一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法.pdf

本发明公开了一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，包括准备提取溶剂准备阶段、混合阶段、升温提取阶段、过滤离心阶段、大孔树脂吸附分离阶段、分子膜分离阶段、浓缩阶段、放置阶段、固液分离阶段、溶剂漂洗阶段、二次固液分离以及干燥，其中分子膜分离阶段是将解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A的溶液合并收集。通过本发明的提取方法能使提取的莱鲍迪苷A纯度达到97%以上，且该方法工艺路线简单，对设备要求不高，而且具有低能耗、高产出、莱鲍迪苷A纯度稳定、彻底去除后苦味等优点，适合工业化生产的优点。

权利要求书
1.   一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）准备提取溶剂准备阶段；
（2）混合阶段：将甜菊叶与上述提取溶剂按质体比1：10～20混合；
（3）升温提取阶段：将上述混合物加热升温至80～90℃，并保温1.5-2.0小时；
（4）过滤离心阶段：将提取混合物先通过目数为300目的布袋过滤器，再通过转速为4000转\分钟的碟片离心机，离心至澄清，冷却至40℃以下；
（5）大孔树脂吸附分离阶段：将冷却后的提取过滤澄清液上大孔吸附树脂吸附，水洗后再用50%-80%乙醇解吸；
（6）分子膜分离阶段：将上述解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A纯度达85%以上的溶液合并收集；
（7）浓缩阶段：将收集液用刮板浓缩器减压浓缩至比重为1.1～1.5；
（8）放置阶段：将浓缩液在40℃以下的温度放置12-24小时，莱鲍迪苷A充分析出；
（9）固液分离阶段：用离心或板框压滤的方法进行固液分离，过滤滤材孔径大于400目；
（10）溶剂漂洗阶段：将分离的固体物用95%-100%的乙醇水溶液，按固体物质量的2-4倍进行漂洗15-30分钟；
（11）二次固液分离：用离心或板框压滤的方法进行再次固液分离，过滤滤材孔径大于400目；
（12）干燥：将分离的固形物用烘干或喷雾干燥的方法进行干燥。

2.  根据权利要求1所述的一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（1）所述提取溶剂为乙醇与水的混合物。

3.  根据权利要求1或2所述的一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：所述提取溶剂为乙醇与水按照溶剂的比例按1：10～100%混合。

4.  根据权利要求1所述的一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（6）所述分子膜为组合膜，具体是1000-5000分子量卷式超滤膜、100-600分子量卷式纳滤膜，HPLC跟踪分析膜滤液中莱鲍迪苷A的纯度。

说明书一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法
 
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法。
背景技术
甜菊糖苷是从甜菊叶中提取分离得到的一种高甜度低热能、味质好、且安全无毒的天然低热糖源，其甜度为蔗糖的150～300倍，可以替代糖精或蔗糖，应用于各种食品、饮料中。甜菊糖苷还可以防止糖尿病、肥胖症及小儿龋齿等疾病，是患者的理想甜味剂。但甜菊糖的苦味一直影响它的推广和运用，日本和韩国采用转移酶和水解酶化的方法来改变甜菊糖的后苦味；不足的是带来的副作用往往是甜度倍数下降，成本增高。同样造成应用上的困难。但随着天然甜味剂市场需求的逐步增大，越来越多的企业开始关注研究和解决甜菊的后苦味，人们试图提炼精致高纯度的莱鲍迪苷A的甜菊产品，去掉口感不好的成分甜菊双甙和杜克甙，这样甜度可高达350-400倍，同时除掉了甜菊的后苦味。目前韩国、马来西亚、美国、中国等的一些企业都可以将莱鲍迪苷A提纯到80%以上，但由于各自工艺和方法的差异，普遍存在转化率低，成本高，有效成分控制不稳定等弊端。
发明内容
发明目的：本发明针对现有技术中工艺复杂、提取纯度低的不足，提出一种工艺简单、成本低以及纯度高的从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法。
技术方案：本发明所述的一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，包括如下步骤：
（1）准备提取溶剂准备阶段；
（2）混合阶段：将甜菊叶与上述提取溶剂按质体比1：10～20混合；
（3）升温提取阶段：将上述混合物加热升温至80～90℃，并保温1.5-2.0小时；
（4）过滤离心阶段：将提取混合物先通过目数为300目的布袋过滤器，再通过转速为4000转\分钟的碟片离心机，离心至澄清，冷却至40℃以下；
（5）大孔树脂吸附分离阶段：将冷却后的提取过滤澄清液上大孔吸附树脂吸附，水洗后再用50%-80%乙醇解吸；
（6）分子膜分离阶段：将上述解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A纯度达85%以上的溶液合并收集；
（7）浓缩阶段：将收集液用刮板浓缩器减压浓缩至比重为1.1～1.5；
（8）放置阶段：将浓缩液在40℃以下的温度放置12-24小时，莱鲍迪苷A充分析出；
（9）固液分离阶段：用离心或板框压滤的方法进行固液分离，过滤滤材孔径大于400目；
（10）溶剂漂洗阶段：将分离的固体物用95%-100%的乙醇水溶液，按固体物质量的2-4倍进行漂洗15-30分钟；
（11）二次固液分离：用离心或板框压滤的方法进行再次固液分离，过滤滤材孔径大于400目；
（12）干燥：将分离的固形物用烘干或喷雾干燥的方法进行干燥。
作为优化，步骤（1）所述提取溶剂为乙醇与水的混合物。
进一步的优化，所述提取溶剂为乙醇与水按照溶剂的比例按1：10～100%混合。
作为优化，步骤（6）所述分子膜为组合膜，具体是1000-5000分子量卷式超滤膜、100-600分子量卷式纳滤膜，HPLC跟踪分析膜滤液中莱鲍迪苷A的纯度。
有益效果：通过本发明的提取方法能使提取的莱鲍迪苷A纯度达到97%以上，且该方法工艺路线简单，对设备要求不高，而且具有低能耗、高产出、莱鲍迪苷A纯度稳定、彻底去除后苦味等优点，适合工业化生产的优点。
附图说明
图1为实施例1中的莱鲍迪苷A 对照品溶液HPLC图谱及分析表；
图2为实施例1中的莱鲍迪苷A膜滤液HPLC图谱及分析表；
图3为实施例1中的莱鲍迪苷A 样品溶液HPLC图谱及分析表；
图4为实施例2中的莱鲍迪苷A 对照品溶液HPLC图谱及分析表；
图5为实施例2中的莱鲍迪苷A膜滤液HPLC图谱及分析表；
图6为实施例2中的莱鲍迪苷A 样品溶液HPLC图谱及分析表；
图7为实施例3中的莱鲍迪苷A 对照品溶液HPLC图谱及分析表；
图8为实施例3中的莱鲍迪苷A膜滤液HPLC图谱及分析表；
图9为实施例3中的莱鲍迪苷A 样品溶液HPLC图谱及分析表。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：
实施例1
一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，包括如下步骤：
（1）提取溶剂准备阶段：乙醇与水的比例为20%；
（2）混合阶段：甜菊叶与乙醇混合溶剂按质体比1：15；
（3）升温提取阶段：上述混合物加热升温至85℃，并保温1.5小时；
（4）过滤离心阶段：提取混合物先通过目数为300目的布袋过滤器，再通过转速为4000转\分钟的碟片离心机，离心至澄清，冷却至40℃以下； 
（5）大孔树脂吸附分离阶段：冷却后的提取过滤澄清液上大孔吸附树脂吸附，水洗后，用65%乙醇解吸；
（6）分子膜分离阶段：解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A纯度达85%以上的溶液合并收集；
（7）浓缩阶段：收集液用刮板浓缩器减压浓缩至比重为1.25；
（8）放置阶段：浓缩液在40℃以下的温度放置15小时，莱鲍迪苷A充分析出；
（9）固液分离阶段：用离心方法进行固液分离，滤材孔径450目；
（10）漂洗提纯阶段：将分离的固体物用95%的乙醇水溶液，按固体物质量的3倍进行漂洗20分钟；
（11）二次固液分离：过滤滤材孔径450目；
（12）干燥：将分离的固形物用烘干的方法干燥。
通过上述提取工艺，经HPLC的检测最终的纯度高于97%，具体分析图谱及分析结果见附图1-3。
实施例2
一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，包括如下步骤：
 （1）提取溶剂准备阶段：乙醇与水的比例为80%；
 （2）混合阶段：甜菊叶与乙醇混合溶剂按质体比1：20；
 （3）升温提取阶段：上述混合物加热升温至90℃，并保温2小时；
 （4）过滤离心阶段：提取混合物先通过目数为300目的布袋过滤器，再通过转速为4000转\分钟的碟片离心机，离心至澄清，冷却至40℃以下； 
 （5）大孔树脂吸附分离阶段：冷却后的提取过滤澄清液上大孔吸附树脂吸附，水洗后，用75%乙醇解吸；
 （6）分子膜分离阶段：解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A纯度达85%以上的溶液合并收集；
 （7）浓缩阶段：收集液用刮板浓缩器减压浓缩至比重为1.35；
 （8）放置阶段：浓缩液在40℃以下的温度放置20小时，莱鲍迪苷A充分析出；
 （9）固液分离阶段：用离心方法进行固液分离，滤材孔径450目；
 （10）漂洗提纯阶段：将分离的固体物用100%的乙醇，按固体物质量的3倍进行漂洗30分钟；
 （11）二次固液分离：过滤滤材孔径450目；
 （12）干燥：将分离的固形物用喷雾干燥的方法干燥。
通过上述提取工艺，经HPLC的检测最终的纯度高于97%，具体分析图谱及分析结果见附图4-6。
实施例3
一种从甜菊叶中提取分离莱鲍迪苷A的方法，包括如下步骤：
 （1）提取溶剂准备阶段：乙醇与水的比例为60%；
 （2）混合阶段：甜菊叶与乙醇混合溶剂按质体比1：18；
 （3）升温提取阶段：上述混合物加热升温至90℃，并保温2小时；
 （4）过滤离心阶段：提取混合物先通过目数为300目的布袋过滤器，再通过转速为4000转\分钟的碟片离心机，离心至澄清，冷却至40℃以下； 
 （5）大孔树脂吸附分离阶段：冷却后的提取过滤澄清液上大孔吸附树脂吸附，水洗后，用80%乙醇解吸；
 （6）分子膜分离阶段：解吸液用分子膜分离，HPLC跟踪分析，将含有莱鲍迪苷A纯度达85%以上的溶液合并收集；
 （7）浓缩阶段：收集液用刮板浓缩器减压浓缩至比重为1.40；
 （8）放置阶段：浓缩液在40℃以下的温度放置22小时，莱鲍迪苷A充分析出；
 （9）固液分离阶段：用离心方法进行固液分离，滤材孔径450目；
 （10）漂洗提纯阶段：将分离的固体物用100%的乙醇，按固体物质量的3倍进行漂洗30分钟；
 （11）二次固液分离：过滤滤材孔径450目；
 （12）干燥：将分离的固形物用喷雾干燥的方法干燥。
通过上述提取工艺，经HPLC的检测最终的纯度高于97%，具体分析图谱及分析结果见附图7-9。