使用胎盘干细胞对骨相关癌的治疗本专利申请要求于2010年1月26日提交的美国临时专利申请序号No.
61/298,517；2010年2月24日提交的美国临时专利申请序号No.61/307,821；
和2010年6月8日提交的美国临时专利申请序号No.61/352,768的权益，
以上每篇专利申请以其全部内容以引用方式并入本文。
1.技术领域
本文提供了使用组织培养贴壁胎盘干细胞（在本文中称为PDAC）和/
或骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC）治疗骨相关癌（例如，多发性骨髓
瘤），抑制骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞或软骨肉瘤细胞）增
殖和抑制骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤、软骨肉瘤及其他骨相关癌（例
如，肿瘤））生长的方法。
2.背景技术
多发性骨髓瘤（也称为MM、骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤或卡勒氏病）是
一类浆细胞癌，浆细胞是产生抗体的免疫系统细胞。多发性骨髓瘤的症状
包括骨痛、感染、肾衰竭、贫血和骨病变。这种疾病被认为是不可医治的，
并且只有如来那度胺的少数治疗方法可用并且是有希望的。
照此，存在对多发性骨髓瘤新型治疗方法的需要。到目前为止，尚未对非
造血组织培养贴壁胎盘干细胞抑制骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤）生长
或抑制骨相关癌细胞增殖的能力进行描述。
3.发明概述
在一个方面，本文提供了治疗患有骨相关癌的个体的方法，其包括向
所述个体施用治疗有效量的分离的组织培养贴壁胎盘干细胞（在本文中还
称为PDAC（胎盘源贴壁细胞））、这类胎盘干细胞的分离群体或包含胎
盘干细胞的分离细胞群体；和/或分离的骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC）
或包含BM-MSC的骨髓。
在一种实施方式中，本文提供了治疗患有骨相关癌的个体的方法，其
包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述治
疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC改善（例如，可检测地改善）了所述
骨相关癌的一种或多种症状，或者降低（例如，可检测地降低）了所述骨
相关癌的发展。在具体的实施方式中，所述骨相关癌是多发性骨髓瘤。在
具体的实施方式中，所述骨相关癌是软骨肉瘤。在其他实施方式中，所述
骨相关癌是骨癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、脊索瘤、骨恶性
纤维组织细胞瘤、前列腺癌或骨纤维肉瘤。在具体的实施方式中，所述骨
相关癌不是前列腺癌。在其他实施方式中，所述骨相关癌包括实性肿瘤。
在另一种实施方式中，所述个体是哺乳动物。在另一种实施方式中，所述
个体是人。在另一种实施方式中，所述施用所述胎盘干细胞导致比施用相
等数目的骨髓来源的间质干细胞更大的（例如，可检测地更大的）所述一
种或多种症状的改善。在某些实施方式中，所述骨髓来源的间质干细胞是
CD34–、CD45–、CD73+和/或CD105+中的一种或多种。
在某些实施方式中，所述个体表现出骨病变，例如，由所述骨相关癌
造成的骨病变，例如，在X射线放射照片上可见的骨病变。在其他实施方
式中，所述个体不表现出骨病变，例如，由所述骨相关癌造成的骨病变，
例如，在X射线放射照片上可见的骨病变。在其他实施方式中，所述施用
导致骨病变的出现或发病的延缓，所述骨病变例如，由所述骨相关癌造成
的骨病变，例如，在X射线放射照片上可见的骨病变或由癌的治疗造成的
骨病变。
在某些实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或所述BM-MSC静脉内施用
给所述个体。在其他实施方式中，就细胞总数而言，所述治疗方法包括向
所述个体施用至少约1×107、5×107、1×108、5×108、1×109、5×109、1×1010、
5×1010或1×1011个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在另一个具体的实施方式中，
在所述施用之前，所述胎盘干细胞、所述BM-MSC或两者已体外增殖了不
超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、
19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30次群体倍增。在另一
种实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在骨病变（例如，由所述
骨相关癌造成的骨病变）处或附近施用于所述个体。在另一种实施方式中，
所述治疗方法另外包括向所述个体施用一种或多种抗癌化合物。在本文任
何实施方式的另一种实施方式中，在所述施用之前已将所述胎盘干细胞和/
或BM-MSC冷冻保存并融化。
在一种实施方式中，所述治疗方法可以包括对（1）所述个体中骨病变
的数目或程度；（2）所述个体中破骨细胞前体的数目或（3）所述个体中
多发性骨髓瘤细胞的数目中的一种或多种在所述施用前确定一次或多次和/
或在所述施用后确定一次或多次，例如，在所述施用前至少一次和在所述
施用后至少一次。在某些实施方式中，所述治疗有效量的胎盘干细胞和/或
BM-MSC降低（例如，可检测地降低）了所述个体中所述骨病变的数目或
严重程度，或者降低了所述个体中所述骨病变的数目或严重程度的提高速
度，例如，如可通过骨密度测定法或X射线确定的。在其他实施方式中，
所述治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC降低（例如，可检测地降低）
了所述个体中破骨细胞前体的数目，例如，如使用对破骨细胞前体特异的
抗体以检测（例如）个体的周围血液或骨髓中的破骨细胞前体所确定的。
在其他实施方式中，所述治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC降低了所
述个体中骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞）的数目，例如，如使
用对这些细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞或浆细胞）特异的抗体（例如，
对细胞标志物CD28或CD138特异的抗体）通过对来自所述个体的有核血
细胞的细胞计数（例如，通过流式细胞术）或抗体染色可确定的，或者如
可通过评价来自所述个体的血液中M蛋白水平确定的。在其他实施方式中，
与施用所述胎盘干细胞之前所述细胞的数目相比，所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC将所述骨相关癌细胞或所述破骨细胞前体的数目降低了至少（例
如）10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、
65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
在另一种实施方式中，所述个体患有软骨肉瘤；例如，所述骨相关癌
是软骨肉瘤。在某些实施方式中，所述治疗方法包括对所述个体中的软骨
肉瘤细胞数目或所述个体中的骨病变（例如，软骨肉瘤造成的块）数目中
的一种或多种在所述施用前确定一次或多次和/或在所述施用后确定一次或
多次。
在另一个方面，本文提供了抑制骨相关癌细胞增殖的方法，其包括将
所述骨相关癌细胞与多个胎盘干细胞和/或BM-MSC接触足以使所述胎盘
干细胞和/或BM-MSC与未与胎盘干细胞和/或BM-MSC接触的多个所述骨
相关癌细胞相比抑制（例如，可检测地抑制）所述骨相关癌细胞增殖的时
间，例如，如可通过所述骨相关癌细胞数目的减少（例如，可检测的减少）
或所述骨相关癌细胞数目增加的可检测减缓确定的。在某些实施方式中，
所述骨相关癌细胞是多发性骨髓瘤细胞。在所述方法的另一种实施方式中，
所述骨相关癌细胞是软骨肉瘤细胞。在其他实施方式中，所述骨相关癌细
胞是骨癌细胞、神经母细胞瘤细胞、骨肉瘤细胞、尤文氏肉瘤细胞、脊索
瘤细胞、骨恶性纤维组织细胞瘤细胞或骨纤维肉瘤细胞。在另一个具体的
实施方式中，所述骨相关癌细胞属于实性肿瘤。
在所述方法的某些实施方式中，所述接触是在体外进行的。在某些其
他实施方式中，所述接触是在体内进行的。在某些实施方式中，所述接触
是在包含所述骨相关癌细胞的个体中进行的，例如，在患有由所述细胞引
起的疾病的个体中进行。在其他实施方式中，所述接触是在包含多发性骨
髓瘤细胞的个体中进行的，例如，在患有多发性骨髓瘤的个体中进行。在
某些实施方式中，所述个体是哺乳动物，例如，人。在另一个具体的实施
方式中，所述接触包括将所述胎盘干细胞静脉内施用至所述个体中。在另
一个具体的实施方式中，所述接触包括将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在
所述个体的骨病变处或附近施用至所述个体。
在另一种实施方式中，所述抑制骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤
细胞）增殖的方法另外包括将所述骨相关癌细胞与一种或多种抗癌化合物
接触，例如，与治疗有效量的一种或多种抗癌化合物接触。在另一种实施
方式中，所述方法包括向所述个体施用至少约1×107、5×107、1×108、5×108、
1×109、5×109或1×1010个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在某些实施方式中，
所述胎盘干细胞和/或BM-MSC和/或两者已体外增殖了不超过2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25、26、27、28、29或30次群体倍增。在其他实施方式中，与在
不存在所述胎盘干细胞和/或BM-MSC的情况下相等所述骨相关癌细胞数
目的增殖相比，所述胎盘干细胞和/或BM-MSC将所述骨相关癌细胞的增殖
抑制了至少（例如）10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、
55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，例
如，可通过所述骨相关癌细胞数目的可检测减少或所述骨相关癌细胞数目
增加的可检测减缓确定的，或者如可通过具有所述癌细胞的个体中骨病变
的数目和/或严重性的可检测降低确定的。
在其他实施方式中，在所述接触之前已将所述胎盘干细胞或BM-MSC
或两者冷冻保存并融化。在另一种实施方式中，所述方法包括在所述接触
之前确定所述胎盘干细胞抑制（例如，可检测地抑制）所述骨相关癌细胞
样品的增殖。
在另一种实施方式中，本文提供了减少破骨细胞前体成熟为破骨细胞
的方法，其包括将所述破骨细胞前体与多个胎盘干细胞和/或BM-MSC接
触，其中所述多个胎盘干细胞和/或BM-MSC为足以减少（例如，可检测地
减少）从所述破骨细胞前体向破骨细胞成熟的多个细胞，例如，可通过由
于所述接触使破骨细胞数目可检测的减少或破骨细胞数目增加的减缓确定
的。在另一种实施方式中，本文提供了提高破骨细胞前体凋亡的方法，其
包括将所述破骨细胞前体与多个胎盘干细胞和/或BM-MSC接触，其中所述
多个胎盘干细胞和/或BM-MSC是足以提高（例如，可检测地提高）破骨细
胞前体凋亡的多个细胞。在某些实施方式中，所述破骨细胞前体凋亡的提
高是通过来自所述个体的破骨细胞前体的膜联蛋白V的可检测增加和/或碘
化丙啶染色所检测的。在某些实施方式中，所述破骨细胞前体位于个体中，
例如，患有骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤、软骨肉瘤或本文所述的其他
骨相关癌中的一种）的个体。在某些其他实施方式中，所述方法包括将所
述破骨细胞前体与来那度胺接触，例如，将来那度胺施用至具有所述破骨
细胞前体的个体。
在上述方法的某些实施方式中，所述接触在体外发生。在其他实施方
式中，所述接触在体内发生。在另一种实施方式中，所述接触在人中发生。
在另一种实施方式中，所述接触在患有骨相关癌的个体中发生，例如，在
具有骨相关癌细胞或患有由这类细胞引起的疾病的个体中发生。在另一种
实施方式中，所述个体是具有多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞的个体。
在另一种实施方式中，所述个体具有至少一种多发性骨髓瘤的症状。在另
一种实施方式中，所述个体具有至少一种由多发性骨髓瘤引起的骨病变。
在上述方法的某些实施方式中，所述胎盘干细胞为以下一种或多种：
（1）贴壁至组织培养塑料制品；（2）如可通过流式细胞术检测的CD34–、
CD10+、CD105+和CD200+；和/或（3）具有分化为成骨或软骨形成细胞的
能力，例如，体内分化或体外分化或两者。在另一种实施方式中，所述胎
盘干细胞贴壁至组织培养塑料制品；为如可通过流式细胞术检测的CD34–、
CD10+、CD105+和CD200+；和具有分化为具有成骨或软骨形成细胞的一种
或多种特征（例如，骨细胞或软骨细胞的特征）的细胞的能力，例如，体
内分化或体外分化或两者。在其他实施方式中，所述胎盘干细胞另外具有
分化为具有神经细胞或神经源性细胞的一种或多种特征（例如，神经元的
特征）；胶质细胞的一种或多种特征（例如，神经胶质或星形细胞的特征）；
成脂细胞的一种或多种特征（例如，脂肪细胞的特征）；胰腺细胞的一种
或多种特征；和/或心肌细胞的一种或多种特征的细胞的能力。在本文中胎
盘干细胞的每个实施方式的具体实施方式中，所述胎盘干细胞是分离的胎
盘干细胞。
在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+和
CD200+，以及CD44+、CD45–、CD90+、CD166+、KDR-或CD133–中的一种
或多种。在更具体的实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+
和CD200+、CD44+、CD45–、CD90+、CD166+、KDR-和CD133–。在另一种
实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+和CD200+，以及
HLA ABC+、HLA DR,DQ,DP–、CD80–、CD86–、CD98–或PD-L1+中的一种
或多种。在更具体的实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+
和CD200+、HLA ABC+、HLA DR,DQ,DP–、CD80–、CD86–、CD98–和PD-L1+。
在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34-、CD10+、CD105+和CD200+，
以及CD38-、CD45-、CD80-、CD86-、CD133-、HLA-DR,DP,DQ-、SSEA3-、
SSEA4–、CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A,B,C+、PDL1+、
ABC-p+和/或OCT-4+中的一种或多种，如可通过流式细胞术和/或RT-PCR
检测的。在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD45–、CD10+、
CD90+、CD105+和CD200+，如通过流式细胞术可检测的。在另一种实施方
式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD45–、CD10+、CD80–、CD86–、CD90+、
CD105+和CD200+，如可通过流式细胞术检测的。在另一种实施方式中，所
述胎盘干细胞是CD34–、CD45–、CD10+、CD80–、CD86–、CD90+、CD105+
和CD200+，并且另外是CD29+、CD38–、CD44+、CD54+、SH3+或SH4+中
的一种或多种，如通过流式细胞术可检测的。在另一种实施方式中，所述
胎盘干细胞是CD34–、CD38–、CD45–、CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、
CD73+、CD80–、CD86–、CD90+、CD105+和CD200+，如可通过流式细胞术
检测的。
在另一种实施方式中，所述CD34–、CD10+、CD105+和CD200+胎盘干
细胞另外是CD3–、CD9–、CD117–、CD133–、CD146+、CD166+、KDR-
（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-或编程死亡-1配体（PDL1）
+中的一种或多种，或它们的任意组合。在另一个具体的实施方式中，所述
胎盘干细胞是CD3–、CD9–、CD34–、CD38–、CD45–、CD 10+、CD29+、CD44+、
CD54+、CD73+、CD80–、CD86–、CD90+、CD105+、CD117–、CD133–、CD146+、
CD 166+、CD200+、KDR-（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-
或编程死亡-1配体（PDL1）+，如可通过流式细胞术检测的。
在另一种实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞另外是ABC-p+，如
通过流式细胞术可检测的，或OCT-4+（POU5F1+），例如，可通过RT-PCR
确定的，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白（也称为乳腺癌耐药蛋
白（BCRP）和耐米托蒽醌蛋白（MXR））。在另一种实施方式中，本文所
述的任何胎盘干细胞另外是SSEA3–或SSEA4–，例如，如通过流式细胞术
可确定的，其中SSEA3是阶段特异性胚胎抗原3，而SSEA4是阶段特异性
胚胎抗原4。在另一种实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞另外是
SSEA3–和SSEA4–。
在本文所述方法的另一种实施方式中，本文所述的分离的胎盘干细胞
的任何胎盘干细胞群体另外是MHC-I+（例如，HLA-A、B、C+）、MHC-II-
（例如，HLA-DP、DQ、DR-）或HLA-G–中的一种或多种。在另一种实施
方式中，本文所述的任何胎盘干细胞另外是MHC-I+（例如，HLA-A、B、
C+）、MHC-II–（例如，HLA-DP、DQ、DR-）和HLA-G-中的每一个。
在另一种实施方式中，所述CD34-、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干
细胞另外是CD3-、CD9-、CD29+、CD38-、CD44+、CD54+、CD80-、CD86-、
CD146+、CD166+、SH3+或SH4+中的一种或多种。在另一种实施方式中，
所述CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞另外是CD44+。在另一
种实施方式中，所述CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞另外是
CD3–、CD9–、CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、
CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+（CD73+）、SH4+（CD73+）、CD80–、
CD86–、CD90+、SH2+（CD105+）、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-
钙粘素low、CD184/CXCR4–、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、
KDR-（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–或编程死亡
-1配体（PDL1）+中的一种或多种，或者它们的任意组合。在另一种实施方
式中，所述CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞另外是CD13+、
CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L-、
CD62P–、SH3+（CD73+）、SH4+（CD73+）、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+
（CD105+）、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-钙粘素dim、CD146+、
CD166+、CD184/CXCR4–、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、
KDR-（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–和编程死亡
-1配体（PDL1）+。
在本文所公开的方法的其他实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是
CD200+和HLA-G-；CD73+、CD105+和CD200+；CD200+和OCT-4+；CD73+、
CD105+和HLA-G–；CD73+和CD105+；或OCT-4+；或者它们的任意组合。
在本文所公开的方法的某些实施方式中，所述胎盘干细胞是CD10+、
CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、
SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+、MHC-I+或ABC-p+中的一种或多种，其
中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白（也称为乳腺癌耐药蛋白（BCRP）
和耐米托蒽醌蛋白（MXR））。在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是
CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、
SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–和OCT-4+。在另一种实施方式中，所述胎
盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD45–、CD54+、SH2+、SH3+
和SH4+。在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34-、
CD38–、CD45–、CD54+、SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一种实施方
式中，所述胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34-、CD38–、CD44+、CD45–、
CD54+、CD90+、MHC-1+、SH2+、SH3+、SH4+。在另一种实施方式中，所
述胎盘干细胞是OCT-4+和ABC-p+。在另一种实施方式中，所述胎盘干细
胞是SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一种实施方式中，所述胎盘干细
胞是OCT-4+、CD34-、SSEA3-和SSEA4-。在具体的实施方式中，所述
OCT-4+、CD34-、SSEA3-和SSEA4-胎盘干细胞另外是CD10+、CD29+、
CD34–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一种
实施方式中，所述胎盘干细胞是OCT-4+和CD34–，以及SH3+或SH4+。在
另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–，以及CD10+、CD29+、CD44+、
CD54+、CD90+或OCT-4+。在某些实施方式中，所述胎盘干细胞是CD10+、
CD34–、CD105+和CD200+。
在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD44+、
CD45–、CD54/ICAM–、CD62-E–、CD62-L-、CD62-P–、CD80–、CD86–、CD103–、
CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-钙粘素dim、CD184/CXCR4–、
β2-微球蛋白dim、MHC-Idim、MHC-II–、HLA-Gdim和/或PDL1dim。在某些实
施方式中，这些胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞群体至少为CD29+和
CD54–。在另一种实施方式中，这些胎盘干细胞至少为CD44+和CD106+。
在另一种实施方式中，这些胎盘干细胞至少为CD29+。
在任何上述特征的某些实施方式中，通过流式细胞术确定了细胞标志
物的表达（例如，分化或免疫原性标志物簇）。在某些其他实施方式中，
通过RT-PCR确定了细胞标志物的表达。
在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞，例如，所述CD10+、CD34–、
CD105+、CD200+细胞，例如，聚集体中的细胞，以比相等数目的骨髓来源
的间质干细胞更高的水平（例如，可检测地更高水平）表达一种或多种基
因，其中所述一种或多种基因是以下一种或多种，或者全部，ACTG2、
ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、
COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、
GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、
KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、
PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、
TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，并且其中所述骨髓来源的间质干细胞
在培养中已经历了与所述分离的胎盘干细胞所经历的传代次数相等的传代
次数。在某些实施方式中，通过（例如）RT-PCR或微阵列分析（例如，使
用U133-A微阵列（Affymetrix））确定了所述一种或多种基因的所述表达。
在另一种实施方式中，当在包含60%DMEM-LG（例如，得自Gibco）和
40%MCDB-201（例如，得自Sigma）；2%胎牛血清（例如，得自Hyclone
Labs）；1×胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）；1×亚油酸-牛血清白蛋白（LA-BSA）；
10-9M地塞米松（例如，得自Sigma）；10-4M抗坏血酸2-磷酸酯（例如，
得自Sigma）；表皮生长因子10ng/mL（例如，得自R&D Systems）；和血
小板源生长因子（PDGF-BB）10ng/mL（例如，得自R&D Systems）的培养
基中培养（例如）约3至约35次之间任何次数的群体倍增时，所述胎盘干
细胞表达（例如，差异表达）所述一个或多个基因。在另一种实施方式中，
当在包含60%DMEM-LG（例如，得自Gibco）和40%MCDB-201（例如，
得自Sigma）；2%胎牛血清（例如，得自Hyclone Labs）；1×胰岛素-转铁
蛋白-硒（ITS）；1×亚油酸-牛血清白蛋白（LA-BSA）；10-9M地塞米松（例
如，得自Sigma）；10-4M抗坏血酸2-磷酸酯（Sigma）；表皮生长因子10ng/mL
（例如，得自R&D Systems）；和血小板源生长因子（PDGF-BB）10ng/mL
（例如，得自R&D Systems）的培养基中培养约3至约35次群体倍增时，
所述胎盘干细胞表达（例如，差异表达）所述一个或多个基因。
在某些实施方式中，所述胎盘干细胞以比相等数目的骨髓来源的间质
干细胞（BM-MSC）更高的水平（例如，可检测地更高水平）表达CD200
和ARTS1（1型肿瘤坏死因子氨肽酶调控因子）；ARTS-1和LRAP（白血
球源性精氨酸氨肽酶）；IL6（白细胞介素-6）和TGFB2（转化生长因子，
β2）；IL6和KRT18（角蛋白18）；IER3（即刻早期反应蛋白3）、MEST
（中胚层特异性转录本同源物）和TGFB2；CD200和IER3；CD200和IL6；
CD200和KRT18；CD200和LRAP；CD200和MEST；CD200和NFE2L3
（核因子（网织红细胞源性2）样3）；或者CD200和TGFB2，其中所述
骨髓来源的间质干细胞在培养中已经历了与所述胎盘干细胞所经历的传代
次数相等的传代次数。在其他实施方式中，所述胎盘干细胞以比相等数目
的骨髓来源的间质干细胞BM-MSC更高的水平（例如，可检测地更高水平）
表达ARTS-1、CD200、IL6和LRAP；ARTS-1、IL6、TGFB2、IER3、KRT18
和MEST；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2；
ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2；
或者IER3、MEST和TGFB2，其中所述骨髓来源的间质干细胞在培养中已
经历了与所述胎盘干细胞所经历的传代次数相等的传代次数。
在多种实施方式中，本文所公开的方法中有用的所述胎盘干细胞包含
在细胞群体内，所述细胞群体至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、
40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、
98%或99%的细胞是所述胎盘干细胞。在某些其他实施方式中，所述细胞
群体中的胎盘干细胞基本不含具有母体基因型的细胞；例如，所述群体中
至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、
95%、98%或99%的胎盘干细胞具有胎儿基因型，即，是胎儿来源的。在某
些其他实施方式中，包含所述胎盘干细胞的细胞群体基本不含具有母体基
因型的细胞；例如，所述群体中至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、
70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%的细胞具有胎儿基因型，
即，是胎儿来源的。在某些其他实施方式中，包含所述胎盘干细胞的细胞
群体包含具有母体基因型的细胞；例如，所述群体中至少10%、15%、20%、
25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、
85%、90%、95%、98%或99%的细胞具有母体基因型，即，是母体来源的。
在本文任何胎盘干细胞实施方式的实施方式中，当胎盘细胞群体在允
许胚状体样体（embryoid-like body）形成的条件下培养（例如，在增殖条
件下培养）时，胎盘干细胞有利于包含所述分离的胎盘干细胞的胎盘细胞
群体中一个或多个胚状体样体的形成。
在本文所公开的任何胎盘干细胞或BM-MSC的某些实施方式中，所述
细胞是哺乳动物细胞，例如，人细胞。
在某些实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞和/或BM-MSC对受体
是自体同源的，例如，患有骨相关癌的个体，例如，患有多发性骨髓瘤或
具有骨相关癌症状（例如，多发性骨髓瘤症状）的个体。在某些其他实施
方式中，胎盘干细胞和/或BM-MSC对受体是异源的，例如，患有骨相关癌
的个体，例如，患有多发性骨髓瘤或具有骨相关癌症状（例如，多发性骨
髓瘤症状）的个体。
在本文所公开的治疗方法或抑制骨相关癌细胞增殖的方法的某些实施
方式中，在所述施用前将胎盘干细胞和/或BM-MSC冷冻保存。在另一种实
施方式中，所述胎盘干细胞得自细胞库，例如，胎盘干细胞库。在另一种
实施方式中，所述BM-MSC得自骨髓来源的间质干细胞库。
在本文胎盘干细胞的任何实施方式中，胎盘干细胞在生长培养基（例
如，配制以促进（例如）在生长培养基中增殖期间增殖的培养基）中培养
期间一般不分化。在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞不需要饲养层来
增殖，例如，当在生长培养基中培养时不需要饲养层来增殖。在另一种实
施方式中，仅由于在不存在饲养细胞层的情况下培养，因此所述胎盘干细
胞在培养时不分化。
在本文分离的BM-MSC的任何实施方式中，细胞在生长培养基（即，
配制以促进（例如）在生长培养基中增殖期间增殖的培养基）中培养期间
一般不分化。在另一种实施方式中，所述分离的BM-MSC不需要饲养层来
增殖，例如，当在生长培养基中培养时不需要饲养层来增殖。在另一种实
施方式中，仅由于在不存在饲养细胞层的情况下培养，因此所述分离的
BM-MSC在培养时不分化。
在某些实施方式中，通过已排去血液并灌注以除去残余血液；已排去
血液但未灌注以除去残余血液；或即未排去血液又未灌注以除去残余血液
的产后胎盘的灌注获得了所述胎盘干细胞。在另一个具体的实施方式中，
通过胎盘组织的物理和/或酶促破环获得了所述胎盘干细胞。在另一个具体
的实施方式中，通过培养部分胎盘并允许胎盘干细胞从所述部分胎盘中增
殖获得了所述胎盘干细胞。
在以下5.2节中详细说明了在本文所提供的方法中有用的胎盘干细胞
的细胞表面、分子和遗传标志物特征。
在所述方法的另一个具体实施方式中，治疗有效量的所述胎盘干细胞
和/或BM-MSC是导致骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤）的一种或多种症状
的消除、可检测的改善、严重程度的减轻或进展的减缓的多个细胞。在具
体的实施方式中，骨相关癌的所述症状（例如，多发性骨髓瘤的所述症状）
是骨病变。在另一个具体的实施方式中，如（例如）通过密度测定法或骨
矿物含量（BMC）所测量的，如（例如）通过密度测定法所测量的，所述
治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC提高（例如，可检测地提高）了接
受所述细胞的个体的至少一块骨中的骨矿物密度（BMD）。在另一个具体
的实施方式中，例如，如通过X射线、MRI或CAT扫描等可见的，所述治
疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC减少（例如，可检测地减少）了骨病
变，例如，由所述骨相关癌所引起的至少一种骨病变。
在另一个具体的实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在所述
骨相关癌所引起的骨病变处或附近施用（即，病灶内施用）于患有骨相关
癌（例如，多发性骨髓瘤）的个体。在如上所述的方法的另一个具体实施
方式中，通过弹丸注射施用所述分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC。在另一
个具体的实施方式中，通过静脉内输注施用所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC。在具体的实施方式中，所述静脉内输注是约1至约8小时内的
静脉内输注。在另一个具体的实施方式中，颅内施用所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC。在另一个具体的实施方式中，腹膜内施用所述分离的胎盘干细
胞。在另一个具体的实施方式中，动脉内施用所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC。在所述治疗方法的另一个具体的实施方式中，肌内、皮内、皮
下或眼内施用所述胎盘干细胞和/或BM-MSC。
在如上所述的方法的另一种实施方式中，通过（例如）在由骨相关癌
所引起的骨病变处或附近向所述个体手术植入包含所述细胞的物质组合物
来施用所述胎盘干细胞和/或BM-MSC。在具体的实施方式中，所述物质组
合物是基质或支架。在另一个具体的实施方式中，所述基质或支架是水凝
胶。在另一个具体的实施方式中，所述基质或支架是脱细胞化组织。在另
一个具体的实施方式中，所述基质或支架是合成生物可降解组合物。在另
一个具体的实施方式中，所述基质或支架是泡沫。在另一个具体的实施方
式中，所述基质或支架是生理学可用的陶瓷材料，例如，磷酸一钙、磷酸
二钙、磷酸三钙、α-磷酸三钙、β-磷酸三钙和磷酸四钙、羟基磷灰石、氟磷
灰石、硫酸钙、氟化钙、氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃（例
如，）或它们中任何的混合物。在另一个具体的实施方式中，
所述基质或支架是多孔生物相容性陶瓷材料（例如，
等）或矿化胶原骨移植产物（例如，HEALOSTM、
RHAKOSSTM和等）。
在如上所述的方法的另一个具体实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC一次施用至所述个体。在另一个具体的实施方式中，以两次或更
多次独立的施用将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施用于所述个体。在另一
个具体的实施方式中，所述施用包括施用约1×104至1×105个胎盘干细胞和
/或BM-MSC（例如，每千克所述个体）。在另一个具体的实施方式中，所
述施用包括施用约1×105至1×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个
体。在另一个具体的实施方式中，所述施用包括施用约1×106至1×107个胎
盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体。在另一个具体的实施方式中，所述
施用包括施用约1×107至1×108个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体。
在其他具体的实施方式中，所述施用包含施用约1×106至约2×106个胎盘干
细胞和/或BM-MSC/千克所述个体；约2×106至约3×106个胎盘干细胞和/
或BM-MSC/千克所述个体；约3×106至约4×106个胎盘干细胞和/或
BM-MSC/千克所述个体；约4×106至约5×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/
千克所述个体；约5×106至约6×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述
个体；约6×106至约7×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体；约
7×106至约8×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体；约8×106至
约9×106个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体；或约9×106至约1×107
个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体。在另一个具体的实施方式中，
所述施用包括施用约1×107至约2×107个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所
述个体至所述个体。在另一个具体的实施方式中，所述施用包括施用约
1.3×107至约1.5×107个胎盘干细胞和/或BM-MSC/千克所述个体至所述个
体。在另一个具体的实施方式中，所述施用包括施用多至约3×107个胎盘干
细胞和/或BM-MSC/千克所述个体至所述个体。在具体的实施方式中，所述
施用包括施用约5×106至约2×107个胎盘干细胞和/或BM-MSC至所述个体。
在另一个具体的实施方式中，所述施用包括以约20毫升溶液将约150×106
个胎盘干细胞和/或BM-MSC施用至所述个体。
在如上所述的方法的某些实施方式中，按细胞数目计，所述BM-MSC
以比所述胎盘干细胞一般至少大50%的量使用。
在具体的实施方式中，所述施用包括施用约5×106至约2×107个胎盘干
细胞和/或BM-MSC至所述个体，其中所述细胞包含在含有10%葡聚糖（例
如，葡聚糖-40）、5%人血清白蛋白和可选地免疫抑制剂的溶液中。
在另一个具体的实施方式中，所述施用包括静脉内施用约5×107至
3×109个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在具体的实施方式中，所述施用包括
静脉内施用约9×108个胎盘干细胞和/或BM-MSC或约1.8×109个胎盘干细
胞和/或BM-MSC。在另一个具体的实施方式中，所述施用包括病灶内施用
约5×107至1×108个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在另一个具体的实施方式
中，所述施用包括病灶内施用约9×107个胎盘干细胞和/或BM-MSC。
在所述治疗方法的另一个具体实施方式中，在骨相关癌（例如，多发
性骨髓瘤）的诊断或骨相关癌的一种或多种症状的发展的21-30天内（例如，
21天）；7天内；48小时内；或24小时内将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC
施用于所述个体。
在某些实施方式中，可以通过基因工程设计在本文所提供的方法中使
用的胎盘干细胞和/或BM-MSC以产生抑制骨相关癌细胞（例如，多发性骨
髓瘤细胞）生长或增殖的一种或多种蛋白质。例如，在某些实施方式中，
所述一种或多种蛋白质可以包括骨保护素、一种或多种骨形态发生蛋白
（BMP）；一种或多种连接蛋白，例如，连接蛋白26（Cx26）和/或连接蛋
白43（Cx43）；骨桥蛋白；或活化素A。在其他实施方式中，已工程设计
了胎盘干细胞和/或BM-MSC，从而当所述肿瘤细胞与所述胎盘干细胞和/
或BM-MSC接触时与不表达外源IFN-β或IL-2的这些细胞相比使所述胎盘
干细胞和/或BM-MSC（例如）以导致肿瘤细胞增殖更大（例如，可检测地
更大）的抑制的量表达外源IFN-β或IL-2。本文还提供了包含这些基因工
程胎盘干细胞和/或BM-MSC的药物组合物以用于在抑制骨相关癌细胞（例
如，多发性骨髓瘤细胞）的生长或增殖中使用，或者用于治疗具有骨相关
癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞）的个体。
3.1定义
如本文所使用的，当涉及说明的数值时，术语“约”表示所说明的数值正
或负10%内的值。
如本文所使用的，在骨相关癌的背景中“骨病变”表示由骨相关癌所引起
的或者是骨相关癌症状的骨生长或结构的异常。在非限制性实例中，多发
性骨髓瘤一般导致溶骨性病变，它是由骨脱矿物质所引起的骨蚀空区。在
另一个非限制性实例中，软骨肉瘤一般导致以一个或多个骨的生长为特征
的病变，通常包括可以钙化的软骨生长。
如本文所使用的，“骨髓来源的间质干细胞”也称为BM-MSC，它是指
获自骨髓的或者从获自骨髓的间质干细胞培养的间质干细胞，例如，美国
专利No.5486359中所公开的细胞，该专利的公开内容作为参考并入本文。
如本文所使用的，术语“骨相关癌”是指在疾病的任何期影响或转移至患
有癌的个体中一个或多个骨的癌。例如，由于癌影响了骨，因此多发性骨
髓瘤是骨相关癌；多发性骨髓瘤的一个方面是至少部分由于多发性骨髓瘤
细胞分泌的细胞因子所导致的破骨细胞活性的上调所引起的骨病变的发
展。
如本文所使用的，在将胎盘干细胞与骨相关癌细胞接触的背景下“接触”
涵盖（但不要求）将细胞放置如此接近从而使它们实际彼此物理接触（例
如，在多孔板等中的共培养），和将细胞放置在相同空间内而无实际物理
接触，但在相同空间中（例如，在培养系统）或者施用给个
体（例如，人）。如本文所使用的“接触”涵盖在（例如）单个容器（例如，
培养皿、烧瓶、小瓶等）中将胎盘干细胞和骨相关癌细胞体外放置在一起。
“接触”还涵盖（例如）在相同个体（例如，哺乳动物，例如，小鼠、大鼠、
狗、猫、绵羊、山羊、马、人等）中将胎盘干细胞和肿瘤细胞放置在一起
或体外放置。例如，可以通过将胎盘干细胞静脉内施用至患有所述骨相关
癌的个体或者通过直接注射到肿瘤位点（例如，由骨相关癌所引起的骨病
变）等来将胎盘干细胞与骨相关癌细胞接触。可以通过将胎盘干细胞和骨
相关癌细胞静脉内施用至（例如）实验动物来使胎盘干细胞与骨相关癌细
胞接触。
如本文所使用的，术语“SH2”是指结合细胞标志物CD105上的表位的
抗体。因此，称为SH2+的细胞是CD105+。
如本文所使用的，术语“SH3”和“SH4”是指结合细胞标志物CD73上所
存在的表位的抗体。因此，称为SH3+和/或SH4+的细胞是CD73+。
胎盘具有在其中发育的胎儿的基因型，但是在妊娠期间它还与母体组
织紧密物理接触。照此，如本文所使用的，术语“胎儿基因型”表示胎儿的基
因型，例如，与从中获得如本文所述的特定的分离胎盘干细胞的胎盘有关
的胎儿基因型，与带有胎儿的母体的基因型相反。如本文所使用的，术语“母
体基因型”表示带有胎儿的母体的基因型，例如，与从中获得如本文所述的
特定的分离胎盘干细胞的胎盘有关的胎儿。
如本文所使用的，如果在（例如）干细胞的收集和/或培养期间从干细
胞中除去了至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的干细胞
与之天然相联系的其他细胞，那么干细胞（例如，胎盘干细胞）得到“分离”。
如本文所使用的，当涉及细胞时，“多能的”表示细胞具有分化成一些（但
不必需是所有）体细胞类型或者分化成具有一些（但不必需是所有）体细
胞类型的特征的细胞或者分化成三种胚层中的一种或多种的细胞的能力。
在某些实施方式中，例如，如以下5.2节中所述的具有分化成具有神经细胞、
软骨形成细胞和/或生骨细胞特征的细胞的能力的分离胎盘干细胞（PDAC）
是多能细胞，
如本文所使用的，术语“分离的细胞群体”表示基本上与组织（例如，从
中获得或分离细胞群体的胎盘）的其他细胞分离的细胞群体。在某些实施
方式中，细胞群体与至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、
90%、95%、98%或99%的组织（例如，从中获得或分离细胞群体的胎盘）
的其他细胞分离。
如本文所使用的，术语“胎盘干细胞”是指来源于哺乳动物胎盘的干细胞
或祖细胞，例如，如下所述，作为原代分离细胞或培养细胞而不考虑该细
胞是否是原代细胞、原代细胞培养的一部分或者已在原代培养后传代。如
果细胞显示出与一种或多种类型的干细胞有关的标志物或基因表达谱；在
培养中复制至少10-40次的能力；和分化成显示出三种胚层中一种或多种的
分化细胞的特征的细胞的能力中的一种、两种或三种，那么认为该细胞（例
如，“胎盘干细胞”）是“干细胞”。除非在本文中另作说明，否则术语“胎盘”
包括脐带。在某些实施方式中，本文所公开的分离的胎盘细胞（例如，胎
盘干细胞）在分化条件下体外分化、体内分化或两者。
如本文所使用的，当标志物通过（例如）抗体介导或核酸介导的检测
在背景上是可检测的时，细胞或细胞群体对特定标志物是“阳性的”。例如，
可以通过抗体的使用或者基于编码该标志物的基因或mRNA的序列通过寡
核苷酸探针或引物来完成特定标志物的检测。例如，由于CD73在胎盘干细
胞上是以比背景（与（例如）抗体同型对照相比）更大（例如，可检测地
更大）的量可检测的，因此胎盘干细胞对于（例如）CD73是阳性的。当由
细胞所提供或表达时标志物可用于将该细胞与至少一种其他细胞类型进行
区分或可用于选择或分离该细胞时，该细胞对于标志物也是阳性的。在（例
如）抗体介导的检测的背景中，作为存在特定细胞表面标志物的指示，“阳
性”表示使用对该标志物特异的抗体（例如，荧光标记抗体）该标志物是可
检测的；“阳性”还是指显示出处于在（例如）血细胞计数器中产生高于（例
如，可检测地高于）背景的信号的量的标志物的细胞。例如，当用对CD200
特异的抗体标记（例如，可检测地标记）细胞并且来自该抗体的信号高于
（例如，可检测地高于）对照（例如，同型对照的背景）的信号时，则该
细胞是“CD200+”。例如，如果如（例如）通过如RT-PCR、狭缝印迹等检测
RNA的方法所确定的，在来自细胞或细胞群体的RNA中所检测的OCT-4
RNA的量可检测地大于背景时，可以将细胞或细胞群体确定为OCT-4+。在
某些实施方式中，如果OCT-4是使用RT-PCR可检测的，则确定OCT-4存
在并且细胞为“OCT-4+”。除非在本文中另作说明，否则使用抗体检测分化
（“CD”）标志物簇。就HLA-G而言，在某些实施方式中，如果群体中大于
5%的细胞对HLA-G是阳性的（例如，用抗HLA-G抗体可检测地染色），
则胎盘干细胞群体对HLA-G是阳性的。
如本文所使用的，对除HLA-G以外的所有标志物，如果（例如）与对
照（例如，背景或同型对照）相比使用对该标志物特异的抗体时细胞标志
物是不可检测的，或者使用核酸基检测方法（例如，RT-PCR）时是不可检
测的，则胎盘干细胞对特定细胞标志物是“阴性的”。例如，当未使用对CD34
特异的抗体可重复、可检测地将细胞标记至比对照（例如，背景或同型对
照）更大的程度时，则细胞是“CD34–”。使用适当的对照并使用其他（例如）
核酸介导的检测方法，可以以类似的方式使用抗体将标志物（例如，未检
测到或不可检测的标志物）确定为阳性或阴性的。除非在本文中另作说明，
否则使用抗体检测分化（“CD”）标志物簇。就HLA-G而言，在某些实施方
式中，如果群体中5%或更少的细胞对HLA-G是阳性的（例如，用抗HLA-G
抗体可检测地染色），则胎盘干细胞群体对HLA-G是阴性的。
如本文所使用的，当涉及在流式细胞术中可检测的标志物的表达时，
符号“低（low）”或“模糊（dim）”表示所表达的该标志物小于所测试细胞的
10%，或者在（例如）流式细胞术中由该标志物所发出的荧光小于背景之上
的1log。
如本文所使用的，“治疗”涵盖了疾病、病症或病况或其任何参数或症状
的治愈、补救、改善、严重程度的减轻或者时间过程的缩短。
4.附图说明
图1：胎盘干细胞改善了实验大鼠中骨缺损的修复。Y轴：如通过面积
所评价的颅骨骨缺损的闭合程度。X轴-条件：仅与
骨形态发生蛋白2（BMP-2）相结合；和胎盘干细胞；
和骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC）；或者无修复作用（空白）。星号
表示相对于对照，结合骨形态发生蛋白2（BMP-2）；
结合胎盘干细胞；以及结合BM-MSC中缺损修复的显著改善
（p<0.05）。
图2：胎盘干细胞抑制破骨细胞前体的分化。X轴：破骨细胞（OC）；
未与胎盘干细胞或骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC）共培养的破骨细胞
前体。Y轴：所形成的成熟破骨细胞的数目。
图3：胎盘干细胞降低了来自不同个体的肿瘤细胞的生长。用编码荧光
素酶的基因转染多发性骨髓瘤细胞（细胞系BN、JB、ARP1、U266、Dn
和Hale）并与（从左至右在每种条件下）胎儿间质干细胞（FB-MSC）、患
者骨髓来源的间质干细胞（Pt-MSC），或胎盘干细胞共培养。将几周后多
发性骨髓瘤细胞生长的降低表示为相比于和FB-MSC共培养的多发性骨髓
瘤细胞的荧光素酶表达，与胎盘干细胞或Pt-MSC共培养的多发性骨髓瘤细
胞中荧光素酶表达的倍数值。
图4：实验图，其中在膜的下侧培养胎盘干细胞或间质
干细胞，而在膜的上侧培养多发性骨髓瘤细胞。
图5：胎盘干细胞（PDAC）和胎儿骨髓来源的间质干细胞（胎儿MSC）
对来自六位不同患者的多发性骨髓瘤细胞的抑制（X轴）。Y轴：与在不
存在胎盘干细胞的情况下培养的骨髓瘤细胞相比的百分比活力。
图6：胎盘干细胞降低了SCID-rab/SCID-hu小鼠中多发性骨髓瘤细胞
的生长。通过如通过ELISA所评价的来自小鼠的血清中存在的人抗体的滴
度来评价多发性骨髓瘤细胞的数目。Pre-Rx：施用骨髓瘤细胞之前人抗体的
滴度。2WK、4WK：单独（对照）或与胎盘干细胞一起施用多发性骨髓瘤
细胞两周和四周后人抗体的滴度。
图7：如通过X射线所评价的，SCID-rab/SCID-hu小鼠中骨植入物的
骨质量密度的变化。BMD：骨矿物密度。
图8-9：胎盘干细胞对骨髓瘤骨疾病和肿瘤生长的影响是剂量依赖性的
并且与胎儿MSC可比较。植入患者两骨髓瘤细胞的SCID-rab小鼠。（A-C）
一旦建立高肿瘤负荷，对宿主病灶内注射赋形剂，0.1、0.5和1×106个胎盘
干细胞，或使用HyStem-C水凝胶载体皮下植入5×106个胎盘干细胞（有关
详细内容参见方法）（6-7只小鼠/组）。
图8：处理前（Pre-Rx）、用胎盘干细胞处理后2周和4周时人免疫球
蛋白（Ig）的变化。IL=0.1、0.5或1×106个细胞的病灶内施用。SC=细胞的
皮下施用。CONT=对照（无细胞）。
图9：所植入的骨髓瘤骨与预处理水平相比的骨矿物密度的变化。
IL=0.1、0.5或1×106个细胞的病灶内施用。SC=细胞的皮下施用。CONT=
对照（无细胞）。
图10：对宿主病灶内注射赋形剂或者1×106个胎盘干细胞或MSC。图
10显示了所植入的骨髓瘤骨与预处理水平相比的骨矿物密度的变化。左侧
条件：对照（无细胞）；中间条件：胎盘干细胞；右侧条件：骨髓来源的
间质干细胞。
图11：对宿主病灶内注射赋形剂或者1×106个胎盘干细胞或MSC。图
11显示了处理前（Pre-Rx）和实验结束时人Ig的变化。左侧条件：对照（无
细胞）；中间条件：胎盘干细胞；右侧条件：骨髓来源的间质干细胞。
图12：在存在或不存在胎盘干细胞的情况下，在培养或共培养的第5
天，每孔多发性骨髓瘤细胞系细胞（U-266、RPMI-8226、L363和OMP-2）
的平均数（n=3）的比较。为对照和实验条件的每个多发性骨髓瘤细胞系提
供了P-值。
图13A-13C：对于多发性骨髓瘤细胞系H929（图13A）、OPM-2（图
13B）和LP1（图13C），成视网膜细胞瘤（Rb）蛋白在丝氨酸780（S780）
或丝氨酸807和811（S807/S811）处的磷酸化作用的降低。D2：共培养的
第2天。D4：共培养的第4天。GM：Rb磷酸化作用提高/降低的几何平均
数。Δ：几何平均数的变化。
图14：在存在1μM来那度胺的情况下培养时所形成的破骨细胞数目。
粗水平线代表对照孔中形成的破骨细胞的数目。
图15：当与仅胎盘干细胞（PDAC）、骨髓来源的间质干细胞（BM-MCS）
或者PDAC和来那度胺的组合一起共培养时所形成的破骨细胞的数目。
5.发明详述
5.1使用分离的胎盘干细胞和/或间质干细胞治疗骨相关癌
本文提供了治疗患有骨相关癌的个体的方法，其包括向所述个体施用
分离的胎盘干细胞，具体地，以下5.2节中详细说明的在本文中还称为PDAC
（胎盘源贴壁细胞）的分离的胎盘干细胞，和/或骨髓来源的间质干细胞
（BM-MSC），例如，所述细胞之一或两者的治疗有效量。骨相关癌无限
制地包括多发性骨髓瘤、骨癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、软
骨肉瘤、脊索瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、骨纤维肉瘤、前列腺癌或以骨
转移为特征的任何形式的转移性癌。在某些实施方式中，骨相关癌不包括
前列腺癌。在某些实施方式中，分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用是
治疗有效的以减少、改善或逆转与骨相关癌有关的一种或多种症状，例如，
由癌对个体中一个或多个骨的影响（例如，可归因于骨相关癌的骨缺损）
所引起的，与之相关联或与之有关的症状。如本文所提供的用胎盘干细胞
和/或BM-MSC对骨相关癌的治疗可以发生在如以下所讨论的第二抗癌疗
法之前、之后或同时发生。因此，在一种实施方式中，在用第二抗癌疗法
治疗癌之前治疗了作为骨相关癌的症状的骨缺损。在另一种实施方式中，
在用第二抗癌疗法治疗癌的同时或者接近同时治疗了作为骨相关癌的症状
的骨缺损。在另一种实施方式中，在用第二抗癌疗法治疗癌之后治疗了作
为骨相关癌的症状的骨缺损。
在一个方面，本文提供了治疗患有骨相关癌的个体的方法，其包括向
所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC。在一种实施方式
中，本文提供了治疗患有骨相关癌的个体的方法，其包括向所述个体施用
一段时间的治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC从而使所述胎盘干细
胞和/或BM-MSC足以改善（例如，可检测地改善）所述骨相关癌的一种或
多种症状，或者降低（例如，可检测地降低）所述骨相关癌的发展。在具
体的实施方式中，所述骨相关癌是多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方
式中，所述骨相关癌是肉瘤。在其他具体的实施方式中，所述骨相关癌是
骨癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、脊索瘤、骨恶性纤维组织细
胞瘤或骨纤维肉瘤。在另一个具体的实施方式中，所述骨相关癌包括实性
肿瘤。在另一个具体的实施方式中，所述骨相关癌不是前列腺癌。
如本文所使用的，“施用一段时间足以”等涵盖了（例如）施用细胞（例
如，单位细胞），然后在足以确定所述一种或多种症状中任何变化的时间
内评价骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤）的一种或多种症状，例如，在1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22或23小时，或者1、2、3、4、5或6天，或者1、2、3或4周
等的时间过程内。如果未检测到变化，则可以进行一次或多次后续施用。
在某些实施方式中，骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤）的治疗包括将
一定量（例如，治疗有效量）的分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC施用至具
有骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞）的个体，其中所述胎盘干细
胞和/或BM-MSC中的至少一些直接接触骨相关癌细胞中的至少一些，例
如，在所述胎盘干细胞和/或BM-MSC的至少一些和所述骨相关癌细胞的至
少一些之间存在直接细胞-细胞接触。在某些其他实施方式中，骨相关癌（例
如，多发性骨髓瘤）的治疗包括将一定量（例如，治疗有效量）的胎盘干
细胞和/或BM-MSC施用至具有骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞）
的个体，其中没有或基本没有所述胎盘干细胞和/或BM-MSC直接接触所述
骨相关癌细胞，例如，在大部分或任何所述胎盘干细胞和/或BM-MSC和所
述骨相关癌细胞之间没有或基本没有直接细胞-细胞接触。
在某些实施方式中，将胎盘干细胞和/或BM-MSC病灶内（例如）直接
施用到由骨相关癌所引起的一个或多个骨病变或施用到其附近（例如，约
1-5厘米内）。在某些实施方式中，将胎盘干细胞和/或BM-MSC与基质（例
如，可注射基质）结合施用。在某些其他实施方式中，将胎盘干细胞和/或
BM-MSC与海藻酸盐或与富血小板血浆结合施用到患有骨相关癌的个体。
在某些其他实施方式中，将胎盘干细胞和/或BM-MSC与固体基质（例如，
骨替代物，以下5.7.4节中所述的基质或骨替代物）结合施用给患有骨相关
癌的个体。
在某些其他实施方式中，将胎盘干细胞和/或BM-MSC静脉内施用给个
体。可以从任何容器并且通过医学上适合于液体（例如，包含细胞的液体）
递送的任何递送系统将胎盘干细胞和/或BM-MSC施用给个体。这些容器可
以是（例如）无菌塑料袋、烧瓶、罐或者可以容易地从中分配胎盘干细胞
或BM-MSC的其他容器。例如，所述容器可以是血袋或者是适合于液体静
脉内施用至受者的其他医学上可用的塑料袋。
病灶内或静脉内施用可以在单个剂量中包含（例如）约至少或者不超
过1×105、5×105、1×106、5×106、1×107、5×107、1×108、5×108、1×109、5×109、
1×1010、5×1010、1×1011个或更多个分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC。在某
些实施方式中，BM-MSC的剂量包含比胎盘干细胞（例如，PDAC）的剂
量多约50%的细胞。
在一种实施方式中，病灶内或静脉内施用可以在单一剂量中包含约
2×108个胎盘干细胞。在另一种实施方式中，病灶内或静脉内施用可以在单
一剂量中包含约8×108个胎盘干细胞。在治疗过程中，可以施用一次或多于
一次的分离的胎盘干细胞。优选地，所施用的胎盘干细胞包含至少50%或
以上的活细胞（也就是，在胎盘干细胞群体中至少约50%、60%、70%、80%、
90%、95%、98%或99%的胎盘干细胞是功能性的或活的）。优选地，在群
体中至少约60%的细胞是有活力的。更优选地，在药物组合物中群体中至
少约70%、80%、90%、95%或99%的细胞是有活力的。
除治疗骨相关癌症状（例如，多发性骨髓瘤的症状，如骨病变）之外，
分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用可以抑制骨相关癌细胞（例如，多
发性骨髓瘤细胞）的增殖或生长。增殖的抑制可以涵盖（例如）降低肿瘤
细胞的生长或增殖速率或者杀死一些或全部肿瘤细胞。因此，在另一个方
面，本文提供了抑制骨相关癌细胞增殖的方法，其包括将所述多个肿瘤细
胞与多个胎盘干细胞和/或BM-MSC接触足以使所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC与未与胎盘干细胞和/或BM-MSC接触的多个所述骨相关癌细胞
相比抑制（例如，可检测地抑制）所述骨相关癌细胞的增殖的一段时间，
例如，可通过在处理后这些细胞数目可检测的减少或在处理后这些细胞数
目增加的可检测的减缓确定的。在具体的实施方式中，所述骨相关癌细胞
是多发性骨髓瘤细胞、骨癌细胞、神经母细胞瘤细胞、骨肉瘤细胞、尤文
氏肉瘤细胞、软骨肉瘤细胞、脊索瘤细胞、骨恶性纤维组织细胞瘤细胞、
转移到骨的癌的细胞、前列腺癌细胞或骨纤维肉瘤细胞。在另一个具体的
实施方式中，所述骨相关癌细胞是实性肿瘤细胞或是实性肿瘤范围内的细
胞。在另一个具体的实施方式中，所述骨相关癌细胞不是前列腺癌细胞。
在另一个具体的实施方式中，所述接触是在体外进行的。在另一个具
体的实施方式中，通过（例如）将所述细胞施用于具有骨相关癌（例如，
多发性骨髓瘤或软骨肉瘤）细胞的个体在体内进行所述接触。在另一个具
体的实施方式中，所述个体是哺乳动物。在另一个具体的实施方式中，所
述哺乳动物是人。在另一个具体的实施方式中，所述接触包括将所述胎盘
干细胞和/或BM-MSC静脉内施用至所述个体。在另一个具体的实施方式
中，所述接触包括将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在由所述骨相关癌所引
起的骨病变处或附近（例如）病灶内或骨内施用至所述个体。
在另一种实施方式中，通过将所述骨相关癌细胞与胎盘干细胞和/或
BM-MSC接触抑制骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤细胞）增殖的方法
另外包括将所述骨相关癌细胞与一种或多种抗癌化合物（例如，5.1.3节中
的一种或多种抗癌化合物）接触，例如，将一种或多种所述抗癌化合物施
用至所述个体。
在另一种实施方式中，所述方法包括将至少1×107个胎盘干细胞和/或
BM-MSC以总细胞数目施用至所述个体。在另一个具体的实施方式中，所
述方法包括将至少1×108个胎盘干细胞和/或BM-MSC以总细胞数目施用至
所述个体。在另一个具体的实施方式中，在施用之前所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC已体外增殖了不超过30次群体倍增。在另一个具体的实施方式中，
在施用之前所述胎盘干细胞和/或BM-MSC已体外增殖了不超过10次群体
倍增。在另一个具体的实施方式中，在所述接触之前已将所述胎盘干细胞
和/或BM-MSC冷冻保存并融化。
在所述方法的另一个具体的实施方式中，与（例如）在不存在所述胎
盘干细胞和/或BM-MSC的情况下相等数目的骨相关癌细胞的增殖相比，所
述胎盘干细胞和/或BM-MSC将所述骨相关癌细胞的增殖抑制了（例如）至
少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在某些实施
方式中，可以通过（例如）比较施用胎盘干细胞和/或BM-MSC前后来自患
有骨相关癌的个体的组织（例如，血液）样品中骨相关癌细胞的数目来评
价增殖的减少百分比。在另一个具体的实施方式中，所述方法包括在所述
接触之前确定所述胎盘干细胞和/或BM-MSC抑制（例如，可检测地抑制）
所述骨相关癌细胞样品的增殖。在该实施方式中，例如，可以通过（例如）
抽取胎盘干细胞和/或BM-MSC群体的样品（例如，来自干细胞库的单位或
批的样品等）来确定胎盘干细胞和/或BM-MSC抑制所述骨相关癌细胞样品
的增殖。在任何本文所公开的方法中，例如，本文所公开的治疗方法、抑
制肿瘤生长的方法或抑制破骨细胞成熟的方法，胎盘干细胞（例如，PDAC）
或BM-MSC可以单独使用，或者胎盘干细胞和BM-MSC可以组合使用。
当组合使用时，可以将所述细胞混合从而使它们是同时可施用的，例如，
在相同的细胞单元中；或者可以是单独可施用的，例如，维持在单独的细
胞单元（例如，单独的血液型袋）中。当组合使用时，胎盘干细胞和BM-MSC
的施用可以一起同时发生，或者可以在分开的时间发生。
本文还提供了减少破骨细胞前体成熟为破骨细胞的方法，其包括将所
述破骨细胞前体与多个分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的
BM-MSC或骨髓中的BM-MSC）接触，其中所述多个胎盘干细胞和/或
BM-MSC是足以减少（例如，可检测地减少）破骨细胞从所述破骨细胞前
体成熟的多个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在具体的实施方式中，所述接触
是在体外发生的。在另一个具体的实施方式中，所述接触是在体内发生的。
在另一个具体的实施方式中，所述接触是在哺乳动物，例如，在人中发生
的。在另一个具体的实施方式中，所述接触是在具有多发性骨髓瘤或包含
多发性骨髓瘤细胞或具有多发性骨髓瘤的一种或多种症状的个体中发生
的。在另一个具体的实施方式中，所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状包
括一种或多种骨病变，或者由破骨细胞的活性所引起的骨疼。
在另一种实施方式中，本文提供了提高破骨细胞前体细胞凋亡的方法，
其包括将所述破骨细胞前体与多个胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离
的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC）接触，其中所述多个胎盘干细胞和/或
BM-MSC是足以提高（例如，可检测地提高）破骨细胞前体细胞凋亡的多
个胎盘干细胞和/或BM-MSC。在具体的实施方式中，所述接触是在体外发
生的。在另一个具体的实施方式中，所述接触是在体内发生的。在另一个
具体的实施方式中，所述接触是在人中发生的。在另一个具体的实施方式
中，所述接触是在具有多发性骨髓瘤或包含多发性骨髓瘤细胞或具有多发
性骨髓瘤的一种或多种症状的个体中发生的。在另一个具体的实施方式中，
所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状包括一种或多种骨病变，或者由破骨
细胞的活性所引起的骨疼。在另一个具体的实施方式中，破骨细胞前体细
胞凋亡的所述增加是通过来自所述个体的破骨细胞前体的膜联蛋白V的可
检测增加和碘化丙啶染色所检测的。
在任何上述实施方式中，所述胎盘干细胞和/或BM-MSC可以是基因工
程胎盘干细胞，例如，以下5.7.2节中所述的基因工程细胞。
在任何本文所公开的方法中，所述个体是哺乳动物。在具体的实施方
式中，所述哺乳动物是人。
在任何本文所公开的方法中，所述BM-MSC可以是分离的骨髓来源的
间质干细胞，例如，培养或购自商业来源的BM-MSC，或者可以是骨髓内
所包含的BM-MSC，例如，骨髓吸出物、粗骨髓等。
5.1.1多发性骨髓瘤的治疗
本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方法，其包括向所述个体
施用胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述分离的胎盘干细胞具有以下5.2
节中所述特征的任意组合或全部。
多发性骨髓瘤是浆细胞癌，浆细胞是产生抗体的免疫系统细胞。该疾
病通常具有三种主要特征：骨病变，其发展可以导致骨疼和血钙升高；贫
血；和肾衰竭。
在某些实施方式中，本文提供了治疗具有一种或多种多发性骨髓瘤相
关疾病或病况或其症状的个体的方法。在具体的实施方式中，所述多发性
骨髓瘤相关疾病或病况是意义未明的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）、冒烟
型骨髓瘤（例如，冒烟型多发性骨髓瘤）、孤立性浆细胞瘤、良性单克隆
丙种球蛋白病、无症状单克隆丙种球蛋白病（asymptomatic monoclonal
gammopathy）、非骨髓瘤性单克隆丙种球蛋白病、分散性单株丙种球蛋白
病、隐源性单克隆丙种球蛋白病、无症状单克隆丙种球蛋白病（lanthanic
monoclonal gammopathy）、初期单克隆丙种球蛋白病、血免疫球蛋白异常、
无症状副免疫球蛋白血症（paraimmunoglobulinemia）或特发性副蛋白血症。
在某些实施方式中，具有冒烟型骨髓瘤的人显示出血液副蛋白，但是未显
示出多发性骨髓瘤的其他症状。
在某些实施方式中，症状如下所述。
骨病变和骨疼-骨髓瘤细胞分泌破骨细胞激活因子，它是激活破骨细
胞以分解骨的细胞因子，从而产生了疼痛性骨病变。这些骨病变在（例如）
X射线放射照片中是可见的，它们在本质上是溶解性的并且通常作为其中
骨表现为缺少或“冲孔”的一种或多种区域出现。骨髓瘤骨疼通常涉及脊柱和
肋骨，并且随着活动而恶化。可能存在持续局部疼痛并且它们可以指示病
理性骨折。脊椎的涉及可能会导致脊髓压迫。骨的分解还导致钙向血液的
释放，从而引起血钙过多及其相关症状。
贫血-骨髓瘤中所发现的贫血通常是正常红细胞性贫血和正常色素性
贫血，并且是由于通过浸润性瘤细胞的正常骨髓替换以及细胞因子对正常
红细胞产生（造血作用）的抑制所引起的。
肾衰竭-多发性骨髓瘤还往往会导致肾衰竭，它可能会急性和慢性发
展。多发性骨髓瘤中的肾衰竭很大程度上可归因于在破骨细胞分解所存在
的骨时所发展的血钙过多。肾衰竭还是由轻链（也称为凝溶蛋白）分泌的
小管损伤所引起的，其可以表示为范科尼综合征（II型肾小管性酸中毒）。
其他原因包括淀粉样蛋白的小球沉积、高尿酸血、复发性感染（例如，肾
盂肾炎）以及肿瘤细胞的局部浸润。肾衰竭可以与血清肌酐的较高水平有
关。
多发性骨髓瘤还可以具有如下的其他症状。
感染-由于免疫系统被破坏，因此多发性骨髓瘤的另一种常见症状是
感染。提高的感染风险是由弥漫性低丙种球蛋白血所引起的免疫缺陷所造
成的，而这种免疫缺陷是由正常抗体产生的减少和破坏的提高所造成的。
最常见的感染是肺炎和肾盂肾炎。在多发性骨髓瘤患者中引起疾病的常见
肺炎病原体包括肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）、金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus）和肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae），而
引起肾盂肾炎的常见病原体包括大肠杆菌（Escherichia coli）。通常，感染
在化学疗法开始后的最初几个月中发生。
神经学症状-多发性骨髓瘤的症状包括神经学病况谱，其包括由于血
钙过多性头痛所引起的虚弱、精神混乱和疲劳；视觉变化和视网膜病，其
根据副蛋白的性质可以是由于血液粘度过高所造成的（参见下文）。其他
神经学症状包括神经根痛、肠或膀胱控制的丧失（例如，由于导致脊髓压
迫的脊髓受累）和腕管综合征以及其他神经病（例如，由于通过淀粉样蛋
白的周围神经浸润）。在随后提供的病例中，多发性骨髓瘤可以导致截瘫。
副蛋白的存在-多发性骨髓瘤的诊断性症状是血液和/或尿中副蛋白的
存在，副蛋白是单克隆蛋白（M蛋白），例如，通过浆细胞无性增殖所产
生的免疫球蛋白轻链或免疫球蛋白片段。可以通过琼脂糖凝胶电泳或者通
过使用抗免疫球蛋白轻或重链的一种或多种抗体的免疫固定来分析来自个
体的尿和/或血清中的蛋白质从而确定副蛋白的存在。
在某些实施方式中，当存在下列症状或病征时诊断了症状性多发性骨
髓瘤：在骨髓活体组织检查中无性浆细胞构成了10%以上的细胞，或者在
其他组织（例如，浆细胞瘤）的活组织检查中以任意量存在；血清或尿中
的副蛋白；末梢器官损害（相关器官或组织损伤）的迹象，例如，血钙过
多（例如，每分升血液中大于约12mg的折合钙，或者血液中大于约2.75mmol
的折合钙）、可归因于骨髓瘤的肾机能不全、定义为血红蛋白<10g/dL血液
的贫血、骨病变（例如，溶解性病变或伴随压缩骨折的骨质疏松症）、频
繁的严重感染（>2次/年）、其他器官的淀粉样变性（淀粉样蛋白的沉积）
和高粘稠度综合征（血液粘度升高），例如，大于1.8厘泊的血液粘度，例
如，至少2、3、4或5厘泊的血液粘度。
在某些实施方式中，具有多发性骨髓瘤的个体属于以下组之一。在一
种实施方式中，具有多发性骨髓瘤的个体从未对该疾病进行治疗。在另一
种实施方式中，该个体具有反应性骨髓瘤；即，对治疗起反应的多发性骨
髓瘤。在具体的实施方式中，这种个体由于治疗而表现出至少50%的M蛋
白（副蛋白）的减少。在另一个具体的实施方式中，该个体由于治疗而表
现出25%至50%之间的M蛋白的减少。在另一种实施方式中，所述个体具
有稳定性多发性骨髓瘤，它是指对治疗不起反应（例如，M蛋白的减少未
达到50%）但又不发展或恶化的骨髓瘤。在另一种实施方式中，所述个体
具有进行性多发性骨髓瘤，它是指正在恶化的活性骨髓瘤（例如，M蛋白
提高和器官恶化或者组织损伤或末梢器官损害）。在另一种实施方式中，
所述个体具有复发性多发性骨髓瘤，它是指开始对治疗起反应但随后开始
再次发展的骨髓瘤疾病。在具体的实施方式中，所述个体在初始治疗后复
发或者在后续治疗后复发。在另一种实施方式中，所述个体具有难治性多
发性骨髓瘤。在具体的实施方式中，所述难治性多发性骨髓瘤是对初始治
疗不起反应的多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方式中，所述难治性多
发性骨髓瘤是对后续治疗不起反应的复发性多发性骨髓瘤。在另一个具体
的实施方式中，所述难治性多发性骨髓瘤是不起反应的进行性难治性疾病，
它是指正在发展的难治性疾病。在另一个具体的实施方式中，所述难治性
多发性骨髓瘤是不起反应的非进行性难治性疾病，它是指未恶化的难治性
疾病。
因此，在一种实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体
的方法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，
分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致进展的可检测
减缓、恶化的可检测减轻和/或多发性骨髓瘤的一种或多种症状（例如，无
限制地，本文所述的多发性骨髓瘤的任意一种或多种症状）的可检测改善。
在具体的实施方式中，所述一种或多种症状包括与正常相比血液或尿钙的
升高、骨病变的存在、贫血或肾衰竭。在另一个具体的实施方式中，所述
一种或多种症状包括浆细胞，例如，在骨髓活体组织检查中构成10%以上
细胞或者在其他组织（例如，浆细胞瘤）的活组织检查中以任意量存在的
的无性浆细胞；血清或尿中的副蛋白；和/或末梢器官损害的迹象。在另一
个具体的实施方式中，所述一种或多种症状是血液中钙浓度大于约
2.75mmol/L、肾机能不全、每分升血液中小于约10g的血红蛋白、骨病变
的存在或除骨髓以外的一种或多种器官的淀粉样变性。
在另一个具体的实施方式中，所述症状是感染，例如，由高丙种球蛋
白血症所引起的感染。在某些实施方式中，所述感染是肺炎或肾盂肾炎。
在某些实施方式中，所述感染在化学疗法（例如，治疗所述多发性骨髓瘤
的化学疗法）开始后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月内
发生。
在另一个具体的实施方式中，所述症状是神经学症状。在其他具体的
实施方式中，所述神经学症状是虚弱、精神混乱、疲劳、头痛、视觉变化、
视网膜病、神经根痛、肠或膀胱控制的丧失、腕管综合征和/或截瘫。
在具体的实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方
法，其包括向所述个体施用胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的
BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致所述个体的一种或多
种器官或组织中的多发性骨髓瘤细胞（例如，无性多发性骨髓瘤细胞）数
目的可检测减少。
在具体的实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方
法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离
的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致所述个体血液中血
红蛋白的可检测提高，例如，提高到正常范围内。如下表1A中所示，根据
个体年龄和性别正常血红蛋白水平的变化：
表1A
新生儿
17-22gm/dl
一周大
15-20gm/dl
一个月大
11-15gm/dl
儿童
11-13gm/dl
成年男性
14-18gm/dl
成年女性
12-16gm/dl
中年后男性
12.4-14.9gm/dl
中年后女性
11.7-13.8gm/dl
因此，在另一个具体的实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓
瘤的个体的方法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC
（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致所述
个体中血红蛋白水平提高到11g/dL血液至20g/dL血液之间。在另一个具体
的实施方式中，所述施用导致所述个体中血红蛋白水平提高到11g/dL血液
至13g/dL血液之间。在另一个具体的实施方式中，所述施用导致所述个体
中血红蛋白水平提高到12g/dL血液至16g/dL血液之间。在另一个具体的实
施方式中，所述施用导致所述个体中血红蛋白水平提高到14g/dL血液至
18g/dL血液之间。在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有贫血（例如，
每分升血液中具有小于约10g血红蛋白）的个体的方法，其包括向所述个
体施用治疗有效量的胎盘干细胞，其中所述贫血是由多发性骨髓瘤引起的，
并且其中所述治疗有效量是足以导致来自所述个体的血液中血红蛋白升高
至约10克/分升或以上的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方
法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞、分离的胎盘干细胞群体或
包含分离的胎盘干细胞的细胞群体，其中所述施用导致来自所述个体的血
液或尿中的副蛋白水平可检测的降低。在具体的实施方式中，所述施用导
致所述个体的血液或尿中的副蛋白降低至不可检测的水平。在另一种实施
方式中，本文提供了治疗在个体血液中具有副蛋白的个体的方法，其包括
向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中副蛋白的存
在是由多发性骨髓瘤引起的，并且其中所述治疗有效量是足以导致所述个
体血液中副蛋白可检测的降低的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗在来自个体的骨髓活体组织检
查或血液样本中无性浆细胞数目大于所有有核细胞的10%的所述个体的方
法，其包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中
所述无性浆细胞的数目是由多发性骨髓瘤所引起的，并且其中所述治疗有
效量是足以导致骨髓活体组织检查或血液样本中的所述无性浆细胞数目可
检测地降低至小于10%的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有血钙过多的个体的方法，
其包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述
血钙过多是由多发性骨髓瘤引起的，并且其中所述治疗有效量是足以导致
来自所述个体的血液中钙可检测的降低的量。在另一种实施方式中，本文
提供了治疗具有高血钙水平（例如，折合钙大于约12mg/分升血液或大于约
2.75mmol）的个体的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细
胞和/或BM-MSC，其中所述高血钙水平是由多发性骨髓瘤引起的，并且其
中所述治疗有效量是足以导致所述血钙水平可检测的降低（例如，所述血
钙水平降低至低于约12mg/分升血液或低于约2.75mmol）的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有贫血的个体的方法，其中
所述贫血是由多发性骨髓瘤引起的，其中将所述贫血定义为血红蛋白小于
10g/dL血液，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或
BM-MSC，其中所述治疗有效量是足以导致来自所述个体的血液中血红蛋
白可检测的提高的量。在具体的实施方式中，所述治疗有效量是导致来自
所述个体的血液中血红蛋白提高至10g/dL或以上的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有血液高粘稠度综合征的个
体的方法，其中所述血液的粘度在1.8厘泊以上，其中所述血液高粘稠度综
合征是由多发性骨髓瘤引起的，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量
的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述治疗有效量是足以导致来自所述个
体的血液的粘度可检测的降低的量。在具体的实施方式中，所述治疗有效
量是导致所述个体中血液粘度降低至5、4、3、2或1.8厘泊以下的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗在个体骨髓中具有大于（例如）
6%、8%、10%、12%、14%、16%、18%或20%的浆细胞的个体的方法，
其包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述
治疗有效量是足以导致来自所述个体的骨髓中浆细胞的百分比可检测的降
低的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方
法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离
的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致所述个体中由多发
性骨髓瘤所引起的骨病变的严重程度和/或数目可检测的降低，如可通过（例
如）骨扫描或放射照相术确定的。在另一种实施方式中，本文提供了治疗
具有多发性骨髓瘤的个体的方法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细
胞和/或BM-MSC，其中所述施用导致所述个体中骨量或骨矿含量损失的可
检测减少，骨量或骨矿含量损失的停止或骨量或骨矿含量的增加。
在所述治疗方法的另一个具体的实施方式中，所述多发性骨髓瘤的一
种或多种症状是骨疼、溶骨性病变（例如，通过X射线或核磁共振成像（MRI）
可见）、骨质疏松症、贫血、血钙过多或由于血钙过多所引起的症状或者
肾衰竭。在其他具体的实施方式中，所述个体从未对多发性骨髓瘤进行治
疗；所述个体已对多发性骨髓瘤进行治疗并且对非胎盘干细胞和/或
BM-MSC治疗起反应；所述个体已对多发性骨髓瘤进行治疗而对非胎盘干
细胞和/或BM-MSC治疗不起反应，但是所述个体中多发性骨髓瘤的病程不
发展；或所述个体具有进行性多发性骨髓瘤。
在另一种实施方式中，胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的
BM-MSC或骨髓中的BM-MSC）的施用足以导致所述个体中的一种或多种
骨形成标志物的可检测提高。例如，可以通过（例如）来自所述个体的血
清样品中骨特异性碱性磷酸酶（BSAP）和/或血清完整I型原胶原N端肽
（PINP）的水平分析来评价骨形成。将胎盘干细胞和/或BM-MSC施用至
具有多发性骨髓瘤的个体后血清BSAP和/或PINP的可检测升高是骨形成
提高的指示。因此，在另一种实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨
髓瘤的个体的方法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC，其中所述施用导致来自所述个体的血清中BSAP或PINP的可检
测升高。
在另一种实施方式中，分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用足以导
致一种或多种骨吸收标志物的可检测减少。例如，可以通过血清I型胶原C
端肽（CTX）和/或血清抗酒石酸酸性磷酸酶同工型-5b（TRACP-5b）的水
平分析来评价骨吸收。向具有多发性骨髓瘤的个体施用胎盘干细胞和/或
BM-MSC后CTX或TRACP-5b的可检测减少是骨吸收减少的指示。因此，
在另一种实施方式中，本文提供了治疗具有多发性骨髓瘤的个体的方法，
其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的
BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述施用导致来自所述个体的血清
中CTX或TRACP-5b的可检测减少。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有I期多发性骨髓瘤的个体的
方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述I期
多发性骨髓瘤的特征在于：（i）血红蛋白水平为10g/dL或以上；（2）正
常的骨，或仅有1-2处病变，如在放射照片上所见；（iii）小于12mg/dL
的血钙；和可检测的副蛋白水平；其中所述治疗有效量的所述胎盘干细胞
和/或BM-MSC是足以导致一种或多种所述症状改善和/或来自所述个体的
血液中浆细胞数目可检测减少的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有II期多发性骨髓瘤的个体
的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述II
期多发性骨髓瘤的特征在于以下症状：（i）血红蛋白低于8.5g/dL；（ii）
血钙水平大于12mg/dL；（iii）如放射照片上所见，3处或以上的骨病变区
域；和（iv）高副蛋白水平；其中所述治疗有效量的所述分离的胎盘干细胞
和/或BM-MSC是足以导致一种或多种所述症状改善和/或来自所述个体的
血液中浆细胞数目可检测减少的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有I期多发性骨髓瘤的个体的
方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述I期
多发性骨髓瘤的特征在于血清β-2微球蛋白小于3.5mg/L和血清白蛋白水平
为3.5g/dL或以上，并且其中所述治疗有效量的所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC是足以降低（例如，可检测地降低）所述个体中血清β-2微球蛋
白的水平或提高（例如，可检测地提高）血白蛋白水平的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有II期多发性骨髓瘤的个体
的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述II
期多发性骨髓瘤的特征在于约3.3mg/L至5.5mg/L之间的血清β-2微球蛋白
以及任意水平的血清白蛋白，或者低于约3.5g/dL的血清白蛋白水平以及小
于约3.5g/L的血清β-2微球蛋白，并且其中所述治疗有效量的所述胎盘干
细胞和/或BM-MSC是在所述个体中足以将血清β-2微球蛋白的水平降低
（例如，可检测地降低）至（例如）约3.3mg/L以下或者足以提高（例如，
可检测地提高）血白蛋白水平的量。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有III期多发性骨髓瘤的个体
的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的胎盘干细胞和/或
BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC），其中所述III
期多发性骨髓瘤的特征在于大于5.5mg/L的血清β-2微球蛋白以及任意水平
的血清白蛋白，其中所述治疗有效量的所述胎盘干细胞和/或BM-MSC是足
以将所述个体的血液或血清中的血清β-2微球蛋白的量降低（例如，可检测
地降低）至（例如）约5.5mg/L以下或约3.5mg/L以下的量。在上述任何实
施方式的某些其他的具体实施方式中，患有多发性骨髓瘤的个体对一种或
多种非细胞多发性骨髓瘤疗法是难治的，所述疗法例如美法仑（具有或不
具有泼尼松龙）、环磷酰胺（具有或不具有泼尼松龙）、烷化剂、VAD（长
春新碱、多柔比星和高剂量地塞米松）、ABCM（长春新碱、多柔比星、
泼尼松龙和卡莫司汀）、高剂量地塞米松、沙利度胺、双膦酸酯等。
在另一个方面，本文提供了抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的方法，其包
括将所述多发性骨髓瘤细胞与分离的胎盘干细胞（例如，以下5.2节中所述
的分离的胎盘干细胞）、这些分离的胎盘干细胞的群体或者包含所述分离
的胎盘干细胞的细胞群体，和/或分离的BM-MSC或包含BM-MSC的骨髓
接触从而抑制（例如，可检测地抑制）所述多发性骨髓瘤细胞的增殖。在
某些实施方式中，本文提供了体内抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的方法，其
包括将治疗有效量的胎盘干细胞和/或BM-MSC施用至包含多发性骨髓瘤
细胞的个体，其中所述施用降低（例如，可检测地降低）了所述多发性骨
髓瘤细胞的增殖。在具体的实施方式中，所述施用减少（例如，可检测地
减少（例如，改善））了多发性骨髓瘤的一种或多种症状或病征或者减轻
了多发性骨髓瘤的所述一种或多种症状或病征的恶化。例如，可以通过（例
如）使用对浆细胞或多发性骨髓瘤细胞特异的一种或多种抗体（例如，抗
CD28或CD138的抗体）检测来自患有多发性骨髓瘤的个体的血液或骨髓
的浆细胞数目的减少来评价施用胎盘干细胞和/或BM-MSC后多发性骨髓
瘤细胞增殖的减少。
在另一个方面，本文提供了减少（例如）患有多发性骨髓瘤的个体中
多发性骨髓瘤细胞数目的方法，其包括将所述多发性骨髓瘤细胞与分离的
胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC）
接触从而在所述接触后抑制（例如，可检测地抑制）所述个体中多发性骨
髓瘤细胞的数目。在具体的实施方式中，通过将所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC施用至所述个体来实施所述接触。在另一个具体的实施方式中，
所述施用减少（例如，可检测地减少（例如，改善））了多发性骨髓瘤的
一种或多种症状或病征或者减轻了多发性骨髓瘤的所述一种或多种症状或
病征的恶化。可以通过（例如）使用对浆细胞或多发性骨髓瘤细胞特异的
一种或多种抗体（例如，抗CD28或CD138的抗体）检测来自患有多发性
骨髓瘤的个体的血液或骨髓的浆细胞数目的减少来评价与施用前相比施用
胎盘干细胞和/或BM-MSC后多发性骨髓瘤细胞数目的减少。
通常，表现出多发性骨髓瘤的一种或多种症状的个体在多发性骨髓瘤
的最终诊断前对多发性骨髓瘤进行了至少一次评价，例如，作为实施以达
到多发性骨髓瘤诊断的测试的一部分。另外，通常，在多发性骨髓瘤的诊
断后，诊断为多发性骨髓瘤的个体对多发性骨髓瘤的症状评价至少一次，
通常不止一次，以测定疾病的发展。这种评价可以包括使用（例如）X射
线分析、核磁共振成像（MRI）、计算机断层（CT）扫描、正电子发射层
析成象（PET）扫描等对骨病变程度和/或数目的确定；对血液中钙水平的
确定；对血液或尿等中的M蛋白（抗体或抗体片段）水平的确定。可以通
过多发性骨髓瘤的这些症状中的任何一种或多种（例如，通过多发性骨髓
瘤的这些症状中的任何一种或多种的改善）来评价多发性骨髓瘤治疗的有
效性（例如，施用胎盘干细胞和/或BM-MSC的有效性）。还可以通过在所
述胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用前后确定所述个体的血液或骨髓中的
多发性骨髓瘤细胞的数目来评价有效性。
因此，在具体的实施方式中，任何上述方法包括在所述施用前对以下
一种或多种确定一次或多次，和可选地在所述施用后对以下一种或多种确
定一次或多次：（1）所述个体中骨病变的数目和程度；（2）来自所述个
体的血液或尿中的M蛋白（副蛋白）的水平；（3）来自所述个体的血液中
钙的水平；和/或（4）来自所述个体的血液或骨髓中多发性骨髓瘤细胞的数
目。在某些实施方式中，如果在分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用后，
来自所述个体的血液中钙的水平或者来自所述个体的血液或尿中M蛋白的
水平与施用前的水平相比降低（例如，可检测地降低），则所述胎盘干细
胞和/或BM-MSC是治疗有效的。类似地，在某些实施方式中，如果相对于
所述施用前骨病变的数目或骨病变的严重程度，所述个体中骨病变的数目
或骨病变的严重程度在所述施用后减轻，则胎盘干细胞和/或BM-MSC的施
用是治疗有效的。在某些其他实施方式中，如果（例如）胎盘干细胞和/或
BM-MSC的施用导致所述个体的血液或尿中M蛋白水平增加的减缓或者所
述个体的血液中钙水平增加的减缓或者所述个体中骨病变数目或严重性增
加的减缓，则胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用也是治疗有效的。在某些具
体的实施方式中，如果在所述胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用后所述个体
中骨病变的数目或严重性，所述个体的血液或尿中M蛋白的水平或者所述
个体中血钙的水平无可检测的变化，则重复胎盘干细胞或BM-MSC中任一
种或两者的施用。
还可以通过确定施用后降低（例如，可检测地降低）所述个体中破骨
细胞前体或多发性骨髓瘤细胞的数目的胎盘干细胞和/或BM-MSC的量（例
如，治疗有效量）来评价分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用的有效性。
可以通过任何医学上可用的方法确定所述个体中破骨细胞前体数目的减
小。例如，可以使用对破骨细胞前体特异的抗体检测（例如）所述个体的
周围血液或骨髓样品中的破骨细胞前体来确定破骨细胞前体的数目；可以
通过（例如）组织学、显微镜下的细胞计数、通过流式细胞术的标记细胞
分选等评价标记细胞的数目。在另一个具体的实施方式中，所述治疗有效
量的胎盘干细胞和/或BM-MSC降低了所述个体中多发性骨髓瘤细胞的数
目，例如，可通过使用对多发性骨髓瘤细胞或浆细胞特异的抗体（例如，
对细胞标志物CD28或CD138特异的抗体）对来自所述个体的有核血细胞
的细胞计数（例如，通过流式细胞术）或抗体染色确定的。
如本文所述，在治疗多发性骨髓瘤、治疗多发性骨髓瘤症状或抑制多
发性骨髓瘤细胞增殖的任何方法中，所述多发性骨髓瘤细胞显示出遗传材
料从染色体4到染色体14的易位（例如，t(4:14)易位）。在其他实施方式
中，多发性骨髓瘤细胞显示出t(14:16)易位、t(11:14)易位和/或IgH与未知
染色体伴侣的异常重排。在某些其他实施方式中，多发性骨髓瘤细胞不会
分泌可检测数量的免疫球蛋白。在某些其他实施方式中，所述多发性骨髓
瘤细胞仅或者基本上仅分泌免疫球蛋白轻链，例如，κ轻链、λ轻链或两者。
在某些其他实施方式中，多发性骨髓瘤细胞分泌包含重链和轻链的免疫球
蛋白。在其他实施方式中，多发性骨髓瘤细胞产生IgG免疫球蛋白、IgA免
疫球蛋白或两者。
在任何上述实施方式中，分离的胎盘干细胞可以是（例如）如下所述
的基因工程胎盘干细胞。在任何上述实施方式中，BM-MSC可以是基因工
程BM-MSC。如以下5.7.2节所述，如对胎盘干细胞的基因工程所述，可以
以任何方式通过基因工程设计BM-MSC。
在某些实施方式中，另外用化学治疗化合物（例如，以下5.1.3节中所
述的抗癌化合物）治疗患有多发性骨髓瘤的个体，例如，一种或多种抗癌
化合物与胎盘干细胞和/或BM-MSC。可以（例如）同时或者在化学疗法（例
如，治疗所述多发性骨髓瘤的化学疗法）开始后的1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、11或12个月内将胎盘干细胞和/或BM-MSC施用于所述个体以
治疗多发性骨髓瘤。在其他实施方式中，在所述胎盘干细胞和/或BM-MSC
施用后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月内施用抗癌化合
物。
5.1.2软骨肉瘤的治疗
在另一个方面，本文提供了治疗患有软骨肉瘤的个体的方法，其包括
向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC（例如，分离的BM-MSC
或骨髓中的BM-MSC）。如本文中的其他处，所述分离的胎盘干细胞可以
具有以下5.2节中所述特征的任意组合或全部。另外，BM-MSC可以是分
离的或存在于（例如）包含BM-MSC的骨髓中。
因此，在一种实施方式中，本文提供了治疗患有软骨肉瘤的个体的方
法，其包括向所述个体施用分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC，其中所述施
用导致软骨肉瘤的一种或多种症状的发展的可检测减缓、恶化的可检测减
轻和/或可检测改善。在具体的实施方式中，所述症状包括（但不限于）骨
疼、在（例如）X射线上可见的一种或多种骨病变、在（例如）肿瘤位点
处的骨肿胀或者一个或多个骨的肥大。
在具体的实施方式中，所述软骨肉瘤是透明细胞软骨肉瘤。在另一个
具体的实施方式中，所述软骨肉瘤是良性软骨肉瘤（内生软骨瘤）。在另
一个具体的实施方式中，所述软骨肉瘤是低级恶性软骨肉瘤（I级软骨肉瘤；
其特征为肿瘤与正常软骨类似；肿瘤可以围绕板骨区和/或显示出包括双核
细胞在内的非典型细胞）。在另一个具体的实施方式中，所述软骨肉瘤是
中级恶性软骨肉瘤（II级软骨肉瘤；其特征为显著的多孔性和多个非典型
细胞，所述非典型细胞中的多个具有着色过度（核中大量深着色的DNA）
和与I级相比核尺寸增加）。在另一个具体的实施方式中，软骨肉瘤是高级
恶性软骨肉瘤（III级软骨肉瘤；其特征为显著多形性区、具有显著着色过
度的大细胞、偶见巨细胞和大量坏死）。在另一个具体的实施方式中，软
骨肉瘤是去分化软骨肉瘤（邻近于高级非软骨肉瘤的包含分化良好型软骨
肿瘤（内生软骨瘤或II或II级软骨肉瘤）的软骨肉瘤）。在另一个具体的
实施方式中，软骨肉瘤是间胚叶性软骨肉瘤。
在某些实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施用于所述个体
而不对软骨肉瘤进行任何进一步处理。在某些其他实施方式中，在手术除
去部分或全部软骨肉瘤肿瘤或者除去受软骨肉瘤影响的部分或全部骨之后
将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施用给所述个体。在某些其他实施方式
中，在手术除去部分或全部软骨肉瘤肿瘤或者除去受软骨肉瘤影响的部分
或全部骨之前或同时将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施用给所述个体。在
某些其他实施方式中，将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在（例如）所述个
体中的软骨肉瘤位点处或通过除所述个体中的软骨肉瘤位点以外的途径全
身施用至所述个体，例如，静脉内、动脉内、腹膜施用等。在某些其他实
施方式中，将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC在软骨肉瘤位点（例如，所述
个体中的软骨肉瘤位点）处或附近施用（如果肿瘤未被除去），或者如果
已发生了手术去除，则在从此除去软骨肉瘤的位点处或附近施用。
5.1.3组合疗法
骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤、软骨肉瘤或本文所提到的其他骨相
关癌之一）的治疗可以包括结合第二疗法将胎盘干细胞和/或BM-MSC（例
如，分离的BM-MSC或骨髓中的BM-MSC）施用至患有癌的个体。在多个
实施方式中，在与所述胎盘细胞相同的疗程中与所述胎盘干细胞和/或
BM-MSC同时施用第二疗法，或者在已施用所述胎盘干细胞和/或BM-MSC
后（例如，在包括施用胎盘干细胞和/或BM-MSC的疗程完成后）施用或者
在胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用前（例如，在包括施用胎盘干细胞和/
或BM-MSC的疗程开始前）施用。在某些实施方式中，将所述胎盘干细胞
和/或BM-MSC和第二疗法配制在一起以从（例如）相同的包装或容器中施
用。在某些其他实施方式中，分别配制所述胎盘干细胞和/或BM-MSC和第
二疗法以单独施用。
因此，在另一个方面，本文提供了治疗患有骨相关癌（例如，多发性
骨髓瘤或软骨肉瘤或本文所列的其他骨相关癌之一）的个体的方法，其包
括将分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC与一种或多种其他抗癌疗法（例如，
一种或多种化学疗法或化学治疗化合物）结合施用于所述个体。可以在与
所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施用的同时，在与之相同的疗程期间或与之
分开施用这些其他抗癌疗法。在具体的实施方式中，将一种或多种抗癌疗
法与所述胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用顺序施用。在另一个具体的实施
方式中，在所述胎盘干细胞和/或BM-MSC的施用前将所述其他抗癌疗法施
用于所述个体；例如，在将胎盘干细胞和/或BM-MSC施用至所述个体前，
将一系列这些其他抗癌疗法施用于所述个体并完成。在另一个具体的实施
方式中，在所述其他抗癌疗法的施用前将所述胎盘干细胞和/或BM-MSC施
用于所述个体；例如，在施用所述其他抗癌疗法前，将一系列胎盘干细胞
和/或BM-MSC施用于所述个体，并且在将所述其他抗癌疗法施用至所述个
体前完成。
如本文所使用的，“抗癌剂”或“抗癌疗法”是已在（例如）临床、临床前
或科学研究（包括无对照研究）中鉴别对一种或多种类型的肿瘤或癌细胞
具有肿瘤稳定或肿瘤破坏作用的试剂或疗法。
在具体的实施方式中，所述抗癌剂是美法仑（也称为L-苯基丙氨酸氮
芥或L-PAM；商品名为Albertan）。因此，在一种实施方式中，治疗患有
多发性骨髓瘤的个体的方法包括向所述个体施用美法仑，例如，治疗有效
量的美法仑（例如，）。施用通常是口服或静脉内施用。在另
一个具体的实施方式中，所述抗癌剂是沙利度胺。在另一个具体的实施方
式中，所述抗癌剂是氨基取代的沙利度胺类似物或氨基取代的咪唑。在另
一个具体的实施方式中，所述抗癌剂是玻马利度胺（pomalidomide）（以商
品名出售）；来那度胺（以商品名出售）；或来那
度胺结合地塞米松。在另一个具体的实施方式中，所述抗癌治疗是硼替佐
米（例如，）。在另一个具体的实施方式中，所述抗癌剂包括
美法仑、泼尼松和沙利度胺的组合（单独或一起施用）。在另一个具体的
实施方式中，所述抗癌剂是硼替佐米、美法仑和泼尼松的组合（单独或一
起施用）。在其他具体的实施方式中，所述抗癌剂是环磷酰胺（例如，
）、长春新碱（例如，VINCASAR）、多
柔比星（例如，ADRIAMYCINADRIAMYCIN）或脂质体多
柔比星（例如，）中的一种或多种。
其他抗癌剂在本领域中是熟知的。因此，在其他具体的实施方式中，
所述抗癌剂包括（但不限于）阿西维辛；阿柔比星；阿考达唑盐酸盐；阿
克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；阿美蒽醌乙酸盐；
安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；门冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎
替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；比生群盐酸盐；双奈
法德二甲磺酸盐；比折来新；博来霉素硫酸盐；布喹那钠；溴匹立明；白
消安；放线菌素C；卡普睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；卡
柔比星盐酸盐；卡折来新；西地芬戈；塞来考昔（COX-2抑制剂）；苯丁
酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；克立那托甲磺酸盐；阿糖胞苷；达
卡巴嗪；放线菌素D；柔红霉素盐酸盐；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；
地扎胍宁甲磺酸盐；地吖醌；多西他赛；多柔比星盐酸盐；屈洛昔芬；屈
洛昔芬柠檬酸盐；屈他雄酮丙酸盐；达佐霉素；依达曲沙；依氟鸟氨酸盐
酸盐；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；表柔比星盐酸盐；厄布
洛唑；依索比星盐酸盐；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊
苷；依托泊苷磷酸盐；氯苯乙嘧胺；法倔唑盐酸盐；法扎拉滨；芬维A胺；
氮尿苷；氟达拉滨磷酸盐；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；
吉西他滨；吉西他滨盐酸盐；羟基脲；伊达比星盐酸盐；异环磷酰胺；伊
莫福新；异丙铂；伊立替康；伊立替康盐酸盐；兰瑞肽乙酸盐；来曲唑；
亮脯利特乙酸盐；利阿唑盐酸盐；洛美曲索钠；洛莫司汀；洛索蒽醌盐酸
盐；马索罗酚；美登素；氮芥盐酸盐；甲地孕酮；十六次甲基甲地孕酮；
美法仑；美诺立尔；巯嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替
哌；米丁度胺；米托卡星；草绿霉素；米托洁林；米托马星；丝裂霉素；
米托司培；米托坦；米托蒽醌盐酸盐；麦考酚酸；诺考达唑；诺拉霉素；
奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；奈莫司汀；培洛霉素
硫酸盐；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；吡罗蒽醌盐酸盐；普卡霉素；
普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸甲基下肼；嘌罗霉素；
嘌罗霉素盐酸盐；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；沙芬戈；沙芬戈盐酸盐；司
莫司汀；辛曲秦；磷乙酰天冬氨酸钠；司帕霉素；锗螺胺盐酸盐；螺莫司
汀；螺铂；链黑霉素；链佐星；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；泰索
帝；替加氟；替洛蒽醌盐酸盐；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酪；
硫唑嘌呤胺；硫鸟嘌呤；塞替派；噻唑呋林；替拉扎明；托瑞米芬柠檬酸
盐；曲托龙乙酸盐；曲西立滨磷酸盐；三甲曲沙；三甲曲沙葡萄糖醛酸盐；
曲普瑞林；妥布氯唑盐酸盐；乌拉莫司汀；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；
硫酸长春碱；硫酸醛基长春碱；长春地辛；长春地辛硫酸盐；长春匹定硫
酸盐；长春甘酯硫酸盐；长春罗新硫酸盐；长春瑞滨酒石酸盐；长春罗定
硫酸盐；长春利定硫酸盐；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；和佐柔比星盐酸
盐。
其他抗癌药物包括（但不限于）：20-表-1,25-二羟基维生素D3；5-乙
炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿
地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；3,4-二羟基苄胺肟
（amidox）；氨磷汀；氨基-γ-酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿
那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克
斯（antarelix）；抗背侧形态发生蛋白-1；抗雄激素物质，前列腺癌；抗雌
激素物质；抗瘤酮；反义寡核苷酸；阿非迪霉素甘氨酸盐；细胞凋亡基因
调节剂；细胞凋亡调节剂；无嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨
酶；asulacrine；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin
3；阿扎司琼；阿扎毒素；氮杂酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；
巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢卟吩；苯甲酰星孢菌素；β内酰胺
衍生物；β-alethine；β-clamycin B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比
生群；双氮丙啶基精胺；双奈法德；bistratene A；比折来新；breflate；溴
匹立明；布度钛；丁硫堇；卡泊三醇；卡弗他丁C；喜树碱衍生物；卡培
他滨；氨甲酰基氨基三唑；羧酰氨三唑；CaRest M3；CARN 700；软骨源
性抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂（ICOS）；栗精胺；杀菌肽B；
西曲瑞克；绿素类（chlorlns）；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素；顺式-卟啉；
克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；考布他
丁A4；考布他丁类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；cryptophycin
8；cryptophycin A衍生物；curacin A；环戊烯蒽醌（cyclopentanthraquinone）；
cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐；溶细胞因子；磷酸己
烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱水代代宁B；地洛瑞林；地塞米松；右
异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；代代宁B；3，4-二羟荃苯
并氧肟酸（didox）；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮胞苷；9-二氢紫杉醇；
dioxamycin；二苯基螺莫司汀；多西他赛；二十二醇；多拉司琼；去氧氟尿
苷；多柔比星；屈洛昔芬；屈大麻酚；倍癌毒素SA；依布硒；依考莫司汀；
依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；依
立雄胺；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；依
托泊苷磷酸盐；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非
那雄胺；flavopiridol；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；fluorodaunorunicin
盐酸盐；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；德克萨卟啉钆；硝酸
镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；
hepsulfam；heregulin；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比
星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；伊马替尼（例如，
）；咪喹莫特；免疫刺激剂肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制
剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘阿霉素；4-甘薯苦醇；伊
罗普拉；伊索拉定；isobengazole；isohomohalicondrin B；伊他司琼；
jasplakinolide；kahalalide F；片螺素-N三醋酯盐；兰瑞肽；leinamycin；来
格司亭；硫酸蘑菇多糖；leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α
干扰素；亮脯利特+雌激素+黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；直链
聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；胍
乙基磷酸丝氨酸；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛索立宾；勒托替康；
德克萨卟啉镥；利索茶碱；裂解肽；美坦新；制甘糖酶素A；马立马司他；
马索罗酚；maspin；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立
尔；merbarone；美替瑞林；蛋氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司
酮；米替福新；米立司亭；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米
托萘胺；米托毒素（mitotoxin）成纤维细胞生长因子-肥皂草素；米托蒽醌；
莫法罗汀；莫拉司亭；爱必妥，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰酯A+分支杆
菌细胞壁sk；莫哌达醇；芥末抗癌剂；印度洋海绵B（mycaperoxide B）；
分支杆菌细胞壁萃取；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺；
那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；
奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；尼鲁米特；nisamycin；一氧化氮调节剂；
硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；奥利默森（例如，）；O6-苄基
鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；
oracin；口腔细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；
紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；棕榈酰根霉素；帕米
磷酸；人参三醇；帕诺米芬；副球菌素；帕折普汀；培门冬酶；培得星；
木聚硫钠；喷司他丁；pentrozole；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏子醇；苯连
氮霉素；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；溶链菌；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；
吡曲克辛；帕斯婷A；帕斯婷B；纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂；铂络合
物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼松；丙基双吖
啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激
酶C抑制剂；微藻蛋白激酶C抑制剂；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核
苷磷酸化酶抑制剂；紫红素；吡唑啉吖啶；吡醇羟乙酯化血红蛋白聚氧乙
烯结合物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转移酶抑制剂；
ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；脱甲基化的瑞替普汀；羟乙二磷酸铼Re 186；
根霉素；核糖酶；RII视黄酰胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；rubiginone
B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭；Sdi1
模拟物；司莫司汀；衰老源抑制剂1（senescence derived inhibitor 1）；正义
寡核苷酸；信号转导抑制剂；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯基乙酸钠；
solverol；促生长因子结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；穗霉素D；螺莫司汀；
脾脏五肽；海绵抑制素1；角鲨胺；stipiamide；基质降解酶抑制剂；sulfinosine；
超强血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；苦马豆碱；他莫司汀；他莫
昔芬甲碘化物；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；
未端酶抑制剂；替莫泊芬；替尼泊苷；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；
菌体胚素；噻可拉林；促血小板生成素；促血小板生成素模拟物；胸腺法
新；促胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；本紫红素乙酯
锡；替拉扎明；二氯环戊二烯钛；topsentin；托瑞米芬；转化抑制剂；维甲
酸；三乙酰基尿甙（triacetyluridine）；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；
托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸蛋白激酶抑制剂
（tyrphostins）；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦源生长抑制因子；尿
激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；维拉雷琐；藜芦明；verdins；维替
泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；整合素拮抗剂（Vitaxin）；伏氯唑；扎诺特
隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他丁斯酯。
在其他实施方式中，所述组合疗法包括将胎盘干细胞和/或BM-MSC与
破骨细胞抑制剂（例如，破骨细胞形成或破骨细胞前体分化为破骨细胞的
抑制剂）结合施用至个体。在具体的实施方式中，所述破骨细胞抑制剂是
RANKL抑制剂，例如，地诺单抗。在另一个具体的实施方式中，所述破骨
细胞抑制剂是整合素或组织蛋白酶K抑制剂。
在另一种实施方式中，所述组合疗法包括胎盘干细胞和/或BM-MSC与
二膦酸酯结合的施用。在具体的实施方式中，所述二膦酸酯是阿仑膦酸（例
如，以每天约5mg至约10mg的剂量，或每周一次约35mg至约70mg的剂
量；加入或不加入补充维生素D）、伊班膦酸，利塞膦酸、氯屈膦酸和/或
帕米膦酸。在另一种实施方式中，所述组合疗法包括胎盘干细胞和/或
BM-MSC与降钙素、雌激素、甲状旁腺激素（例如，特立帕肽，例如，
）或雷洛昔芬中的一种或多种结合的施用。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有骨相关癌（例如，多发性
骨髓瘤、软骨肉瘤或本文所列的其他骨相关癌之一）的个体的方法，其包
括将分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC与具有活化素拮抗剂或活化素受体
RIIa（ActRIIa）拮抗剂活性的化合物（例如，ActRIIa拮抗剂）结合施用于
所述个体。在具体的实施方式中，所述ActRIIa拮抗剂是可溶性IIA型活化
素受体IgC-Fc融合蛋白（例如，）。参见（例如）美国专利申请
公开No.2009/0142333，该专利以其全部内容作为参考并入本文。
在另一种实施方式中，本文提供了治疗患有骨相关癌（例如，多发性
骨髓瘤、软骨肉瘤或本文所列的其他骨相关癌之一）的个体的方法，其包
括将分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC与放射疗法结合施用于所述个体。在
某些实施方式中，所述放射疗法包括将X射线施用至患有骨相关癌的个体
中的器官或组织，所述器官或组织受骨相关癌影响。在具体的实施方式中，
例如，将所述放射疗法（例如，X射线）施用于由多发性骨髓瘤所引起的
骨病变或由软骨肉瘤所引起的骨病变。在其他具体的实施方式中，将所述
放射疗法（例如，X射线）施用于受所述骨相关癌影响的个体身体的一半。
在其他具体的实施方式中，将所述放射疗法（例如，X射线）施用于受影
响的个体身体的全部。在其他实施方式中，所述放射疗法包括将质子束或
电子束施用至患有骨相关癌的个体中的器官或组织，所述器官或组织受骨
相关癌影响。在某些其他实施方式中，施用所述放射疗法为造血干细胞代
替治疗做准备（例如，放射疗法杀死个体现有的造血系统）。
在另一种实施方式中，将分离的胎盘干细胞和/或BM-MSC与骨替代物
结合（例如）以通过（例如）在由骨相关癌所引起的骨病变处或附近的施
用来治疗与骨相关癌有关的骨病变。在具体的实施方式中，所述骨替代物
是生理学可用的陶瓷材料，例如，磷酸一钙、磷酸二钙、磷酸三钙、α-磷酸
三钙、β-磷酸三钙和磷酸四钙、羟基磷灰石、氟磷灰石、硫酸钙、氟化钙、
氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃（例如，）或它们
中任意的混合物。在另一个具体的实施方式中，所述骨替代物是多孔生物
相容性陶瓷材料（例如，等）或矿
化胶原骨移植产品（例如，HEALOSTM、RHAKOSSTM和
等）。
5.2胎盘干细胞
在患有骨相关癌（例如，多发性骨髓瘤）或具有骨相关癌细胞（例如，
多发性骨髓瘤细胞）的个体的治疗中有用的分离的胎盘干细胞是从胎盘或
其部分可获得的细胞，其贴壁在组织培养基材（例如，未涂覆的组织培养
塑料制品）上并具有多能细胞或干细胞的特征。在某些实施方式中，在本
文所公开的方法中有用的分离的胎盘干细胞具有分化为一种或多种非胎盘
细胞类型的能力。在本文中以及在（例如）美国专利No.7486276和美国专
利申请公开No.2007/0275362中说明了在本文所公开的方法中有用的胎盘
干细胞，以上专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。胎盘干细
胞不是滋养层、细胞滋养层、胚胎生殖细胞或胚胎干细胞，如本领域技术
人员所理解的那些细胞。
在本文所公开的方法中有用的分离的胎盘干细胞在来源上可以是胎儿
的或母体的（即，可以分别具有胎儿或母体的基因型）。优选地，分离的
胎盘干细胞和分离的胎盘干细胞群体在来源上是胎儿的。分离的胎盘干细
胞或包含分离的胎盘干细胞的细胞群体可以包含在来源上仅是胎儿的或母
体的分离的胎盘干细胞或者可以包含胎儿和母体来源的分离的胎盘干细胞
的混合群体。在本文所述的任何胎盘干细胞的某些实施方式中，所述分离
的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在某些其他实施方式中，所述胎盘干
细胞基本不含母体细胞；例如，至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、
70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%的所述细胞在来源上是
非母体的。
可以通过以下所讨论的形态学、标志物和培养特征来鉴别和选择分离
的胎盘干细胞和包含分离的胎盘干细胞的细胞群体。在某些实施方式中，
本文所述的任何胎盘干细胞对受体是自体同源的，例如，患有骨相关癌或
具有骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞，或者软骨
肉瘤或软骨肉瘤细胞，或者另一种骨相关癌或另一种骨相关癌细胞）的个
体。在某些其他实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞对受体是异源的，
例如，患有骨相关癌或具有骨相关癌细胞（例如，多发性骨髓瘤或多发性
骨髓瘤细胞，或者软骨肉瘤或软骨肉瘤细胞，或者另一种骨相关癌或另一
种骨相关癌细胞）的个体。
在某些实施方式中，在本发明所述的方法中有用的胎盘干细胞（例如，
本文所述的胎盘干细胞）得自足月的胎盘，即分娩后的哺乳动物（例如，
人）的胎盘。在某些其他实施方式中，在本发明所述的方法中有用的胎盘
干细胞（例如，本文所述的胎盘干细胞）得自早产哺乳动物（例如，人）
的胎盘。
5.2.1物理和形态特征
当在原代培养或在细胞培养中培养时，本文所述的分离的胎盘干细胞
（PDAC）贴壁到组织培养基材（例如，组织培养容器表面（例如，组织培
养塑料制品））上或者贴壁到涂覆了胞外基质或配体的组织培养表面上，
所述配体如层粘连蛋白、胶原（例如，天然的或变性的）、明胶、纤连蛋
白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜蛋白（例如，（BD Discovery
Labware,Bedford Mass.））。培养中的分离的胎盘干细胞呈现出一般成纤维
样星形外观，其中多个胞质突从中央细胞体中伸出。然而，由于所述分离
的胎盘干细胞显示出比成纤维细胞数目更多的该类胞质突，因此该细胞在
词法上是与相同条件下培养的成纤维细胞可区分的。词法上，分离的胎盘
干细胞还是与造血干细胞可区分的，造血干细胞在培养时一般呈现出更圆
的或卵石形态并且不贴壁到组织培养塑料制品上。词法上，所述胎盘干细
胞还是与滋养层或细胞滋养层可区分的，滋养层或细胞滋养层往往表现为
圆形或上皮样，并且就细胞滋养层来说，与单核胎盘干细胞相比它是多核
的。所述胎盘干细胞是单细胞的并且在培养期间和多次传代过程中保持为
单细胞，并且在培养中（例如，在空气中在生长培养基中培养，或者在95%
空气/5%CO2中在生长培养基中培养）不形成（例如）多核细胞。
在某些实施方式中，当在生长培养基中培养时，在本文所公开的方法
（例如，治疗方法或抑制骨相关癌细胞生长或抑制破骨细胞前体分化为破
骨细胞的方法）中有用的所述分离的胎盘干细胞发展出胚状体样体
（embryoid-like body）。在本领域中胚状体样体是熟知的，并且它们是可
以在增殖的分离的胎盘干细胞贴壁层的顶部生长的非相邻细胞块。由于细
胞块与胚状体（由胚胎干细胞的培养生长的细胞块）类似，因此使用了术
语“胚状体样”。其中胚状体样体可以在分离的胎盘干细胞的增殖培养中发育
的生长培养基包括包含以下成分的培养基：例如，DMEM-LG（例如，得自
Gibco）；2%胎牛血清（例如，得自Hyclone Labs.）；1×胰岛素-转铁蛋白-
硒（ITS）；1×亚油酸-牛血清白蛋白（LA-BSA）；10-9M地塞米松（例如，
得自Sigma）；10-4M抗坏血酸2-磷酸盐（例如，得自Sigma）；10ng/mL
表皮生长因子（例如，得自R&D Systems）；10ng/mL和血小板源性生长
因子（PDGF-BB，例如，得自R&D Systems）。
5.2.2细胞表面、分子和遗传标志物
分离的胎盘干细胞是组织培养贴壁人胎盘干细胞，其具有多能细胞或
干细胞的特征并且表达可以用于鉴别和/或分离所述细胞或包含所述干细胞
的细胞群体的多种标志物。所述分离的胎盘干细胞包括直接从胎盘或其部
分获得的细胞和含有胎盘干细胞的细胞群体。分离的胎盘干细胞群体还包
括培养中的（也就是说，两种或更多种）分离的胎盘干细胞的群体和容器
（例如，袋）中的群体。本文所述的分离的胎盘干细胞不是骨髓来源的间
充质细胞、脂肪源间质干细胞或得自脐带血、胎盘血或周围血液的间充质
细胞。在（例如）美国专利No.7311904；7311905和7468276中；以及在
美国专利申请公开No.2007/0275362中说明了在本文所述的方法和组合物
中有用的胎盘干细胞，以上专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本
文。在本文所述的胎盘干细胞的任何实施方式的具体实施方式中，所述细
胞是哺乳动物（例如，人）细胞。
在某些实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是分离的胎盘干细胞。在
某些其他实施方式中，所述分离的胎盘细胞是分离的胎盘多能细胞。在一
种实施方式中，在本文所述的方法中有用的分离的胎盘干细胞是可通过流
式细胞术检测的CD34–、CD10+和CD105+。如本文所使用的，短语“可通
过……检测的”、“可通过……确定的”等不表示为了待分离的细胞而需要对
细胞进行所述标志物表达的评价，也不表示需要使用所述标志物分离细胞。
在另一个具体的实施方式中，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞
具有（例如）体外或体内或两者分化为神经表型细胞、成骨表型细胞和/或
软骨形成表型细胞的潜能。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD34–、
CD10+、CD105+胎盘干细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞另外是CD45–或CD90+。
在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD34-、CD10+、CD105+胎盘干
细胞还是可通过流式细胞术检测的CD45–和CD90+。在另一个具体的实施
方式中，所述分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞还是可
通过流式细胞术检测的CD90+或CD45–。在具体的实施方式中，所述分离
的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞还是CD44+、CD45–、CD90+、
CD166+、KDR+或CD133–中的一种或多种。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞还是CD44+、CD45–、
CD90+、CD166+、KDR+和CD133-。在另一个具体的实施方式中，如通过
流式细胞术可检测的，所述分离的CD34-、CD10+、CD105+、CD200+胎盘
干细胞还是CD90+和CD45–，即，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD45–、
CD90+、CD105+和CD200+。在另一个具体的实施方式中，所述CD34–、
CD10+、CD45–、CD90+、CD105+、CD200+胎盘干细胞还是CD44+、CD80–
和/或CD86–。在另一个具体的实施方式中，所述CD34–、CD10+、CD44+、
CD45–、CD90+、CD105+、CD200+胎盘干细胞还是CD80–、CD86–、CD117–、
CD133–、细胞角蛋白+、KDR+、HLA-A,B,C+、HLA-DR,DP,DQ–和HLA-G-
中的一种或多种。在另一个具体的实施方式中，所述CD34–、CD10+、CD105+
胎盘干细胞还是SSEA1-、SSEA3–和/或SSEA4–中的一种或多种。在另一个
具体的实施方式中，所述CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞还是SSEA1-、
SSEA3–和SSEA4–。
在另一种实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+和
CD200+，以及CD44+、CD45–、CD90+、CD166+、KDR-或CD133–中的一种
或多种。在更具体的实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+
和CD200+、CD44+、CD45–、CD90+、CD166+、KDR-和CD133–。在另一种
实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+和CD200+，以及
HLA ABC+、HLA DR,DQ,DP–、CD80–、CD86–、CD98–或PD-L1+中的一种
或多种。在更具体的实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+
和CD200+、HLA ABC+、HLA DR,DQ,DP–、CD80–、CD86–、CD98–和PD-L1+。
在某些实施方式中，所述胎盘干细胞是CD34–、CD10+、CD105+和CD200+，
以及CD3–、CD9–、CD38–、CD45–、CD80–、CD86–、CD133–、HLA-DR,DP,DQ–、
SSEA3–、SSEA4–、CD29+、CD44+、CD73+、CD90+、CD105+、HLA-A,B,C+、
PDL1+、ABC-p+和/或OCT-4+中的一种或多种，如通过流式细胞术可检测的。
在其他实施方式中，任何如上所述的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞
另外是CD29+、CD38–、CD44+、CD54+、SH3+或SH4+中的一种或多种。在
另一个具体的实施方式中，所述胎盘干细胞还是CD44+。在任何上述分离
的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞的另一个具体的实施方式中，所述
细胞另外是CD117–、CD133–、KDR-（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、
HLA-DP,DQ,DR-或编程死亡-1配体（PDL1）+中的一种或多种，或它们的
任意组合。
在另一种实施方式中，所述分离的CD34-、CD10+、CD105+胎盘干细
胞另外是CD3–、CD9–、CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、
CD54+、CD62E-、CD62L–、CD62P–、SH3+（CD73+）、SH4+（CD73+）、
CD80–、CD86–、CD90+、SH2+（CD105+）、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-
钙粘素low、CD146+、CD166+、CD184/CXCR4-、CD200+、CD133-、OCT-4+、
SSEA3-、SSEA4-、ABC-p+、KDR-（VEGFR2-）、HLA-A,B,C+、
HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–或编程死亡-1配体（PDL1）+中的一种或多种，
或者它们的任意组合。在另一种实施方式中，所述CD3–、CD9–、CD34–、
CD10+、CD105+胎盘干细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、
CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+（CD73+）、SH4+
（CD73+）、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+（CD105+）、CD106/VCAM+、
CD117–、CD144/VE-钙粘素low、CD146+、CD166+、CD184/CXCR4–、CD200+、
CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4-、ABC-p+、KDR-（VEGFR2–）、
HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–和编程死亡-1配体（PDL1）+。
在另一个具体的实施方式中，本文所述的任何分离的胎盘干细胞是
ABC-p+，如通过流式细胞术可检测的，和/或OCT-4+（POU5F1+），如通
过RT-PCR可确定的，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白（也称为
乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和耐米托蒽醌蛋白（MXR）），并且OCT-4是
八聚体-4蛋白（POU5F1）。在另一个具体的实施方式中，本文所述的任何
胎盘干细胞另外是SSEA3–或SSEA4–，如通过流式细胞术可确定的，其中
SSEA3是阶段特异性胚胎抗原3，而SSEA4是阶段特异性胚胎抗原4。在
另一个具体的实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞另外是SSEA3–和
SSEA4–。
在另一个具体的实施方式中，本文所述的任何胎盘干细胞是MHC-I+
（例如，HLA-A,B,C+）、MHC-II–（例如，HLA-DP,DQ,DR-）或HLA-G–
中的一种或多种。在另一个具体的实施方式中，本文所述的任何胎盘干细
胞是MHC-I+（例如，HLA-A,B,C+）、MHC-II–（例如，HLA-DP,DQ,DR-）
和HLA-G–中的一种或多种。
本文还提供了在本文所公开的方法和组合物中有用的包含分离的胎盘
干细胞（例如，富含分离的胎盘干细胞）的细胞群体。优选的细胞群体包
含所述分离的胎盘干细胞，其中在所述细胞群体中至少10%、15%、20%、
25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、
85%、90%、95%或98%的细胞是分离的CD10+、CD105+和CD34-胎盘干细
胞。在具体的实施方式中，所述分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细
胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD34-、CD10+、
CD105+、CD200+胎盘干细胞另外是CD90+或CD45–，如通过流式细胞术可
检测的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD34-、CD10+、CD105+、
CD200+胎盘干细胞另外是CD90+和CD45–，如通过流式细胞术可检测的。
在另一个具体的实施方式中，任何如上所述的分离的CD34-、CD10+、CD105+
胎盘干细胞另外是CD29+、CD38-、CD44+、CD54+、SH3+或SH4+中的一种
或多种。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD34-、CD10+、CD105+
胎盘干细胞或分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘干细胞另外是
CD44+。在任何包含上述分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘干细胞的细胞
群体的具体实施方式中，所述分离的胎盘干细胞另外是CD13+、CD29+、
CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD62E-、CD62L–、CD62P–、SH3+
（CD73+）、SH4+（CD73+）、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+（CD105+）、
CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-钙粘素low、CD184/CXCR4–、CD200+、
CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4-、ABC-p+、KDR-（VEGFR2–）、
HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–或编程死亡-1配体（PDL1）+中
的一种或多种，或它们的任意组合。在另一个具体的实施方式中，所述
CD34–、CD10+、CD105+细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、
CD45–、CD54/ICAM+、CD62E-、CD62L–、CD62P–、SH3+（CD73+）、SH4+
（CD73+）、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+（CD 105+）、CD 106/VCAM+、
CD117–、CD144/VE-钙粘素low、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、
SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR-（VEGFR2–）、HLA-A,B,C+、
HLA-DP,DQ,DR-、HLA-G–和编程死亡-1配体（PDL1）+。
在某些实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘
干细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、
SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+和ABC-p+中的一种或多种
或者全部，其中所述分离的胎盘干细胞是通过胎盘组织的物理和/或酶促破
环获得的。在具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+和
ABC-p+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+
和CD34–，其中所述分离的胎盘干细胞具有以下特征中的至少一种或全部：
CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、SSEA3–
和SSEA4–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+、
CD34–、CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、
SSEA3–和SSEA4–。在另一种实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是
OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–。在另一个具体的实施方式中，所述分
离的胎盘干细胞是OCT-4+和CD34–，以及SH2+或SH3+。在另一个具体的
实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+、CD34-、SH2+和SH3+。在
另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+、CD34-、
SSEA3–和SSEA4–，以及SH2+或SH3+。在另一个具体的实施方式中，所述
分离的胎盘干细胞是OCT-4+和CD34–，以及SH2+或SH3+，并且是CD10+、
CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SSEA3–或SSEA4–中的至少一种。
在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+、CD34-、
CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SSEA3–和SSEA4–，以
及SH2+或SH3+。
在另一种实施方式中，在本文所公开的方法和组合物中有用的所述分
离的胎盘干细胞是SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一个具体的实施方
式中，所述分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、
CD34–、CD45–、SSEA3–或SSEA4–。在另一种实施方式中，所述分离的胎
盘干细胞是SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–。在另一个具体的实施
方式中，所述分离的胎盘干细胞是SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–、
CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、OCT-4+、CD34–或CD45–。
在另一种实施方式中，在本文所公开的方法和组合物中有用的分离的
胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、
SH2+、SH3+和SH4+；其中所述分离的胎盘干细胞另外是OCT-4+、SSEA3–
或SSEA4–中的一种或多种。
在某些实施方式中，在本文所公开的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是CD200+或HLA-G–。在具体的实施方式中，所述分离的胎盘干
细胞是CD200+和HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘
干细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的
胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实
施方式中，所述分离的胎盘干细胞是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+和
CD105+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+或HLA-G–胎盘
干细胞在允许胚状体样体形成的条件下在包含所述分离的胎盘干细胞的胎
盘细胞群体中促进了胚状体样体的形成。在另一个具体的实施方式中，所
述分离的胎盘干细胞是从非干细胞或多能细胞的胎盘细胞中分离出来的。
在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是从不表现出这些标
志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体
是包含（例如，富含）CD200+、HLA-G-胎盘干细胞的细胞群体。在具体的
实施方式中，所述群体是胎盘细胞群体。在多种实施方式中，所述细胞群
体中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或
至少约60%的细胞是分离的CD200+、HLA-G-胎盘干细胞。在某些实施方
式中，所述细胞群体中至少约70%的细胞是分离的CD200+、HLA-G-胎盘
干细胞。在某些其他实施方式中，至少约90%、95%或99%的所述细胞是
分离的CD200+、HLA-G-胎盘干细胞。在所述细胞群体的具体实施方式中，
所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘干细胞还是CD73+和CD105+。在另一个
具体的实施方式中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘干细胞还是CD34–、
CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、HLA-G–
胎盘干细胞还是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+和CD105+。在另一个具体
的实施方式中，所述细胞群体是从非干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在
另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘干细胞是从
不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的所述分离
的胎盘干细胞是CD73+、CD105+和CD200+。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的胎盘干细胞是HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，所述分离
的胎盘干细胞是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方式中，所
述分离的胎盘干细胞是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方式
中，所述分离的胎盘干细胞是CD34–、CD38–、CD45–和HLA-G–。在另一
个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是从非分离的胎盘干细胞的
胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干
细胞是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体
是包含（例如，富含）分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘干细胞的细胞
群体。在多种实施方式中，所述细胞群体中至少约10%、至少约20%、至
少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞是分离的CD73+、
CD105+、CD200+胎盘干细胞。在另一种实施方式中，所述细胞群体中至少
约70%的所述细胞是分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘干细胞。在另一
种实施方式中，所述细胞群体中至少约90%、95%或99%的细胞是分离的
CD73+、CD105+、CD200+胎盘干细胞。在所述群体的具体实施方式中，所
述分离的胎盘干细胞是HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的
胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实
施方式中，所述分离的胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–和HLA-G-。
在另一个具体的实施方式中，所述胎盘细胞群体是从非干细胞的胎盘细胞
中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所述胎盘干细胞群体是从不
表现出这些特征的胎盘细胞中分离出来的。
在某些其他实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、
CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、
SSEA4–、OCT-4+、HLA-G-或ABC-p+中的一种或多种。在具体的实施方式
中，所述分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34-、CD38-、CD44+、
CD45-、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3-、SSEA4-和OCT-4+。
在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、
CD34–、CD38–、CD45–、CD54+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一个具体的实
施方式中，所述分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD45–、
CD54+、SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一个具体的实施方式中，所述
分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、
CD90+、HLA-G–、SH2+、SH3+、SH4+。在另一个具体的实施方式中，所述
分离的胎盘干细胞是OCT-4+和ABC-p+。在另一个具体的实施方式中，所
述分离的胎盘干细胞是SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一种实施方式
中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–。在具
体的实施方式中，所述分离的OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–胎盘干
细胞另外是CD10+、CD29+、CD34–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、
SH3+和SH4+。在另一种实施方式中，所述分离的胎盘干细胞是OCT-4+和
CD34–，以及SH3+或SH4+。在另一种实施方式中，所述分离的胎盘干细胞
是CD34–，以及CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+或OCT-4+。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的所述分离
的胎盘干细胞是CD200+和OCT-4+。在具体的实施方式中，所述分离的胎
盘干细胞是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎
盘干细胞是HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、
OCT-4+胎盘干细胞是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细胞是CD34–、CD38–和CD45–。在另
一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细胞是CD34–、
CD38–、CD45–、CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细胞是从非干细胞的胎盘细胞中分离出
来的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细
胞是从不表现出这些特征的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体
是包含（例如，富含）CD200+、OCT-4+胎盘干细胞的细胞群体。在多种实
施方式中，所述细胞群体中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少
约40%、至少约50%或至少约60%的细胞是分离的CD200+、OCT-4+胎盘
干细胞。在另一种实施方式中，至少约70%的所述细胞是所述分离的
CD200+、OCT-4+胎盘干细胞。在另一种实施方式中，所述细胞群体中至少
约80%、90%、95%或99%的细胞是所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细
胞。在所述分离的群体的具体实施方式中，所述分离的CD200+、OCT-4+
胎盘干细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方式中，所述分
离的CD200+、OCT-4+胎盘干细胞另外是HLA-G–。在另一个具体的实施方
式中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–和
CD45–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘干
细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一
个具体的实施方式中，所述细胞群体是从非分离的CD200+、OCT-4+胎盘干
细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所述细胞群
体是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的所述分离
的胎盘干细胞是CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的CD73+、CD105+和HLA-G–胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–
或CD45–。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、
HLA-G–胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施
方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞另外是OCT-4+。
在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干
细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、
CD105+、HLA-G–胎盘干细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、OCT-4+和
CD200+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–
胎盘干细胞是从非分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞的胎盘细胞
中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、
HLA-G–胎盘干细胞是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体
是包含（例如，富含）分离的CD73+、CD105+和HLA-G–胎盘干细胞的细
胞群体。在多种实施方式中，所述细胞群体中至少约10%、至少约20%、
至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞是分离的CD73+、
CD105+、HLA-G–胎盘干细胞。在另一种实施方式中，所述细胞群体中至少
约70%的细胞是分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞。在另一种实
施方式中，所述细胞群体中至少约90%、95%或99%的细胞是分离的CD73+、
CD105+、HLA-G–胎盘干细胞。在上述群体的具体实施方式中，所述分离的
CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞另外是CD34-、CD38–或CD45–。在
另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细
胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方式中，所述分离
的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞另外是OCT-4+。在另一个具体的
实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干细胞另外是
CD200+。在另一个具体的实施方式中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–
胎盘干细胞另外是CD34-、CD38-、CD45-、OCT-4+和CD200+。在另一个
具体的实施方式中，所述细胞群体是从非CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘干
细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所述细胞群
体是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是分离的HLA-A,B,C+、CD45–、CD133–和CD34–胎盘干细胞。在
另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体是包含
分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述分离的细胞群体中至少约70%、至
少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细胞是分离的
HLA-A,B,C+、CD45–、CD133–和CD34–胎盘干细胞。在具体的实施方式中，
所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞群体是从非HLA-A,B,C+、
CD45–、CD133–和CD34–胎盘干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在本文所述
的任何胎盘干细胞的另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在
来源上是非母体的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞
群体基本不含母体成分；例如，所述分离的胎盘细胞群体中至少约40%、
45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%
或99%的所述细胞在来源上是非母体的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–胎盘
干细胞。在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞
群体是包含所述分离的胎盘干细胞的细胞群体，其中所述细胞群体中至少
约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细胞是所
述分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–胎盘干细胞。
在具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞群体是
从非所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施
方式中，所述分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–
胎盘干细胞在来源上是非母体的，即具有胎儿基因型。在另一个具体的实
施方式中，所述分离的胎盘干细胞群体中至少约40%、45%、50%、55%、
60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%的所述细胞
在来源上是非母体的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细
胞或分离的胎盘干细胞群体是从不表现出这些特征的胎盘细胞中分离出来
的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是分离的CD10–、CD33–、CD44+、CD45–和CD117–胎盘干细胞。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体是包
含（例如，富含）所述分离的胎盘干细胞的细胞群体，其中所述细胞群体
中至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细
胞是分离的CD10–、CD33–、CD44+、CD45–和CD117–胎盘干细胞。在具体
的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞群体是从非所
述胎盘干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方式中，所
述分离的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在另一个具体的实施方式中，
所述细胞群体中至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、
90%、85%、90%、95%、98%或99%的所述胎盘干细胞在来源上是非母体
的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干
细胞群体是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是分离的CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–胎盘干细胞。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体是包
含（例如，富含）分离的CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–胎盘干
细胞的细胞群体，其中所述群体中至少约70%、至少约80%、至少约90%、
至少约95%或至少约99%的细胞是CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–
胎盘干细胞。在具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘
干细胞群体是从非所述胎盘干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具
体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在另一个
具体的实施方式中，所述细胞群体中至少约40%、45%、50%、55%、60%、
65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%的所述细胞在来源
上是非母体的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分
离的胎盘干细胞群体是从不表现出这些特征的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是HLA A,B,C+、CD45–、CD34–和CD133–，并且另外是CD10+、
CD13+、CD38+、CD44+、CD90+、CD105+、CD200+和/或HLA-G–，和/或对
CD117是阴性的。在另一种实施方式中，在本文所述的方法中有用的细胞
群体是包含所述分离的胎盘干细胞的细胞群体，其中所述群体中至少约
20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、
80%、85%、90%、95%、98%或约99%的细胞是作为HLA A,B,C–、CD45–、
CD34–、CD133–的分离的胎盘干细胞，并且另外对CD10、CD13、CD38、
CD44、CD90、CD105、CD200是阳性的，和/或对CD117和/或HLA-G是
阴性的。在具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细
胞群体是从非所述胎盘干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的
实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在另一个具体
的实施方式中，所述细胞群体中至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、
70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%的所述细胞在来源上是
非母体的。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞或分离的
胎盘干细胞群体是从不表现出这些标志物的胎盘细胞中分离出来的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是CD200+和CD10+，如通过抗体结合可确定的，以及CD117–，
如通过抗体结合和RT-PCR两者可确定的。在另一种实施方式中，在本文
所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘干细胞是CD10+、CD29–、CD54+、
CD200+、HLA-G–、MHC I类+和β-2微球蛋白+。在另一种实施方式中，在
本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘干细胞是胎盘细胞，其中至
少一种细胞标志物的表达比间质干细胞（例如，骨髓来源的间质干细胞）
高至少两倍。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在来源
上是非母体的。在另一个具体的实施方式中，所述细胞群体中至少约40%、
45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%
或99%的所述细胞在来源上是非母体的。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、
CD62P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、
CD144/VE-钙粘素low、CD184/CXCR4–、β2-微球蛋白low、MHC-Ilow、MHC-II–、
HLA-Glow和/或PDL1low中的一种或多种。在具体的实施方式中，所述分离
的胎盘干细胞是至少CD29+和CD54+。在另一个具体的实施方式中，所述
分离的胎盘干细胞是至少CD44+和CD106+。在另一个具体的实施方式中，
所述分离的胎盘干细胞是至少CD29+。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体
包含分离的胎盘干细胞，其中所述细胞群体中至少50%、60%、70%、80%、
90%、95%、98%或99%的细胞是分离的胎盘干细胞，所述分离的胎盘干细
胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、
CD62P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、
CD144/VE-钙粘素dim、CD184/CXCR4–、β2-微球蛋白dim、HLA-Idim、HLA-II-、
HLA-Gdim和/或PDL1dim中的一种或多种。在另一个具体的实施方式中，所
述细胞群体中至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的细
胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62-E-、CD62-L-、
CD62-P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、
CD144/VE-钙粘素dim、CD184/CXCR4–、β2-微球蛋白dim、MHC-Idim、MHC-II-、
HLA-Gdim和PDL1dim胎盘干细胞。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎
盘干细胞是CD10+、CD29+、CD34-、CD38-、CD44+、CD45-、CD54+、CD90+、
SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+和ABC-p+中的一种或多种
或者全部，其中ABC-p是胎盘特异的ABC转运蛋白（也称为乳腺癌耐药
蛋白（BCRP）和耐米托蒽醌蛋白（MXR）），其中所述分离的胎盘干细胞
是通过已排出脐带血并灌注以除去残余血液的哺乳动物（例如，人）胎盘
的灌注获得的。
在本文所述的胎盘干细胞的任何实施方式的另一个具体的实施方式
中，所述细胞对于末端酶基因表达是阴性的，对于末端酶活性是阴性的或
者对两者均是阴性的。可以使用（例如）使用（例如）斑点印迹或狭缝印
迹的末端酶RNA的检测；或者端粒重复扩增规程（TRAP）测定（例如，
ELISA，得自Millipore的荧光或凝胶基测定试剂盒）检测末端
酶基因表达。
在本文所述的胎盘干细胞的任何实施方式的另一个具体的实施方式
中，所述胎盘干细胞对波形蛋白是阳性的，例如，至少50%、55%、60%、
65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%的所述胎盘干细胞表达
波形蛋白。可以通过（例如）使用一种或多种抗波形蛋白的抗体（例如，
得自Abcam的所述抗体）的流式细胞术；通过原位荧光染色等检测波形蛋
白。
在本文所述的胎盘干细胞的任何实施方式的另一个具体的实施方式
中，所述胎盘干细胞不分泌可检测量的人绒毛膜促性腺激素（hCG）。可以
通过（例如）使用（例如）hCG单克隆抗体HCG1（Abcam）或多克隆抗
hCG抗体（Abcam，Novus Biologicals）的ELISA或免疫荧光法检测人绒毛
膜促性腺激素。
在本文所述的任何分离的胎盘干细胞的另一种实施方式中，所述分离
的胎盘干细胞群体包含非自然杀伤细胞的CD56+组织培养贴壁胎盘细胞。
在具体的实施方式中，在所述分离的胎盘干细胞群体中所述群体包含约1%
至约30%的所述CD56+胎盘细胞，如通过使用CD56-FITC（异硫氰酸荧光
素）的流式细胞术可确定的。在另一个具体的实施方式中，在所述分离的
胎盘干细胞群体中所述群体包含约16%至约62%的所述CD56+胎盘细胞，
如通过使用CD56-APC（别藻蓝蛋白）的流式细胞术可确定的。
在任何上述特征的另一个具体的实施方式中，细胞标志物（例如，分
化或免疫原性标志物簇）的表达是通过流式细胞术可确定的；在另一个具
体的实施方式中，所述标志物的表达是通过RT-PCR可确定的。
基因谱确认分离的胎盘干细胞与其他细胞（例如，间质干细胞，例如，
骨髓来源的间质干细胞）是可区分的。根据一种或多种基因的表达，本文
所述的分离的胎盘干细胞可以不同于（例如）间质干细胞，与骨髓来源的
间质干细胞相比，在分离的胎盘干细胞或在某些分离的脐带干细胞中所述
基因的表达显著更高。具体地，根据一种或多种基因的表达，在本文提供
的治疗方法中有用的分离的胎盘干细胞可以不同于间质干细胞（例如，骨
髓来源的间质干细胞），当细胞在相同条件下生长时，在所述分离的胎盘
干细胞中所述基因的表达显著高于（即至少两倍高于）相等数目的骨髓来
源的间质干细胞中的表达，其中所述一种或多种基因为ACTG2、ADARB1、
AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、
CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、
GPRC5B、HLA-G、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、
KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、
PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、
TGFB2、VTN、ZC3H12A或任何上述基因的组合。参见（例如）美国专利
申请公开No.2007/0275362，该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入
本文。在某些具体的实施方式中，通过（例如）RT-PCR或微阵列分析（例
如，使用U133-A微阵列（Affymetrix））确定了所述一种或多种基因的所
述表达。在另一个具体的实施方式中，当在包含DMEM-LG（例如，得自
Gibco）；2%胎牛血清（例如，得自Hyclone Labs）；1×胰岛素-转铁蛋白-
硒（ITS）；1×亚油酸-牛血清白蛋白（LA-BSA）；10-9M地塞米松（例如，
得自Sigma）；10-4M抗坏血酸2-磷酸酯（例如，得自Sigma）；10ng/mL
表皮生长因子（例如，得自R&D Systems）；10ng/mL和血小板源性生长
因子（PDGF-BB）（例如，得自R&D Systems）的培养基中培养多次群体
倍增（例如，约3至约35次之间任何次数的群体倍增）时，所述分离的胎
盘干细胞表达所述一个或多个基因。在另一个具体的实施方式中，所述分
离的胎盘干细胞特异的基因是CD200。应理解一般通过胎盘干细胞群体中
基因的聚合体表达分析来评价特定基因（例如，本文所列的任何基因）的
表达。
这些基因的具体序列可见于GenBank，例如，以2008年3月的登录号
no.NM_001615（ACTG2）、BC065545（ADARB1）、NM_181847（AMIGO2）、
AY358590（ARTS-1）、BC074884（B4GALT6）、BC008396（BCHE）、
BC020196（C11orf9）、BC031103（CD200）、NM_001845（COL4A1）、
NM_001846（COL4A2）、BC052289（CPA4）、BC094758（DMD）、AF293359
（DSC3）、NM_001943（DSG2）、AF338241（ELOVL2）、AY336105（F2RL1）、
NM_018215（FLJ10781）、AY416799（GATA6）、BC075798（GPR126）、
NM_016235（GPRC5B）、AF340038（ICAM1）、BC000844（IER3）、BC066339
（IGFBP7）、BC013142（IL1A）、BT019749（IL6）、BC007461（IL18）、
（BC072017）KRT18、BC075839（KRT8）、BC060825（LIPG）、BC065240
（LRAP）、BC010444（MATN2）、BC011908（MEST）、BC068455（NFE2L3）、
NM_014840（NUAK1）、AB006755（PCDH7）、NM_014476（PDLIM3）、
BC126199（PKP-2）、BC090862（RTN1）、BC002538（SERPINB9）、
BC023312（ST3GAL6）、BC001201（ST6GALNAC5）、BC126160或BC065328
（SLC12A8）、BC025697（TCF21）、BC096235（TGFB2）、BC005046
（VTN）和BC005001（ZC3H12A）可见于GenBank。
在某些具体的实施方式中，当细胞在相同条件下生长时，所述分离的
胎盘干细胞以比相同数目的骨髓来源的间质干细胞更高的水平（例如，可
检测地更高的水平）表达ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、
BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、
ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAM1、
IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、
MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、
ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A
中的每一个。
在具体的实施方式中，所述胎盘干细胞以比相同数目的骨髓来源的间
质干细胞（BM-MSC）更高的水平（例如，可检测地更高的水平）表达CD200
和ARTS1（1型氨肽酶调节子肿瘤坏死因子）；CD200和NUAK1、ARTS-1
和LRAP（白血球源性精氨酸氨肽酶）；IL6（白介素-6）和TGFB2（转化
生长因子β2）；IL6和KRT18（角蛋白18）；IER3（即刻早期反应蛋白3）、
MEST（中胚层特异性转录本同源物）和TGFB2；CD200和IER3；CD200
和IL6；CD200和KRT18；CD200和LRAP；CD200和MEST；CD200和
NFE2L3（核因子（红细胞源2）样蛋白3）；或CD200和TGFB2，其中在
培养中所述骨髓来源的间质干细胞经历了与所述分离的胎盘干细胞所经历
的传代次数相等的传代次数。在其他具体的实施方式中，所述胎盘干细胞
以比相同数目的骨髓来源的间质干细胞BM-MSC更高的水平（例如，可检
测地更高的水平）表达ARTS-1、CD200、IL6和LRAP；ARTS-1、IL6、
TGFB2、IER3、KRT18和MEST；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、
MEST、NFE2L3和TGFB2；ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、
MEST、NFE2L3和TGFB2；或IER3、MEST和TGFB2，其中在培养中所
述骨髓来源的间质干细胞经历了与所述分离的胎盘干细胞所经历的传代次
数相等的传代次数。可以通过标准技术评价上述提及的基因的表达（例如，
与骨髓来源的间质干细胞相比的差异表达）。例如，可以通过常规方法分
别选择并构建基于所述基因序列的探针。可以在（例如）包含一种或多种
基因的探针的微阵列（例如，Affymetrix人基因组U133A 2.0
阵列或Affymetrix人基因组U133Plus 2.0（Santa Clara,
California））上评价基因的表达。由于可以使用众所周知的标准技术容易
地产生对修改的序列特异的探针，因此即使特定GenBank登录号的序列被
修改，但仍可以评价这些基因的表达。
这些基因的表达水平可用于确认分离的胎盘干细胞群体的身份，鉴别
细胞群体（由于包含至少多个分离的胎盘干细胞）等。身份确认的分离的
胎盘干细胞群体可以是无性系的（例如，分离的胎盘干细胞群体是从单个
分离的胎盘干细胞扩增的），或者是干细胞的混合群体（例如，包含从多
个分离的胎盘干细胞扩增的分离的胎盘干细胞的细胞群体），或者是包含
如本文所述的分离的胎盘干细胞和至少一种其他类型细胞的细胞群体。
这些基因的表达水平可用于选择分离的胎盘干细胞群体。例如，如果
在来自胎盘干细胞群体的样品中以上所列的一种或多种基因的表达显著高
于相等的间质干细胞（例如，骨髓来源的间质干细胞）群体中的表达，则
可以选择胎盘干细胞群体（例如，无性系扩增的胎盘干细胞）。
可以根据与（例如）间质干细胞对照中所述一种或多种基因的表达水
平（例如，相等数目的骨髓来源的间质干细胞中所述一种或多种基因的表
达水平）相比的一种或多种这些基因的表达水平选择分离的胎盘干细胞。
在一种实施方式中，将包含相等数目的间质干细胞的样品中所述一种或多
种基因的表达水平用作对照。在另一种实施方式中，在一定条件下测试的
分离的胎盘干细胞的对照是表示在所述条件下间质干细胞中所述一种或多
种基因的表达水平的数值。
在某些实施方式中，本文所述的分离的胎盘干细胞在原代培养中或者
在包含（例如）DMEM-LG（Gibco）、2%胎牛血清（FCS）（Hyclone
Laboratories）、1×胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）、1×亚麻酸-牛血清白蛋白
（LA-BSA）、10-9M地塞米松（Sigma）、10-4M抗坏血酸2-磷酸酯（Sigma）、
10ng/ml表皮生长因子（EGF）（R&D Systems）、10ng/ml血小板源性生长
因子（PDGF-BB）（R&D Systems）和100U青霉素/1000U链霉素的培养
基中增殖期间显示出上述特征（例如，细胞表面标志物和/或基因表达谱的
组合）。
在本文所公开的任何胎盘干细胞的某些实施方式中，所述细胞是人细
胞。在本文所公开的任何胎盘干细胞的某些实施方式中，所述细胞标志物
特征或基因表达特征是人标志物或人基因。
在所述分离的胎盘干细胞或包含所述分离的胎盘干细胞的细胞群体的
另一个具体的实施方式中，所述胎盘干细胞或群体已扩增（例如）传代了
至少，约或者不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19或20次，或者增殖了至少，约或者不超过1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、
34、36、38或40次群体倍增。在所述分离的胎盘干细胞或包含所述分离的
胎盘干细胞的细胞群体的另一个具体的实施方式中，所述细胞或群体是原
代分离物。在分离的胎盘干细胞或包含本文所公开的分离的胎盘干细胞的
细胞群体的另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在来源上是
胎儿的（即，具有胎儿的基因型）。
在某些实施方式中，所述分离的胎盘干细胞在生长培养基（即，配制
以促进增殖的培养基）中培养期间（例如，在生长培养基中增殖期间）不
分化。在另一个具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞不需要饲养层
来增殖。在另一个具体的实施方式中，仅由于饲养细胞层的缺少，所述分
离的胎盘干细胞在不存在饲养层的情况下培养时不分化。
在另一种实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞是分
离的胎盘干细胞，其中多个所述分离的胎盘干细胞对醛脱氢酶（ALDH）是
阳性的，如通过醛脱氢酶活性测定所评价的。这些测定在本领域中是已知
的（参见，例如，Bostian和Betts,Biochem.J.,173,787,(1978)）。在具体
的实施方式中，所述ALDH测定使用（Aldagen,Inc.,Ashland,
Oregon）作为醛脱氢酶活性的标志物。在具体的实施方式中，所述多个是
所述细胞群体中约3%至约25%之间的细胞。在另一种实施方式中，本文提
供了分离的脐带细胞（例如，多能的分离的脐带细胞）群体，其中多个所
述分离的脐带细胞对醛脱氢酶是阳性的，如通过使用作为醛
脱氢酶活性指示剂的醛脱氢酶活性测定所评价的。在具体的实施方式中，
所述多个是所述细胞群体中约3%至约25%之间的细胞。在另一种实施方式
中，所述分离的胎盘干细胞群体或分离的脐带干细胞群体显示出比具有大
致相同的细胞数目并且在相同条件下培养的骨髓来源的间质干细胞群体高
至少三倍或至少五倍的ALDH活性。
在本文所提供的方法中有用的胎盘干细胞的任何上述实施方式的具体
实施方式中，所述胎盘干细胞表达本文所述的流式细胞学标志物和/或基因
表达标志物中的任一种或任意组合。在某些实施方式中，本文所述的分离
的胎盘干细胞的分离的群体中至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、
80%、85%、90%、95%或98%的胎盘干细胞表达本文所述的流式细胞学标
志物和/或基因表达标志物中的任一种或任意组合。
在包含本文所述的分离的胎盘干细胞的任何细胞群体的某些实施方式
中，所述细胞群体中的胎盘干细胞基本不含具有母体基因型的细胞；例如，
所述群体中至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、
85%、90%、95%、98%或99%的胎盘干细胞具有胎儿基因型。在包含本文
所述的分离的胎盘干细胞的任何细胞群体的某些其他实施方式中，包含所
述胎盘干细胞的细胞群体基本不含具有母体基因型的细胞；例如，所述群
体中至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、
90%、95%、98%或99%的细胞具有胎儿基因型。
在任何上述分离的胎盘干细胞或分离的胎盘干细胞的细胞群体的具体
实施方式中，所述群体中细胞或至少约95%或约99%的细胞的染色体组型
是正常的。在任何上述胎盘干细胞的另一个具体的实施方式中，所述胎盘
干细胞或所述细胞群体中的细胞在来源上是非母体的。
可以将具有任何上述标志物组合的分离的胎盘干细胞的不同群体以任
何比例混合。可以将上述分离的胎盘干细胞的任何两种或更多种群体混合
以形成分离的胎盘干细胞群体。例如，分离的胎盘干细胞群体可以包含由
如上所述的标志物组合之一所定义的第一分离的胎盘干细胞群体和由如上
所述的标志物组合中另一种所定义的第二分离的胎盘干细胞群体，其中所
述第一和第二群体以约1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、
40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2或约
99:1的比值混合。以类似的方式，可以将任何三种、四种、五种或更多种
上述分离的胎盘干细胞群体混合。
可以通过（例如）使用或不使用酶促消化（参见5.3.3节）或灌注（参
见5.3.4节）的胎盘组织破坏来获得在本文所述的方法和组合物中有用的分
离的胎盘干细胞。例如，可以根据以下方法产生从中可以分离胎盘干细胞
的分离的胎盘细胞群体，所述方法包括灌注已排出脐带血并灌注以除去残
余血液的哺乳动物胎盘；用灌注溶液灌注所述胎盘；和收集所述灌注溶液，
其中灌注后的所述灌注溶液包含含有分离的胎盘干细胞的胎盘细胞群体；
和从所述细胞群体分离多个所述分离的胎盘细胞。在具体的实施方式中，
将灌注溶液通过脐静脉和脐动脉并在其从胎盘流出后收集。在另一个具体
的实施方式中，将灌注溶液通过脐静脉并从脐动脉收集，或者通过脐动脉
并从脐静脉收集。
在多种实施方式中，包含在得自胎盘灌注的细胞群体内的所述分离的
胎盘干细胞是所述胎盘细胞群体的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、
99%或至少99.5%。在另一个具体的实施方式中，通过灌注收集的分离的胎
盘干细胞包含胎儿细胞和母细胞。在另一个具体的实施方式中，通过灌注
收集的分离的胎盘干细胞是至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%
或至少99.5%的胎儿细胞。
在另一个具体的实施方式中，本文提供了包含通过灌注收集的如本文
所述的分离的胎盘干细胞群体的组合物，其中所述组合物包含用于收集所
述分离的胎盘干细胞的灌注溶液的至少一部分。
还可以通过使用一种或多种组织破坏酶的胎盘组织消化以获得包含所
述胎盘干细胞的胎盘细胞群体并且将胎盘干细胞与其余的所述胎盘细胞分
离或基本分离来分离本文所述的胎盘干细胞。可以将全部或部分胎盘消化
以获得本文所述的分离的胎盘干细胞。在其他具体的实施方式中，所述组
织破坏酶是胰蛋白酶或胶原酶。在多种实施方式中，包含在得自胎盘消化
的细胞群体内的所述分离的胎盘干细胞是所述胎盘细胞群体的至少50%、
60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%。
如上所述的分离的胎盘干细胞群体可以包含约，至少或不超过1×105、
5×105、1×106、5×106、1×107、5×107、1×108、5×108、1×109、5×109、1×1010、
5×1010、1×1011个或更多个分离的胎盘干细胞。在本文所述的治疗方法中有
用的分离的胎盘干细胞群体包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、
80%、85%、90%、95%、98%或99%的分离的活胎盘干细胞，例如，如通
过（例如）台盼蓝排阻法可确定的。
在本文所提供的方法中有用的本文所述的胎盘干细胞在原代培养中或
者在包含60%DMEM-LG（Gibco）、40%MCDB-201（Sigma）、2%胎牛
血清（FCS）（Hyclone Laboratories）、1×胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）、1×
亚麻酸-牛血清白蛋白（LA-BSA）、10-9M地塞米松（Sigma）、10-4M抗坏
血酸2-磷酸酯（Sigma）、10ng/ml表皮生长因子（EGF）（R&D Systems）、
10ng/ml血小板源性生长因子（PDGF-BB）（R&D Systems）和100U青霉
素/1000U链霉素的培养基中增殖期间显示出上述特征（例如，细胞表面标
志物和/或基因表达谱的组合）。
5.2.3培养中的生长
在某些实施方式中，在5.2.2节中本文所述的分离的胎盘干细胞的生长
部分取决于选择用于生长的特定培养基。在最适条件下，所述分离的胎盘
干细胞通常在约1-3天中数目加倍。在培养期间，在培养中本文所述的分离
的胎盘干细胞贴壁到基材上，例如，组织培养容器（例如，塑料组织培养
皿、纤连蛋白涂覆的塑料制品等）的表面上，并且形成单层。在具体的实
施方式中，当在37℃，在95%的空气/5%的CO2中，在包含60%DMEM-LG
（Gibco）和40%MCDB-201（Sigma），并且补充了2%胎牛血清（FCS）
（Hyclone Laboratories）、1×胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）、1×亚麻酸-牛血
清白蛋白（LA-BSA）、10-9M地塞米松（Sigma）、10-4M抗坏血酸2-磷酸
酯（Sigma）、10ng/ml表皮生长因子（EGF）（R&D Systems）、10ng/ml
血小板源性生长因子（PDGF-BB）（R&D Systems）和100U青霉素/1000U
链霉素的培养基中；或者在包含DMEM-LG（Gibco），并且补充了2%-10%
胎牛血清（FCS）（Hyclone Laboratories）、1×ITS、1×（LA-BSA）、10-9M
地塞米松（Sigma）、10-4M抗坏血酸2-磷酸酯（Sigma）、10ng/ml表皮生
长因子（EGF）（R&D Systems）、10ng/ml血小板源性生长因子（PDGF-BB）
（R&D Systems）和100U青霉素/1000U链霉素的培养基中培养时，所述胎
盘干细胞在培养中加倍。
5.3获得分离的胎盘干细胞的方法
5.3.1细胞收集组合物
胎盘干细胞是使用生理学可用的溶液（例如，细胞收集组合物）从哺
乳动物胎盘获得的。在相关的美国专利申请公开No.2007/0190042中详细
说明了示例性细胞收集组合物，该专利的公开内容以其全部内容作为参考
并入本文。
细胞收集组合物可以包括适合于细胞（例如，本文所述的分离的胎盘
干细胞）收集和/或培养的任何生理学可用的溶液，例如，盐溶液（例如，
磷酸盐缓冲盐水、克氏液、改良的克氏液、伊格尔氏溶液、0.9%NaCl等）、
培养基（例如，DMEM、H.DMEM等）等。
细胞收集组合物可以包含趋于维持分离的胎盘干细胞的一种或多种成
分，即在从收集到培养期间防止分离的胎盘干细胞死亡或延缓分离的胎盘
干细胞死亡、减少细胞群体中死亡的分离的胎盘干细胞的数目等。这些成
分可以是（例如）细胞凋亡抑制剂（例如，半胱氨酸天冬氨酸酶抑制剂或
JNK抑制剂）；血管扩张剂（例如，硫酸镁、抗高血压药、心房钠尿肽（ANP）、
促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、硝普钠、肼屈嗪、三磷
腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等）；坏死抑制剂（例
如，2-(1H-吲哚-3-基)-3-戊基氨基-马来酰亚胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐或
氯硝西泮）；TNF-α抑制剂；和/或携氧全氟化碳（例如，全氟辛基溴化物、
全氟癸基溴化物等）。
细胞收集组合物可以包含一种或多种组织降解酶，例如，金属蛋白酶、
丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、核糖核酸酶或脱氧核糖核酸酶等。这些酶包
括（但不限于）胶原酶（例如，胶原酶I、II、III或IV、得自溶组织梭状芽
孢杆菌（Clostridium histolyticum）的胶原酶等）；分散酶、嗜热菌蛋白酶、
弹性酶、胰蛋白酶、释放酶、玻璃酸酶等。
细胞收集组合物可以包含杀菌或细菌抑制有效量的抗生素。在某些非
限制性实施方式中，所述抗生素是大环内酯（例如，妥布霉素）、头孢菌
素（例如，头孢氨苄、环己烯胺头孢菌素、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢克
洛、头孢克肟或头孢羟氨苄）、克拉霉素、红霉素、青霉素（例如、青霉
素V）或喹诺酮（例如，氧氟沙星、环丙沙星或诺氟沙星）、四环素、链
霉素等。在具体的实施方式中，所述抗生素对革兰氏（+）和/或革兰氏（-）
细菌是有活性的，例如，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄
色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）等。在一种实施方式中，所述抗生素
是庆大霉素，例如，在培养基中的约0.005%至约0.01%（w/v）。
细胞收集组合物还可以包含一种或多种下列化合物：腺苷（约1mM至
约50mM）；D-葡萄糖（约20mM至约100mM）；镁离子（约1mM至约
50mM）；分子量大于20,000道尔顿的大分子，在一种实施方式中，其以
足以维持内皮完整性和细胞活力的量存在（例如，合成或天然存在的胶体，
如葡聚糖的多糖或聚乙二醇，其以约25g/l至约100g/l或者约40g/l至约
60g/l存在）；抗氧化剂（例如，丁基羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、谷胱
甘肽、维生素C或维生素E，其以约25mM至约100mM存在）；还原剂
（例如，以约0.1mM至约5mM存在的N-乙酰半胱氨酸）；防止钙进入细
胞的试剂（例如，以约2mM至约25mM存在的维拉帕米）；硝酸甘油（例
如，约0.05g/L至约0.2g/L）；抗凝剂，在一种实施方式中，其以足以帮助
防止残余血液凝结的量存在（例如，以约,单位/升至约100,000单位/升的浓
度存在的肝素或水蛭素）；或含有阿米洛利的化合物（例如，阿米洛利、
乙基异丙基阿米洛利、六亚甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或异丁基阿米
洛利，其以约1.0mM至约5mM存在）。
5.3.2胎盘的收集和处理
一般地，在分娩后胎盘娩出后不久回收人胎盘。在优选的实施方式中，
在知情同意后并且在获得患者的完整病历并且该病历与胎盘有关后从患者
回收胎盘。优选地，病历在产后连续。该病历可用于配合由此收获的胎盘
或分离的胎盘干细胞的后续使用。例如，根据病历，分离的人胎盘干细胞
可用于与胎盘有关的婴儿或者婴儿的父母、兄弟或其他亲属的个人化医学。
在分离的胎盘干细胞的回收之前，优选地除去脐带血和胎盘血。在某
些实施方式中，产后回收胎盘中的脐带血。可以对胎盘进行常规脐带血回
收过程。通常，借助于重力使用针或插管对胎盘抽血（参见，例如，Anderson，
美国专利No.5372581；Hessel等人，美国专利No.5415665）。通常将针或
插管置于脐静脉中，并且可以轻轻地按摩胎盘以帮助从胎盘中排出脐带血。
可以通过商业进行这种脐带血回收，例如，LifeBank USA,Cedar Knolls,N.J。
优选地，将胎盘重力放血而无需其他操作从而使脐带血回收期间的组织破
环程度最小。
通常，将胎盘从分娩或生产房间输送到另一个位置（例如，实验室）
以用于通过（例如）灌注或组织解离的脐带血回收和胎盘干细胞收集。优
选地，将胎盘在无菌、隔热的输送装置（将胎盘温度维持在20-28℃之间）
中输送，例如，通过将近端脐带夹紧的胎盘置于无菌自封塑料袋中，然后
置于保温容器中。在另一种实施方式中，在基本如未决美国专利No.7147626
中所述的脐带血收集试剂盒中输送胎盘，该专利的公开内容作为参考并入
本文。优选地，在分娩后的4至24小时将胎盘输送到实验室。在某些实施
方式中，在脐带血回收之前将近端脐带夹紧，优选地，在胎盘中插入的4-5cm
（厘米）内。在其他实施方式中，在脐带血回收后但在胎盘的其他处理前
将近端脐带夹紧。
在细胞收集前，可以将胎盘储存在无菌条件下和室温或5℃至25℃的
温度下。在灌注胎盘以除去任何残留脐带血之前，可以将胎盘储存4至24
小时，多至48小时或48小时以上的一段时间。在一种实施方式中，在娩
出后约0小时至约2小时收获胎盘。优选地，将胎盘在5℃至25℃的温度
下储存在抗凝剂溶液中。适合的抗凝剂溶液在本领域中是熟知的。例如，
可以使用肝素或华法令钠溶液。在优选的实施方式中，所述抗凝剂溶液包
括肝素溶液（例如，1:1000溶液中的1%（w/w））。优选地，在收集胎盘
干细胞之前将放血的胎盘储存不超过36小时。
一旦一般地如上所述收集并制备，则可以采用任何本领域已知的方式
（例如，可以灌注或破坏，例如，用一种或多种组织破坏酶消化）处理哺
乳动物胎盘或其部分以获得分离的胎盘干细胞。
5.3.3胎盘组织的物理破环和酶促消化
在一种实施方式中，通过部分或全部器官的物理破环从哺乳动物胎盘
中收集干细胞。例如，可以（例如）将胎盘或其部分挤压、剪切、剁碎、
切块、切碎、浸软等。然后，可以培养组织以获得分离的胎盘干细胞群体。
通常，使用（例如）培养基、盐溶液或干细胞收集组合物（参见5.5.1节以
及下文）来破坏胎盘组织。
通常，可以通过小块胎盘组织（例如，体积为约1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、
600、700、800、900或约1000立方毫米的胎盘组织块）的破环获得分离的
胎盘干细胞。可以使用任何物理破环方法，但前提条件是所述破环方法在
所述器官中留下多个，更优选地大多数，并且更优选地至少60%、70%、
80%、90%、95%、98%或99%的活细胞，如通过（例如）台盼蓝排阻法可
确定的。
一般地，可以在娩出后约前三天内的任何时候从胎盘或其部分收集分
离的胎盘干细胞，但优选地在娩出后约8小时至约18小时之间收集。
在具体的实施方式中，在适合于分离的胎盘干细胞增殖（参见（例如）
以下描述胎盘干细胞（例如，PDAC）培养的5.6节）的组织培养基中培养
破坏的组织。
在另一个具体的实施方式中，例如，部分通过胎盘组织的物理破环分
离胎盘干细胞，其中所述物理破环包括可以通过利用一种或多种组织水解
酶完成的酶促消化。还可以将胎盘或其部分物理破坏并用一种或多种酶水
解，并且然后将所得材料浸没或混合到细胞收集组合物中。
优选的细胞收集组合物包含一种或多种组织破坏酶。可以用于破坏胎
盘组织的酶包括木瓜蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶，如胰蛋白
酶、糜蛋白酶、胶原酶、分散酶或弹性酶。可以通过血清中的α2微球蛋白
抑制丝氨酸蛋白酶，并因此用于消化的媒介通常是不含血清的。通常在酶
消化程序中使用EDTA和脱氧核糖核酸酶以提高细胞回收的效率。优选地，
稀释消化物以避免将细胞限制在粘稠的消化液内。
可以使用组织消化酶的任意组合。使用胰蛋白酶消化的典型浓度包括
0.1%至约2%的胰蛋白酶，例如，约0.25%的胰蛋白酶。蛋白酶可以组合使
用，即在相同消化反应中使用两种或更多种蛋白酶，或者可以顺序使用以
释放胎盘干细胞。例如，在一种实施方式中，首先用约1至约2mg/ml的适
量胶原酶I将胎盘或其部分消化（例如）30分钟，然后以约0.25%的浓度
使用胰蛋白酶在37℃消化（例如）10分钟。优选地，在使用其他酶之后，
连续使用丝氨酸蛋白酶。
在另一种实施方式中，还可以通过将螯合剂（例如，乙二醇双(2-氨基
乙醚)-N,N,N′,N′-四乙酸（EGTA）或乙二胺四乙酸（EDTA））加入至包含
干细胞的干细胞收集组合物中，或者加入到其中在胎盘干细胞的分离之前
用干细胞收集组合物破坏和/或消化组织的溶液中来破坏组织。
消化后，用培养基清洗消化物（例如）三次并且将清洗的细胞接种到
培养瓶中。然后，通过差异贴壁性分离细胞并鉴别（例如）活力、细胞表
面标志物、分化等。
将理解当整个胎盘或胎盘的一部分包含胎儿和母体细胞两者时（例如，
当胎盘的一部分包含绒毛膜或绒毛叶时），所分离的胎盘干细胞可以包含
来源于胎儿和母体来源两者的胎盘干细胞的混合。当胎盘的一部分不包含
或包含数目可忽略的母体细胞（例如，羊膜）时，由此分离的胎盘干细胞
将几乎只包含胎儿胎盘干细胞（也就是说，胎盘干细胞具有胎儿基因型）。
可以通过差异胰酶消化（参见以下5.3.5节）并随后在一个或多个新培
养容器中的新鲜增殖培养基中培养并可选地随后进行第二差异胰酶消化步
骤来从破坏的胎盘组织中分离胎盘干细胞，例如，以上5.2.2节中所述的胎
盘干细胞。
5.3.4胎盘灌注
还可以（例如）部分通过哺乳动物胎盘的灌注分离胎盘干细胞，例如，
以上5.2.2节中所述的胎盘干细胞。例如，在美国专利No.7045148和
7255729、在美国专利申请公开No.2007/0275362和2007/0190042中公开了
灌注哺乳动物胎盘以获得胎盘干细胞的方法，以上每篇专利的公开内容以
其全部内容作为参考并入本文。
可以通过使用（例如）细胞收集组合物作为灌注溶液（例如）通过胎
盘脉管系统灌注来收集（例如，分离）胎盘干细胞。在一种实施方式中，
通过将灌注溶液穿过脐动脉和脐静脉之一或两者来灌注哺乳动物胎盘。可
以使用（例如）重力流动至胎盘来完成通过胎盘的灌注溶液的流动。优选
地，使用泵（例如，蠕动泵）迫使灌注溶液通过胎盘。可以（例如）用连
接到无菌连接装置（如，无菌管）的插管（例如，或塑料插管）
插入脐静脉。将无菌连接装置连接到灌注歧管。
在为灌注做准备时，优选地以使脐动脉和脐静脉位于胎盘最高点的方
式定向（例如，悬挂）胎盘。可以通过将灌注液体穿过胎盘脉管系统和周
围组织来灌注胎盘。还可以通过将灌注液体穿过脐静脉并从脐动脉收集或
者将灌注液体穿过脐动脉并从脐静脉收集来灌注胎盘。
在一种实施方式中，例如，同时将脐动脉和脐静脉连接至（例如）通
过挠性连接器连接至灌注溶液储罐的吸移管。将灌注溶液通过至脐静脉和
动脉。灌注溶液从血管壁流出和/或穿过血管壁至胎盘的周围组织，并且从
连接至妊娠期间的母体子宫的胎盘表面收集至适合的开放容器中。还可以
将灌注溶液引入通过脐带开口并允许从与母体子宫壁连接的胎盘壁中的开
口中流出或渗出。通过这种方法（该方法可以称为“盘”法（pan method））
收集的胎盘干细胞通常是胎儿和母体细胞的混合物。
在另一种实施方式中，将灌注溶液通过脐静脉并从脐动脉收集，或者
通过脐动脉并从脐静脉收集。通过这种方法（该方法可以称为“封闭回路”
法（closed circuit method））收集的胎盘干细胞通常几乎只是胎儿细胞。
将理解使用盘法（即，其中在灌注液从胎盘母体侧流出后收集灌注液）
的灌注导致产生了胎儿和母体细胞的混合。因此，通过该方法收集的细胞
可以包含胎儿和母体来源的胎盘干细胞的混合群体。相反，仅通过封闭回
路法中的胎盘脉管系统的灌注（其中灌注液通过一个或两个胎盘血管并仅
通过剩余的血管收集）导致收集了几乎只有胎儿来源的胎盘干细胞群体。
在一种实施方式中，可以如下所示进行封闭回路灌注法。在分娩后约
48小时内获得分娩后胎盘。夹紧脐带并在夹子上方切割。可以将脐带丢弃，
或加工以回收（例如）脐带干细胞和/或以加工脐带膜用于生产生物材料。
可以在灌注期间保留羊膜，或者可以（例如）用手指使用钝器切开将其与
绒毛膜分离。如果在灌注之前将羊膜与绒毛膜分离，则可以将其（例如）
丢弃或通过酶促消化加工以（例如）获得干细胞或以产生（例如）羊膜生
物材料，例如，美国专利申请公开No.2004/0048796中所述的生物材料，
该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。在（例如）使用消毒
纱布清洗胎盘的所有可见血块和残余血液后，通过（例如）部分切割脐带
膜以暴露脐带横截面来暴露脐带血管。鉴别血管并通过（例如）将闭合的
鳄鱼夹向前通过每根血管的切头来打开血管。然后，将所述装置（例如，
连接到灌注装置或蠕动泵的塑料管）插入每根胎盘动脉。所述泵可以是适
合于该目的的任何泵，例如，蠕动泵。然后，将连接到无菌收集储罐（例
如，血液袋，如250mL收集袋）的塑料管插入胎盘静脉。作为另外一种选
择，将连接到泵的管插入胎盘静脉，并将连接到收集储罐的管插入胎盘动
脉之一或两者。然后，用大量灌注溶液（例如，约750ml灌注溶液）灌注
胎盘。然后，通过（例如）离心作用收集灌注液中的细胞。在某些实施方
式中，在灌注以收集胎盘干细胞之前，用灌注溶液（例如，100-300mL灌
注溶液）灌注胎盘以除去残余血液。在另一种实施方式中，在灌注以收集
胎盘干细胞之前不用灌注溶液灌注胎盘以除去残余血液。
在一种实施方式中，在灌注期间将近端脐带夹紧，并且更优选地，在
胎盘中脐带插入的4-5cm（厘米）内夹紧近端脐带。
一般地，放血过程中来自哺乳动物胎盘的第一次收集的灌注液被脐带
血和/或胎盘血的残留红细胞染色。随着灌注的进行，灌注液变得更无色并
且残留的脐带血细胞被清洗出胎盘。一般地，30ml至100ml（毫升）的灌
注液满足了初始对胎盘的放血，但是根据观察结果可以使用更多或更少的
灌注液。
可以根据要收集的细胞数目、胎盘的尺寸、对单个胎盘进行收集的次
数等改变用于分离胎盘干细胞的灌注液的量。在多个实施方式中，灌注液
的量可以为50mL至5000mL、50mL至4000mL、50mL至3000mL、100
mL至2000mL、250mL至2000mL、500mL至2000mL或者750mL到
2000mL。通常，在放血后用700-800mL的灌注液灌注胎盘。
可以在几小时或几天的过程中对胎盘灌注多次。当将胎盘灌注多次时，
可以将其在无菌条件下在容器或其他适合的器皿中维持或培养，并用细胞
收集组合物或标准灌注溶液（例如，生理盐溶液，如加入或未加入抗凝剂
（例如，肝素、华法令钠、香豆素、双香豆素）和/或加入或未加入抗微生
物剂（例如，β-巯基乙醇（0.1mM）；抗生素，如链霉素（例如，40-100μg/ml）、
青霉素（例如，40U/ml）、两性霉素B（例如，0.5μg/ml））的磷酸盐缓冲
盐水（“PBS”））灌注。在一种实施方式中，将分离的胎盘维持或培养一段
时间而不收集灌注液，从而在灌注液的灌注和收集之前将该胎盘维持或培
养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、
19、20、21、22、23或24小时，或者2或3或更多天。可以将灌注的胎盘
维持额外的一次或多次，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或更多个小时，并用
（例如）700-800mL灌注液灌注第二次。可以将胎盘灌注1、2、3、4、5
或更多次，例如，每1、2、3、4、5或6小时一次。在优选的实施方式中，
重复胎盘的灌注和灌注溶液（例如，细胞收集组合物）的收集直至回收的
有核细胞的数目低于100个细胞/毫升。可以在不同的时间点分别进一步处
理灌注液以回收时间依赖的细胞（例如，干细胞）群体。还可以将来自不
同时间点的灌注液混合。在优选的实施方式中，在娩出后的约8小时至约
18小时之间收集一次或多次胎盘干细胞。
可以通过用包含一种或多种蛋白酶或其他组织破坏酶的溶液灌注来将
胎盘干细胞与胎盘分离。在具体的实施方式中，使胎盘或其部分（例如，
羊膜、羊膜和绒毛膜、胎盘小叶或胎盘绒毛叶、脐带或任何上述部分的组
合）恢复至25-37℃，并在200mL培养基中与一种或多种组织破坏酶培育
30分钟。收集来自灌注液的细胞，使其恢复至4℃，并用包含5mM EDTA、
2mM二硫苏糖醇和2mM β-巯基乙醇的冷抑制剂混合物清洗。几分钟后，
用冷（例如，4)℃干细胞收集组合物清洗胎盘干细胞。
在某些实施方式中，在无菌罩下方的（例如）盘中开放进行灌注（无
论是通过盘法或通过封闭回路法）。在某些其他实施方式中，在封闭环境
（例如，含有胎盘的无菌袋）内进行灌注。在某些其他实施方式中，在灌
注期间将胎盘折叠（例如，对半或基本对半折叠）一次或多次。在具体的
实施方式中，通过手工或机械完成折叠。
如上所述进行的灌注导致了胎盘灌注液（包含不同胎盘细胞的异源群
体的溶液，所述群体包含如以上5.2.2节中所述的组织培养贴壁胎盘干细胞
以及非组织培养贴壁造血胎盘干细胞，例如，CD34+胎盘干细胞）的收集。
5.3.5胎盘干细胞的分离、分选和鉴别
开始，可以通过Ficoll梯度离心从其他细胞纯化（即，分离）无论是通
过灌注还是通过（例如）酶促消化的物理破环获得的分离的胎盘干细胞，
例如，以上5.2.2节中所述的组织培养贴壁细胞。这种离心作用可以按照对
于离心速度等的任何标准规程进行。在一种实施方式中，例如，通过在室
温下以5000×g离心15分钟从灌注液回收了收集自胎盘的细胞，该离心作
用将细胞与（例如）污染碎片和血小板分离。在某些实施方式中，以约1.070
g/ml至约1.090g/mL的密度使用聚蔗糖（Ficoll），例如，约1.073g/mL、
1.077g/mL或约1.084g/mL；将在这些密度梯度的顶部收集胎盘干细胞。在
另一种实施方式中，将胎盘灌注液浓缩至约200ml，轻轻地在聚蔗糖上方
成层，并在22℃以约1100×g离心20分钟，并且收集细胞的低密度中间层
以用于其他处理。
可以将细胞颗粒在新鲜的干细胞收集组合物中或者在适合于细胞维持
（例如，干细胞维持）的培养基（例如，含有2U/ml肝素和2mM EDTA的
IMDM无血清培养基（GibcoBRL,NY））中再悬浮。可以（例如）根据生
产商推荐的程序使用Lymphoprep（Nycomed Pharma,Oslo,Norway）分离总
单核细胞部份。
可以通过使用（例如）含有0.2%EDTA（Sigma,St.Louis MO）的0.05%
的胰蛋白酶溶液的差异胰酶消化进一步或初始分离通过灌注或消化获得的
胎盘干细胞。差异胰酶消化可能是由于组织培养贴壁的分离的胎盘干细胞
通常在约5分钟内从塑料表面上分开，而其他贴壁群体通常需要20-30分钟
以上的培育。可以在胰酶消化和使用（例如）胰蛋白酶中和溶液（TNS,
Cambrex）的胰蛋白酶中和后收获分开的胎盘干细胞。在贴壁细胞分离的一
种实施方式中，将细胞等份（例如，约5-10×106个细胞）分别置于几个T-75
烧瓶中，优选地纤连蛋白涂覆的T75烧瓶。在这种实施方式中，可以用可
商购的间质干细胞生长培养基（MSCGM）（Cambrex）培养细胞并将其置
于组织培养箱（37℃，5%的CO2）中。10至15天后，通过用PBS清洗从
烧瓶中除去非贴壁细胞。然后，用MSCGM替代PBS。
可以（例如）通过使用标准细胞检测技术（如流式细胞术、细胞分选、
免疫细胞化学（例如，用组织特异或细胞标志物特异的抗体染色）、荧光
激活细胞分选（FACS）、磁性激活细胞分选（MACS））测量形态和细胞
表面标志物的变化，通过使用光学或共聚焦显微镜检查法检查细胞形态和/
或通过使用本领域中熟知的技术（如PCR和基因表达谱）测量基因表达的
变化来监测从哺乳动物胎盘收集的细胞的数目和类型。这些技术也可以用
于鉴别对一种或多种特定标志物呈阳性的细胞。例如，使用抗CD73抗体，
使用上述技术可以确定细胞是否包含可检测数量的CD73；如果是，则该细
胞是CD73+。同样，如果细胞产生通过RT-PCR可检测的足够的OCT-4或
者产生比成体（终末分化）细胞（例如，真皮成纤维细胞）显著更多的OCT-4，
则该细胞是OCT-4+。在具体的实施方式中，如果使用适合的引物对通过
RT-PCR在35次或以下的循环中将mRNA扩增高于背景，则该细胞对特定
mRNA是阳性的。抗细胞表面标志物（例如，CD标志物，如CD34）的抗
体和干细胞特异基因（如OCT-4）的序列在本领域中是熟知的。
可以使用（例如）荧光激活细胞分选仪（FACS）分选胎盘干细胞，特
别是已通过聚蔗糖分离、差异贴壁或两者组合分离的细胞。荧光激活细胞
分选（FACS）是根据颗粒的荧光性能分离包括细胞在内的颗粒的熟知方法
（Kamarch,1987,Methods Enzymol,151:150-165）。在一种实施方式中，用
不同的荧光标记物标记细胞表面标志物特异的抗体或配体。通过细胞分选
仪处理细胞，从而允许根据它们与所使用的抗体结合的能力分离细胞。可
以将FACS分选的颗粒直接沉积到96孔板或384孔板的各个孔中以有利于
分离和克隆。
在一个分选方案中，根据标志物CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、
CD105、CD133、CD166、CD200和/或KDR中的一种或多种的表达分选了
胎盘干细胞（例如，PDAC）；也就是说，根据CD44、CD73、CD90、CD105、
CD166或CD200中一种或多种的表达和/或CD34、CD45、CD133或KDR
表达的缺少分选胎盘干细胞。这可以与根据它们在培养中的贴壁性能选择
这些细胞的程序结合完成。例如，可以在根据标志物表达的分选之前或之
后完成组织培养贴壁选择。在一种实施方式中，例如，首选根据它们的CD34
表达分选细胞；保留CD34–细胞，并且将另外是CD73+、CD90+或CD200+
中的一种或多种的CD34–细胞与所有其他CD34–细胞分离。在另一种实施
方式中，根据它们的CD200表达分选来自胎盘的细胞；例如，将显示出
CD200的细胞分离用于其他用途。在具体的实施方式中，可以根据它们的
CD73和/或CD105表达，或者通过抗体SH2、SH3或SH4识别的表位，或
者CD34、CD38或CD45表达的缺少进一步分选表达（例如）CD200的细
胞。例如，在另一种实施方式中，通过CD200、CD73、CD105、CD34、
CD38和CD45的表达或表达缺少来分选胎盘干细胞，并且将作为CD200+、
CD73+、CD105+、CD34–、CD38–和CD45–的胎盘干细胞与其他胎盘细胞分
离以用于其他用途。
细胞分选可以用于确认胎盘干细胞群体的身份。例如，可以将本文所
述的组织培养贴壁胎盘干细胞（例如，PDAC）培养一次或多次传代，然后
收集并使用抗CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105和/或CD200
的抗体鉴别样品以确定是否（例如）70%、75%、80%、85%、90%、95%
或98%的培养细胞是CD34–、CD44+、CD45–、CD73+、CD90+、CD105+和/
或CD200+。
在分选的胎盘干细胞的任何上述实施方式的具体实施方式中，分选后
在细胞群体中保留的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%的细胞是所
述分离的胎盘干细胞。可以根据以上5.2.2节中所述的任何标志物中的一种
或多种来分选胎盘干细胞。在具体的实施方式中，例如，将（1）贴壁至组
织培养塑料制品和（2）作为CD10+、CD34–和CD105+的胎盘细胞从其他胎
盘细胞中分选（即，分离）出。在另一个具体的实施方式中，将（1）贴壁
至组织培养塑料制品和（2）作为CD10+、CD34–、CD105+和CD200+的胎
盘细胞从其他胎盘细胞中分选（即，分离）出。在另一个具体的实施方式
中，将（1）贴壁至组织培养塑料制品和（2）作为CD10+、CD34–、CD45–、
CD90+、CD105+和CD200+的胎盘细胞从其他胎盘细胞中分选（即，分离）
出。然而，不需要根据要“分离的”特定细胞标志物或细胞标志物组分选胎盘
干细胞。
相对于胎盘干细胞的核苷酸序列基检测和/或分析，本文所列的标志物
序列在公开可用的数据库（如GenBank或EMBL）中易于获得。
相对于胎盘干细胞（例如，胎盘干细胞或胎盘多能细胞）的抗体介导
的检测和分选，可以与适合于细胞检测和分选的任何荧光团或其他标记物
（例如，荧光激活细胞分选）结合使用对特定标志物特异的任何抗体。相
对于特定标志物的抗体/荧光团组合包括（但不限于）抗HLA-G（得自Serotec,
Raleigh,North Carolina）、CD10（得自BD Immunocytometry Systems,San Jose,
California）、CD44（得自BD Biosciences Pharmingen,San Jose,California）
和CD105（得自R&D Systems Inc.,Minneapolis,Minnesota）的异硫氰酸荧
光素（FITC）结合的单克隆抗体；抗CD44、CD200、CD117和CD13的藻
红蛋白（PE）结合的单克隆抗体（BD Biosciences Pharmingen）；抗CD33
和CD10的藻红蛋白-Cy7（PE Cy7）结合的单克隆抗体（BD Biosciences
Pharmingen）；抗CD38的别藻蓝蛋白（APC）结合的抗生蛋白链菌素和单
克隆抗体（BD Biosciences Pharmingen）；和生物素化的CD90（BD
Biosciences Pharmingen）。可以使用的其他抗体包括（但不限于）CD133-APC
（Miltenyi）、KDR-生物素（CD309,Abcam）、细胞角蛋白-Fitc（Sigma
或Dako）、HLA ABC-Fitc（BD）、HLA DR,DQ,DP-PE（BD）、β-2-微球
蛋白-PE（BD）、CD80-PE（BD）和CD86-APC（BD）。可以使用的其他
抗体/标记物组合包括（但不限于）CD45-PerCP（藻多甲素叶绿素蛋白）；
CD44-PE；CD10-F（荧烷二醇）；HLA-G-F和7-氨基-放线菌素-D（7-AAD）；
HLA-ABC-F等。该列表不是完全的，并且来自其他供应商的其他抗体也是
可商购的。
可以使用（例如）藻红蛋白-Cy5（PE Cy5）结合的抗生蛋白链菌素和
抗CD117或CD133的生物素结合的单克隆抗体对CD117或CD133测定分
离的胎盘干细胞；然而，使用该系统，由于相对高的背景，细胞可以分别
表现为对CD117或CD133呈阳性。
可以用抗单个标志物的抗体标记分离的胎盘干细胞并对其进行检测和/
分选。还可以用抗不同标志物的多个抗体同时标记胎盘干细胞。
在另一种实施方式中，可以使用磁珠将细胞（例如，胎盘干细胞）与
其他胎盘细胞分离。可以使用磁性激活细胞分选（MACS）技术对细胞进行
分选，该技术是基于它们结合磁珠（0.5-100μm直径）的能力分离颗粒的方
法。可以对磁性微球体进行多种有用的修饰，其包括特异性识别特定细胞
表面分子或半抗原的抗体的共价加成。然后，将珠与细胞混合以使其结合。
然后，将细胞通过磁场以分离出具有特异性细胞表面标志物的细胞。在一
种实施方式中，然后可以将这些细胞分离并与和抗其他细胞表面标志物的
抗体结合的磁珠再混合。将这些细胞再次通过磁场，从而分离出与两种抗
体结合的细胞。然后，可以将这些细胞稀释至单独的盘中，如用于无性系
分离的微量滴定盘。
还可以根据细胞形态和生长特征来鉴别和/或分选分离的胎盘干细胞。
例如，可以将培养中的分离的胎盘干细胞鉴别为具有（例如）成纤维样外
观和/或根据（例如）成纤维样外观进行选择。还可以将分离的胎盘干细胞
鉴定为具有形成胚状体样体的能力和/或根据它们形成胚状体样体的能力进
行选择。在一种实施方式中，例如，将处于成纤维样形状，表达CD73和
CD105并且在培养中产生一个或多个胚状体样体的胎盘干细胞与其他胎盘
细胞分离。在另一种实施方式中，将在培养中产生一个或多个胚状体样体
的OCT-4+胎盘干细胞与其他胎盘细胞分离。
可以使用本领域中已知的标准技术对分离的胎盘干细胞测定活力、增
殖潜能和寿命，所述标准技术如台盼蓝排阻测定、荧光素二乙酸酯吸收测
定、碘化丙啶吸收测定（以评价活力）；和胸苷吸收测定、MTT（3-(4,5-
二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯四唑溴化物）细胞增殖测定（以评价增殖）。可
以通过本领域中熟知的方法确定寿命，如通过确定扩大培养中群体倍增的
最大次数。
还可以使用本领域中已知的其他技术将分离的胎盘干细胞（例如，以
上5.2.2节中所述的分离的胎盘干细胞）与其他胎盘细胞分离，所述技术例
如所需细胞的选择性生长（阳性选择）、不希望的细胞的选择性破坏（阴
性选择）；基于混合群体中差异细胞可凝集性的分离，如（例如）使用大
豆凝集素；冻融程序；过滤；常规和区带离心；离心淘选（逆流离心作用）；
单位重力分离；逆流分配；电泳等。
5.4分离的胎盘干细胞的培养
5.4.1培养基
可以将分离的胎盘细胞或从中生长出胎盘干细胞的胎盘组织用于起始
或接种胎盘干细胞的培养。一般将细胞转移至未用胞外基质或配体涂覆或
用其涂覆的无菌组织培养容器中，所述胞外基质或配体如层粘连蛋白、胶
原（例如，天然或变性）、明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜
蛋白（例如，（BD Discovery Labware,Bedford,Mass.））。类
似的程序可以用于BM-MSC培养。
可以在本领域中认为是对细胞（例如，干细胞）培养可用的任何培养
基中和任何条件下培养分离的胎盘细胞（例如，分离的胎盘干细胞）。优
选地，所述培养基包含血清，例如，小牛血清、人血清等。分离的胎盘干
细胞可以在（例如）含有ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒）、LA+BSA（亚油酸-
牛血清白蛋白）、地塞米松L-抗坏血酸、PDGF、EGF、IGF-1和青霉素/
链霉素的DMEM-LG（达尔伯克氏改良基础培养基，低葡萄糖）/MCDB 201
（小鸡成纤维细胞基础培养基）；包含10%胎牛血清（FBS）的DMEM-HG
（高葡萄糖）；包含15%FBS的DMEM-HG；包含10%FBS、10%马血清
和氢化可的松的IMDM（伊思考夫改良达尔伯克氏培养基)；包含1%至20%
FBS、EGF和肝素的M199；包含10%FBS、和庆大霉素的
α-MEM（最低必需培养基）；包含10%FBS、和庆大霉素的
DMEM等。
其中可用于培养胎盘干细胞的其他培养基包括DMEM（高或低葡萄
糖）、伊格尔基础培养基、汉姆氏F10培养基（F10）、汉姆氏F-12培养
基（F12）、伊思考夫改良的达尔伯克氏培养基、间质干细胞生长培养基
（MSCGM）、莱博维茨L-15培养基（Liebovitz′s L-15medium）、MCDB、
DMEM/F12、RPMI 1640、高级DMEM（Gibco）、DMEM/MCDB201（Sigma）
和CELL-GRO FREE。
所述培养基可以单独或组合补充一种或多种成分，其包括（例如）血
清（例如，胎牛血清（FBS），优选地约2-15%（v/v）；马（马）血清（ES）；
人血清（HS））；β-巯基乙醇（BME），优选地约0.001%（v/v）；一种
或多种生长因子，例如，血小板源性生长因子（PDGF）、表皮生长因子
（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、胰岛素样生长因子-1（IGF
-1）、白血病抑制因子（LIF）、血管内皮生长因子（VEGF）和促红细胞
生成素（EPO）；氨基酸，其包括L-缬氨酸；和控制微生物污染的一种或
多种抗生素和/或抗霉菌剂，如（例如）青霉素、链霉素硫酸盐、两性霉素
B、庆大霉素和制霉菌素。
在某些实施方式中，可以在包含补充有胎牛血清（FBS，例如，1.9%
的FBS（v/v））、亚油酸-白蛋白（例如，0.01%v/v）（Sigma）、胰岛素-
转铁蛋白-硒（0.97%v/v）（Invitrogen,Carlsbad,CA）、庆大霉素（例如，
48μg/mL）（Invitrogen）、L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐（例如，97μM）（Sigma）、
48nM地塞米松（Sigma）、重组人PDGF-BB（例如，9.7ng/ml）（Invitrogen）
和重组人EGF（例如，9.7ng/ml）（Invitrogen）的DMEM培养基的培养基
中培养适合在本文所述的方法中使用的胎盘干细胞。
可以在标准的组织培养条件下（例如，在组织培养盘或多孔板中）培
养分离的胎盘干细胞。还可以使用悬滴法培养分离的胎盘干细胞。在该方
法中，将分离的胎盘干细胞以约1×104个细胞/毫升悬浮在约5mL培养基中，
并且将一滴或多滴培养基置于组织培养容器（例如，100ml培养皿）盖板内
侧上。所述滴可以是来自（例如）多通道吸液管的（例如）单滴或多滴。
小心地将所述盖板翻转并置于培养皿底部的上方，所述培养皿底部含有大
量液体（例如，足以维持培养皿气氛中湿度的无菌PBS），并且培养胎盘
干细胞。
在一种实施方式中，在存在起维持分离的胎盘干细胞中未分化表型的
作用的化合物的情况下培养分离的胎盘干细胞。在这个方面，“未分化的”
不需要是完全未分化的，例如，涵盖了与终末分化细胞或者引起分化从而
表现出终末分化细胞的一个或多个特征的胎盘干细胞相比相对未分化的表
型。在具体的实施方式中，该化合物是取代的3,4-二氢吡啶酚[4,5-d]嘧啶。
在另一个具体的实施方式中，该化合物是具有以下化学结构的化合物：
该化合物可以（例如）以约1μM至约10μM之间的浓度与分离的胎盘
干细胞接触。
5.4.2胎盘干细胞的扩增和增殖
一旦胎盘干细胞已分离（例如，与至少50%的胎盘干细胞在体内与之
正常相连的胎盘细胞分离），则所述细胞或细胞群体可以体外增殖和扩增。
例如，可以在组织培养容器（例如，盘、烧瓶、多孔板等）中将分离的胎
盘干细胞培养足以使所述细胞增殖至70-90%汇合（即，直至所述细胞以及
它们的子代占据组织培养容器的培养表面积的70-90%）的一段时间。
可以将分离的胎盘干细胞以允许细胞生长的密度接种到培养容器中。
例如，可以将细胞以低密度（例如，约1000至约5000个细胞/平方厘米）
至高密度（例如，约50,000个细胞/平方厘米或以上）接种。在优选的实施
方式中，在空气中存在约0至约5体积%的CO2的情况下培养细胞。在一
些优选的实施方式中，将细胞在空气中约2至约25%的O2的情况下培养，
优选地，在空气中约5至约20%的O2的情况下培养。优选地，将细胞在约
25℃至约40C培养，优选地，在37℃培养。优选地，将细胞在培育箱中
培养。培养基可以是静止的或搅拌的，例如，使用生物反应器。在某些实
施方式中，胎盘干细胞在低氧胁迫（例如，加入谷胱甘肽、抗坏血酸、过
氧化氢酶、维生素E、N-乙酰半胱氨酸等）条件下生长。
一旦获得小于100%（例如，70%至90%）的汇合，则细胞可以传代。
例如，可以使用本领域中公知的技术对细胞进行酶促处理（例如，胰蛋白
酶化）以将它们从组织培养表面上分离。通过吸取除去细胞并对细胞计数
后，将约10,000-100,000个细胞/平方厘米传代至含有新鲜培养基的新培养
容器中。通常，新的培养基与从中除去分离的胎盘干细胞的培养基的类型
相同。可以将分离的胎盘干细胞传代约，至少或不超过1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10、12、14、16、18或20次或更多次。
5.4.3分离的胎盘干细胞群体
本文还提供了在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘干细胞
群体，例如，以上5.2.2节中所述的分离的胎盘干细胞。分离的胎盘干细胞
群体可以直接从一个或多个胎盘中分离；即，所述细胞群体可以是包含分
离的胎盘细胞的胎盘细胞群体，其中所述分离的胎盘干细胞得自或包含在
灌注液内，或者得自或包含在破坏的胎盘组织（例如，胎盘组织消化物（即，
通过胎盘或其部分的酶促消化获得的细胞收集物））内。还可以培养并扩
增本文所述的分离的胎盘干细胞以产生分离的胎盘干细胞群体。还可以培
养并扩增包含分离的胎盘干细胞的胎盘细胞群体以产生胎盘干细胞群体。
在本文所提供的治疗方法中有用的胎盘干细胞群体包含分离的胎盘干
细胞，例如，如本文5.2.2节中所述的分离的胎盘干细胞。在多个实施方式
中，胎盘细胞群体中至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、
90%、95%或99%的细胞是所述分离的胎盘干细胞。也就是说，分离的胎盘
细胞群体可以包含（例如）多至1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、
60%、70%、80%、90%的非分离的胎盘干细胞的细胞。
可以通过（例如）选择表达特定标志物和/或特定培养或形态特征的分
离的胎盘细胞而无论其来源于酶促消化或灌注来产生在本文所述的方法和
组合物中有用的包含分离的胎盘干细胞的分离的胎盘细胞群体。在多个实
施方式中，例如，本文提供了通过选择包含如本文在（例如）以上5.2节中
所述的（a）贴壁至基材和（b）表达流式细胞学标志物和/或基因表达特征
中任一项或其任意组合的胎盘干细胞的胎盘细胞来产生细胞群体的方法。
在另一个方面，可以通过选择标志物表达特征以及胎盘干细胞群体（例
如，胎盘干细胞群体样品）抑制（例如，可检测地抑制）骨相关癌细胞增
殖的能力来产生胎盘干细胞（例如，在以上5.2节中所述的胎盘干细胞）群
体。在多个实施方式中，所述骨相关癌细胞是多发性骨髓瘤细胞、软骨肉
瘤细胞、骨癌细胞、神经母细胞瘤细胞、骨肉瘤细胞、尤文氏肉瘤细胞、
脊索瘤细胞、骨恶性纤维组织细胞瘤细胞、前列腺癌细胞或骨纤维肉瘤细
胞。为了鉴别满足（例如）有效性的某些预定标准的群体，可以将这种选
择应用于（例如）不同的胎盘干细胞群体（例如，不同的胎盘干细胞批次
或批）。
可以以类似的方式分离或获得包含以上5.2.2节中所述的具有任何标志
物组合的胎盘干细胞的细胞群体的选择。
在任何上述实施方式中，分离的细胞群体的选择可以另外包含选择性
表达ABC-p（胎盘特异性ABC转运蛋白；参见，例如Allikmets等人,Cancer
Res.58(23):5337-9(1998)）的胎盘干细胞。所述方法还可以包括选择表现出
对（例如）间质干细胞特异的至少一种特性（例如，CD44的表达、CD90
的表达或上述组合的表达）的细胞。
在上述实施方式中，所述基材可以是在其上可以完成细胞（例如，分
离的胎盘干细胞）的培养和/或选择的任何表面。通常，所述基材是塑料制
品，例如，组织培养盘或塑料多孔板。可以用生物分子（例如，层粘连蛋
白或纤连蛋白）涂覆组织培养塑料制品。
可以通过细胞选择领域中已知的任何方式选择分离的胎盘干细胞。例
如，可以在（例如）流式细胞术或FACS中使用抗一种或多种细胞表面标
志物的抗体选择细胞。可以使用与磁珠结合的抗体完成选择。对某些干细
胞相关标志物特异的抗体在本领域中是已知的。例如，抗OCT-4（Abcam,
Cambridge,MA）、CD200（Abcam）、HLA-G（Abcam）、CD73（BD Biosciences
Pharmingen,San Diego,CA）、CD 105（Abcam;BioDesign International,Saco,
ME）等的抗体。抗其他标志物的抗体也是可商购的，例如，购自（例如）
StemCell Technologies或BioDesign International的CD34、CD38和CD45。
分离的胎盘干细胞群体可以包含非干细胞的胎盘细胞或非胎盘细胞的
细胞。
本文所提供的分离的胎盘干细胞群体可以与一个或多个非干细胞或非
胎盘细胞群体混合。例如，可以将分离的胎盘干细胞群体与血液（例如，
胎盘血或脐带血）、血液来源的干细胞（例如，来源于胎盘血或脐带血的
干细胞）、脐带干细胞、血液来源的有核细胞群体、骨髓来源的间充质细
胞、骨来源的干细胞群体、粗骨髓、成体（体细胞）干细胞、包含在组织
内的干细胞群体、培养的干细胞、完全分化的细胞（例如，软骨细胞、成
纤维细胞、羊膜细胞、成骨细胞、肌细胞、心肌细胞等）的群体等混合。
在具体的实施方式中，在本文所述的方法和组合物中有用的细胞群体包含
分离的胎盘干细胞和分离的脐带干细胞。通过比较每个群体中总有核细胞
的数目，可以将分离的胎盘干细胞群体中的细胞与另一类型的多个细胞以
约100000000:1、50000000:1、20000000:1、10000000:1、5000000:1、2000000:1、
1000000:1、500000:1、200000:1、100000:1、50000:1、20000:1、10000:1、
5000:1、2000:1、1000:1、500:1、200:1、100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、
1:1；1:2；1:5；1:10；1:100；1:200；1:500；1:1000；1:2000；1:5000；1:10000；
1:20000；1:50000；1:100000；1:500000；1:1000000；1:2000000；1:5000000；
1:10000000；1:20000000；1:50000000；或约1:100000000的比值混合。也
可以将分离的胎盘干细胞群体中的细胞与多种细胞类型的多个细胞混合。
在一种实施方式中，将分离的胎盘干细胞群体与多个造血干细胞混合。
这些造血干细胞可以（例如）包含在未处理的胎盘、脐带血或周围血液中；
来自胎盘血、脐带血或周围血液的所有有核细胞中；来自胎盘血、脐带血
或周围血液的分离的CD34+细胞群体中；未处理的骨髓中；来自骨髓的所
有有核细胞中；来自骨髓的分离的CD34+细胞群体中等。
在其他实施方式中，将本文所述的胎盘干细胞群体（例如，以上5.2.2
节中所述的PDAC）与成骨胎盘贴壁细胞（OPAC）混合，例如，美国专利
申请No.2010/0047214中所述的OPAC，该专利的公开内容以其全部内容
并入本文作为参考。在其他实施方式中，将本文所述的胎盘干细胞群体（例
如，以上5.2.2节中所述的PDAC）与胎盘灌注液和/或自然杀伤细胞混合，
例如，来自胎盘灌注液的自然杀伤细胞，例如，胎盘中间体自然杀伤细胞，
例如，如美国专利申请公开No.2009/0252710中所述的，该专利的公开内
容以其全部内容并入本文作为参考。
5.5胎盘干细胞的保存
可以保存分离的胎盘干细胞（例如，如上所述的分离的胎盘干细胞），
即可以将它们置于使其长期保存的条件或抑制通过（例如）细胞凋亡或坏
死的细胞死亡的条件下。
可以使用（例如）包含细胞凋亡抑制剂、坏死抑制剂和/或携氧全氟化
碳的组合物来保存胎盘干细胞，如相关美国专利申请公开No.2007/0190042
中所述，该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。在一种实施
方式中，保存细胞（例如，胎盘干细胞）群体的方法包括将所述细胞群体
与包含细胞凋亡抑制剂和携氧全氟化碳的细胞收集组合物接触，其中所述
细胞凋亡抑制剂以与未接触细胞凋亡抑制剂的细胞群体相比足以降低或防
止细胞群体中细胞凋亡的量和时间存在。在具体的实施方式中，所述细胞
凋亡抑制剂是半胱氨酸天冬氨酸酶抑制剂。在另一种具体的实施方式中，
所述细胞凋亡抑制剂是JNK抑制剂。在另一种具体的实施方式中，所述JNK
抑制剂不调节所述细胞的分化或增殖。在另一种实施方式中，所述细胞收
集组合物包含处于分离的相的所述细胞凋亡抑制剂和所述携氧全氟化碳。
在另一种实施方式中，所述细胞收集组合物包含处于乳液中的所述细胞凋
亡抑制剂和所述携氧全氟化碳。在另一种实施方式中，所述细胞收集组合
物另外包含乳化剂，例如，卵磷脂。在另一种实施方式中，所述细胞凋亡
抑制剂和所述全氟化碳在与细胞接触时处于约0℃至约25℃之间。在另一
种具体的实施方式中，所述细胞凋亡抑制剂和所述全氟化碳在与细胞接触
时处于约2℃至10℃之间，或者约2℃至约5℃之间。在另一种具体的实
施方式中，在所述细胞群体的输送期间进行所述接触。在另一种具体的实
施方式中，在所述细胞（例如，胎盘干细胞）群体的冻融期间进行所述接
触。
可以通过（例如）包括将所述细胞群体与细胞凋亡抑制剂和器官保存
化合物接触的方法来保存在本文所述的方法和组合物中有用的胎盘细胞群
体，其中所述细胞凋亡抑制剂以与未接触细胞凋亡抑制剂的细胞群体相比
足以降低或防止所述细胞群体中细胞凋亡的量和时间存在。在具体的实施
方式中，所述器官保存化合物是UW溶液（例如，如美国专利No.4798824
中所述；也称为ViaSpan；另外参见Southard等人,Transplantation
49(2):251-257(1990)）或在Stern等人，美国专利No.5552267中所述的溶液，
该专利的公开内容以其全部内容作为参考并入本文。在另一种实施方式中，
所述器官保存化合物是羟乙基淀粉、乳糖酸、棉子糖或它们的组合。在另
一种实施方式中，所述细胞收集组合物另外包含处于两相或作为乳液的携
氧全氟化碳。
在所述方法的另一种实施方式中，在灌注期间将胎盘干细胞与包含细
胞凋亡抑制剂和携氧全氟化碳、器官保存化合物或它们的组合的细胞收集
组合物接触。在另一种实施方式中，在组织破环处理（例如，酶促消化）
期间接触所述细胞。在另一种实施方式中，在通过灌注收集后或在通过组
织破环（例如，酶促消化）收集后，将胎盘干细胞与所述细胞收集化合物
接触。
通常，在胎盘干细胞收集、富集和分离期间，优选地减少或消除由于
缺氧和机械应力所造成的细胞胁迫。因此，在所述方法的另一种实施方式
中，在收集、富集或分离期间将细胞或细胞（例如，胎盘干细胞）群体在
所述保存期间在缺氧条件下暴露6小时以下，其中缺氧条件是低于正常血
氧浓度的氧浓度。在另一种具体的实施方式中，在所述保存期间将所述细
胞群体在所述缺氧条件下暴露两小时以下。在另一种具体的实施方式中，
在收集、富集或分离期间将所述细胞群体在所述缺氧条件下暴露1小时以
下或30分钟以下或不暴露于缺氧条件。在另一个具体的实施方式中，在收
集、富集或分离期间未将所述细胞群体暴露于切应力。
胎盘干细胞可以在（例如）小容器（例如，安瓿）中的冷冻保存培养
基中冷冻保存。适合的冷冻保存培养基包括（但不限于）包含（例如）生
长培养基或细胞冷冻培养基（例如，可商购的细胞冷冻培养基，例如，C2695、
C2639或C6039（Sigma））的培养基。冷冻保存培养基优选地包含约2%
至约15%（v/v）浓度（例如，约10%（v/v））的DMSO（二甲亚砜）。冷
冻保存培养基可以包含其他试剂，例如，甲基纤维素和/或甘油。优选地，
在冷冻保存期间将胎盘干细胞以约1℃/min冷却。可以通过使细胞达到约
-80℃至约-180℃，优选地约-125℃至约-140℃的温度来完成冷冻保存。在
融化使用前，可以将冷冻保存的细胞转移至液氮。在一些实施方式中，例
如，一旦安瓿达到约-90℃，则将它们转移至液氮储存区。还可以使用速率
控制的冰箱进行冷冻保存。优选地，在约25℃至约40℃的温度下，优选
地在约37℃的温度下融化冷冻保存的细胞。
也可以通过任何上述方法保存骨髓来源的间质干细胞。
5.6包含分离的胎盘干细胞的组合物
可以将在本文（例如）5.2.2节中所述的胎盘干细胞与用于在本文所述
的方法和组合物中使用的任何生理学可用或医学可用的化合物、组合物或
装置混合。在某些实施方式中，所述组合物是药物可用组合物，例如，在
药物可用载体中包含胎盘干细胞的组合物。任何本文所述的组合物另外可
以包含分离的骨髓来源的间质干细胞或包含BM-MSC（例如，美国专利No.
5486359中所述的BM-MSC）的骨髓。
在某些实施方式中，包含分离的胎盘干细胞的组合物另外包含基质，
例如，脱细胞化基质或合成基质。在另一个具体的实施方式中，所述基质
是立体支架。在另一个具体的实施方式中，所述基质包含胶原、明胶、层
粘连蛋白、纤连蛋白、果胶、鸟氨酸或玻连蛋白。在另一个具体的实施方
式中，所述基质是羊膜或羊膜来源的生物材料。在另一个具体的实施方式
中，所述基质包含细胞外膜蛋白。在另一个具体的实施方式中，所述基质
包含合成化合物。在另一个具体的实施方式中，所述基质包含生物活性化
合物。在另一个具体的实施方式中，所述生物活性化合物是生长因子、细
胞因子、抗体或小于5000道尔顿的有机分子。
在另一种实施方式中，在本文所提供的治疗方法中有用的组合物包含
由任何上述胎盘干细胞或任何上述胎盘干细胞群体调节的培养基。
5.6.1冷冻保存的细胞
可以将在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘干细胞保存
（例如，冷冻保存）以备以后使用。用于细胞（如干细胞）冷冻保存的方
法在本领域中是公知的。可以将分离的胎盘干细胞群体制备成易于施用至
个体的形式，例如，包含在适合于医学使用的容器内的分离的胎盘干细胞
群体。这种容器可以是（例如）注射器、无菌塑料袋、烧瓶、罐或从中可
以容易地分配分离的胎盘细胞群体的其他容器。例如，所述容器可以是血
袋或者是适合于液体静脉内施用至受者的其他可医用的塑料袋。优选地，
所述容器是允许分离的胎盘干细胞冷冻保存的容器。
所述冷冻保存的分离的胎盘干细胞可以包含来源于单个供体或多个供
体的分离的胎盘细胞。所述分离的胎盘干细胞群体可以是与预定受体完全
HLA匹配的或者是部分或完全HLA不匹配的。
因此，在一种实施方式中，可以在本文所述的方法中使用处于容器中
包含组织培养贴壁胎盘干细胞群体的组合物的形式的分离的胎盘干细胞。
在具体的实施方式中，将分离的胎盘干细胞冷冻保存。在另一种具体的实
施方式中，所述容器是袋、烧瓶或罐。在另一种具体的实施方式中，所述
袋是无菌塑料袋。在另一种具体的实施方式中，所述袋适合于，允许或有
利于（例如）通过静脉内输注的所述分离的胎盘干细胞群体的静脉内施用。
所述袋可以包含互相连接以允许在施用之前或期间所述分离的胎盘干细胞
和一种或多种其他溶液（例如，药物）混合的多个腔或隔室。在另一种具
体的实施方式中，所述组合物包含有利于胎盘干细胞冷冻保存的一种或多
种化合物。在另一种具体的实施方式中，所述分离的胎盘干细胞包含在生
理学可用的水溶液内。在另一种具体的实施方式中，所述生理学可用的水
溶液是0.9%NaCl溶液。在另一种具体的实施方式中，所述分离的胎盘干
细胞包含与所述胎盘干细胞受体HLA匹配的胎盘干细胞。在另一种具体的
实施方式中，所述混合的细胞群体包含与所述胎盘干细胞受体至少部分
HLA不匹配的胎盘干细胞。在另一种具体的实施方式中，所述分离的胎盘
干细胞来源于多个供体。
在某些实施方式中，所述容器中的分离的胎盘干细胞是本文5.2.2节中
所述的任何分离的胎盘干细胞，其中已将所述细胞冷冻保存并包含在容器
内。
在任何上述冷冻保存的分离的胎盘干细胞的具体实施方式中，所述容
器是袋。在多个具体的实施方式中，所述容器包含约，至少或至多1×106
个所述分离的胎盘干细胞，5×106个所述分离的胎盘干细胞，1×107个所述
分离的胎盘干细胞，5×107个所述分离的胎盘干细胞，1×108个所述分离的
胎盘干细胞，5×108个所述分离的胎盘干细胞，1×109个所述分离的胎盘干
细胞，5×109个所述分离的胎盘干细胞，1×1010个所述分离的胎盘干细胞或
1×1010个所述分离的胎盘干细胞。在任何上述冷冻保存群体的其他具体的实
施方式中，所述分离的胎盘干细胞已传代了约，至少或不超过5次、不超
过10次、不超过15次或不超过20次。在任何上述冷冻保存的分离的胎盘
干细胞的另一种具体的实施方式中，已经在所述容器内扩增了所述分离的
胎盘干细胞。
5.6.2基因工程胎盘干细胞
本文还提供了胎盘干细胞，其中已将所述胎盘干细胞基因工程设计以
产生与肿瘤抑制有关的重组或外源细胞因子。例如，在多个实施方式中，
将所述胎盘干细胞工程设计以表达可检测数量的外源蛋白质，其中所述外
源蛋白质是骨形态发生蛋白（BMP）、活化素A、骨粘连蛋白、骨保护素
或连接蛋白中的一种或多种。编码活化素A的序列可见于，例如，GenBank
登录号No.NM_002191。编码骨粘连蛋白的序列可见于，例如，GenBank
登录号No.NM_003118。编码骨保护素的序列可见于，例如，GenBank登
录号No.NM_002546。
在具体的实施方式中，所述连接蛋白是连接蛋白26（Cx26）或连接蛋
白43（Cx43）。编码Cx26或Cx43的序列可分别见于（例如）GenBank
登录号No.NM_004004和NM_000165。
在具体的实施方式中，所述骨形态发生蛋白是BMP1（骨形态发生蛋白
1）、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP8b、
BMP9（GDF2；生长分化因子-2）、BMP10、BMP11（GDF11）、BMP12
（GDF7）、BMP13（GDF6）、BMP14（GDF5）或BMP15中的一种或多
种，或它们的任意组合。编码BMP的序列可见于（例如）GenBank，例如，
GenBank登录号No.NM_001199（BMP1）、NM_001200（BMP2）、NM_001201
（BMP3）、NM_001202（BMP4）、NM_021073（BMP5）、NM_021073
（BMP6）、NM_001719（BMP7）、NM_181809（BMP8a）、NM_001720
（BMP8b）、NM_016204（BMP9/GDF2）、NM_014482（BMP10）、NM_005811
（BMP11/GDF11）、NM_182828（BMP12/GDF7）、NM_001001557
（BMP13/GDF6）、NM_000557（BMP14/GDF5）或NM_005448（BMP15）。
在其他实施方式中，本文提供了分离的胎盘干细胞，其中将所述胎盘
干细胞工程设计以表达外源IFN-β或IL-2。在具体的实施方式中，当所述
肿瘤细胞与所述胎盘干细胞接触时，与不表达外源IFN-β或IL-2的胎盘干
细胞相比，所述胎盘干细胞以导致更大程度（例如，可检测地更大程度）
的肿瘤细胞增殖抑制的量表达外源IFN-β或IL-2。
可以使用本领域技术人员所知的使用（例如）反转录病毒载体、腺病
毒载体、腺相关病毒载体、聚乙二醇或其他方法的基因工程细胞方法。这
些包括使用在细胞中输送并表达核酸分子的表达载体。（参见Geoddel;“基
因表达技术：酶学方法（Gene Expression Technology:Methods in
Enzymology）”,185,Academic Press,San Diego,Calif.(1990)）。可以通过
常规转化或转染技术将载体DNA引入到原核或真核细胞。用于转化或转染
宿主细胞的适合的方法可见于Sambrook等人，“分子克隆：实验室手册
（Molecular Cloning:A Laboratory Manual）”，第二版，Cold Spring Harbor
Laboratory press（1989）以及其他实验室教科书。
可以通过包括病毒转移（其包括DNA或RNA病毒载体的使用，如（例
如）反转录病毒（包括慢病毒）、猿猴病毒40（SV40），腺病毒、辛德毕
斯病毒和牛乳头状瘤病毒）；化学转移（其包括磷酸钙转染和DEAE葡聚
糖转染法）；使用DNA加载的膜囊（如，例如，脂质体、红细胞影和原生
质体）的膜融合转移；或物理转移技术（如微量注射、电穿孔或裸DNA转
移）在内的方法通过将DNA或RNA（例如，编码所关心蛋白的DNA或
RNA）引入到细胞中来基因修饰胎盘干细胞。可以通过外源DNA的插入或
通过用外源DNA对细胞基因组片段的替换来基因改变胎盘干细胞。可以
（例如）使用质粒表达载体和核定位序列通过同源重组或通过病毒整合至
宿主细胞基因组或通过将DNA引入至细胞，具体地引入至细胞核来完成外
源DNA序列的插入。所述DNA可以包含使用某些化学品/药物（例如，四
环素）允许所关心蛋白质表达的正或负诱导的一个或多个启动子；在其他
实施方式中，所述启动子可以是组成型的。
可以使用磷酸钙转染将（例如）含有编码所关心蛋白质的多核苷酸序
列的质粒DNA引入到细胞中，例如，胎盘干细胞中。在某些实施方式中，
将DNA与氯化钙溶液混合，然后加入至磷酸盐缓冲溶液中。一旦形成沉淀
物，则直接将溶液加入至培养细胞。可以将使用DMSO或甘油的处理用于
改善转染效率，并且可以使用双羟乙基氨基乙烷磺酸盐（BES）来改善稳定
转染剂的水平。磷酸钙转染系统是可商购的（例如，Promega
Corp.,Madison,Wis.）。还可以使用DEAE-葡聚糖转染。
还可以通过微量注射对分离的胎盘干细胞进行基因修饰。在某些实施
方式中，在光学显微镜下将玻璃微量吸移管导入细胞核中以注射DNA或
RNA。
还可以使用电穿孔对胎盘干细胞进行基因修饰。在某些实施方式中，
将DNA或RNA加入到培养细胞的悬液中并且将DNA/RNA细胞悬液置于
两个电极之间并进行电脉冲，从而在细胞外膜导致通过穿过膜的气孔的出
现所显示的瞬时渗透性。
可以使用阳离子脂质体进行DNA或RNA的脂质体递送以基因修饰所
述细胞，所述阳离子脂质体可选地包括二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）或
二油酰基磷脂酰胆碱（DOPC），例如，（Life Technologies,
Inc.）。其他可商购的递送系统包括EFFECTENETM（Qiagen）、DOTAP（Roche
Molecular Biochemicals）、FUGENE 6TM（Roche Molecular Biochemicals）
和（Promega）。
可以将病毒载体用于通过（例如）靶标基因、多核苷酸、反义分子或
核糖酶序列向所述细胞的递送来基因改变胎盘干细胞。反转录病毒载体对
于转导快速分裂细胞是有效的，尽管同样已发展了多种反转录病毒载体来
有效地将DNA转移到非分裂细胞。反转录病毒载体的包装细胞系是本领域
技术人员所知的。在某些实施方式中，反转录病毒DNA载体含有两个反转
录病毒LTR，从而使得第一LTR位于SV40启动子的5′，其可操作地连接
至克隆到多克隆位点的靶标基因序列，随后是3′第二LTR。一旦形成，如
前所述使用磷酸钙介导的转染将反转录病毒DNA载体转移至包装细胞系。
病毒产生约48小时后，收获现含有靶标基因序列的病毒载体。使用慢病毒
载体、重组疱疹病毒、腺病毒载体或α病毒载体转染细胞的方法在本领域
中是已知的。
可以在本领域技术人员所知的技术中使用遗传标志物来表明靶细胞的
成功转染或转导。例如，已表明水晶水母（Aequorea victoria）的绿色荧光
蛋白是鉴别和追踪基因修饰造血细胞的有效标志物。替代性可选择标志物
包括β-Gal基因、截短型神经生长因子受体或药物可选择性标志物（其包括
（但不限于）NEO、MTX或潮霉素）。
可以通过以上公开的任何方法和/或任何基因来基因修饰骨髓来源的间
质干细胞。
5.6.3药物组合物
可以将分离的胎盘干细胞群体或包含分离的胎盘干细胞的细胞群体配
制到用于在（例如）本文所提供的治疗方法中体内使用的药物组合物中。
这些药物组合物包含药物可用载体（例如，盐溶液或用于体内施用的其他
可用的生理学可用溶液）中的分离的胎盘干细胞群体或含有分离的胎盘干
细胞的细胞群体。包含本文所述的分离的胎盘干细胞的药物组合物可以包
含本文其他处所述的任何分离的胎盘干细胞或其任意组合。所述药物组合
物可以包含胎儿、母体、或胎儿和母体两者的分离的胎盘干细胞。本文所
提供的药物组合物还可以包含获自单个个体或胎盘或者获自多个个体或胎
盘的分离的胎盘干细胞。
本文所提供的药物组合物可以包含任意数目的分离的胎盘干细胞。例
如，在多种实施方式中，单一单位剂量的分离的胎盘干细胞可以包含约，
至少或不超过1×105、5×105、1×106、5×106、1×107、5×107、1×108、5×108、
1×109、5×109、1×1010、5×1010、1×1011个或以上的分离的胎盘干细胞，或
者1×105至5×105、5×105至1×106、1×106至5×106、5×106至1×107、1×107
至5×107、5×107至1×108、1×108至5×108、5×108至1×109、1×109至5×109、
5×109至1×1010、1×1010至5×1010或5×1010至1×1011个分离的胎盘干细胞。
本文所提供的药物组合物包含含有50%或以上的活细胞的胎盘干细胞
群体（也就是说，所述群体中至少50%的细胞是功能性的或活的）。优选
地，在所述群体中至少60%的细胞是有活力的。更优选地，在所述药物组
合物中的所述群体中至少70%、80%、90%、95%或99%的细胞是有活力的。
本文所提供的药物组合物可以包含（例如）有利于移植的一种或多种
化合物（例如，抗T细胞受体抗体、免疫抑制剂等）；稳定剂，如白蛋白、
葡聚糖40、明胶、羟乙基淀粉、勃脉力（plasmalyte）等。
在一种实施方式中，当配制为可注射溶液时，所述药物组合物包含约
1%至1.5%的HSA和约2.5%的葡聚糖。在优选的实施方式中，所述药物组
合物在包含5%HSA和10%葡聚糖（可选地包含免疫抑制剂，例如，（例
如）10mg/kg的环胞霉素A）的溶液中包含约5×106个细胞/毫升至约2×107
个细胞/毫升。
在其他实施方式中，所述药物组合物（例如，溶液）包含分离的胎盘
干细胞，其中所述药物组合物包含约1.0±0.3×106个细胞/毫升至约
5.0±1.5×106个细胞/毫升。在其他实施方式中，所述药物组合物包含约
1.5×106个细胞/毫升至约3.75×106个细胞/毫升。在其他实施方式中，所述
药物组合物包含约1×106个细胞/毫升至约50×106个细胞/毫升，约1×106个
细胞/毫升至约40×106个细胞/毫升，约1×106个细胞/毫升至约30×106个细
胞/毫升，约1×106个细胞/毫升至约20×106个细胞/毫升，约1×106个细胞/
毫升至约15×106个细胞/毫升或约1×106个细胞/毫升至约10×106个细胞/毫
升。在某些实施方式中，所述药物组合物不包含可见的细胞块（即，无大
细胞块），或者基本没有这样可见的块。如本文所使用的，“大细胞块”表示
无需放大即可见（例如，肉眼可见）的细胞聚集体，并且一般是指大于约
150微米的细胞聚集体。在一些实施方式中，所述药物组合物包含约2.5%、
3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%、6.0%、6.5%、7.0%、7.5%、8.0%、
8.5%、9.0%、9.5%或10%的葡聚糖，例如，葡聚糖-40。在具体的实施方式
中，所述组合物包含约7.5%至约9%的葡聚糖-40。在具体的实施方式中，
所述组合物包含约5.5%的葡聚糖-40。在某些实施方式中，所述药物组合物
包含约1%至约15%的人血清白蛋白（HSA）。在具体的实施方式中，所述
药物组合物包含约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、
11%、12%、13%、14%或15%的HSA。在具体的实施方式中，所述细胞已
冷冻保存并融化。在另一个具体的实施方式中，所述细胞已通过70μM至
100μM过滤器过滤。在另一个具体的实施方式中，所述组合物不包含可见
的细胞块。在另一个具体的实施方式中，所述组合物包含少于约200个细
胞块/106个细胞，其中所述细胞块仅在显微镜（例如，光学显微镜）下可见。
在另一个具体的实施方式中，所述组合物包含少于约150个细胞块/106个细
胞，其中所述细胞块仅在显微镜（例如，光学显微镜）下可见。在另一个
具体的实施方式中，所述组合物包含少于约100个细胞块/106个细胞，其中
所述细胞块仅在显微镜（例如，光学显微镜）下可见。
在具体的实施方式中，所述药物组合物包含约1.0±0.3×106个细胞/毫
升、约5.5%的葡聚糖-40（w/v）、约10%的HSA（w/v）和约5%的DMSO
（v/v）。
在其他实施方式中，所述药物组合物在包含10%葡聚糖-40的溶液中包
含多个分离的胎盘干细胞，其中所述药物组合物包含约1.0±0.3×106个细胞/
毫升至约5.0±1.5×106个细胞/毫升，并且其中所述组合物不包含肉眼可见的
细胞块（即，不包含大细胞块）。在一些实施方式中，所述药物组合物包
含约1.5×106个细胞/毫升至约3.75×106个细胞/毫升。在具体的实施方式中，
所述细胞已冷冻保存并融化。在另一种具体的实施方式中，所述细胞已通
过70μM至100μM过滤器过滤。在另一种具体的实施方式中，所述组合物
包含少于约200个微细胞块（即，仅通过放大可见的细胞块）/106个细胞。
在另一种具体的实施方式中，所述药物组合物包含少于约150个微细胞块
/106个细胞。在另一个具体的实施方式中，所述药物组合物包含少于约100
个微细胞块/106个细胞。在另一个具体的实施方式中，所述药物组合物包含
小于15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、
3%或2%的DMSO，或小于1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、
0.3%、0.2%或0.1%的DMSO。
本文还提供了包含胎盘干细胞的组合物，其中所述组合物是通过本文
所公开的方法中的一种产生的。例如，在一种实施方式中，所述药物组合
物包含细胞（例如，胎盘干细胞），其中所述药物组合物是通过以下方法
产生的，所述方法包括过滤包含细胞（例如，胎盘干细胞）的溶液以形成
含有过滤的细胞的溶液；例如，在冷冻保存之前用第一溶液将所述含有过
滤的细胞的溶液稀释至约1至50×106、1至40×106、1至30×106、1至20×106、
1至15×106或1至10×106个细胞/毫升；和用包含葡聚糖但不包含人血清白
蛋白（HSA）的第二溶液稀释所得的含有过滤的细胞的溶液以产生所述组
合物。在某些实施方式中，所述稀释将达到不超过约15×106个细胞/毫升。
在某些实施方式中，所述稀释将达到不超过约10±3×106个细胞/毫升。在某
些实施方式中，所述稀释将达到不超过约7.5×106个细胞/毫升。在其他某些
实施方式中，如果在稀释之前含有过滤的细胞的溶液包含小于约15×106个
细胞/毫升，则过滤是可选的。在其他某些实施方式中，如果在稀释之前含
有过滤的细胞的溶液包含小于约10±3×106个细胞/毫升，则过滤是可选的。
在其他某些实施方式中，如果在稀释之前含有过滤的细胞的溶液包含小于
约7.5×106个细胞/毫升，则过滤是可选的。
在具体的实施方式中，将细胞（例如，胎盘干细胞）在使用第一稀释
溶液的所述稀释和使用所述第二稀释溶液的所述稀释之间冷冻保存。在另
一种具体的实施方式中，所述第一稀释溶液包含葡聚糖和HSA。所述第一
稀释溶液或第二稀释溶液中的葡聚糖可以是任何分子量的葡聚糖，例如，
分子量从约10kDa至约150kDa的葡聚糖。在一些实施方式中，所述第一稀
释溶液或所述第二溶液中的所述葡聚糖为约2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、
5.0%、5.5%、6.0%、6.5%、7.0%、7.5%、8.0%、8.5%、9.0%、9.5%或10%
的葡聚糖。在另一种具体的实施方式中，所述第一稀释溶液或所述第二稀
释溶液中的葡聚糖是葡聚糖-40。在另一个具体的实施方式中，所述第一稀
释溶液和所述第二稀释溶液中的葡聚糖是葡聚糖-40。在另一个具体的实施
方式中，所述第一稀释溶液中的所述葡聚糖-40是5.0%的葡聚糖-40。在另
一种具体的实施方式中，所述第一稀释溶液中的所述葡聚糖-40是5.5%的
葡聚糖-40。在另一种具体的实施方式中，所述第二稀释溶液中的所述葡聚
糖-40是10%的葡聚糖-40。在另一种具体的实施方式中，包含HSA的所述
溶液中的所述HSA是1至15%的HSA。在另一种具体的实施方式中，包含
HSA的所述溶液中的所述HSA为约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、
8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%的HSA。在另一种具体的
实施方式中，包含HSA的所述溶液中的所述HSA是10%的HSA。在另一
种具体的实施方式中，所述第一稀释溶液包含HSA。在另一种具体的实施
方式中，所述第一稀释溶液中的所述HSA是10%的HSA。在另一种具体的
实施方式中，所述第一稀释溶液包含冷冻保护剂。在另一种具体的实施方
式中，所述冷冻保护剂是DMSO。在另一种具体的实施方式中，所述第二
稀释溶液中的所述葡聚糖-40为约10%的葡聚糖-40。在另一种具体的实施
方式中，包含细胞的所述组合物包含约7.5%至约9%的葡聚糖。在另一种
具体的实施方式中，所述药物组合物包含约1.0±0.3×106个细胞/毫升至约
5.0±1.5×106个细胞/毫升。在另一种具体的实施方式中，所述药物组合物包
含约1.5×106个细胞/毫升至约3.75×106个细胞/毫升。
在另一种实施方式中，通过以下方法制备了所述药物组合物，其包括
（a）在冷冻保存之前，过滤包含胎盘干细胞的含有细胞的溶液以产生含有
过滤的细胞的溶液；（b）以约1至50×106、1至40×106、1至30×106、1
至20×106、1至15×106或1至10×106个细胞/毫升冷冻保存所述含有过滤的
细胞的溶液中的细胞；（c）融化细胞；和（d）用葡聚糖-40溶液以约1:1
至约1:11（v/v）稀释所述含有过滤的细胞的溶液。在某些实施方式中，如
果在步骤（a）之前细胞的数目小于约10±3×106个细胞/毫升，则过滤是可
选的。在另一个具体的实施方式中，以约10±3×106个细胞/毫升冷冻保存步
骤（b）中的细胞。在另一个具体的实施方式中，在包含约5%至约10%的
葡聚糖-40和HSA的溶液中冷冻保存步骤（b）中的细胞。在某些实施方式
中，步骤（b）中的所述稀释将达到不超过约15×106个细胞/毫升。
在另一种实施方式中，通过以下方法制备了所述药物组合物，所述方
法包括：（a）将胎盘干细胞悬浮于包含10%HSA的5.5%葡聚糖-40溶液
中以形成含有细胞的溶液；（b）通过70μM过滤器过滤含有细胞的溶液；
（c）用包含5.5%葡聚糖-40、10%HSA和5%DMSO的溶液将含有细胞的
溶液稀释至约1至50×106、1至40×106、1至30×106、1至20×106、1至15×106
或1至10×106个细胞/毫升；（d）冷冻保存所述细胞；（e）融化所述细胞；
和（f）用10%的葡聚糖-40以1:1至1:11（v/v）稀释含有细胞的溶液。在
某些实施方式中，步骤（c）中的所述稀释将达到不超过约15×106个细胞/
毫升。在某些实施方式中，步骤（c）中的所述稀释将达到不超过约10±3×106
个细胞/毫升。在某些实施方式中，步骤（c）中的所述稀释将达到不超过约
7.5×106个细胞/毫升。
在另一种实施方式中，通过以下方法制备了包含细胞的所述组合物，
所述方法包括：（a）将多个细胞（例如，胎盘干细胞）离心以收集所述细
胞；（b）将所述细胞在5.5%的葡聚糖-40中再悬浮；（c）将所述细胞离心
以收集所述细胞；（d）在包含10%HSA的5.5%的葡聚糖-40溶液中再悬
浮所述细胞；（e）通过70μM过滤器过滤所述细胞；（f)在5.5%葡聚糖
-40、10%HSA和5%DMSO中将细胞稀释至约1至50×106、1至40×106、
1至30×106、1至20×106、1至15×106或1至10×106个细胞/毫升；（g）冷
冻保存所述细胞；（h）融化所述细胞；和（i）用10%葡聚糖-40以1:1至
1:11（v/v）稀释所述细胞。在某些实施方式中，步骤（f)中的所述稀释将
达到不超过约15×106个细胞/毫升。在某些实施方式中，步骤（f）中的所
述稀释将达到不超过约10±3×106个细胞/毫升。在某些实施方式中，步骤（f)
中的所述稀释将达到不超过约7.5×106个细胞/毫升。在其他某些实施方式
中，如果细胞数目小于约10±3×106个细胞/毫升，则过滤是可选的。
可以使用适合于细胞产品施用的其他可注射制剂。
在本发明所述的方法中有用的药物组合物可以包含任何本文所述的胎
盘干细胞，例如，如以上5.2.2节中所述的。在一种实施方式中，所述药物
组合物包含在来源上基本或完全是非母体的（即，具有胎儿基因型的）分
离的胎盘干细胞；例如，至少约90%、95%、98%、99%或约100%在来源
上是非母体的。在某些实施方式中，药物组合物包含在非限制性实例中作
为CD10+、CD34–、CD105+和CD200+；CD200+和HLA-G–；CD73+、CD105+
和CD200+；CD200+和OCT-4+；或CD73+、CD105+和HLA-G–的分离的胎
盘干细胞群体或者上述的组合，其中至少70%、80%、90%、95%或99%的
所述分离的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在另一种实施方式中，药物
组合物包含作为CD10+、CD105+和CD34–；CD10+、CD105+、CD200+和
CD34–；CD10+、CD105+、CD200+、CD34–以及CD90+或CD45–中的至少一
种；CD10+、CD90+、CD105+、CD200+、CD34–和CD45–；CD10+、CD90+、
CD105+、CD200+、CD34–和CD45–；CD200+和HLA-G-；CD73+、CD105+
和CD200+；CD200+和OCT-4+；CD73+、CD105+和HLA-G–；CD117–、CD133–、
KDR-、CD80–、CD86–、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR-和/或PDL1+中的一
个或多个的分离的胎盘干细胞群体，或上述的组合，其中至少70%、80%、
90%、95%或99%的所述分离的胎盘干细胞在来源上是非母体的。在具体的
实施方式中，所述药物组合物另外包含非得自胎盘的干细胞。
本文所提供的所述组合物（例如，药物组合物）中的分离的胎盘干细
胞可以包含来源于单个供体或多个供体的胎盘干细胞。所述分离的胎盘干
细胞可以是与预定受体完全HLA匹配的或者是部分或完全HLA不匹配的。
本文所提供的药物组合物还可以包含BM-MSC。在某些实施方式中，
药物组合物中胎盘干细胞和BM-MSC以（例如）按细胞数目计99:1、95:5、
90:10、85:15、80:20、75:25、70:30、65:35、60:40、55:45、50:50、45:55、
40:60、35:65、30:70、25:75、20:80、15:85、10:90、5:95或1:99的比例存
在，或者以按细胞数目计99:1至95:5之间、95:5至90:10之间、90:10至
85:15之间、85:15至80:20之间、80:20至75:25之间、75:25至70:30之间、
70:30至65:35之间、65:35至60:40之间、60:40至55:45之间、55:45至50:50
之间、50:50至45:55之间、45:55至40:60之间、40:60至35:65之间、35:65
至30:70之间、30:70至25:75之间、25:75至20:80之间、20:80至15:85之
间、10:90至5:95之间或者5:95至1:99之间的比例存在。
5.6.4包含分离的胎盘干细胞的基质
本文还提供了包含含有胎盘干细胞的基质、水凝胶、支架等的组合物。
可以代替液体悬液中的细胞或者除液体悬液中的细胞以外使用这些组合
物。在某些实施方式中，将分离的胎盘干细胞与富血小板血浆混合。在某
些实施方式中，将分离的胎盘干细胞与海藻酸盐混合。
可以将本文所述的分离的胎盘干细胞接种到天然基质上，例如，胎盘
生物材料，如羊膜材料。这种羊膜材料可以是（例如）直接从哺乳动物胎
盘上切下的羊膜；固定或热处理的羊膜、基本干燥（即，<20%的H2O）的
羊膜、绒毛膜、基本干燥的绒毛膜、基本干燥的羊膜和绒毛膜等。在Hariri,
美国专利申请公开No.2004/0048796中描述了可以在其上接种分离的胎盘
干细胞的优选的胎盘生物材料，该专利的公开内容以其全部内容作为参考
并入本文。
可以将本文所述的分离的胎盘干细胞悬浮在适合于（例如）注射的水
凝胶溶液中。适合于这些组合物的水凝胶包括自组装肽，如RAD16。在一
种实施方式中，可以使包含细胞的水凝胶溶液在（例如）模具中硬化以形
成具有分散于其中的细胞的移植用基质。还可以培养该基质中的分离的胎
盘干细胞从而使细胞在植入前通过有丝分裂扩增。水凝胶是（例如）通过
共价键、离子键或氢键交联以产生捕获水分子以形成凝胶的立体开放网格
结构的（天然或合成）有机聚合物。水凝胶形成材料包括多糖（如海藻酸
盐及其盐）、肽、聚膦嗪和聚丙烯酸酯，它们通过阴离子交联或者是嵌段
聚合物（如聚环氧乙烷-聚丙二醇嵌段共聚物），其分别是通过温度或pH
交联的。在一些实施方式中，所述水凝胶或基质是生物可降解的。
在一些实施方式中，所述制剂包括原位可聚合凝胶（参见，例如，美
国专利申请公开2002/0022676，该专利的公开内容以其全部内容作为参考
并入本文；Anseth等人,J.Control Release,78(1-3):199-209(2002)；Wang等
人,Biomaterials,24(22):3969-80(2003)）。
在一些实施方式中，具有带电侧基的聚合物或其一价离子盐在水溶液
（如水、缓冲盐溶液或酒精水溶液）中至少是部分可溶的。具有可以与阳
离子反应的酸性侧基的聚合物的实例是聚(磷腈)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯
酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚(醋酸乙烯酯)和磺化聚合物，如磺
化聚苯乙烯。还可以使用具有通过丙烯酸或甲基丙烯酸与乙烯基醚单体或
聚合物反应形成的酸性侧基的共聚物。酸性基团的实例是羧基、磺酸基、
卤化（优选地，氟化）醇基、酚OH基和酸性OH基。
可以将本文所述的分离的胎盘干细胞或其共培养接种到立体框架或支
架上并体内植入。可以将该框架与任何一种或多种生长因子、细胞、药物
或（例如）刺激组织形成的其他组分结合植入。
可以使用的支架的实例包括无纺垫、多孔泡沫或自组装肽。可以使用
由乙醇酸和乳酸（例如，PGA/PLA）的合成可吸收共聚物（VICRYL,Ethicon,
Inc.,Somerville,N.J.）组成的纤维来形成非纺织垫。还可以将通过如冷冻干
燥或冻干法（参见，例如，美国专利No.6355699）的工艺所形成的由（例
如）聚(ε-己内酯)/聚(羟基乙酸)（PCL/PGA）共聚物组成的泡沫用作支架。
在另一种实施方式中，可以将分离的胎盘干细胞接种到毡制物上或者
与毡制物接触，所述毡制物可以由（例如）生物可吸收材料（如PGA、PLA、
PCL共聚物或共混物）或者透明质酸制成的复丝组成。
在另一种实施方式中，可以将本文所提供的分离的胎盘干细胞接种到
可以是复合结构的泡沫支架上。可以将这些泡沫支架塑模成有用的形状，
如具体结构（例如，含有病变的骨）的一部分。在一些实施方式中，在细
胞接种之前用（例如）0.1M乙酸处理所述框架，然后在聚赖氨酸、PBS和
/或胶原中培育以提高细胞附着。可以（如）通过血浆涂覆基质或一种或多
种蛋白（例如，胶原、弹性纤维、网状纤维）、糖蛋白、糖胺聚糖（例如，
硫酸肝素、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白等）、
细胞基质和/或其他材料（如，但不限于，明胶、海藻酸盐、琼脂、琼脂糖
和植物树胶等）的加入来修饰基质的外表面以改善细胞的附着或生长和组
织的分化。
在一些实施方式中，所述支架包含使其为非血栓形成性的材料或用该
材料处理。这些处理和材料还可以促进并保持内皮的生长、迁移和胞外基
质的沉积。这些材料和处理的实例包括（但不限于）天然材料，如基底膜
蛋白（如层粘连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白）；合成材料，如EPTFE和嵌段聚氨
酯脲硅酮（polyurethaneurea silicones），如PURSPANTM（The Polymer
Technology Group,Inc.,Berkeley,Calif.）。所述支架还可以包含抗血栓形成
试剂，如肝素；还可以在用分离的胎盘干细胞接种之前处理所述支架以改
变表面电荷（例如，用血浆涂覆）。
还可以将本文所提供的胎盘干细胞接种到生理学可用的陶瓷材料上或
与之接触，所述陶瓷材料包括（但不限于）磷酸一钙、磷酸二钙、磷酸三
钙、α-磷酸三钙、β-磷酸三钙和磷酸四钙、羟基磷灰石、氟磷灰石、硫酸钙、
氟化钙、氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃（如）及
其混合物。目前可商购的多孔生物相容性陶瓷材料包括
（CanMedica Corp.,Canada）、（Merck Biomaterial France,
France）、（Mathys,AG,Bettlach,Switzerland）和矿化胶原骨移植
产品，如HEALOSTM（DePuy,Inc.,Raynham,MA）和RHAKOSSTM
和（Orthovita,Malvern,Pa.）。所述框架可以是天然和/或合成
材料的混合物、共混物或复合材料。
在一种实施方式中，将分离的胎盘干细胞以约0.5×106至约8×106个细
胞/毫升接种到适合的支架上或与之接触。
5.7永生化胎盘干细胞系
可以通过使用含有生长促进基因（即，编码在适当情况下促进转染细
胞生长从而使生长促进蛋白的产生和/或活性是通过外部因素可调控的蛋白
的基因）的任何适合载体的转染使在骨相关癌的治疗、骨相关癌细胞增殖
的抑制或破骨细胞祖代成熟的抑制中有用的胎盘干细胞有条件地永生化。
在优选的实施方式中，所述生长促进基因是致癌基因，如（但不限于）V-myc、
N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤大T抗原、E1a腺病毒或人乳
头状瘤病毒的E7蛋白。
可以通过将生长促进基因置于外部可调控启动子（例如，可以通过（例
如）改变转染细胞的温度或与所述细胞接触的培养基的组成来控制其活性
的启动子）的控制之下来实现生长促进蛋白的外部调控。在一种实施方式
中，可以使用四环素（tet）控制的基因表达系统（参见Gossen等人,Proc.Natl.
Acad.Sci.USA 89:5547-5551,1992；Hoshimaru等人,Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 93:1518-1523,1996）。在不存在tet的情况下，该载体内的tet控制的
反式激活因子（tTA）强烈激活从phCMV*-1（融合至tet操纵子序列的来自人
巨细胞病毒的最小启动子）的转录。tTA是大肠杆菌（Escherichia coli）的
转座子-10源tet耐受操纵子的抑制因子（tetR）和单纯疱疹病毒VP16的酸
性域的融合蛋白。低、无毒浓度的tet（例如，0.01-1.0μg/mL）几乎完全消
除了tTA的反式激活。
在一种实施方式中，所述载体还含有编码可选择标志物（例如，赋予
抗药性的蛋白）的基因。细菌新霉素抗性基因（neoR）是可以在本发明方法
中使用的一个这种标志物。可以通过本领域技术人员已知的方式选择具有
neoR的细胞，如向生长培养基中加入（例如）100-200μg/mL的G418。
可以通过本领域技术人员已知的任何多种方式来实现转染，其包括（但
不限于）反转录病毒感染。一般地，可以通过与从载体的生产细胞系收集
的条件培养基和含有N2添加剂的DMEM/F12的混合物培育来转染细胞培
养。例如，可以在（例如）体外五天后通过在一体积条件培养基和两体积
含有N2添加剂的DMEM/F12中培育约20小时来感染如上所述制备的胎盘
干细胞培养。然后，可以如上所述选择具有可选择标志物的转染细胞。
转染后，将细胞传代至允许增殖（例如，允许至少30%的细胞在24小
时的周期内倍增）的表面上。优选地，所述基材是由用聚鸟氨酸（10μg/mL）
和/或层粘连蛋白（10μg/mL）涂覆的组织培养塑料制品组成的聚鸟氨酸/层
粘连蛋白基材、聚赖氨酸/层粘连蛋白基材或用纤连蛋白处理的表面。然后，
每3-4天用可以或可以不补充一种或多种增殖增强因子的生长培养基饲养
培养物。当培养小于50%汇合时，可以将增殖增强因子加入至生长培养基。
当80%-95%汇合时，可以使用标准技术（如通过胰酶消化）使条件永
生化胎盘干细胞系传代。在一些实施方式中，直至约第二十次传代，维持
选择（例如，通过对含有新霉素抗性基因的细胞加入G418）是有益的。还
可以将细胞在液氮中冷冻以用于长期储存。
可以从如上所述制备的条件永生化人胎盘干细胞系分离无性细胞系。
一般地，可以使用标准技术（如通过限度稀释或使用克隆环）分离这些无
性细胞系并扩增。一般地，可以如上所述饲养无性细胞系并使其传代。
一般地，可以通过在有利于分化的培养条件下抑制生长促进蛋白的产
生和/或活性来诱导条件永生化人胎盘干细胞系（其可以但不需要是无性系
的）分化。例如，如果编码生长促进蛋白的基因受外界可调控启动子的控
制，则可以改变条件（例如，温度或培养基组成）以抑制所述生长促进基
因的转录。对于以上所讨论的四环素控制基因表达系统，可以通过四环素
的加入来抑制生长促进基因的转录从而实现分化。一般地，4-5天的1μg/mL
的四环素足以引起分化。为了促进进一步分化，可以在生长培养基中包含
其他试剂。
还可以使用任何上述方法使BM-MSC永生化。
5.8试剂盒
在另一个方面，本文提供了适合于患有骨相关癌（例如，多发性骨髓
瘤或软骨肉瘤，或者在本文其他处列出的其他骨相关癌中的一种）的个体
的治疗的试剂盒，其包括装在与其余试剂盒内容物分离的容器内的组织培
养塑料制品胎盘干细胞（例如，在以上5.2.2节中所述的分离的胎盘干细胞）
和/或分离的骨髓来源的间质干细胞以及使用说明。优选地，在药物可用溶
液（例如，适合于病灶内施用的溶液或适合于静脉内施用的溶液）中提供
了所述胎盘干细胞和/或BM-MSC。
在某些实施方式中，所述试剂盒包含有利于胎盘干细胞和/或BM-MSC
向所述个体递送的一种或多种组分。例如，在某些实施方式中，所述试剂
盒包含有利于细胞向所述个体病灶内递送的组分。在这些实施方式中，所
述试剂盒可以包含（例如）适合于细胞向所述个体递送的注射器和针等。
在这些实施方式中，所述胎盘干细胞可以包含在试剂盒中的袋或一个或多
个小瓶中。在某些其他实施方式中，所述试剂盒包含有利于胎盘细胞向所
述个体静脉内或动脉内递送的组分。在这些实施方式中，所述胎盘干细胞
可以包含在（例如）瓶或袋（例如，血液袋或能够包含多至约1.5L含有细
胞的溶液的类似的袋）内，并且所述试剂盒另外包含适合于细胞向所述个
体递送的管和针。
另外，所述试剂盒可以包含减轻所述个体中疼痛或炎症的一种或多种
化合物（例如，止痛、甾族或非甾族抗炎化合物等）。所述试剂盒还可以
包含抗菌或抗病毒化合物（例如，一种或多种抗生素）、减轻个体中焦虑
的化合物（例如，阿普唑仑）、减轻个体中免疫应答的化合物（例如，环
胞霉素A）、抗组胺剂（苯海拉明、氯雷他定、地氯雷他定、喹硫平、非
索非那定、西替利嗪、异丙嗪、氯苯那敏、左旋西替利嗪、西眯替丁、法
莫替丁、雷尼替丁、尼扎替丁、罗沙替丁、拉呋替丁等）。
另外，所述试剂盒可以包含有利于个体对递送的准备或降低由于胎盘
干细胞的施用所导致的个体中感染的可能性的一次性用品，例如，无菌擦
拭物、一次性纸制品、手套等。
6.实施例
6.1实施例1：胎盘干细胞促进体内骨形成
本实施例表明了分离的组织培养贴壁胎盘干细胞促进骨形成的能力。
如下所示获得了胎盘干细胞。简要地，获得了测量为约1×2×1cm的胎
盘组织并将其切成约1mm3的块。将这些块用胶原酶IA（2mg/ml，Sigma）
消化30分钟，然后在37℃在水浴中用胰蛋白酶-EDTA（0.25%，GIBCO
BRL）消化10分钟。在室温下将所得的溶液以400g离心10分钟，然后除
去消化溶液。用PBS将小颗粒再悬浮至约10体积，并在室温下以400g离
心10分钟。将组织/细胞小颗粒在130mL培养基中再悬浮，并且以每个纤
连蛋白涂覆的T-75烧瓶13ml接种所述细胞。在37℃下用具有5%CO2的
湿润气氛培育细胞。在使用前，将在本文所述的研究中以及在以下实施例
中使用的细胞培养传代6次。这些分离的胎盘干细胞一般是CD34–、CD10+、
CD105+和CD200+。使用抗CD44和CD90的抗体的检查还显示所述细胞是
CD34–、CD10+、CD44+、CD90+、CD105+和CD200+。
本研究中使用的大鼠在研究时为约6周龄，并且每个组分配16只大鼠。
在96只雄性Hsd:RH-Foxnrnu无胸腺大鼠（Charles River,Wilmington,
Massachusetts）中产生了双侧颅骨缺损（左侧和右侧；约3mm×5mm）。简
言之，在双耳之间的中央颅骨区中形成横向皮肤切口，并且将组织扩张器
置于切口吻缘的中央区（皮瓣）。扩张器将切口打开并暴露出颅骨。在形
成切口后，将骨膜从顶骨除去。标记缺损位点，并且使用Dremel钻以中速
在每个顶骨中轻轻划出两个缺损的边缘（面积为约3mm×5mm）。检查缺
损边缘，并且如果需要使用镊子轻轻地将其弄平。清洗并清除了多余液体
后，如下所述病灶内处理该缺损。然后，相对于颅骨将真皮拉回并且使用
缝合术使真皮切口闭合。
处理组如下所示。用接种了胎盘干细胞（500μL中的5×106个细胞）、
骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC；得自新鲜骨髓吸出物（AllCells,
Emeryville,California））（500μL中的5×106个细胞）的（包含
交联胶原和羟基磷灰石的海绵状仿生基质；DuPuy Spine,Inc.,Raynham,
Massachusetts）、作为阴性对照的单独的或作为阳性对照的补充
有骨形态发生蛋白2（BMP-2）（每个外植体5μg）的修复每只
大鼠的一个缺损。在其他阴性对照大鼠中，不修复缺损。使用单独的
修复每只大鼠中其余的缺损。
植入后三周，接受+BMP-2、+胎盘干细胞和
+BM-MSC的大鼠均显示出大致相同水平的愈合和比接受单独的
或不接受修复的大鼠显著更大程度的颅骨缺损愈合。参见图1。
因此，PDAC具有促进作为多发性骨髓瘤发展的一个症状的骨病变愈
合的能力。
6.2实施例2：胎盘干细胞抑制破骨细胞成熟
本实施例表明组织培养贴壁胎盘干细胞（PDAC）抑制破骨细胞前体的
成熟。破骨细胞前体的抑制将为患有由骨髓瘤诱导的破骨细胞过量产生所
引起的骨病变（和伴随症状）的多发性骨髓瘤患者提供益处。
将通过使用人CD14阳性选择试剂盒（Cat#18058）从周围
血液单核细胞（PBMC）中富集CD14+细胞获得的人破骨细胞前体在24孔
板中制备并在补充有巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和核因子κB受体活
化因子配体（RANKL；参见Yaccoby等人,Cancer Research 64(6):2016-2023
(2004)）的αMEM培养基中培养。通过将细胞接种到1μm
（New York）（10000个细胞/）上
并将胎盘干细胞或MSC与破骨细胞前体共培养5-6天，从而将如实施例1
中所述分离的胎盘干细胞或胎儿间质干细胞（MSC）与破骨细胞前体在非
接触的条件下培养。在培养结束时，除去并通过使用膜联蛋
白V/PI试剂盒（Caltag Labs.,Burlingame,California）的膜联蛋白V和碘化
丙啶（PI）染色来检查破骨细胞前体和/或破骨细胞的细胞凋亡迹象。膜联
蛋白V结合磷脂酰丝氨酸，在细胞凋亡期间磷脂酰丝氨酸被从质膜的内片
输送至外片；具有完整质膜的细胞排斥碘化丙啶。因此，对膜联蛋白染色
呈阳性而对PI染色不呈阳性的细胞是早期凋亡细胞；对膜联蛋白染色和PI
染色均呈阳性的细胞是晚期凋亡细胞。
如通过提高的膜联蛋白V和碘化丙啶染色所示，与其中多发性骨髓瘤
细胞在没有胎盘干细胞的情况下生长的对照相比，发现胎盘干细胞显著诱
导了破骨细胞前体的细胞凋亡并降低了破骨细胞前体的活力。
用福尔马林固定中的细胞并对抗酒石酸酸性磷酸酶
（TRAP；破骨细胞标志物）染色。对每个孔中表达TRAP的多核破骨细胞
的数目进行计数。如通过组织切片中TRAP染色的减轻和通过TRAP阳性
破骨细胞数目的显著（p<0.05）减少所示（图2），如实施例1中所述分离
的胎盘干细胞抑制破骨细胞的分化。
因此，胎盘干细胞不仅可以修复骨病变，而且可以降低会产生或有助
于这些病变的破骨细胞的数目和活性。
6.3实施例3：胎盘干细胞抑制多发性骨髓瘤细胞的生长
本实施例表明组织培养贴壁胎盘干细胞（PDAC）能够抑制多发性骨髓
瘤细胞的体外和体内增殖。
6.3.1PDAC抑制多发性骨髓瘤细胞体外增殖
在阿肯色医科大学的骨髓瘤研究和治疗研究所（Myeloma Institute for
Research and Therapy）构建了人多发性骨髓瘤细胞系BN、JB、DNC和HLE
（参见Li等人,Br.J.Haematol.138(6):802-11(2007)）和ARP1。多发性骨
髓瘤细胞系U266（Nilsson等人,Clin.Exp.Immunol.7:477(1970)）获自美国
典型培养物保藏中心。通过已建立的方法（参见Li等人，同前）使用萤光
酶/GFP慢病毒构件转染这些细胞系以有利于在存在胎盘干细胞的情况下在
细胞-对-细胞接触条件下追踪和分析肿瘤生长。BN、JB和DNC是基质依
赖性细胞系。将从患有多发性骨髓瘤（Pt-MSC）的患者骨髓中产生的胎盘
干细胞、胎儿MSC（FB-MSC）和MSC以约10000个细胞/孔在96孔板中
培养。将多发性骨髓瘤细胞（10000个细胞/孔）与胎盘干细胞或MSC在补
充有10%FBS和抗生素的RPMI培养基中共培养一周。培养结束时，多发
性骨髓瘤细胞的生长是通过荧光素酶活性的测量可确定的。
图3中总结了本研究的结果，其显示与存在FB-MSC和Pt-MSC的情
况下的生长相比，存在胎盘干细胞的情况下多发性骨髓瘤细胞成倍生长。
存在胎盘干细胞的情况下多发性骨髓瘤细胞的生长根据特定细胞系而改
变，但是对于与胎盘干细胞共培养的细胞系，每种细胞系的生长显著低于
与胎儿MSC或患者MSC共培养的细胞系。
还通过与由成骨细胞骨生成因子（例如，抗坏血酸、β甘油磷酸酯和地
塞米松）调节的DMEM/10%胎牛血清（FBS）培育约3-3.5周（参见Yaccoby
等人,Haematologica 91(2):192-199(2006)）来诱导如实施例1中所述分离的
MSC和胎盘干细胞以分化成成骨细胞。为了测试对多发性骨髓瘤细胞系生
长的影响，将板用PBS清洗以除去成骨细胞因子。相比于和FB-MSC或
Pt-MSC的共培养中多发性骨髓瘤细胞的生长，与从FB-MSC或Pt-MSC产
生的成骨细胞的共培养中多发性骨髓瘤细胞的生长降低。相比于和胎盘干
细胞的共培养，胎盘干细胞向成骨细胞的分化对多发性骨髓瘤细胞系的生
长无影响或稍微降低了多发性骨髓瘤细胞系的生长。对于大部分细胞系，
实验重复3次。
为了研究细胞-细胞接触的可能影响，在其中防止细胞-细胞接触的系统
中培养细胞。具体地，在系统中24孔膜的
背面上培养如实施例1中所述分离的MSC（FB-MSC或BM-MSC）或胎盘
干细胞，而在的上室上培养多发性骨髓瘤浆细胞。参见图4。
使用CD138-免疫磁珠分离法分离来自6位患者的原代多发性骨髓瘤细胞并
以500,000个多发性骨髓瘤细胞/孔与MSC或胎盘干细胞（100,000个细胞
）共培养6-10天。CD138是浆细胞的标志物。
通过台盼蓝排阻法和通过MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯四唑
溴化物）测定确定了共培养对多发性骨髓瘤细胞存活力的影响。MTT测定
是测量将MTT还原成甲臢从而产生紫色的酶活性的比色测定。只有在线粒
体还原酶有活性时才会发生这种还原，并且因此通常将转化用作活细胞的
测量。在一个实验中，还对多发性骨髓瘤细胞进行膜联蛋白V/PI流式细胞
学分析，如以上实施例2中所述。与和胎儿MSC的共培养
中来自大部分所测试的患者的骨髓瘤细胞的存活相比，在与胎盘干细胞的
共培养中原代多发性骨髓瘤细胞的存活降低。参见图5。
6.3.2胎盘干细胞抑制体内多发性骨髓瘤细胞增殖和骨量增加
使用SuperFect（QIAGEN Inc.,Valencia,California,USA）将含有增强
型绿色荧光蛋白（EGFP）编码序列的pLEGFP反转录病毒载体（Clontech,
Palo Alto,California,USA）用于瞬时转染包装细胞系Phoenix Eco（亲宅性）。
EGFP是野生型水晶水母（Aequorea victoria）绿色荧光蛋白的红移变体，
已对其优化获得了更亮的荧光和哺乳动物细胞中更高的表达。转染后24-48
小时收集含有反转录病毒颗粒的上清液。为了有利于追踪，在存在8μg/ml
聚凝胺的情况下用反转录病毒颗粒感染胎盘干细胞12小时，并在此时用新
鲜培养基替换所述培养基。在一些实验中，在通过将它们在存在
200-400μg/ml G418的情况下培养2-3周进行选择前，将细胞再次暴露于含
有病毒颗粒的上清液。
作为在原代人骨髓瘤SCID-hu模型中使用人骨组织的替代，使用了其
中将兔骨植入SCID小鼠（SCID-rab小鼠）并随后将骨髓瘤细胞直接引入
到所植入的骨中的系统。如前所述，构建了骨髓瘤SCID-rab小鼠。参见Yata,
K.和Yaccoby,S.等人,Leukemia 2004;18:1891-1897。CB.17/Icr-SCID小鼠
（6-8周大）得自Harlan Sprague Dawley（Indianapolis,IN,USA），新西兰
孕兔来自Myrtle养兔场（Thompson Station,TN,USA）。用大剂量戊巴比
妥钠使3-4周龄的兔深度麻醉并通过颈椎脱位处死。将兔股骨和胫骨切成两
段，并保持近端和远端封闭，而将脊椎切成小片段（1×2cm2）。
对于骨植入法，用乙醇冲洗SCID小鼠的右侧或左侧并用消毒纱布吸
干。通过小（5mm）切口将兔骨皮下插入。然后，用无菌手术吻合器使切
口闭合，并且允许骨移植发生6-8周。在一些实验小鼠中，在相同小鼠中同
时对侧植入两个骨。对于每个实验，将含有17+/-8%浆细胞（PC）的10-50×106
个未分离人患者源骨髓瘤骨髓细胞或3.3+/-1.6×106个PC在50μl磷酸盐缓
冲盐水（PBS）中直接注射到植入的兔骨中。对于每个实验，使用至少两只
小鼠。将小鼠周期性从尾静脉放血以测量M蛋白同型的循环人免疫球蛋白
（Ig）的水平变化。
如通过ELISA和通过溶骨性病变的放射照相评价所见，通过小鼠血清
中人单克隆免疫球蛋白（hIg）水平的提高表明了骨髓瘤生长的建立。在转
化前，通过使用胰蛋白酶-EDTA收集了5×105个如实施例1中所述分离的
EGFP表达胎盘干细胞并将其在50μl PBS中再悬浮。将胎盘干细胞直接注
射到SCID-rab小鼠中的植入骨中。注射后将实验继续8-16周。使用PIXImus
DEXA密度计（GE Medical Systems LUNAR,Madison,WI）确定了植入骨
的骨矿物密度（BMD）变化。通过追踪如通过ELISA所见的小鼠血清中人
单克隆免疫球蛋白（hIg）的水平确定了胎盘干细胞对多发性骨髓瘤细胞增
殖的影响。
发现来自一位患者（表示为患者1）的多发性骨髓瘤细胞在
SCID-rab/SCID-hu小鼠中生长并且可以传代至新构建的SCID-rab/SCID-hu
小鼠；然而，它们不能体外独立生长或在基质层上生长。对成功移植了多
发性骨髓瘤细胞的6只SCID-rab小鼠病灶内施用转染的胎盘干细胞，并且
对6只施用对照（磷酸盐缓冲盐水）。
通过如通过ELISA所见的小鼠血清中人单克隆免疫球蛋白（hIg）的检
测，发现在胎盘干细胞注射后两周和四周时多发性骨髓瘤细胞的生长被显
著抑制，但是PBS的注射不会抑制（p<0.007；图6）。活动物中的生物发
光分析检测了这些小鼠中的荧光素酶表达胎盘干细胞；在所有施用胎盘干
细胞的小鼠中14天时的生物发光强度降低（表1B）。此外，在胎盘干细
胞施用之前和处理后4周时拍摄的X射线显示向骨髓瘤骨注射胎盘干细胞
后骨量提高，但是在对照PBS处理的骨中骨量降低（图7）。
表1B：活体生物发光测定结果-每只动物的计数数目
小鼠
1
2
3
4
5
3天
5.20×106
6.50×105
8.3×106
2.30×107
3.30×106
14天
2.68×104
未检测到
2.80×105
1.10×106
2.00×104
为了测试胎盘干细胞对非骨髓瘤骨的骨密度的影响，将胎盘干细胞
（1×106个细胞/只小鼠）或赋形剂直接注射到SCID-rab小鼠中植入的非骨
髓瘤骨中。胎盘干细胞的注射导致植入骨的BMD从处理前的水平显著提
高，但赋形剂不能。这些数据表明胎盘干细胞向骨髓瘤或非骨髓瘤骨的直
接注射导致了局部骨量的增加，并且通过胎盘干细胞提高的骨形成与骨髓
瘤负荷降低有关。
接着，我们使用来自第二位患者（表示为患者2）的骨髓瘤细胞，其在
分子上分类为高风险MMSET亚类（与侵袭性多发性骨髓瘤和不良预后有
关）并表达中等水平的DKK1。患者2的骨髓瘤细胞在培养中不生长，但
是在如上所述的SCID-rab模型中成功传代。当良好地建立了骨髓瘤生长并
且溶骨病变明显时，开始处理。将胎盘干细胞病灶内注射到植入骨中
（0.1-1×106个胎盘干细胞/骨，7位宿主/组）或使用HyStem-C水凝胶载体
皮下注射（5×106个胎盘干细胞/只小鼠，6只小鼠）。处理后4周时分析，
病灶内注射0.5和1×106个胎盘干细胞导致植入骨的BMD从处理前的水平
提高（p<0.01）或与对照组相比防止了骨损失（p<0.02）（图8）。通过注
射1×106个胎盘干细胞的骨量增加另外与接近显著水平的骨髓瘤生长的降
低有关（p<0.08，图9）。
还比较了胎盘干细胞和人胎儿MSC对骨髓瘤骨疾病和肿瘤生长的影
响。将细胞（1×106个细胞/只小鼠）直接注射到移植了患者2骨髓瘤细胞（7
位宿主/组）的SCID-rab小鼠的植入骨中。与处理前的水平相比，胎盘干细
胞和MSC处理导致植入骨的BMD升高，然而胎盘干细胞的影响更显著（图
10）。胎盘干细胞和MSC处理均显著抑制SCID-rab模型中患者#2骨髓瘤
细胞的生长（图11）。这些结果表明尽管MSC和胎盘干细胞均对提高受骨
髓瘤影响的骨的BMD有效，但是胎盘干细胞具有比胎儿MSC更大的骨同
化代谢潜能。
因此，本实施例表明胎盘干细胞可以显著降低多发性骨髓瘤细胞的活
力，特别是当病灶内施用于骨髓瘤个体时。胎盘干细胞还在允许细胞-细胞
接触的情况下以及在防止细胞-细胞接触的情况下体外降低了多发性骨髓瘤
细胞的活力。与胎盘干细胞修复骨（例如，作为多发性骨髓瘤症状的骨病
变）和抑制破骨细胞成熟（多发性骨髓瘤相关骨病变发展的主要原因）的
能力相结合，这些结果表明胎盘干细胞可以是有用的抗多发性骨髓瘤治疗
剂。
6.4实施例4：胎盘干细胞促进多发性骨髓瘤细胞周期阻滞
本实施例表明组织培养贴壁胎盘干细胞（PDAC）抑制多发性骨髓瘤细
胞的生长。
6.4.1胎盘干细胞抑制多发性骨髓瘤细胞增殖
为了研究胎盘干细胞对多发性骨髓瘤细胞生长的影响，将如实施例1
中所述分离的胎盘干细胞与6种多发性骨髓瘤细胞系（MMCL）共培养，
所述多发性骨髓瘤细胞系表示为U-266（美国典型培养物保藏中心（ATCC）
目录No.TIB-196）、RPMI-8226（ATCC目录No.CCL-155）、L-363（Deutsche
Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（DSMZ）目录No.
ACC49）、H929（Gazdar,Blood 67:1542-1549(1986)）、LP-1（DSMZ目录
No.ACC41）和OPM-2（DSMZ目录No.ACC-50）。如通过免疫球蛋白产
生中的差异（参见表2）以及细胞标志物表达中的差异（参见表3A-3C）所
见，选择用于这些实验的四种多发性骨髓瘤细胞系代表了多发性骨髓瘤细
胞的异质性。
表2：通过多发性骨髓瘤细胞系的免疫球蛋白类型的产生
细胞系
IgA
IgG
κ链
λ链
H-929
0.0
0.1
98.9
0.9
OPM-2
0.6
0.1
3.5
97.3
RPMI-8226
0.0
0.0
0.9
85.8
U266
0.0
0.1
1.2
99.5
表3A-表3C：通过多发性骨髓瘤细胞系表达的细胞标志物（表示为表
达标志物的细胞百分比）。
表3A
样品
CD38+
CD56+
CD19+
CD45+
CD11b+
CD40+
CD138+
H929
97.7
98.6
0.74
2.3
7.56
0.18
72.9
OPM-2
13.2
21.2
0.062
0.21
56.9
0.14
7.33
RPMI-8226
96.7
64.4
0.093
0.3
29.4
18.3
16.7
U266
4.39
3.39
0.64
91.5
2.51
0.84
16.6
表3B
表3C
用DMEM+10%胎牛血清（FCS）融化如实施例1中所述分离的传代6
次的胎盘干细胞。在24孔板中每孔铺板5×104个胎盘干细胞。在胎盘干细
胞生长至汇合后，更换1次培养基，将每孔5×104个MMCL细胞铺板在胎
盘干细胞的上方并在37℃在5%CO2下培育4-5天。在培养1、2和5天时
收获MMCL细胞以用于进一步分析。使用EASYCOUNTTM系统
（Immunicon）对细胞计数。
结果表明与单独培养的这些多发性骨髓瘤细胞相比，胎盘干细胞实现
了对多发性骨髓瘤细胞系U266（在共培养5天时p<0.001）、RPMI-8226
（在共培养5天时p<0.03）、H929（在共培养4天时p<0.003）和OPM-2
（在共培养5天时p<0.01）的显著生长抑制。参见图12。在独立的实验中，
L-363细胞与胎盘干细胞的共培养导致了生长的显著抑制（在共培养5天时
p<0.06），并且LP-1细胞与胎盘干细胞的共培养也导致了生长抑制。
6.4.2胎盘干细胞下调编码在NF-κB信号和B细胞激活中起关键作用
的蛋白的基因的多发性骨髓瘤细胞表达
为了进一步鉴别胎盘干细胞对多发性骨髓瘤细胞系的生长抑制，将如
实施例1中所述分离的胎盘干细胞与U-266、RPMI-8226、OPM-2和H929
细胞共培养4天，然后通过不扰动胎盘干细胞的温和吸取收集了与胎盘干
细胞共培养的多发性骨髓瘤细胞或单独培养的多发性骨髓瘤细胞，随后进
行RNA制备和定量实时PCR（qRT-PCR）分析。使用使得能够同时进行实
时PCR反应的384孔微流卡（定制阵列,Applied Biosystems）进
行qRT-PCR。该卡包含参与细胞周期调控、细胞生长和增殖以及激素免疫
应答的300个基因，其包括参与B细胞信号和NF-κB信号的基因。使用
7900HT快速实时PCR系统（Applied Biosystems）进行qRT-PCR，并且使
用REALTIME软件分析数据。
与胎盘干细胞的共培养显著下调了编码B细胞激活的关键组分的基
因，其包括TRAF1（TNF受体相关因子1）、TRAF6；和编码NF-κB信号
通路的关键组分的基因，其包括TIRAP（Toll-白介素1受体TIR域衔接蛋
白）、p65/RelA和RelB。参见下表4。
通过多发性骨髓瘤细胞产生的蛋白质DKK1抑制了成骨细胞的活性并
且使成骨细胞和破骨细胞之间的平衡向有利于骨吸收的方向倾斜。在与如
上的胎盘干细胞共培养后，OPM-2细胞中DKK1的表达同样被下调。参见
表4。
表4.与单独的OPM-2相比，与胎盘干细胞共培养的OPM-2中基因表
达的倍数变化。对2次重复实验的倍数变化的平均值计算标准偏差。
基因
倍数变化
STDEV
DKK1
0.34
0.09
RELA
0.72
0.03
RELB
0.27
0.08
TIRAP
0.49
0.05
TRAF1
0.44
0.07
TRAF6
0.50
0.12
STDEV：标准偏差。
6.4.3胎盘干细胞下调编码细胞周期蛋白和CDK的基因的多发性骨髓
瘤细胞表达并且上调编码CDK抑制剂的基因
通过使用含有如上所述参与细胞周期调控的基因的384孔微流卡的
qRT-PCR分析了和使用Ingenuity途径分析（Systems,
www.ingenuity.com）分析了如实施例1中所述分离的胎盘干细胞（PDAC）
对细胞周期蛋白（CCN）和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）表达的影响。
发现胎盘干细胞降低了编码某些CCN和CDK的基因的多发性骨髓瘤细胞
系中的表达，并且以细胞类型特异的方式提高了某些CDK抑制剂基因的表
达。例如，在多发性骨髓瘤细胞系OPM-2中，下调了CDKs CDK3、CDK5
和CDK7；在多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226和U-266中，下调了CDK4。
相反，在多发性骨髓瘤细胞系OPM-2中，上调了CDK抑制剂p16和p19
和CDK抑制剂3；在多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226中，上调了CDK抑
制剂p19；在多发性骨髓瘤细胞系U266中，上调了p21；和在多发性骨髓
瘤细胞系H929中，p19、p21和p27均上调。
在下表5A-5D中显示了细胞周期相关基因表达变化的总结。
表5A-5D.对于多发性骨髓瘤细胞系OPM-2、U-266、RPMI-8226和
H929，与单独的多发性骨髓瘤细胞相比，与胎盘干细胞共培养的多发性骨
髓瘤细胞中基因表达的倍数变化。对2次重复实验的倍数变化的平均值计
算了标准偏差。
表5A.OPM-2
倍数变化
STDEV
|
CCNB3
0.39
0.07
CCNC
0.63
0.02
CCND1
0.01
0.00
CDK3
0.82
0.05
CDK5
0.82
0.00
CDK7
0.73
0.05
CDKN2A(p16)
1.55
0.26
CDKN2D(p19)
1.61
0.25
CDKN3
4.41
0.27
表5B.U-266
倍数变化
STDEV
|
CCNB1
0.16
0.01
CCNB2
0.16
0.03
CCND1
0.23
0.01
CCND2
0.08
0.00
CDK4
0.38
0.01
CDKN1A(p21)
1.45
0.14
E2F3
0.80
0.02
E2F4
0.44
0.00
E2F5
0.30
0.00
E2F6
0.22
0.00
表5C.RPMI-8226
倍数变化
STDEV
|
CCNB1
0.61
0.03
CCNB2
0.82
0.14
CCND1
0.64
0.06
CCND2
0.68
0.05
CDK2AP1
0.56
0.02
CDK4
0.56
0.03
CDKN2D(p19)
1.41
0.13
E2F3
0.67
0.02
E2F4
0.75
0.10
E2F5
0.52
0.02
E2F6
0.63
0.07
表5D.H929
倍数变化
STDEV
|
CCNB1
0.52
0.03
CCNB2
0.71
0.07
CCNB3
0.54
0.37
CCNC
0.64
0.02
CDK10
0.40
0.00
CDK3
0.84
0.06
CDK5
0.83
0.09
CDK9
0.82
0.03
CDKN1A(p21)
3.71
0.99
CDKN1B(p27)
1.12
0.18
CDKN2D(p19)
1.18
0.08
还发现如实施例1中所述分离的胎盘干细胞降低了多发性骨髓瘤细胞
系中编码E2F家族成员3、4、5和6（在从G1向S期过渡中起主要作用的
蛋白）和磷酸化Rb（成视网膜细胞瘤蛋白）的基因的表达。由于在低磷酸
化状态下，Rb通过抑制E2F家族因子作为肿瘤抑制剂起作用；然而，磷酸
化Rb对细胞周期进展具有较少抑制功能，因此该发现是有意义的。
为了进一步研究胎盘干细胞对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响，使用
J146-35单克隆抗体（BD Pharmingen,Cat#558549）和J112-906单克隆抗体
（Cat#558549,BD）通过流式细胞术分析了成视网膜细胞瘤蛋白（Rb）的
磷酸化状态。抗体J146-35识别在丝氨酸780处磷酸化的Rb（pS780），该
磷酸化影响了Rb与E2F的结合；抗体J112-906识别在丝氨酸807和811
处磷酸化的Rb（pS807/pS811），该磷酸化调控了c-Abl结合和细胞周期进
展。相对于单独培养的细胞，与胎盘干细胞共培养的H929、LP1和OPM2
显示出pS780处和pS807/pS811处RB磷酸化作用的降低。参见图13A-13C。
使用荧光染料BrdU和7-AAD，使用APC BrdU流式检测试剂盒（Cat#
552598,BD biosciences）进一步测定了胎盘干细胞对多发性骨髓瘤细胞系增
殖的影响。对于细胞系RPMI-8226、OPM-2和U266，与单独培养的多发性
骨髓瘤细胞相比，与胎盘干细胞的共培养导致G0/G1期中多发性骨髓瘤细
胞的百分比升高，而S期中这类细胞的百分比降低。参见表6。
表6.来自MMCL的细胞分析：胎盘干细胞共培养
G0/G1
S期
|
H929
63.5
27.0
H929+胎盘干细胞
53.9
28.9
RPMI-8226
45.3
11.6
RPMI-8226+胎盘干细胞
64.9
9.9
OPM2
49.2
42.8
OPM2+胎盘干细胞
78.4
11.5
U266
43.0
19.2
U266+胎盘干细胞
65.9
9.3
多发性骨髓瘤细胞异常分泌高水平的免疫球蛋白。为了研究胎盘干细
胞对通过多发性骨髓瘤细胞系的免疫球蛋白产生的影响，通过流式细胞术
分析了与胎盘干细胞共培养的MMCL或单独培养的MMCL的表面或胞内
免疫球蛋白的产生。当与胎盘干细胞共培养时，与单独培养的多发性骨髓
瘤细胞相比，从多发性骨髓瘤细胞系H929、OPM2和LP1观察到免疫球蛋
白产生的降低。例如，与单独培养时的细胞相比，共培养的H929细胞显示
出κ免疫球蛋白产生的降低；共培养的OPM2细胞显示出λ产生的降低；
而共培养的LP1显示出表面和胞内λ和IgG以及胞内κ产生的降低。参见
表7。
表7.在MMCL：胎盘干细胞共培养系统中Ig产生的几何平均数变化
Ig：免疫球蛋白类型
表明胎盘干细胞降低多发性骨髓瘤细胞增殖的以上结果不是由于胎盘
干细胞与其他细胞类型的共培养的一般影响，而是对多发性骨髓瘤细胞特
异的。例如，当以三种不同比例（10:1、1:1和1:10）共培养7天时，发现
胎盘干细胞增强了CD34+造血细胞的扩增。
因此，上述研究表明当与多发性骨髓瘤细胞系共培养时，胎盘干细胞
降低了多发性骨髓瘤细胞的生长速率，下调了编码细胞周期进展所需的细
胞周期蛋白的多发性骨髓瘤细胞系基因的表达并且上调了编码细胞周期进
展抑制剂的基因。照此，所述胎盘干细胞将在降低多发性骨髓瘤细胞体内
增殖中是有用的。
6.5实施例5：胎盘干细胞抑制软骨肉瘤细胞生长的使用
本实施例表明胎盘干细胞（PDAC）抑制培养中的软骨肉瘤细胞的增殖。
培养：为了检查如实施例1中所述分离的胎盘干细胞对
共培养系统中肿瘤细胞生长的影响，将1×104或5×104个
PDAC接种到系统下室中的600μL生长培养基中，并且将
1×104个软骨肉瘤细胞（No.CRL-7891；在生长培养基中400μL）接
种到的上室中（直径3μm）。作为对照，在没有胎盘干细胞
的情况下单独培养软骨肉瘤细胞。在24孔板中建立所有共
培养，并且每个条件重复三次。在37℃在5%CO2下在细胞培养箱中培养
7天后，使用Leica显微镜检查上室中的软骨肉瘤细胞。
软骨肉瘤是以围绕肿瘤细胞产生软骨基质为特征的癌。与该症候学一
致，在实验中，在不存在胎盘干细胞的情况下软骨肉瘤细胞
作为在显微镜下清晰可见的单独的聚集体生长。在以所测试的两个比例存
在胎盘干细胞的情况下，可见的软骨肉瘤细胞较少，并且该细胞的特征在
于完全不存在鉴定肿瘤细胞单独生长的细胞聚集体。照此，胎盘干细胞明
显抑制软骨肉瘤细胞的生长。
6.6实施例6：使用来那度胺的破骨细胞发生的抑制
本实施例表明小分子来那度胺（以商品名出售；3-(4-氨基
-1-氧-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮）可以用于抑制破骨细胞发生。
来那度胺在约1μM的浓度下具有显著的抗破骨细胞发生作用，从而导
致所形成的破骨细胞的数目急剧降低（图14）。当与如实施例1中分离的
胎盘干细胞和0.1μM或1μM来那度胺培养的破骨细胞前体与和胎盘干细胞
或骨髓来源的间质干细胞（BM-MSC）一起生长的破骨细胞相比时，发现
来那度胺进一步降低了从破骨细胞前体分化的破骨细胞的数目。图15。因
此，PDAC和浓度在约0.1μM至1μM之间的来那度胺存在可能的协同或辅
助抗破骨细胞发生的作用。
因此，单独的来那度胺和与胎盘干细胞结合的来那度胺均对降低破骨
细胞前体数目有效，并因此应对降低骨相关癌（如多发性骨髓瘤）附属骨
病变的数目和/或严重性具有治疗性。
等同性：
本发明未受限于本文所述的具体实施方式的范围。的确，除所述那些
以外，通过上述说明和附图对本文所提供主题的多种改变将对本领域技术
人员是显而易见的。这些改变旨在处于所附权利要求的范围内。
在本文中引用了多个出版物、专利和专利申请，以上出版物、专利和
专利申请的公开内容以其全部内容并入本文作为参考。