三磷酸胞苷二钠与精氨酸的冻干制品及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种三磷酸胞苷二钠的稳定形式，具体涉及以精氨酸作为稳定剂的三磷酸胞苷二钠的冻干制品。本发明还涉及一种三磷酸胞苷二钠冻干制品的制备方法。
背景技术
三磷酸胞苷二钠为核苷酸衍生物，是一种辅酶类药，其具有参与并调节物质代谢、营养神经和抗血管硬化的药理作用，因而应用广泛。但是，三磷酸胞苷二钠具有热不稳定性，其原料要求在冷处保存，制剂规定在阴凉处保存。经考察，目前市售产品在规定的阴凉贮存条件下，并不能保证其化学稳定性。三磷酸胞苷二钠不稳定的原因在于其分子的磷酸键断裂，迅速降解为一磷酸胞苷钠和二磷酸胞苷二钠。有效成分的快速下降，影响到药物的疗效和安全性。
中国专利公开号CN 1833655A(名称为“三磷酸胞苷二钠输液及其制备工艺”)公开了用于三磷酸胞苷二钠输液的稳定剂有碳酸胍、精氨酸或吐温-80，三磷酸胞苷二钠与稳定剂的重量比为1∶80～1∶150，pH值为7.5～9.0。该发明使用了大量的稳定剂(相对三磷酸胞苷二钠)，不利于成本控制，并可能产生与治疗无关的药理作用。
中国专利公开号CN 101390873A(名称为“一种三磷酸胞苷二钠与精氨酸组合物及其制备方法”)公开了三磷酸胞苷二钠冻干粉针剂，其中三磷酸胞苷二钠、甘露醇和精氨酸的重量比为1∶1.5∶0.15～0.375，pH值为4.70-5.91(偏酸性)，而用精氨酸作pH调节剂。该发明所得产品的pH呈酸性，稳定性有待进一步提高。
因此，有必要提供一种三磷酸胞苷二钠的更加稳定形式的制品，以方便医学上的实际应用。
【发明内容】
本发明要解决的问题之一在于提供一种更加稳定的三磷酸胞苷二钠制品，以使三磷酸胞苷二钠的降解最小化，从而保证药物的有效性和安全性。
本发明要解决的另一问题在于提供一种制备三磷酸胞苷二钠冻干制品的方法，该方法操作简单，用料少，有利于成本控制。
为解决上述问题，本发明提供一种三磷酸胞苷二钠与精氨酸的冻干制品，其包含作为活性成分的三磷酸胞苷二钠和作为稳定剂的精氨酸，两者的重量比为1∶0.4～3.2。
在优选的实施方式中，三磷酸胞苷二钠与精氨酸的重量比为1∶1。
在优选的实施方式中，所述冻干制品的水溶液的pH为7.0～11.0。优选地，所述pH为9.0。
在优选的实施方式中，所述冻干制品还包含一种或多种药学上可接受的支架剂。所述支架剂例如为葡萄糖、乳糖、甘露醇、右旋糖苷或蔗糖。
本发明另一方面提供一种三磷酸胞苷二钠与精氨酸冻干制品的制备方法，该方法包括：(a)提供三磷酸胞苷二钠，加水溶解，过滤；(b)提供精氨酸母体，使得三磷酸胞苷二钠与精氨酸的重量比为1∶0.4～3.2，加水溶解，过滤；(c)提供支架剂，加水溶解，过滤；(d)将步骤(a)、(b)、(c)中的溶液混合，将pH调节至7.0～11.0后分装并冻干。
在优选的实施方式中，步骤(b)中所述的精氨酸母体为精氨酸或盐酸精氨酸。优选地，三磷酸胞苷二钠与精氨酸的重量比为1∶1。优选地，步骤(c)中的支架剂为甘露醇。优选地，步骤(d)中的pH为9.0。
本发明提供的三磷酸胞苷二钠与精氨酸的冻干制品，使用精氨酸作为稳定剂，三磷酸胞苷二钠与精氨酸的重量比为1∶0.4～3.2，冻干制品的水溶液pH为7.0～11.0(呈碱性)，与现有同类产品的pH范围不同，但属药剂学所允许、临床能接受的范围。按本发明的配方及控制参数可制成质量稳定的冻干品或注射剂，可供生产注射剂使用或直接供临床使用。本发明证实了三磷酸胞苷二钠在碱性条件下相对稳定，而在本发明选用的碱性物质中以精氨酸为最稳定。本发明实施例中所制得的注射剂经动物实验，证实安全性好。产品经一年的留样观察，采用最新的国家食品药品监督管理局标准(YBH17632005)对其含量及有关物质进行测定，均可满足质量标准的要求。
【附图说明】
图1是显示本发明冻干制品中有关物质的含量与精氨酸比例的变化关系的图表；
图2是显示本发明冻干制品中有关物质的含量与pH的变化关系的图表；
图3是通过液相色谱法测定实验例中样品所得的图谱；
图4是通过液相色谱法测定实验例中阳性对照品所得的图谱；
图5是通过液相色谱法测定实验例中阴性对照品所得的图谱。
【具体实施方式】
为了更好地理解本发明地方法，下面将通过实施例和实验证据进一步阐述本发明及其优势。
本发明稳定剂的筛选
取三磷酸胞苷二钠2g(折纯计)，加水溶解并稀释至1000ml。分别精密量取100ml，加磷酸盐缓冲液或10％盐酸精氨酸，分别以氢氧化钠调节pH值为酸、中、碱性，加水至200ml，得6个样品，分别测定pH值，将样品同时于90±1℃水浴加热，分别于0、1、2、3、6小时取样测定1次三磷酸胞苷二钠的含量。实验数据见表1。
表1不同稳定剂在不同pH时的热稳定性数据
从表1可看出，在选定的稳定剂用量基本相同时，三磷酸胞苷二钠对热稳定性随pH值升高而升高，而溶液呈碱性，有游离精氨酸存在时，三磷酸胞苷二钠对热的稳定性最好。
稳定剂的用量及pH值的筛选
取三磷酸胞苷二钠2g(折纯计)，加适量水溶解，分别加入10％精氨酸1ml、2ml、4ml、8ml、16ml、32ml、64ml(相当于三磷酸胞苷二钠与精氨酸重量比为：1∶0.05、1∶0.1、1∶0.2、1∶0.4、1∶0.8、1∶1.6、1∶3.2)，加水至100ml，得7个样品，分别测得其对应的pH值为4.03、4.36、4.88、6.13、8.65、9.66、11.2，将样品同时于90±1℃水浴加热，分别于0、1、2、3、6小时测定三磷酸胞苷二钠及有关物质的含量。将有关物质含量变化与pH变化和精氨酸比例分别作成曲线图，结果参见图1和图2。
从图1和图2可看出，随着精氨酸的增加，三磷酸胞苷二钠在受热条件下分解的有关物质明显递减，曲线显示，当三磷酸胞苷二钠与精氨酸重量比达1∶1，其对应的溶液pH值约为9.0时对热的稳定性最好，但随精氨酸重量比进一步增加，有关物质的变化明显趋平缓，从中可筛选出其适宜的pH范围为7.0～11.0之间，其对应的三磷酸胞苷二钠与精氨酸重量比为1∶0.4～1∶3.2，最佳pH值约为9.0，其对应的三磷酸胞苷二钠与精氨酸重量比约为1∶1。
冻干制品的制备方法
实施例1：取精氨酸10.0g，甘露醇5.0g，以注射用水溶解，加适量活性炭，吸附，过滤脱炭，加入三磷酸胞苷二钠10.0g(折纯计)，搅拌溶解，加注射用水至500ml，测定pH值为9.0，以0.22μm微孔滤膜过滤，按无菌操作法分装于西林瓶中，于冷冻干燥机冻干，压塞、轧盖，得样品462瓶，每瓶含三磷酸胞苷二钠20mg。
对照实施例2：取甘氨酸5.0g，甘露醇2.5g，以注射用水溶解，加适量活性炭，吸附，过滤脱炭，加入三磷酸胞苷二钠5.0g(折纯计)，搅拌溶解，加氢氧化钠溶液调节测定pH值为7.0，加注射用水至250ml，以0.22μm微孔滤膜过滤，按无菌操作法分装于西林瓶中，于冷冻干燥机冻干，压塞、轧盖，得合格样品202瓶，每瓶含三磷酸胞苷二钠20mg。
对照实施例3：取盐酸精氨酸10.0g，甘露醇5.0g，以注射用水溶解，加适量活性炭，吸附，过滤脱炭，加入三磷酸胞苷二钠10.0g(折纯计)，搅拌溶解，加注射用水至500ml，加氢氧化钠溶液调节测定pH值为6.0，以0.22μm微孔滤膜过滤，按无菌操作法分装于西林瓶中，于冷冻干燥机冻干，压塞、轧盖，得合格样品454瓶，每瓶含三磷酸胞苷二钠20mg。
实施例4(大盘冻干无菌原料的制备)：取精氨酸20.0g，甘露醇10.0g，以注射用水溶解，加活性炭0.8g，搅匀，吸附30分钟，过滤脱炭，放冷，加入三磷酸胞苷二钠20.0g，搅拌溶解，加冷却至室温的注射用水至1000ml，测定pH值为9.0，以0.22μm微孔滤膜过滤，按无菌操作法将滤液分装于盘内，于冷冻干燥机冻干，粉碎，分装于无菌容器中，得冻干粉49g。
实施例5(注射剂的制备)：取实施例4所得的冻干粉适量，加入适量注射用水溶解，过滤，分装于无菌容器中，灭菌，得注射剂。
冻干粉针剂的安全性试验
将依本发明制成的冻干粉针(实施例1)按中国药典2005年版二部附录XIC进行异常毒性检查，实验结果如下表2所示：
表2冻干粉针剂的异常毒性实验
实验号 1 2 3 4 5 小鼠体重(g) 18 17 18 18 19 尾静脉注射量(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 48小时观察结果 存活 存活 存活 存活 存活
将依本发明制成的冻干粉针(实施例1)加氯化钠注射液制成每1ml中含2mg的溶液，按中国药典2005年版二部附录XI D进行热原检查，剂量按家兔体重每1kg缓慢注射1ml，实验结果如下表3所示：
表3冻干粉针剂的热原检查
从表2和表3的数据可看出，依本发明制成的冻干粉针的异常毒性及热原均符合规定。
冻干粉针剂的稳定性试验
将依本发明制得的冻干品模拟运输较差条件30～35℃贮存，并与对照实施例比较其稳定性，实验结果如表4所示：
表4本发明冻干制品的稳定性数据
将依本发明制得的冻干品按规定贮存条件上限15～20℃贮存，并与对照实施例比较其稳定性，实验结果如表5所示：
表5本发明冻干制品的稳定性数据
从表4-5可看出，本发明的冻干制品在规定的贮存条件下，均能保持含量及有关物质符合规定，同时也能保证产品在运输过程的短暂高温天气影响下，起到延缓降解的作用。与对照实施例比较，本发明有效期内含量及有关物质的稳定性均有相当明显的优势。
注射用三磷酸胞苷二钠中精氨酸的含量测定
色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A(取CH3COONa·3H2O19.0g，三乙胺0.5ml，1000ppmEDTA溶液200μl，加水使溶解并稀释至1000ml，用冰乙酸调节pH值为6.4，滤过，取滤液940ml与乙腈60ml混合，脱气20秒，即得)，流动相B(乙腈-水-1000ppmEDTA(650∶350∶0.2)，滤过，脱气20秒，即得)，按下表6进行梯度洗脱；柱温为38.0℃；检测波长为254nm。
表6梯度洗脱参数
测定法
取样品3瓶，加水溶解并转移至20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl于微量试管中，真空低温干燥30分钟，加衍生剂(异硫氰酸苯酯-三乙胺-水-无水乙醇(1∶1∶1∶7))20μl，在旋涡振荡器上振荡30秒；静置10分钟，再真空低温干燥50分钟后，加稀释液(取磷酸氢二钠0.71g，加水使溶解并稀释至1000ml，用10％磷酸-乙腈(95∶5)调节pH值至7.4)100μl，于进样前旋涡振荡30秒。取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取精氨酸对照品约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按以上样品处理方法同样操作，按外标法以峰面积计算，即得。样品(含三磷酸胞苷二钠-精氨酸-甘露醇)、阳性对照(含精氨酸)和阴性对照(含三磷酸胞苷二钠-甘露醇)的液相色谱图参见图3-5。该实验建立了稳定剂精氨酸的检测方法，便于产品的质量控制，并可用于配方的甄别。
虽然本发明已经参考具体的实施方式进行描述，但是本领域技术人员通过阅读上述描述后，将可以对本发明做出显而易见的修改和修饰，而不违背本发明的意图和本质。本发明有意将这些修改和修饰包括在权利要求的范围内。