘要

本发明涉及与糖尿病相关的药物领域。具体而言，本发明涉及一类双烷氧苯基丙二醇结构的II型钠依赖性葡萄糖转运子(SGLT2)抑制剂、其制备方法、以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。其中，R1选自C1-C3的烷基；R2选自C1-C3的烷基。

权利要求书

权利要求书
1.  具有通式I结构的化合物及其药学上可以接受的前药酯，

其中，R1选自C1-C3的烷基；
R2选自C1-C3的烷基。

2.  权利要求1所定义的通式I化合物，选自下列化合物，

3.  合成权利要求1-2任一所定义的属于通式I的化合物的方法：

化合物II用烷基锂处理得到对应的芳基锂III；III与化合物IV亲核加成得到V；化合物V经过选择性还原同时脱去异丙叉保护基得到I；得到所述芳基锂选自n-BuLi、sec-BuLi和t-BuLi；R1、R2的定义如权利要求1-3任一所述。

4.  权利要求1-2之一所定义的通式I化合物及其药学上可以接受的盐和前药酯在制备治疗糖尿病药物方面的应用。

说明书

说明书一类双烷氧苯基丙二醇衍生物、其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及与II型糖尿病相关的药物领域。具体而言，本发明涉及一类对II型糖尿病有治疗作用的双烷氧苯基丙二醇结构的2型钠依赖性葡萄糖转运子(SGLT2)抑制剂、制备方法、以及在医药上的用途。
背景技术
全球糖尿病患者呈现逐渐增加的趋势，其中约绝大多数为II型糖尿病患者。目前在临床使用的抗糖尿病药物主要有磺酰脲类、二甲双胍类、噻唑烷二酮类、α-葡糖苷酶抑制剂类、二肽基肽酶-IV抑制剂类和胰岛素类药物。这些药物具有良好的治疗效果，但长期治疗存在较为严重的副作用；且由于存在耐药性，在有些情况下及时联合用药都难以控制患者的血糖。
2型钠依赖性葡萄糖转运子(SGLT2)是近年来发现的治疗糖尿病的新靶点。SGLT2主要分布在肾脏近端小管，其作用是吸收尿中的葡萄糖，并将其返回到血液中，因此抑制SGLT2的就能够降低血液中葡萄糖浓度。当SGLT2功能受到抑制时，更多的葡萄糖将会从尿液中分泌，这将有助于糖尿病患者保持正确的血糖水平。
中国专利CN200610093189.9公开了下列结构的化合物作为SGLT2抑制剂：

其中，A为O，S，NH，(CH2)n，n＝0-3。
中国专利CN200380110040.1公开了下列结构的化合物作为SGLT2抑制剂：

其中，A为共价键，O，S，NH，(CH2)n，n＝1-3。
本发明公开了一类双烷氧苯基丙二醇衍生物作为新型的SGLT2抑制剂，这些化合物可用于制备治疗糖尿病特别是II型糖尿病的药物。
发明内容
本发明的一个目的是克服现有技术的缺点和不足，提供一种具有良好活性，具有通式I的化合物及其药学上可以接受前药酯。
本发明的另一个目的是提供制备具有通式I的化合物及其药学上可以接受的前药酯的方法。
本发明的再一个目的是提供含有通式I的化合物及其药学上可以接受的前药酯作在治疗糖尿病方面的应用。
现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。
本发明具有通式I的化合物具有下述结构式：

其中，R1选自C1-C3的烷基；
R2选自C1-C3的烷基。
优选以下通式I化合物，

本发明所述通式I化合物通过以下路线合成：

化合物IV亲核加成得到V；化合物V经过选择性还原同时脱去异丙叉保护基得到I；得到所述芳基锂选自n-BuLi、sec-BuLi和t-BuLi。其中，R1、R2的定义如前所述。
本发明所述式I化合物的药学上可接受的前药酯，包括分子中的任意一个或多个羟基与乙酰基、特戊酰基、各种磷酰基、氨基甲酰基、烷氧甲酰基等形成的酯。
本发明所述通式I化合物具有SGLT2的抑制作用，可作为有效成分用于制备糖尿病方面的治疗药物。本发明所述通式I化合物的活性是通过受体结合试验来验证的。
本发明的通式I化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如每天服用的剂量约在1mg-700mg/人范围内，分为一次或数次给药。实际服用本发明通式 I化合物的剂量可由医生根据有关的情况来决定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例仅是用于说明，而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明的教导所做出的各种变化均应在本申请权利要求所要求的保护范围之内。
实施例1 I-1的制备

3.22g(10mmol)化合物II-1加入一只100mL的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和30mL干燥的THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮-乙醇中冷却到-78℃，启动搅拌。用注射器慢慢滴加6.25mL(10mmol)1.6M 的n-BuLi正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌1小时。而后通过注射器滴加1.44g(10mmol)化合物IV溶于5mL干燥的THF制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌1 小时。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物V-1，白色固体， ESI-MS,m/z＝395([M+Na]+)。
1.86g(5mmol)化合物V-1溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.33g(20 mmol)Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加1.42g(10mmol)BF3·Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物I-1，白色固体，ESI-MS,m/z＝339([M+Na]+)。
实施例2 I-2的制备

3.35g(10mmol)化合物II-2加入一只100mL的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和30mL干燥的THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮-乙醇中冷却到-78℃，启动搅拌。用注射器慢慢滴加7.7mL(10mmol)1.3M的 sec-BuLi正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌1小时。而后通过注射器滴加1.44g(10mmol)化合物IV溶于5mL干燥的THF制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌1小时。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物V-2，白色固体， ESI-MS,m/z＝409([M+Na]+)。
1.93g(5mmol)化合物V-2溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.33g(20 mmol)Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加1.42g(10mmol)BF3·Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物I-2，白色固体，ESI-MS,m/z＝353([M+Na]+)。
实施例3 I-3的制备

3.07g(10mmol)化合物II-3加入一只100mL的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和30mL干燥的THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮-乙醇中冷却到-78℃，启动搅拌。用注射器慢慢滴加6.25mL(10mmol)1.6M 的t-BuLi正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌1小时。而后通过注射器滴加1.44g(10mmol)化合物IV溶于5mL干燥的THF制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌1 小时。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物V-3，白色固体， ESI-MS,m/z＝381([M+Na]+)。
1.79g(5mmol)化合物V-3溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.33g(20 mmol)Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加1.42g(10mmol)BF3·Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物I-3，白色固体，ESI-MS,m/z＝325([M+Na]+)。
实施例4I-4的制备

3.21g(10mmol)化合物II-4加入一只100mL的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和30mL干燥的THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮-乙醇中冷却到-78℃，启动搅拌。用注射器慢慢滴加6.25mL(10mmol)1.6M 的n-BuLi正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌1小时。而后通过注射器滴加1.44g(10mmol)化合物IV溶于5mL干燥的THF制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌1 小时。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物V-4，白色固体， ESI-MS,m/z＝395([M+Na]+)。
1.86g(5mmol)化合物V-4溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.33g(20 mmol)Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加1.42g(10mmol)BF3·Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物I-4，白色固体，ESI-MS,m/z＝339([M+Na]+)。
实施例5参比化合物D-1的制备
为了进一步说明本发明化合物的药效，本发明记载了尚未公开且同为本申请人设计的化合物D-1。

其制备方法如下：

2.76g(10mmol)化合物II-5加入一只100mL的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和30mL干燥的THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮-乙醇中冷却到-78℃，启动搅拌。用注射器慢慢滴加7.7mL(10mmol)1.3M的 sec-BuLi正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌1小时。而后通过注射器滴加1.44g(10mmol)化合物IV溶于5mL干燥的THF制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌1小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌1小时。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物V-5，白色固体， ESI-MS,m/z＝349([M+Na]+)。
1.63g(5mmol)化合物V-5溶于10mL干燥的二氯甲烷中，加入2.33g(20 mmol)Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加1.42g(10mmol)BF3·Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。
反应混合物倾倒到200mL冰水中，搅拌，100mL×3二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物D-1，白色固体，ESI-MS,m/z ＝293([M+Na]+)。
实施例7
本发明所述的化合物及相关化合物对SGLT2抑制的IC50值参照文献记载方法测定。
使用稳定表达了人源化SGLT2的CHO细胞作为转运分析的载体，使用 [14C]-α-D-甲基葡萄糖苷([14C]-AMG)作为转运分析的底物。将稳定表达了人源化SGLT2的CHO细胞接种到96孔板上，并在37℃下孵育12小时，每孔用 200μL的KRH-Na+洗液(含有120mM NaCl,4.7mM KCl,1.2mM MgCl2,2.2 mM CaCl2,10mM HEPES and 1mM Tris(pH＝7.4))洗涤3次，然后每孔中加入含有待测化合物或者空白的KRH-Na+洗液，每个待测化合物设置10个浓度，最后每个孔加入100μL含有[14C]-AMG(10μCi/mL)的洗液。96孔板随后在 37℃下孵育1小时，然后每孔加入100μL冰冷的终止液(含有120mM NaCl, 4.7mM KCl,1.2mM MgCl2,2.2mM CaCl2,10mM HEPES,1mM Tris and 10 mM根皮苷(pH＝7.4))，随后再用此终止液洗涤5次，每次每孔100μL。每孔中再加入20μL的冰冷的细胞溶解液(100mM NaOH)，然后以600rpm的速率震荡5分钟，然后再在每孔中加入80μL的Microscint 40液闪液，然后以600rpm 的速率震荡5分钟。最后，该96孔板在MicroBeta Trilux液闪计数仪(PerkinElmer) 上计数。响应曲线使用经验四参数模型测定半抑制浓度，表示为IC50。
结果如下列表所示。
本发明的部分化合物对SGLT2的IC50值
化合物编号 IC50(hSGLT2,nM) 参比化合物D-1 19.5
I-1 13.9 I-2 11.4 I-3 18.1 I-4 17.2
上述IC50的测定结果表明，本发明的化合物为强的SGLT2抑制剂，可以用来制备治疗II型糖尿病的药物。

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510021521.X (22)申请日 2015.01.15 C07C 43/23(2006.01) C07C 41/26(2006.01) A61K 31/09(2006.01) A61P 3/10(2006.01) (71)申请人佛山市赛维斯医药科技有限公司地址 528000 广东省佛山市禅城区惺台公 32 号首层 1636、 1637 号铺 (72)发明人蔡子洋 (54) 发明名称一类双烷氧苯基丙二醇衍生物、其制备方法和用途 (57) 摘要本发明涉及与糖尿病相关的药物领域。具体而言，本发明涉及一类双烷氧苯基丙。

2、二醇结构的 II 型钠依赖性葡萄糖转运子 (SGLT2) 抑制剂、其制备方法、以及在制备治疗糖尿病药物中的应用。其中， R1选自 C1-C3的烷基； R2选自 C1-C3的烷基。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书7页 (10)申请公布号 CN 104478671 A (43)申请公布日 2015.04.01 CN 104478671 A 1/1 页 2 1.具有通式 I 结构的化合物及其药学上可以接受的前药酯，其中， R1选自 C 1-C3的烷基； R2选自 C 1-C3的烷基。 2.权利要求 1 所定义。

3、的通式 I 化合物，选自下列化合物， 3.合成权利要求 1-2 任一所定义的属于通式 I 的化合物的方法：化合物II用烷基锂处理得到对应的芳基锂III ； III与化合物IV亲核加成得到V ；化合物V经过选择性还原同时脱去异丙叉保护基得到I ；得到所述芳基锂选自n-BuLi、 sec-BuLi 和 t-BuLi ； R1、 R2的定义如权利要求 1-3 任一所述。 4.权利要求1-2之一所定义的通式I化合物及其药学上可以接受的盐和前药酯在制备治疗糖尿病药物方面的应用。权利要求书 CN 104478671 A 2 1/7 页 3 一类双烷氧苯基丙二醇衍生物、其制备方法和。

4、用途技术领域 0001 本发明涉及与II型糖尿病相关的药物领域。具体而言，本发明涉及一类对II型糖尿病有治疗作用的双烷氧苯基丙二醇结构的 2 型钠依赖性葡萄糖转运子 (SGLT2) 抑制剂、制备方法、以及在医药上的用途。背景技术 0002 全球糖尿病患者呈现逐渐增加的趋势，其中约绝大多数为 II 型糖尿病患者。目前在临床使用的抗糖尿病药物主要有磺酰脲类、二甲双胍类、噻唑烷二酮类、 - 葡糖苷酶抑制剂类、二肽基肽酶 -IV 抑制剂类和胰岛素类药物。这些药物具有良好的治疗效果，但长期治疗存在较为严重的副作用；且由于存在耐药性，在有些情况下及时联合用药都难以控制。

5、患者的血糖。 0003 2型钠依赖性葡萄糖转运子(SGLT2)是近年来发现的治疗糖尿病的新靶点。 SGLT2 主要分布在肾脏近端小管，其作用是吸收尿中的葡萄糖，并将其返回到血液中，因此抑制 SGLT2的就能够降低血液中葡萄糖浓度。当SGLT2功能受到抑制时，更多的葡萄糖将会从尿液中分泌，这将有助于糖尿病患者保持正确的血糖水平。 0004 中国专利 CN200610093189.9 公开了下列结构的化合物作为 SGLT2 抑制剂： 0005 0006 其中， A 为 O， S， NH， (CH2)n， n 0-3。 0007 中国专利 CN200380110040.1 公开了下列。

6、结构的化合物作为 SGLT2 抑制剂： 0008 0009 其中， A 为共价键， O， S， NH， (CH2)n， n 1-3。 0010 本发明公开了一类双烷氧苯基丙二醇衍生物作为新型的 SGLT2 抑制剂，这些化合物可用于制备治疗糖尿病特别是 II 型糖尿病的药物。发明内容 0011 本发明的一个目的是克服现有技术的缺点和不足，提供一种具有良好活性，具有说明书 CN 104478671 A 3 2/7 页 4 通式 I 的化合物及其药学上可以接受前药酯。 0012 本发明的另一个目的是提供制备具有通式 I 的化合物及其药学上可以接受的前药酯的方法。 0013 本发明。

7、的再一个目的是提供含有通式 I 的化合物及其药学上可以接受的前药酯作在治疗糖尿病方面的应用。 0014 现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。 0015 本发明具有通式 I 的化合物具有下述结构式： 0016 0017 其中， R1选自 C 1-C3的烷基； 0018 R2选自 C 1-C3的烷基。 0019 优选以下通式 I 化合物， 0020 0021 本发明所述通式 I 化合物通过以下路线合成： 0022 0023 化合物 IV 亲核加成得到 V ；化合物 V 经过选择性还原同时脱去异丙叉保护基得到 I ；得到所述芳基锂选自 n-BuLi、 sec-BuLi 和 t-B。

8、uLi。其中， R1、 R2的定义如前所述。 0024 本发明所述式 I 化合物的药学上可接受的前药酯，包括分子中的任意一个或多个羟基与乙酰基、特戊酰基、各种磷酰基、氨基甲酰基、烷氧甲酰基等形成的酯。 0025 本发明所述通式 I 化合物具有 SGLT2 的抑制作用，可作为有效成分用于制备糖尿病方面的治疗药物。本发明所述通式 I 化合物的活性是通过受体结合试验来验证的。 0026 本发明的通式 I 化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如每天服用的剂量约在 1mg-700mg/ 人范围内，分为一次或数次给药。实际服用本发明通式 I 化合物的剂量可由说明书 CN 104。

9、478671 A 4 3/7 页 5 医生根据有关的情况来决定。具体实施方式 0027 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例仅是用于说明，而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明的教导所做出的各种变化均应在本申请权利要求所要求的保护范围之内。 0028 实施例 1 I-1 的制备 0029 0030 3.22g(10mmol) 化合物 II-1 加入一只 100mL 的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和 30mL 干燥的 THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮 - 乙醇中冷却到 -78，启动搅拌。用注射器慢慢滴加 6.25mL(10mm。

10、ol)1.6M 的 n-BuLi 正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌 1 小时。而后通过注射器滴加 1.44g(10mmol) 化合物 IV 溶于 5mL 干燥的 THF 制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌 1 小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌 1 小时。 0031 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物 V-1，白色固体， ESI-MS,m/z 395(M+Na+)。。

11、 0032 1.86g(5mmol) 化合物 V-1 溶于 10mL 干燥的二氯甲烷中，加入 2.33g(20mmol) Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加 1.42g(10mmol)BF3 Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物 I-1，白色固体， ESI-MS,m/z 339(M+Na+)。 0033 实施例 2 I-2 的制备 0034 说明。

12、书 CN 104478671 A 5 4/7 页 6 0035 3.35g(10mmol) 化合物 II-2 加入一只 100mL 的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和 30mL 干燥的 THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮 - 乙醇中冷却到 -78，启动搅拌。用注射器慢慢滴加 7.7mL(10mmol)1.3M 的 sec-BuLi 正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌 1 小时。而后通过注射器滴加 1.44g(10mmol) 化合物 IV 溶于 5mL 干燥的 THF 制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌 1 小时，而后慢慢升温至室温，继续。

13、搅拌 1 小时。 0036 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物 V-2，白色固体， ESI-MS,m/z 409(M+Na+)。 0037 1.93g(5mmol) 化合物 V-2 溶于 10mL 干燥的二氯甲烷中，加入 2.33g(20mmol) Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加 1.42g(10mmol)BF3 Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到。

14、 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物 I-2，白色固体， ESI-MS,m/z 353(M+Na+)。 0038 实施例 3 I-3 的制备 0039 0040 3.07g(10mmol) 化合物 II-3 加入一只 100mL 的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和 30mL 干燥的 THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮 - 乙醇中冷却到 -78，启动搅拌。用注射器慢慢滴加 6.25mL(10mmol)1.6M 的。

15、t-BuLi 正己烷溶液。滴加完毕后，说明书 CN 104478671 A 6 5/7 页 7 该温度下继续搅拌 1 小时。而后通过注射器滴加 1.44g(10mmol) 化合物 IV 溶于 5mL 干燥的 THF 制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌 1 小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌 1 小时。 0041 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物 V-3，白色固体， E。

16、SI-MS,m/z 381(M+Na+)。 0042 1.79g(5mmol) 化合物 V-3 溶于 10mL 干燥的二氯甲烷中，加入 2.33g(20mmol) Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加 1.42g(10mmol)BF3 Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物 I-3，白色固体， ESI-MS,m/z 325(M+Na+)。 0043 实施。

17、例 4I-4 的制备 0044 0045 3.21g(10mmol) 化合物 II-4 加入一只 100mL 的干燥圆底烧瓶中，加入干燥磁子一枚和 30mL 干燥的 THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮 - 乙醇中冷却到 -78，启动搅拌。用注射器慢慢滴加 6.25mL(10mmol)1.6M 的 n-BuLi 正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌 1 小时。而后通过注射器滴加 1.44g(10mmol) 化合物 IV 溶于 5mL 干燥的 THF 制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌 1 小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌 1 小时。 004。

18、6 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物 V-4，白色固体， ESI-MS,m/z 395(M+Na+)。 0047 1.86g(5mmol) 化合物 V-4 溶于 10mL 干燥的二氯甲烷中，加入 2.33g(20mmol) Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加 1.42g(10mmol)BF3 Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，。

19、搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物 I-4，白色固体， ESI-MS,m/z 339(M+Na+)。 0048 实施例 5 参比化合物 D-1 的制备 0049 为了进一步说明本发明化合物的药效，本发明记载了尚未公开且同为本申请人设说明书 CN 104478671 A 7 6/7 页 8 计的化合物 D-1。 0050 0051 其制备方法如下： 0052 0053 2.76g(10mmol) 化合物 II-5 加入一只 100mL 的干燥圆底烧。

20、瓶中，加入干燥磁子一枚和 30mL 干燥的 THF，氮气吹扫后用橡胶软塞封口。烧瓶置于液氮 - 乙醇中冷却到 -78，启动搅拌。用注射器慢慢滴加 7.7mL(10mmol)1.3M 的 sec-BuLi 正己烷溶液。滴加完毕后，该温度下继续搅拌 1 小时。而后通过注射器滴加 1.44g(10mmol) 化合物 IV 溶于 5mL 干燥的 THF 制成的溶液。滴加完毕后，反应混合物在该温度下继续搅拌 1 小时，而后慢慢升温至室温，继续搅拌 1 小时。 0054 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥。

21、 (Na2SO4)。抽滤除去干燥剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物经过中性氧化铝柱柱层析，得到产物 V-5，白色固体， ESI-MS,m/z 349(M+Na+)。 0055 1.63g(5mmol) 化合物 V-5 溶于 10mL 干燥的二氯甲烷中，加入 2.33g(20mmol) Et3SiH，搅拌，冰水浴冷却下慢慢滴加 1.42g(10mmol)BF3 Et2O。滴加完毕后，反应混合物在氮气保护下回流过夜。 0056 反应混合物倾倒到 200mL 冰水中，搅拌， 100mL3 二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)。抽滤除去干燥。

22、剂后滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到的残余物柱层析纯化，得到产物 D-1，白色固体， ESI-MS,m/z 293(M+Na+)。 0057 实施例 7 0058 本发明所述的化合物及相关化合物对 SGLT2 抑制的 IC50值参照文献记载方法测定。 0059 使用稳定表达了人源化 SGLT2 的 CHO 细胞作为转运分析的载体，使用 14C-D-甲基葡萄糖苷(14C-AMG)作为转运分析的底物。将稳定表达了人源化SGLT2 的 CHO 细胞接种到 96 孔板上，并在 37下孵育 12 小时，每孔用 200L 的 KRH-Na+ 洗液 ( 。

23、含有 120mM NaCl,4.7mM KCl,1.2mM MgCl2,2.2mM CaCl2,10mM HEPES and 1mM Tris(pH 7.4) 洗涤 3 次，然后每孔中加入含有待测化合物或者空白的 KRH-Na+ 洗液，每个待测化说明书 CN 104478671 A 8 7/7 页 9 合物设置 10 个浓度，最后每个孔加入 100L 含有 14C-AMG(10Ci/mL) 的洗液。96 孔板随后在 37下孵育 1 小时，然后每孔加入 100L 冰冷的终止液 ( 含有 120mM NaCl,4.7mM KCl,1.2mM MgCl2,2.2mM CaCl2,10。

24、mM HEPES,1mM Tris and 10mM根皮苷(pH7.4)，随后再用此终止液洗涤5次，每次每孔100L。每孔中再加入20L的冰冷的细胞溶解液(100mM NaOH)，然后以 600rpm 的速率震荡 5 分钟，然后再在每孔中加入 80L 的 Microscint 40 液闪液，然后以 600rpm 的速率震荡 5 分钟。最后，该 96 孔板在 MicroBeta Trilux 液闪计数仪 (PerkinElmer) 上计数。响应曲线使用经验四参数模型测定半抑制浓度，表示为 IC50。 0060 结果如下列表所示。 0061 本发明的部分化合物对 SGLT2 的 IC50值 0062 化合物编号IC50(hSGLT2,nM) 参比化合物 D-119.5 I-113.9 I-211.4 I-318.1 I-417.2 0063 上述IC50的测定结果表明，本发明的化合物为强的SGLT2抑制剂，可以用来制备治疗 II 型糖尿病的药物。说明书 CN 104478671 A 9 。

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