一种贵州豆豉提取得到的溶栓活性物质及其产品 技术领域：
本发明是一种贵州豆豉提取得到的溶栓活性物质及产品。
技术背景：
豆豉是贵州民间喜爱的一种传统食品，它是一种以大豆为原料经微生物发酵而制成的，其味香，嗅臭，民间认为该食品开胃，助消化，是贵州民间长期以来大众普遍食用和十分喜爱的食品。按制曲时参与的微生物不同，豆豉可分为毛霉型、曲霉型、根霉型和细菌型等。在传统加工过程中，若不注意工艺，会致使品质下降，甚至霉变，造成损失。贵州豆豉属于细菌型，营养丰富，但是目前对该食品的活性物质研究还尚未见任何报道。鉴于此种情况，对贵州豆豉活性物质的研究具有良好发展前景和巨大的市场潜力。
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种贵州豆豉提取得到的活性物质及产品；从贵州豆豉中提取出有益细菌，经过实验摸索建立了可扩大的豆豉制备工艺，并对其活性成分进行了分离、鉴定。
本发明是这样构成的：它主要是由大豆制得的豆豉中分离得到的活性成分。所述的豆豉是这样制备的：取大豆，浸泡，蒸煮，冷却后接入菌种，置于生化培养箱中培养，即得。准确的说：所述的豆豉是这样制备的：取大豆，浸泡6小时，110℃蒸煮30分钟，冷却后接入菌种，置于生化培养箱中37℃，培养48小时，即得。
所述的豆豉活性物质是这样分离的：所述的豆豉活性物质是这样分离的：取豆豉，加入1∶1生理盐水浸提，取上清液，离心5000转/分钟，10分钟，得菌泥；取上清液，加乙醇使含醇量为10％-60％，离心5000转/分钟，10分钟，得沉淀；取上清液，加乙醇使含醇量为30％-90％，离心5000转/分钟，5分钟，得沉淀B。收集沉淀A和B，冷冻干燥，保存，即得。所述的豆豉活性物质还可以是这样分离的：取豆豉，加入1∶1生理盐水浸提，取上清液中慢慢加入硫酸铵使含盐量为10％-60％，4℃放置6h后，4℃、12000转/分钟离心15分钟，得沉淀A，再慢慢加入硫酸铵使含盐量为30％-90％，4℃静置过夜，然后4℃、12000转/分钟离心15分钟，得沉淀B，收集沉淀，用截留分子量为10000的透析袋透析除盐，将所得沉淀A和B，冷冻干燥，保存，即得。
菌泥的主要成分为豆豉芽孢杆菌；沉淀A的主要成分为超氧化物歧化酶、异黄酮、皂苷类、生育酚、吡啶二羧酸、维生素K2、多糖等；沉淀B的主要成分为溶纤维蛋白酶。所得的菌泥可用于制备治疗肠道菌群失衡和肝脏疾病的药物。沉淀A可于制备治疗免疫力低、高血糖、肿瘤、衰老、骨质疏松、高血脂、高血压的药物。沉淀B可用于制备治疗血栓疾病的药物。沉淀A和沉淀B干燥粉碎，混合后加入少量豆豉粉及适量辅料，装胶囊。具有较强的功效：治疗预防血管栓塞，心绞痛及心肌梗塞；治疗预防高血压及骨质疏松症发生；促进肠胃消化及排便顺畅；解酒可分解酒精；抗菌可杀死胃肠内之坏菌，包括引发胃癌之螺旋杆菌；改善血流及缺血性脑中风，降低血清中胆固醇及脂质的浓度。
该溶栓活性物质的生化特性为：分子量28KD，最适pH为8.0，在50℃以下较为稳定，在胃环境中不稳定，具有激活纤维蛋白溶解酶原转化成纤维蛋白溶解酶和直接溶解血栓中的纤维蛋白的溶栓作用。
现有技术相比，本发明进一步明确了贵州传统豆豉的营养价值，利用现在生物技术生产得到了豆豉活性物质及其产品。并且对豆豉进行了活性成分的提取分离工艺研究，还对所得豆豉活性物质进行了成分分析鉴定，该豆豉活性物质及其产品具有明显的溶栓功效，可用于心脑血管的预防和治疗，具有良好发展前景和巨大的市场潜力。
具体的实施方式：
实验例1
贵州豆豉制备工艺研究：从贵州省贵阳市市售豆豉中用平板划线分离法，分离筛选出产豆豉活性物质的单菌落，对其进行传代培养，作为供试菌种。取大豆蛋白胨1％，牛肉膏0.5％，NaCl0.5％，NaH2PO40.1％；加蒸馏水至6ml(2％接种量)，调pH至9.0。121℃高压灭菌，30min。在超净工作台上将上述分离得到的菌种接入培养液，放入恒温培养箱培养24h，制得种子液。取大豆300g浸泡1-10小时，110℃蒸煮10-50分钟，冷却后把种子液均匀撒在煮熟的大豆上，置于生化培养箱中，37℃培养48小时，得成品豆豉。
实验例2：
贵州豆豉活性成分提取、分离方法研究：用生理盐水浸提豆豉得到的浸提液，冷冻离心5000转5-30分钟。取上清液进行分级沉淀，依次加硫酸铵至30％，45％，50％，55％，70％，80％，85％；并且用纤维蛋白平板法测定每一盐浓度下上清液中的溶栓活性组份的活性。以溶圈直径为纵坐标，盐浓度0％～85％为横坐标作图。获得最佳盐析浓度55％，分离得到豆豉活性物质。
实验例3：
贵州豆豉活性成分溶栓活性测定：取无菌培养皿，置于水平操作台内，配制琼脂糖溶液，待冷却后向其中各加入纤维蛋白原溶液和凝血酶液，小心振荡倒入二个无菌培养皿中，然后静置室温过夜，制得纤维蛋白平板，并在其上打出若干小孔。以尿激酶为标准品，分别取一定量加入小孔中；将各阶段所得的活性组分取一定量滴加于小孔中。放入恒温培养箱温育培养后，用游标卡尺测定标准品和样品的溶圈直径，利用标准曲线计算出各阶段所得的活性组分的溶栓效价。
实验例4：
贵州豆豉活性成分产品制备及用法：将从贵州豆豉中提取得到的活性成份与少量豆豉干粉及辅料混合，填装胶囊。口服，每日2-3次，每次1-2粒，可用于治疗和预防心脑血管栓塞；治疗和预防高血压及骨质疏松症发生；促进肠胃消化及排便顺畅；解酒可分解酒精；抗菌可杀死胃肠内之坏菌，包括引发胃癌之螺旋杆菌；改善血流及缺血性脑中风，降低血清中胆固醇及脂质的浓度。(生产工艺见说明书附图)
实验例5：
贵州豆豉活性成分与丹参中药提取物成份按1∶1-10配伍制得可供口服的制剂，肠溶胶囊剂为最佳。口服，每日2-3次，每次1-2粒，可降低血液黏度，促进血液循环，可用于治疗和预防血栓疾病等心脑血管疾病。
实验例5：
贵州豆豉活性成分与黄芪和红花中药提取物成份按1∶1-10配伍制得可供口服的制剂，肠溶胶囊剂为最佳。口服，每日2-3次，每次1-2粒，可降低血液黏度，促进血液循环，可用于治疗和预防血栓疾病等心脑血管疾病。
实验例6：
贵州豆豉活性成分与黄芪、丹参、桃仁、红花四味中药组方提取物成份按1∶1-10配伍制得可供口服的制剂，肠溶胶囊剂为最佳。口服，每日2-3次，每次1-2粒，可降低血液黏度，促进血液循环，用于治疗和预防血栓疾病等心脑血管疾病。
【附图说明】
图1是贵州豆豉提取得到地溶栓活性产品生产工艺流程图。