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治疗卵巢癌的组合物及方法
    背景技术 卵巢癌是女性生殖系统最常见的癌症， 在美国 2007 年出现约 22,430 的新案例和 15,280 的死亡例 (Jemal 等 ,CA Cancer J.Clin.2007,57(1):43-56)。 大约 70% 的卵巢癌被 诊断处于晚期， 并且只有 30% 的具有这种癌症的妇女预期可以生存 5 年 (Cho 和 Shih,Annu. Rev.Pathol.2009,4:284-313)。
     目前治疗卵巢癌的方法包括外科手术、 放射疗法、 化学疗法及其组合。 卵巢癌标准 的首要化学疗法是紫杉烷类和含铂药物的组合。尽管如此， 这种组合目前对于病人的毒性 危险， 和对细胞毒性的化学疗法的耐药性是目前遭受卵巢恶性肿瘤的妇女治疗失败和死亡 的主要原因。参见例如 Lage 和 Denkert,Recent Results Cancer Res.2007,176:51-60。 另外， 用铂试剂组合紫杉烷类治疗晚期卵巢癌， 目前被限制在约 45% 的 5 年生存率。参见例 如 March 等， Journal of Clinical Oncology,2007,25(29):4528-4535。
     已经被广泛使用异种移植模型 （例如卵巢癌细胞通过皮下注射或者注射到腹 腔） ， 来测试新疗法或者对标准化学疗法药物的施用的修饰方案。参见例如 Vanderhyden 等 ,Reproductive Biology and Endocrinology,2003,1:67。
     已经组合使用不同杀死机制的抗癌药物 （例如在细胞中具有不同的靶标） 。例如， 在小细胞肺癌 (SCLC) 异种移植模型中已经使用美登木素生物碱免疫缀合物 （包括与单克 隆抗体 ( 例如抗 -CD56 抗体 ) 连接的美登木素生物碱化合物 ( 例如 DM1) 以及 (1) 紫杉醇、 (2) 顺铂和依托泊苷、 (3) 多西紫杉醇的组合， 其在美国专利号 7,303,749 和 7,601,354 中 已经公开， 且该公开文件整体通过参考的方式并入本文。 此外， 美登木素生物碱免疫缀合物 （包括与单克隆抗体连接的美登木素生物碱化合物） 和 (1) 蛋白酶体抑制剂 ( 硼替佐米 )， (2) 免疫调节剂 / 抗血管生成剂 ( 萨立多胺或者来那度胺 )， 或者 (3)DNA 烷化剂 ( 美法仑 ) 的组合， 伴随任选的进一步的添加皮质类固醇 ( 地塞米松 )， 被使用在多发性骨髓瘤异种移 植模型中。
     在实验系统中 （其中具有不同杀死机制的抗癌药物被组合使用） ， 已经观察到， 具有独立靶标的抗癌药物 （相互排斥的药物） 表现出累加的、 协同或者拮抗的方式。Chou 和 Talalay 建立了一套数学方法， 以定性的和定量的方式精确描述该实验结果 (Chou 和 Talalay,Adv.Enzyme Regul.1984,22:27-55)。Chou 和 Talalay 揭示 ： 在整个浓度范围内， 两种相互排斥的药物会表现出相同类型的效果， 也就是说， 这种组合会表现累加的、 协同 的、 或者拮抗的类型的效果。大多数药物组合表现累加效应。但是在某些例子中， 所述组 合表现出小于或多于累加的效应。这些组合被分别称为拮抗或者协同。拮抗或者协同效 应通常被认为是不可预知的， 并且在意想不到的实验中发现。参见 Knight 等 ,BMC Cancer 2004,4:83;T.H.Corbett 等 ,Cancer Treatment Reports 198266:1187; 和 Tallarida J Pharmacol ExpTher.,2001298(3):865-72。
     在技术上需要更新的和更多的有效的方法来治疗卵巢癌。此外， 仍然需要发现药 物组合物， 其表现协同作用并可以有效地用于治疗和预防癌症 （例如卵巢癌） 。本发明涉及 这种方法和药物组合物。
     发明概述
     本发明涉及治疗卵巢癌的抗癌组合、 包含其相同的药物组合物、 以及其用途。 特别 地， 本发明是基于该发现 ： 将与细胞毒素化合物连接的 CD56 特异性结合的抗体 （例如免疫 缀合物） ， 联合至少两种化学治疗试剂 （尤其紫杉烷类化合物 （例如紫杉醇或者多西紫杉醇） 和铂化合物 ( 例如卡铂、 顺铂、 奥沙利铂、 异丙铂、 奥马铂、 或者四铂化合物 )） 进行施用， 提 高了卵巢癌的治疗指数， 该联合施用超过了抗癌试剂在老鼠 / 人类 （异种移植） 模型系统中 单独使用的累加效应。 在本发明的一个具体实施方案中， 抗体 （其特异性地结合与细胞毒素 化合物连接的 CD56） ( 即， ″免疫缀合物″ ) 加上另外的化学治疗试剂， 在卵巢癌治疗指数 中具有协同效应 （与单一的化合物和单独试剂的可预期组合累加效果相比） 。本发明也提供 通过施用治疗效果剂量的这种组合， 来调节被选定的细胞种群 （例如卵巢癌细胞） 生长的方 法。
     在一个实施方案中， 本发明的药物组合物包括人源化抗体 N901- 美登木素生物碱 缀合物 (huN901-DM1 或者 IMGN901)、 紫杉烷类化合物和铂化合物。 在一个实施方案中， 在所 述药物组合物中的紫杉烷类化合物是紫杉醇或者多西紫杉醇中的一种或两种。 在一个实施 方案中， 在所述药物组合物中的所述铂化合物是卡铂、 顺铂、 奥沙利铂、 异丙铂、 奥马铂或者 四铂化合物中的一种、 两种或者更多种的任意组合。 在一个实施方案中， 本发明的药物组合 物进一步包括药学上可接受的载体。 在一个实施方案中， 所述免疫缀合物是人源化抗体 N901- 美登木素生物碱缀合物 (huN901-DM1 或者 IMGN901)， 其联合紫杉烷类化合物和铂化合物施用， 其中所述组合具有 治疗上的协同作用， 或者提高了卵巢癌治疗的治疗指数， 与使用单独的免疫缀合物、 单独的 紫杉烷类化合物、 单独的铂化合物的累加效果相比 ( 或者不存在第三种时的前两种的任意 组合 )。 在一个实施方案中， 所述紫杉烷类化合物是紫杉醇或者多西紫杉醇中的一种或者两 种。 在一个实施方案中， 所述铂化合物是卡铂、 顺铂、 奥沙利铂、 异丙铂、 奥马铂、 或者四铂化 合物中的一种或者两种或者更多种的任意组合。
     如本文使用的″治疗协同″意思是缀合物联合一种或者多种的化学治疗试剂在 卵巢癌治疗中产生的治疗效果， 其比单独使用缀合物和化学治疗试剂的累加效果更大。
     本文对本发明的这些和其它方面进行详细描述。
     附图概述
     图 1: 显 示 了 IMGN901 治 疗 （以 两 种 不 同 的 剂 量 相 对 对 照）的 抗 肿 瘤 效 果， 在 OVCAR-3 人卵巢恶性肿瘤异种移植中。
     图 2: 显示了 COLO 720E 人卵巢恶性肿瘤异种移植中的联合治疗的抗癌效果， 使用 IMGN901 和两种不同剂量组合的紫杉醇加上卡铂， 以及单独使用 IMGN901 和单独使用两种 不同剂量组合的紫杉醇加上卡铂。
     图 3: 显示了在已建立的皮下 COLO 720E 人类卵巢肿瘤异种移植中， 减少剂量的 IMGN901 和组合紫杉醇加上卡铂 （即低剂量组合治疗） 的抗癌效果。
     发明详述
     卵巢癌
     卵巢癌是卵巢不同部位引起的癌生长。卵巢癌 ( ≥ 80%) 最普遍的形式是由卵巢 的外部的内衬 （上皮） 引起的。尽管如此， 输卵管 （上皮） 易于发展为和卵巢中见到的相同类
     型的癌症。由于卵巢和输卵管相互贴得很近， 假设这些细胞可以模仿卵巢癌。其它形式的 卵巢癌可以由卵细胞引起 （即生殖细胞瘤 )。卵巢癌的风险随年龄增加， 随怀孕而减少。终 生风险被估计为大约 1.6%， 但是受影响的一级亲属的妇女具有更高的风险 ( 高出 ~5%)。有 突变的 BRCA1 或者 BRCA2 基因的妇女具有 25% 和 60% 之间的风险， 其取决于特异性的突变。 卵巢癌是妇女中癌症致死的第五大原因， 并且是妇科疾病致死的首要原因。
     本发明提供改进的药物组合物和方法， 用于治疗卵巢癌。
     缀合物和免疫缀合物
     本发明利用的一种成分和 CD56 抗体产生缀合， 所述 CD56 抗体连接或者 “缀合” 到 细胞毒素化合物 ( 例如美登木素生物碱化合物， 例如 DM1( 下文进一步描述 )) 上。因此， 当 所述 CD56 抗体 ( 或者其抗原结合片段， 例如含有 CD56 抗体的抗原结合区 ) 与细胞毒素化 合物连接， 这种组合的抗体 / 细胞毒素化合物部分在本文被称为 “免疫缀合物” 。本发明的 免疫缀合物和另外的细胞毒素化合物或者化学治疗试剂组合， 以产生在卵巢癌治疗中的协 同效应 ( 协同 )。
     协同
     Chou 和 Talalay(Adv.Enzyme Regul.,22:27-55(1984)) 建立数学方法， 以定性 或者定量地描述实验发现中的组合药物效应。对于相互排斥的药物， 他们展示了适合于任 何程度效果的广义等效线 （参见 52 页， 在 Chou 和 Talalay)。等效线或者等效线图是具有 相同程度效果的两种药物的所有剂量组合的图示表述， 例如两种细胞毒素药物的组合会产 生与例如 20% 或者 50% 的细胞杀死相同的细胞杀死程度。在等效线图中， 直线表示累加效 果， 凸曲线 （直线下方） 表示协同效应， 凹曲线 ( 直线以上 ) 表示拮抗效应。这些曲线也示 出了， 两种相互排斥药物的组合会表现相同类型的效果， 在整个浓度范围内， 所述组合是累 加的、 协同的或者拮抗的。大多数药物组合表现累加效应。尽管在某些例子中， 所述组合表 现少于或者多于累加的效果。这些组合被分别称为拮抗或者协同。拮抗或者协同效应是不 可预知的， 是不能预料的实验发现。如果在它的最适浓度时治疗上优于这些成分中的一种 或其他种， 那么这种组合被表明有治疗协同作用， 参见 T.H.Corbett 等 ,Cancer Treatment Reports,66,1187(1982)。 Tallarida RJ(JPharmacol Exp Ther.2001Sep;298(3):865-72) 也注意到 “产生明显相似效果的两种药物同时使用时， 有时会产生扩大或减弱的效果。 有必 要进行定量评估， 以将这些案例与简单累加作用相区别。 ”
     采用 Chou 和 Talalay 的合用指数 （CI）的方法可以测量协同效应 （参见 Chang 等 ,Cancer Res.45:2434-2439,(1985))， 这种方法是根据中效原理建立的。这种方法计 算两种药物 （所述药物在其多种水平的细胞毒性时） 的协同、 累加或者拮抗的程度。当所 述 CI 值小于 1， 那么在这两种药物之间存在协同。当所述 CI 值是 1， 那么存在累加效果， 但是没有协同效应。当 CI 值大于 1， 那么表明有拮抗作用。所述 CI 值越小， 所述协同效应 越大。在另一个实施方案中， 协同效应通过采用分级抑菌浓度 (fractional inhibitory concentration， FIC) 测定。这种分数值的测定是通过合用药物的 IC50 值表示， 其是单用 药物的 IC50 值的函数。对于两种相互作用的药物， 每种药物的所述 FIC 值的总和表示了协 同相互作用的量度。当 FIC 小于 1， 那么在这两种药物之间有协同作用。FIC 值为 1 表明累 加效应。FIC 值越小， 协同作用越强。
     众所周知， 对本领域技术人员来说， 拮抗或者协同效应具有不可预期性， 这在其他几项研究中已经被证明， 例如 Knight 等， 参见 BMC Cancer2004,4:83。在这项研究中， 作者 测量了单用吉非替尼 ( 也称为易瑞沙 )、 或者与不同细胞毒素药物 ( 顺铂、 吉西他滨、 奥沙利 铂和苏消安 ) 合用对抗多种实体瘤的活性， 所述实体瘤包括乳房、 直肠、 食道和卵巢癌、 原 发灶不明癌、 皮肤和葡萄膜黑色素瘤、 非小细胞肺癌 (NSCLC) 和肉瘤。
     他们发现， 当测试肿瘤对抗单一的吉非替尼时， 观察到一定程度的肿瘤生长抑制 （TGI） 中存在异质性。在 7%(6/86) 的肿瘤中， 观察到相当可观的肿瘤生长抑制， 但是大多 数表现出导致低程度 TGI 的较为温和的反应。有趣地， 当吉非替尼与不同的细胞毒素药物 联合使用时， 其同时具有积极的和消极的效果。在 59%(45/76) 的测试肿瘤中， 添加吉非 替尼似乎加强细胞毒性试剂或者组合物的效果 ( 其中， 在它们的综合指数 （IndexSUM） 中， 11%(5/45) 具有 >50% 的减少 )。在 38% 的肿瘤中 (29/76)， 吉非替尼 + 细胞毒素药物组合使 用的 TGI 减小， 相对于细胞毒素药物单独施用。在剩余的 3%(2/76) 中， 没有观察到变化。
     作者总结了吉非替尼与不同的细胞毒素试剂 ( 顺铂 ; 吉西他滨 ; 奥沙利铂 ; 苏消 安和苏消安 + 吉西他滨 ) 使用时是双刃剑 : 它们对生长率的影响可能使某些肿瘤对细胞毒 素化学疗法更加具有抗性， 而它们对细胞因子介导的细胞生存 ( 抗 - 细胞凋亡的 ) 机制的 影响可能加强对相同药物 （在来自其它个体的肿瘤中） 的敏感度。参见 , 第 7 页的结论 ； 也 参见图 3.Knight 等 ,BMC Cancer 2004,4:83。 因此， 这项研究证明， 当两种已知其具有相同 的目的作用的化合物， 被组合使用也用于这个目的时， 它们可能不一定按预期执行有相同 的作用。 在活性试剂中找到高度有效的组合， 即有协同作用的混合物， 是有挑战性的工作。 依靠偶然性的运气获得成功不是有效的方式， 因为试剂的潜在组合方式是非常多的。 例如， 对于即使相对小的 5000 种潜在试剂的调色板， 存在数万亿的可能 5 倍的组合。从知识机制 中推论潜在组合的其它正常的发现策略， 也受限制于它的潜能， 因为许多有机体的生物终 点会受多种途径影响。 这些途径通常是未知的， 并且即使它们是已知的， 这些途径相互作用 产生生物终点的方式也是未知的。
     先前已经证明的药物组合的协同使用不能排除寻找新的协同组合的必要性， 因为 协同效应是不可预期的。例如在自身免疫缺陷综合症 (AIDS) 的治疗中， 其涉及高效抗反转 录病毒治疗 (HAART)， 据信 HIV-1 病毒反转录酶 (RT) 和病毒蛋白酶 (PR) 的抑制剂的混合， 表现出病毒复制的协同抑制。后来， 有趣的是， 在两类 RT 抑制剂中观察到协同作用 - 即， 在 缺乏 PR 抑制剂的情况下， 核苷类抑制剂 (NRTIs) 表现与非核苷逆转录酶抑制剂 (NNRTIs) 的协同作用。例如当组合施用， NRTI、 AZT( 叠氮胸腺 ) 和 NNRTI、 奈韦拉平表现协同作用 (Basavapathruni A 等 ,J.Biol.Chem.,Vol.279,Issue8,6221-6224,February 20,2004)。 因此， 仍然有必要找到药物组合， 其具有协同作用， 并且可以有效地用于治疗和预防使人衰 弱的疾病， 尤其是考虑到治疗特殊类型的癌症 （例如卵巢癌） 。
     在本发明的一个实施方案中， 惊奇地发现， 在卵巢癌的治疗中， 药物组合物 （其包 括结合 CD56 的免疫缀合物、 紫杉烷类化合物和铂化合物的组合） 产生协同治疗效果。
     如本文使用的所述术语 “协同效应″， 是指由化合物的组合产生的大于累加治疗 的效果， 其中由所述组合获得的治疗效果超过累加效果 （其由于单独地施用单一化合物产 生） 。本发明的实施方案包括在卵巢癌治疗中产生协同效应的方法， 其中所述效果至少 5%， 至少 10%， 至少 20%， 至少 30%， 至少 40%， 至少 50%， 至少 60%， 至少 70%， 至少 80%， 至少 90%， 至
     少 100%， 至少 200%， 至少 500%， 或者至少 1000% 地大于相应的累加效应。
     在某些实施方案中， 在卵巢癌治疗中获得的协同效应， 其中一种或者多种试剂或 者化合物以 “低剂量” 施用 （即， 采用的剂量如果单独施用将被认为是非治疗性的） ， 其中所 述低剂量化合物或者试剂联合其它化合物或试剂的施用 （以低剂量或者治疗剂量施用） ； 这 将导致协同效应， 其超过累加效应 （其由单独施用单一化合物所产生） 。在某些实施方案中， 所述协同效应通过以 “低剂量” 施用一种或多种试剂或化合物， 其中所提供的低剂量是为了 减少或者避免毒性或者不良的副作用。
     在一个实施方案中， 在卵巢癌治疗中获得的协同效应， 其中一种或多种试剂或化 合物以低剂量施用， 包括 IMGN901、 紫杉醇和 / 或卡铂中的任意一种或任意一种或多种的组 合。 在另一实施方案中， 在卵巢癌治疗中获得的协同效应， 其中施用的试剂或化合物包括低 剂量的 IMGN901、 低剂量紫杉醇和低剂量卡铂。
     CD56 抗体及其片段
     本发明中使用的与 CD56 特异性结合的抗体 ( 即 ,″ CD56 抗体″ ) 包括任意类型 的 CD56 抗体或者 CD56 结合片段、 部分、 或者其它抗原结合形式。这些包括， 例如但不限制 于多种形式的抗体和其片段， 例如 : 抗体和衍生物或者其类似物， 例如
     多克隆或者单克隆抗体或其抗原结合片段 ；
     嵌合的、 猴源化的 （primatized） 、 人源化的、 完全人类抗体或者其抗原结合片段 ；
     表面重塑抗体或者其抗原结合片段 ( 参见例如美国专利号 5,639,641);
     抗体的表位结合片段， 例如单链 ,Fv、 sFv、 scFv、 Fab、 Fab’ 和 F(ab’ )2(Parham,J. Immunol.131:2895-2902(1983);Spring 等 ,J.Immunol.113:470-478(1974);Nisonoff 等 ,Arch.Biochem.Biophys.89:230-244(1960))。
     各种的和天然类型的抗原结合分子可以形成的其它实施例， 其作为 CD56 结合试 剂使用， 在下文中将进一步详细讨论。
     IMGN901
     IMGN901 的 抗 体 部 分 起 源 于 N901。N901 是 IgG1 鼠 科 单 克 隆 抗 体 ( 也 称 为 抗 -N901)， 其与 CD56 作用 ； 所述 CD56 在神经内分泌起源的肿瘤上表达。参见 Griffin 等， J.Immunol.130:2947-2951(1983) 和美国专利号 5,639,641。
     所述 CD56 抗原是神经细胞粘附分子 (NCAM)， 其在神经内分泌起源的肿瘤细胞的 表面表达， 包括小细胞肺癌 (SCLC)、 类癌瘤和梅克尔细胞癌 (MCC)。 CD56 在大约 56% 的卵巢 肿瘤上表达。CD56 也在大约 70% 的多发性骨髓瘤上表达。
     不同版本的人源化 N901 的制备已经被描述， 参见 Roguska 等， Proc.Natl.Acad. Sci.USA,91:969-973(1994), 和 Roguska 等 ,Protein Eng.,9:895:904(1996), 其公开文本 整体以参考的方式并入。为了表示人源化抗体， 字母″ hu″或者″ h″在抗体名称的前面 出现。例如， 人源化的 N901 可以被称为 huN901 或者 hN901。
     IMGN901 是抗体 - 药物缀合物 (ADC)， 包括所述 CD56- 结合单克隆抗体、 huN901、 和美登木素生物碱细胞毒素试剂和 DM1。参见美国专利号 7,303,749 中的实施例 1, 作为 huN901/DM1 缀合物的示例性描述。 所述美国专利号 7,303,749( 发明人 :R.V.J.Chari;2007 年 12 月 4 日公告 ) 整体以参考的方式并入本文。其它关于美登木素生物碱化合物的信息
     也在本文中进一步地被讨论。
     IMGN901 高亲和性地与在肿瘤细胞表面表达的 CD56 结合。一旦结合上， 所述缀合 物被内在化， 所述 DM1 被释放。
     DM1 是抗有丝分裂试剂， 其干扰微管蛋白聚合作用和微管组装。参见 Remillard S. 等 ,1975,Science 189:1002-1005)。也参见美国专利号 7,303,749 中的实施例 1 中 描述 ： “由 Takeda(Osaka,Japan) 提供的安丝菌素 P-3, 被转变成含二硫的美登木素生物 碱 DM1, 如同在本文和在美国专利号 5,208,020 中描述的。 ” 美国专利号 5,208,020( 发明 人 :Chari 等， 1993 年 5 月 4 日公告 ) 整体以参考的方式并入本文。
     IMGN901 作为单一的试剂， 在卵巢癌的人类异种移植临床前期模型中， 表现明显的 抗肿瘤活性。
     美登木素生物碱和其它抗有丝分裂剂
     有丝分裂抑制剂 ( 抗有丝分裂剂 ) 是一种通常由天然物质衍生的药物， 其通常在 癌症治疗和细胞发生研究中使用。通过持续的有丝分裂， 癌细胞生长和最终转移。通常地， 有丝分裂抑制剂通过干扰微管的聚合作用阻止细胞经历有丝分裂， 从而阻止癌生长扩散。 有丝分裂抑制剂通过干扰和暂停有丝分裂 ( 通常在细胞分裂的 M 期 ) 发挥作用， 从而导致 细胞不再分裂。 微管蛋白的聚合作用， 其对于有丝分裂的发生是必要的， 可以通过有丝分裂 抑制剂抑制， 从而阻止有丝分裂。在癌症治疗中使用的有丝分裂抑制剂的某些实施例包括 美登木素生物碱 DM1、 紫杉醇、 多西紫杉醇、 长春碱、 长春新碱和长春瑞滨。 在本发明中使用的美登木素生物碱在现有技术中是已知的， 并且可以根据已知的 方法从天然来源中分离得到、 或者根据已知的方法合成制备得到。合适的美登木素生物碱 的实施例包括美登醇和美登醇类似物。 合适的美登醇类似物的实施例包括具有修饰的芳香 环和在其它位点具有修饰。
     合适的美登醇类似物的某些特殊实施例具有修饰的芳香环 :
     （1） C-19- 脱氯 ( 美国专利号 4,256,746)( 通过安丝菌素 P2 的 LAH 还原制备 );
     （2） C-20- 羟 基 ( 或 C-20- 去 甲 基 )+/-C-19- 脱 氯 ( 美 国 专 利 号 4,361,650 和 4,307,016)( 通过采用 Streptomyces 或者 Actinomyces 脱甲基， 或者采用 LAH 脱氯制备 ); 以及
     （3） C-20- 去甲氧基， C-20- 羧基 (-OCOR)， +/- 脱氯 ( 美国专利号 4,294,757)( 采 用酰氯进行酰化制备 )。
     合适的美登醇类似物的某些特殊实施例在其它位点具有修饰 :
     （1） C-9-SH( 美国专利号 4,424,219)( 美登醇与 H2S 或者 P2S5 反应制备得到 );
     （2） C-14- 烷氧甲基 ( 去甲氧 /CH2OR)( 美国专利号 4,331,598);
     （3） C-14- 羟甲基或者酰氧甲基 (CH2OH 或者 CH2OAc)( 美国专利号 4,450,254)( 从 Nocardia 中制备 );
     （4） C-15- 羟基 / 羧基 ( 美国专利号 4,364,866)( 美登醇通过 Streptomyces 转变 制备 );
     （5） C-15- 甲氧基 ( 美国专利号 4,313,946 和 4,315,929)( 从 Trewia nudiflora 分离 );
     （6） C-18-N- 去 甲 基 ( 美 国 专 利 号 4,362,663 和 4,322,348)( 美 登 醇 通 过
     Streptomyces 去甲基化制备 ); 以及
     （7） 4,5- 脱氧基 ( 美国专利号 4,371,533)( 通过美登醇的三氯化钛 /LAH 还原制 备 )。
     有用的含硫醇的美登木素生物碱的合成方法公开于美国专利号 :5,208,020;5,41 6,064;6,333,410;7,276,497; 和 7,301,019。
     带有硫醇部分的美登木素生物碱， 在 C-3 位点、 C-14 位点、 C-15 位点或者 C-20 位 点， 预计都是有用的。优选所述 C-3 位点， 并且尤其优选美登醇的 C-3 位点。其它的优选是 含有 -N- 甲基 - 丙氨酸 C-3 硫醇部分的美登木素生物碱、 和含有 -N- 甲基 - 半胱氨酸 C-3 硫醇部分的美登木素生物碱、 以及每种的类似物。
     本发明中有用的含有 -N- 甲基 - 丙氨酸 C-3 硫醇部分的美登木素生物碱衍生物的 某些特殊实施例通过通式 M1、 M2、 M3、 M6 和 M7 表述。
     其中 :
     l 是从 1 到 10 的整数 ； 并且
     “may” 是美登木素生物碱。
     其中 : R1 和 R2 是 H,CH3 或者 CH2CH3, 并且可以相同或者不同 ； m 是 0、 1、 2 或者 3; 以及 “may” 是美登木素生物碱。其中 :
     N 是从 3 到 8 之间的整数 ； 并且
     “may” 是美登木素生物碱。
     其中 : l 是 1、 2 或者 3; Y0 是 Cl 或者 H; 和 X3 是 H 或者 CH3.
     其中 : R1、 R2、 R3、 R4 是 H、 CH3 或者 CH2CH3, 并且可以相同或者不同 ； m 是 0、 1、 2 或者 3 ； 并且 “may” 是美登木素生物碱。
     本发明中有用的含有 -N- 甲基 - 半胱氨酸 C-3 硫醇部分的美登木素生物碱衍生物 的某些特殊实施例通过通式 M4 和 M5 表述。
     其中 : o 是 1、 2 或 3;p 是 0 到 10 之间的整数 ； 以及 “may” 是美登木素生物碱。
     其中 : o 是 1、 2 或者 3; q 是从 0 到 10 之间的整数 ; Y0 是 Cl 或者 H; 以及 X3 是 H 或者 CH3。美登木素生物碱的某些实施方案的描述也参见于美国专利号 :5,208,020;5,416, 064;6,333,410;6,441,163;6,716,821;RE39,151; 和 7,276,497。
     在卵巢癌治疗中使用的本发明药物组合物的一个实施方案包括 IMGN901， 紫杉醇 和多西紫杉醇中的两者之一或者两种， 卡铂、 顺铂和奥沙利铂中的三者之一或者任意组合。 在卵巢癌治疗中使用的本发明药物组合物的一个实施方案包括 IMGN901、 紫杉醇和卡铂。
     缀合物连接
     本发明细胞结合试剂可以被修饰， 通过双官能团的交联试剂与细胞结合试剂之间 的反应， 从而导致连接体分子与所述细胞结合试剂的共价连接。如本文中使用的， “双官能 团的交联试剂” 是化学部分， 其将细胞结合试剂共价连接到药物， 例如本文描述的药物。在 本发明优选的实施方案中， 一部分的连接部分是由所述药物提供的。 在这一方面， 所述药物 包括连接部分 （其是较大连接体分子的组成部分， 其用于将细胞结合试剂连接到药物） 。例 如， 为了形成所述美登木素生物碱 DM1 或者 DM4, 所述美登素的 C-3 位点酯侧链被修饰成具 有自由的巯基 (SH), 其描述参见于美国专利号 :5,208,020;6,333,410; 和 7,276,497。美 登素的这种硫醇化形式可以与修饰的细胞结合试剂反应， 以形成缀合物。 因此， 最终的连接 体是从两种成分组装而成， 其中一种是由交联试剂提供， 而另一种是由 DM1 或者 DM4 的侧链 提供。 任意合适的双官能团的交联试剂可以用于本发明的连接， 只要所述连接试剂能分 别保留所述药物和所述细胞结合试剂的治疗 ( 例如细胞毒性 ) 和靶标特点。优选的， 所述 连接体分子通过化学键 （如上文描述的） 将药物和细胞结合试剂连接， 致使所述药物和所 述细胞结合试剂彼此相互化学耦合 ( 例如共价键结合 )。优选的， 所述连接试剂是可断裂 的连接体。更加优选的是， 所述连接体在温和的条件下可以断裂， 所述温和的条件即细胞
     的条件， 在这个条件下所述药物的活性不受影响。合适的可断裂的连接体包括二硫化连接 体、 酸不稳定连接体、 光不稳定连接体、 肽酶不稳定连接体和酯酶不稳定连接体。含二硫化 连接体是可以通过二硫键改变而发生断裂的连接体， 其可以在生理条件下发生。酸不稳定 连接体是在酸性 pH 下断裂的连接体。例如某些细胞内室 （例如内涵体和溶酶体） 具有酸性 pH(pH4-5)， 并且提供适合酸不稳定连接体断裂的条件。光不稳定连接体是在体表有用， 并 且在许多容易照射到光的体腔内。 而且， 红外光可以穿透组织。 肽酶不稳定连接体可以断裂 某些细胞内或细胞外的肽 ( 参见 Trouet 等， Proc.Natl.Acad.Sci.USA,79:626-629(1982), 和 Umemoto 等， Int.J.Cancer,43:677-684(1989))。
     在一个实施方案中， 细胞毒素化合物通过二硫键或者硫醚键与细胞结合试剂连 接。 所述连接体分子包含活性化学基团， 其可以和细胞结合试剂反应。 与细胞结合试剂反应 的示例性的活性化学基团是 N- 琥珀酰亚胺酯和 N- 磺酸基琥珀酰亚胺酯。此外， 所述连接 体分子可以包括反应性化学基团， 例如二硫吡啶基， 其可以和所述药物反应形成二硫键。 连 接体分子的详细实施方案， 包括例如 N- 琥珀酰亚胺基 3-(2- 二硫代吡啶基 ) 丙酸酯 (SPDP) ( 参见例如 Carlsson 等 ,Biochem.J.,173:723-737(1978)),N- 琥珀酰亚胺基 4-(2- 二硫 代吡啶基 ) 丁酸酯 (SPDB)( 参见例如美国专利 4,563,304),N- 琥珀酰亚胺基 4-(2- 二硫代 吡啶基 ) 戊酸酯 (SPP)( 参见例如 CAS Registry number341498-08-6)， 和其它反应性交联 剂， 其描述参见于美国专利 6,913,748。 本发明的实施方案包括可断裂的连接体和非断裂的连接体， 以形成上述的缀合 物。 非断裂连接体是任意的化学部分， 其能够将药物 （例如美登木素生物碱、 长春花生物碱、 多拉司他汀、 auristatin 或者 cryptophycin） 以稳定的共价方式与细胞结合试剂连接。非 断裂连接体基本上抵抗酸诱导的断裂、 光诱导的断裂、 肽酶诱导的断裂、 酯酶诱导的断裂和 二硫键断裂， 在所述条件下， 所述药物和所述细胞结合试剂都保留有活性。
     在药物和所述细胞结合试剂之间形成非断裂连接体的合适的交联剂在现有技术 中是已知的。非断裂连接体的实施例包括具有 N- 琥珀酰亚胺酯或者 N- 磺酸基琥珀酰亚胺 酯部分的连接体 （用于与细胞结合试剂反应） , 和马来酰亚胺 - 或者卤代乙酰基的部分 （用 于和所述药物反应） 。 交联剂包括基于马来酰亚胺的部分， 包括 N- 琥珀酰亚胺基 4-(N- 马来 酰亚胺基甲基 ) 环己烷 -1- 羧酸琥珀酰亚胺酯 (SMCC)、 N- 琥珀酰亚胺基 -4-[N- 马来酰亚 胺甲基 ]- 环己烷 -1- 羧基 -[6- 氨基己酸盐 ]） （其是 SMCC 的 “长链” 类似物 (LC-SMCC)） 、 κ- 马来酰亚胺十一烷 N- 琥珀酰亚胺酯 (KMUA)、 γ- 马来酰亚胺丁酸 N- 琥珀酰亚胺酯 (GMBS)、 ε- 马来酰亚胺己酸 N- 羟基琥珀酰亚胺酯 (EMCS)、 m- 马来酰亚胺苯甲酰 -N- 羟 基琥珀酰亚胺酯 (MBS)、 N-(α- 马来酰亚胺乙酰氧基 )- 琥珀酰亚胺酯 (AMAS)、 琥珀酰亚 胺基 -6-(β- 马来酰亚胺丙酰胺基 ) 己酸酯 (SMPH)N- 琥珀酰亚胺基 4-(p- 马来酰亚胺苯 基 )- 丁酸酯 (SMPB) 和 N-(p- 马来酰亚胺苯基 ) 异氰酸酯 (PMPI)。包含卤代乙酰基的部分 的交联剂包括 N- 琥珀酰亚胺基 -4-( 碘代乙酰基 )- 氨基苯甲酸盐 (SIAB)、 N- 琥珀酰亚胺 基碘醋酸酯 (SIA)、 N- 琥珀酰亚胺基溴乙酸乙酯 (SBA) 和 N- 琥珀酰亚胺基 3-( 溴乙酰胺 ) 丙酸酯 (SBAP)。
     缺乏硫原子 （其用于形成非断裂连接体） 的其它交联剂也可以用于本发明的具体 实施方案。这些连接体可以衍生得到， 例如从基于二羧酸的部分衍生得到。合适的基于二 羧酸的部分， 包括但不限于通式 (IX) 的 α,ω- 二羧酸 :
     HOOC-Xl-Yn-Zm-COOH
     (IX),
     其中， X 是直链或者分支的具有 2 至 20 个碳原子的烷基、 烯基或者炔基 ； Y 是具有 3 至 10 个碳原子的环烷基或者环烯基 ； Z 是具有 6 至 10 个碳原子的取代或者非取代的芳香 基， 或者取代的或非取代的杂环基团， 其中所述杂原子选自 N、 O 或者 S ； 其中 l、 m 和 n 三者 每个都是 0 或者 1， 条件是 l、 m 和 n 不同时为 0。
     本 文 公 开 的 示 例 性 的 非 断 裂 连 接 体 的 描 述， 参见于美国专利申请号 10/960,602( 美国 出版号 2005/0169933)。其 他可 以用 于本 发明 的连 接体 包括 带电 连 接 体 或 者 亲 水 连 接 体， 其 描 述 分 别 参 见 于 美 国 专 利 申 请 号 12/433,604( 美 国 出 版 号 2009/0274713) 和 12/574,466( 美国出版号 2010/0129314)。
     可选择地， 如在美国专利 6,441,163B1 中公开的， 所述药物可以首先被修饰以引 入合适的反应性酯与细胞结合试剂反应。 这些含有活化的连接体部分的美登木素生物碱与 细胞结合试剂的反应， 提供了另一种制备可断裂或非断裂细胞结合试剂 - 美登木素生物碱 缀合物的方法。
     紫杉烷类
     紫杉烷类化合物通过影响称为微管的细胞结构， 来阻止癌细胞的生长， 所述微管 在细胞功能中起重要作用。在正常的细胞生长期， 当细胞开始分裂时微管形成。一旦细胞 停止分裂， 所述微管被分解或者破环。 紫杉烷类化合物阻止微管分解， 使所述癌症细胞被微 管堵塞， 从而时它们不能继续生长和分裂。
     紫杉烷类化合物在现有技术中是已知的， 包括例如紫杉醇 ( 作为 从 Bristol-Myers Squibb,Princeton,N.J. 获 得 ) 和 多 西 紫 杉 醇 ( 作 为 从 Sanofi-Aventis( 美国 ),Bridgewater,NJ 获得 ) 等等。被美国食品药品监督管理局 (FDA) 或外国同行认可的其他紫杉烷类化合物也可以考虑在本发明的方法和组合物中 使用。可以在本发明中使用的其他紫杉烷类化合物包括这些描述的， 例如在第 10 版的 NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy,Amsterdam, 第 100 页 ,No.382 和 383(Jun.16-19,1998); 以及美国专利号 4,814,470,5,721,268,5,714,513,5,739,362, 5,728,850,5,728,725,5,710,287,5,637,484,5,629,433,5,580,899,5,549,830,5,523,2 19,5,281,727,5,939,567,5,703,117,5,480,639,5,250,683,5,700,669,5,665,576,5,61 8,538,5,279,953,5,243,045,5,654,447,5,527,702,5,415,869,5,279,949,5,739,016,5 ,698,582,5,478,736,5,227,400,5,516,676,5,489,601,5,908,759,5,760,251,5,578,73 9,5,547,981,5,547,866,5,344,775,5,338,872,5,717,115,5,620,875,5,284,865,5,284 ,864,5,254,703,5,202,448,5,723,634,5,654,448,5,466,834,5,430,160,5,407,816,5, 283,253,5,719,177,5,670,663,5,616,330,5,561,055,5,449,790,5,405,972,5,380,916 ,5,912,263,8,808,113,5,703,247,5,618,952,5,367,086,5,200,534,5,763,628,5,705, 508,5,622,986,5,476,954,5,475,120,5,412,116,5,916,783,5,879,929,5,861,515,5,7 95,909,5,760,252,5,637,732,5,614,645,5,599,820,5,310,672,RE 34,277,5,877,205, 5,808,102,5,766,635,5,760,219,5,750,561,5,637,723,5,475,011,5,256,801,5,900,3 67,5,869,680,5,728,687,5,565,478,5,411,984,5,334,732,5,919,815,5,912,264,5,77 3,464,5,670,673,5,635,531,5,508,447,5,919,816,5,908,835,5,902,822,5,880,131,5,861,302,5,850,032,5,824,701,5,817,867,5,811,292,5,763,477,5,756,776,5,686,62 3,5,646,176,5,621,121,5,616,739,5,602,272,5,587,489,5,567,614,5,498,738,5,438 ,072,5,403,858,5,356,928,5,274,137,5,019,504,5,917,062,5,892,063,5,840,930,5, 840,900,5,821,263,5,756,301,5,750,738,5,750,562,5,726,318,5,714,512,5,686,298 ,5,684,168,5,681,970,5,679,807,5,648,505,5,641,803,5,606,083,5,599,942,5,420, 337,5,407,674,5,399,726,5,322,779,4,924,011,5,939,566,5,939,561,5,935,955,5,9 19,455,5,854,278,5,854,178,5,840,929,5,840,748,5,821,363,5,817,321,5,814,658, 5,807,888,5,792,877,5,780,653,5,770,745,5,767,282,5,739,359,5,726,346,5,717,1 03,5,710,099,5,698,712,5,683,715,5,677,462,5,670,653,5,665,761,5,654,328,5,64 3,575,5,621,001,5,608,102,5,606,068,5,587,493,5,580,998,5,580,997,5,576,450,5 ,574,156,5,571,917,5,556,878,5,550,261,5,539,103,5,532,388,5,470,866,5,453,52 0,5,384,399,5,364,947,5,350,866,5,336,684,5,296,506,5,290,957,5,274,124,5,264 ,591,5,250,722,5,229,526,5,175,315,5,136,060,5,015,744,4,924,012,6,118,011,6, 114,365,6,107,332,6,072,060,6,066,749,6,066,747,6,051,724,6,051,600,6,048,990 ,6,040,330,6,030,818,6,028,205,6,025,516,6,025,385,6,018,073,6,017,935,6,011, 056,6,005,138,6,005,138,6,005,120,6,002,023,5,998,656,5,994,576,5,981,564,5,9 77,386,5,977,163,5,965,739,5,955,489,5,939,567,5,939,566,5,919,815,5,912,264, 5,912,263,5,908,835, 和 5,902,822。
     可以用于本发明的其它化合物是那些通过类紫杉烷机制起作用的化合物。通 过类紫杉烷机制起作用的化合物包括具有使微管稳定效应能力和细胞毒素活性的化合 物， 所述细胞毒素活性是指对抗快速繁殖的细胞， 例如肿瘤细胞或者其它增生过多细胞疾 病。这种化合物包括， 例如埃博霉素化合物， 例如埃博霉素 A、 B、 C、 D、 E 和 F, 以及其衍 生物。其他通过类紫杉烷机制 ( 例如埃博霉素化合物 ) 起作用的化合物 （被 FDA 或者其 外国同行所公认的） 也可以优选在本发明方法和组合物中使用。埃博霉素化合物和其衍 生物是现有技术中已知的， 其描述例如参见于美国专利号 :6,121,029;6,117,659;6,096 ,757;6,043,372;5,969,145;5,886,026; 和 PCT 申 请 号 :WO 97/19086;WO 98/08849;WO 98/22461;WO 98/25929;WO98/38192;WO 99/01124;WO 99/02514;WO 99/03848;WO 99/07692;WO99/27890; 和 WO 99/28324。
     铂化合物铂化合物 （其 作 为 本 发 明 实 施 方 案 中 的 一 种 成 分）包 括， 例如顺铂 (作为 从 Bristol-Myers Squibb,Princeton,N.J. 获 得 )、 卡铂(作为 从 Bristol-Myers Squibb,Princeton,N.J. 获 得 )、 奥沙利铂作为 从 Sanofi-Aventis(U.S),Bridgewater,NJ 获得 )、 异丙铂、 奥马铂和四铂 等等。其它铂化合物 （其被 FDA 或其外国同行公认） 也可以考虑用于本发明的方法和组合 物。在癌症治疗中有用的铂化合物是现有技术中已知的， 其描述例如参见于美国专利号 4, 994,591,4,906,646,5,902,610,5,053,226,5,789,000,5,871,710,5,561,042,5,604,095 ,5,849,790,5,705,334,4,863,902,4,767,611,5,670,621,5,384,127,5,084,002,4,937, 262,5,882,941,5,879,917,5,434,256,5,393,909,5,117,022,5,041,578,5,843,475,5,6 33,243,5,178,876,5,866,169,5,846,725,5,646,011,5,527,905,5,844,001,5,832,931, 5,676,978,5,604,112,5,562,925,5,541,232,5,426,203,5,288,887,5,041,581,5,002,755,4,946,954,4,921,963,4,895,936,4,686,104,4,594,238,4,581,224,4,250,189,5,82 9,448,5,690,905,5,665,771,5,648,384,5,633,016,5,460,785,5,395,947,5,256,653,5 ,132,323,5,130,308,5,106,974,5,059,591,5,026,694,4,992,553,4,956,459,4,956,45 4,4,952,676,4,895,935,4,892,735,4,843,161,4,760,156,4,739,087,4,720,504,4,544 ,759,4,515,954,4,466,924,4,462,998,4,457,926,4,428,943,4,325,950,4,291,027,4, 291,023,4,284,579,4,271,085,4,234,500,4,234,499,4,200,583,4,175,133,4,169,846 ,5,922,741,5,922,674,5,922,302,5,919,126,5,910,102,5,876,693,5,871,923,5,866, 617,5,866,615,5,866,593,5,864,024,5,861,139,5,859,034,5,855,867,5,855,748,5,8 49,770,5,843,993,5,824,664,5,821,453,5,811,119,5,798,373,5,786,354,5,780,478, 5,780,477,5,776,925,5,770,593,5,770,222,5,747,534,5,739,144,5,738,838,5,736,1 56,5,736,119,5,723,460,5,697,902,5,693,659,5,688,773,5,674,880,5,670,627,5,66 5,343,5,654,287,5,648,362,5,646,124,5,641,627,5,635,218,5,633,257,5,632,982,5 ,622,977,5,622,686,5,618,393,5,616,613,5,612,019,5,608,070,5,595,878,5,585,11 2,5,580,888,5,580,575,5,578,590,5,575,749,5,573,761,5,571,153,5,563,132,5,561 ,136,5,556,609,5,552,156,5,547,982,5,542,935,5,525,338,5,519,155,5,498,227,5, 491,147,5,482,698,5,469,854,5,455,270,5,443,816,5,415,869,5,409,915,5,409,893 ,5,409,677,5,399,694,5,399,363,5,380,897,5,340,565,5,324,591,5,318,962,5,302, 587,5,292,497,5,272,056,5,258,376,5,238,955,5,237,064,5,213,788,5,204,107,5,1 94,645,5,182,368,5,130,145,5,116,831,5,106,858,5,100,877,5,087,712,5,087,618, 5,078,137,5,057,302,5,049,396,5,034,552,5,028,726,5,011,846,5,010,103,4,985,4 16,4,970,324,4,936,465,4,931,553,4,927,966,4,912,072,4,906,755,4,897,384,4,88 0,832,4,871,528,4,822,892,4,783,452,4,767,874,4,760,155,4,687,780,4,671,958,4 ,665,210,4,645,661,4,599,352,4,594,418,4,593,034,4,587,331,4,575,550,4,562,27 5,4,550,169,4,482,569,4,431,666,4,419,351,4,407,300,4,394,319,4,335,087,4,329 ,299,4,322,391,4,302,446,4,287,187,4,278,660,4,273,755,4,255,417,4,255,347,4, 248,840,4,225,529,4,207,416,4,203,912,4,177,263,4,151,185,4,140,707,4,137,248 ,4,115,418,4,079,121,4,075,307,3,983,118,3,870,719,RE 33,071,6,087,392,6,077, 864,5,998,648, 和 5,902,610。
     剂量和施用
     本发明的实施方案包括免疫缀合物和细胞毒素化合物 / 化学疗法试剂， 伴随使用 的药学上可接受的载体、 稀释液、 和 / 或赋形剂 （其是已知的） ， 可以由现有技术本领域技术 人员根据临床表现决定。载体、 稀释液和 / 或赋形剂的实施例包括 ： (1) 杜尔贝科磷酸盐缓 冲盐水， pH 约 6.5， 其含有约 1mg/ml 至 25mg/ml 人血清蛋白 ,(2)0.9% 生理盐水 (0.9%w/v NaCl), 和 (3)5%(w/v) 葡萄糖。
     本文描述的化合物和成分， 可以以适当的形式和通过多种途径施用， 所述例如本 领域技术人员已知的途径。多种可能的施用模式包括， 但不限于非肠道的、 静脉内的、 动脉 内的、 腹膜内的、 皮下的、 肌肉内的、 皮肤内的。对于多种施用模式， 所述化合物或者组合物 可以是水相或非水相的无菌溶液、 悬浮液或者乳状液。丙二醇、 植物油和可注射的有机酯 （例如油酸乙酯） 可以作为溶剂或者赋形剂使用。所述组合物可以含有佐药、 乳化剂或者分散剂。组合物也可以以无菌固体组合物的形式存在， 其可以溶解或者分散在无菌水或者其 它可注射的无菌介质中。
     根据本领域技术人员可以按照任意的顺序或者任意的时间间隔施用药物组合物。 例如但不作限制于与细胞毒素化合物 ( 例如 IMGN901) 连接的 CD56- 结合试剂、 紫杉烷类化 合物 ( 例如紫杉醇 ) 和铂化合物 ( 例如卡铂 ) 三者可以顺序施用 ( 按照任意顺序 )， 同时 施用， 或者顺序施用和同时施用的任意组合 ( 例如许多可能实施例中的一种， 同时施用紫 杉烷和铂化合物 , 接着在想要的时间间隔后， 施用与细胞毒素化合物连接的 CD56- 结合试 剂 )。顺序施用和同时施用的任意组合方案可以使用和实行， 根据本领域技术人员的决定。 药物组合物的施用， 无论同时地、 顺序地或两者的组合， 都可以实行， 按照任意数量的分钟 ( 例如 0-60 分钟 )、 小时 ( 例如 0-24 小时 )、 日 ( 例如 0-7 日 ) 和 / 或周 ( 例如 0-52 周 ) 的想要的时间间隔， 根据本领域技术人员的决定。
     本文描述的化学治疗试剂和免疫缀合物的″治疗上有效量″是指是为了抑制选 定细胞群的增值和 / 或治疗病人的疾病而定的给药方案， 所述给药方案是根据多种因素选 择的， 包括病人的年龄、 重量、 性别、 饮食和药物条件， 疾病的严重性， 施药的方式和药理学 考虑 （例如使用的特定化合物的活性、 功效、 药物动力学和毒理学特性） 。所述″治疗上有 效量″也可以参考标准的医疗文本决定， 例如 Physicians Desk Reference 2010( 出版 商 :PDR Network,LLC;ISBN-10:1563637480;ISBN-13:978-1563637483)。本发明的实施方 案包括在人类和非人类哺乳动物中卵巢癌治疗的方法。 本发明制药学 / 治疗学组合物的合适的施用方案的实施例可以考虑， 不作限制地 包括以下的参数。药物组合物可以每天给药， 持续 5 天 ( 每天静脉注射或者持续静脉输注 5 日 )。
     药物组合物可以被施用一周一次， 进行 6 周或更长时间。药物组合物可以使用每 2 至 3 周一次。单次剂量可以在约 50 至约 400ml 的生理盐水中给药， 其中可以添加约 5 至 约 10ml 的人血清蛋白。持续输注可以在约 250 至约 500ml 的生理盐水中给药， 其中可以添 加约 25 至约 50ml 的人血清蛋白， 每 24 小时的周期。剂量可以是每人约 10pg 至约 1000mg/ kg, 静脉注射 ( 约 100ng 至约 10mg/kg 的范围 ).
     治疗后约 1 至 4 周， 病人可以接受第二次的治疗过程。关于施药的方式、 赋形剂、 稀释液、 剂量和时间的专门临床方案可以由熟练的技术人员根据临床情况保证来决定。
     本发明也提供了药物试剂盒， 其包括一个或多个容器， 容器内充装一种或多种本 发明所述药物化合物和 / 或组合物的成分 （包括一种或多种免疫缀合物和一种或多种化学 治疗试剂） 。这种试剂盒也可以包括， 例如其它化合物和 / 或组合物、 化合物和 / 或组合物 的施用设备、 以及按照 （管理制造、 使用和销售药物产品或生物产品的） 政府机关规定形式 成文的说明书。
     癌症治疗和它们的剂量、 施药方式和建议用法在现有技术中是已知的， 并且已经 被描述， 参见于文献如 Physician′ s Desk Reference(PDR)。所述 PDR 公开了在多种癌症 治疗中使用的试剂的剂量。这些前述的化学治疗药物的所述给药方案和治疗有效剂量， 可 以由医师决定 （根据被治疗的特定癌症、 疾病的范围和其它熟练医师熟悉的因素） 。 所述 PDR 的内容以其整体， 通过参考的方式清楚地并入本文。所述 2006 版本的 Physician′ s Desk Reference(PDR) 公开了萨立多胺 (p 979-983)、 万珂 (Velcade， p 2102-2106) 和美法仑 (p
     976-979) 的作用机制， 治疗的优选剂量， 以及给药安排。所述 PDR 的内容以其整体， 通过参 考的方式清楚地并入本文。一个本领域熟练技术人员可以查阅所述 PDR， 决定可以使用的 （根据本发明技术的） 化学治疗试剂和缀合物的给药方案和剂量， 可以采用一种或多种下述 的参数。这些参数包括 :
     （1） 综合索引
     （a） 由制造商
     （b） 产品 ( 公司的或者注明商标的药物名称 )
     （c） 目录索引 ( 例如″蛋白酶体抑制剂″、 “DNA 烷化剂” 、 “美法仑” 等)
     （d） 类别 / 化学索引 ( 非商标的共同药物名称 )
     （2） 药物的彩色图像
     （3） 产品信息， 与 FDA 标记一致
     （a） 化学信息
     （b） 功能 / 作用
     （c） 适应症和禁忌症
     （d） 实验研究、 副作用、 警告
     类似物和衍生物
     对治疗试剂 （例如细胞毒素试剂或者化学治疗试剂） 熟悉的技术人员会很容易地 理解， 本文描述的这些试剂的每种， 可以按照这种方式 （其使最终化合物仍然保留起始化合 物的所述特异性和 / 或活性） 被修饰。熟练的技术人员也会理解， 这些化合物的许多种可以 代替本文描述的治疗试剂使用。因此， 本发明的所述治疗试剂包括本文描述的化合物的类 似物和衍生物。
     免疫球蛋白和抗体
     本文中的所述 “抗体” 和 “免疫球蛋白” 可以替换使用。抗体或者免疫球蛋白包括 至少重链的可变区、 通常包括至少重链和轻链的可变区。在脊椎动物系统中的基本的免疫 球蛋白结构， 对这些普通技术人员是容易理解的。 参见例如 ,Harlow 等， 抗体 :A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)。
     所述术语 “免疫球蛋白” 包括各种广泛的多肽， 其可以通过生化方法识别。本领域 技术人员会理解， 重链分为 γ 链、 μ 链、 α 链、 δ 链和 ε 链， 以及它们之间的一些亚链 ( 例 如 γ1-γ4)。根据链的性质决定所述抗体的 “类别” ， 所述抗体的类别分别为 IgG、 IgM、 IgA、 IgG 或者 IgE。所述免疫球蛋白的亚类 （同型抗原） ， 例如 IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA1 等是 特征明确的， 并且已知具有特定功能。熟练技术人员考虑到即时的公开容易识别这些类别 和同型抗原的每种修饰版本 ； 因此， 也属于本发明的保护范围。 所有的免疫球蛋白类别在本 发明的范围内是清晰的。作为一个实施例， 典型 IgG 免疫球蛋白分子包括两种相同的轻链 多肽 （分子量约 23,000 道尔顿） ， 以及两条相同的重链多肽 （分子量约为 53,000-70,000 道 尔顿） 。所述四条链主要通过二硫键以 “Y” 结构连接， 其中所述轻链支撑重链 （在 “Y” 的口 部开始， 并通过可变区持续通过） 。
     轻链和重链被分成结构和功能同源的区。所述术语 “不变” 和 “可变” 是根据功能 使用的。关于这方面， 容易理解， 所述轻链可变区 （VL） 和所述重链可变区 (VH) 决定抗原识 别和特异性。相反地， 所述轻链不变区 （CL） 和所述重链不变区 (CH1、 CH2 或者 CH3) 赋予重要的生物性质， 例如分泌、 经胎盘活性、 Fc 受体结合、 补体结合以及等等。所述 N- 端部分是 可变区， 所述 C- 端部分是不变区 ； 所述 CH3 和 CL 区实际上分别包括轻链和重链的羧基 - 末 端。
     可变区允许抗体选择识别和特异性地与抗原上抗原表位结合。也就是说， 抗体的 所述 VL 区、 VH 区或者抗原互补决定区 (Complementarity-determining regions， CDR) 组 合形成确定三维抗原结合位点的可变区。这种四级抗体结构在所述 Y 的每个臂的末端形成 抗原结合位点。更加特殊的是， 所述抗原结合位点是由三个 CDR（其在 VH 和 VL 链的每条 上） 确定的。在某些例子中， 例如某些来自骆驼科的免疫球蛋白分子或者基于骆驼科的免 疫球蛋白人工改造的， 其完整免疫球蛋白可以只含有重链， 而没有轻链。参见例如 Hamers Casterman 等， Nature 363:446448(1993)。
     在自然产生的抗体中， 所述 6 个 “互补决定区” 或者 “CDR” （在每个抗原结合区） 是短的、 非连续氨基酸序列， 其特异性定位以形成抗原结合区， 和抗体在水化环境中假定它 的三维构象一样。在所述抗原结合区的剩余氨基酸序列， 称为″框架″区， 表现较少的分 子内变异。所述框架区发挥作用形成支架， 通过链内、 非共价相互作用为 CDR 提供正确方向 的定位。由已定位的 CDR 形成的所述抗原结合区确定与表位 ( 其在免疫反应性抗原上的 ) 的表面互补。所述互补表面促进了抗体非共价地与它的同源表位结合。本领域普通技术人 员能容易地被分别识别所述氨基酸序列 （其包括 CDR 和框架区） 的任意给定的重链或轻链 可变区， 因为它们已经被精确地确定 ( 参见″ Sequences of Proteins of Immunological Interest,″ Kabat,E., 等 ,U.S.Department of Health and Human Services,(1983); 以 及 Chothia 和 Lesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987), 其整体在此处通过参考的方式并入 本文 )。
     本发明的抗体或者抗原结合片段、 变体或者其衍生物包括但不限于多克隆、 单克 隆、 多特异性、 人类的、 人源化的、 猴源化的、 或者嵌合的抗体、 单链抗体、 表位结合片段， 例 如 Fab、 Fab′和 F(ab′ )2、 Fd、 Fvs、 单链 Fvs(scFv)、 单链抗体、 二硫连接的 Fvs(sdFv)、 包 含 VL 或者 VH 区的片段、 Fab 表达库制备的片段、 以及抗个体基因型 ( 抗 -Id) 抗体 ( 包括 例如 , 本文公开的抗 CD56 抗体抗 -Id 抗体 )。ScFv 分子在现有技术中是已知和公开的， 例 如参见美国专利号 5,892,019 中。本发明的免疫球蛋白或者抗体分子可以是任意类型 ( 例 如 IgG、 IgE、 IgM、 IgD、 IgA 和 IgY)， 任意种类 ( 例如 IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA1 和 IgA2) 或者任意亚种类的免疫球蛋白分子。
     抗体片段 （包括单链抗体） 可以包括单独的可变区， 或者与下述的整体或部分联 合： 绞链区、 CH1、 CH2 和 CH3 区。本发明也包括抗原结合片段 （其也包含任意可变区的组 合） ， 所述可变区带有绞链区、 CH1、 CH2 和 CH3 区。本发明的抗体或者其免疫特异性片段 可以来自任意动物起源 （包括鸟类和哺乳类） 。优选的， 所述抗体是人类、 鼠、 驴、 兔子、 山 羊、 豚鼠、 骆驼、 大羊驼、 马或者鸡抗体。在另一个实施方案中， 所述可变区在来源是可以是 condricthoid( 例如来自鲨鱼 )。如本文使用的，″人类的″抗体包括具有人类的免疫球 蛋白氨基酸序列的抗体 ； 同时包括人类的免疫球蛋白库中分离或者来自一种或多种人类免 疫球蛋白的动物转基因的抗体， 其不表达内源免疫球蛋白， 如下文描述， 例如参见美国专利 号 5,939,598， Kucherlapati 等。
     所述术语″特异性结合″通常意思是抗体通过它的抗原结合区与表位结合， 并且所述结合需要一些互补 （在所述抗原结合区和所述表位之间） 。根据这个定义， 抗体被称为 是″特异性结合″到表位， 当它通过它的抗原结合区结合到表位， 相对于它随机结合到不 相关的表位更加容易。本文使用的所述术语 “特异性” 是限定相应的亲和性， 通过亲和性一 定的抗体与一定的表位结合。例如， 抗体 “1” 可以被认为对给定的抗体具有较高的特异性 （相对于抗体 “2” ） ， 或者抗体 “1” 可以说成是与表位 “3” 的结合具有较高的特异性 （相对于 它相关的表位 “4” ） 。
     单克隆抗体可以采用多种现有技术中已知的技术制备， 包括使用杂交瘤、 重组细 胞和噬菌体展示技术或者其组合。例如单克隆抗体可以采用杂交瘤技术制备， 这种技术 在现有技术中是已知的， 例如参见 Harlow 等 , 抗体 :A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.(1988);Hammerling 等 ,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas Elsevier,N.Y.,563-681(1981)( 所述参考文献以其整体通过参 考方式并入本文 )。本文使用的所述术语″单克隆抗体″不限于通过杂交瘤技术制备的抗 体。 所述术语″单克隆抗体″是指其来自于单一克隆， 包括任意的真核的、 原核的或者噬菌 体克隆， 而不是指制备它的方法。 因此， 所述术语″单克隆抗体″不限于通过杂交瘤技术制 备的抗体。例如单克隆抗体可以采用 CD56 敲除老鼠制备， 以增加识别表位区。单克隆抗 体可以采用各种已知技术制备， 包括使用本文别处描述的杂交瘤和重组体和噬菌体展示技 术。
     识别特异性表位的抗体片段可以通过已知即使形成。例如 Fab 和 F(ab′ )2 片段 可以通过重组体的或者免疫球蛋白分子的酶水解切割制备， 所述酶例如木瓜蛋白酶 ( 制备 Fab 片段 ) 或者胃蛋白酶 ( 制备 F(ab′ )2 片段 )。F(ab′ )2 片段含有可变区、 轻链不变区 和重链 CH1 区。
     本领域技术人员也会理解， DNA 编码抗体或者抗体片段 ( 例如抗原结合位点 ) 可 以从抗体库中获得， 例如噬菌体展示库。尤其地， 这种噬菌体可以被利用来展示抗原结合 区 （其从全部的或者组合的抗体库 ( 例如 , 人类的或者鼠科 ) 中表达） 。表达与目标抗原 结合的抗原结合区的噬菌体可以被抗原选择或者识别， 例如使用标记抗原、 或者绑定或捕 获到固体表面或小珠上的抗原。在本发明中使用的噬菌体主要是丝状噬菌体， 包括 fd 和 M13 结合区， 其从噬菌体表达或者二硫化稳定的 Fv 抗体区表达 ； 所述噬菌体具有 Fab、 Fv OE DAB( 来自轻链或者重链的单独的 Fv 区 ) ； 所述二硫化稳定的 Fv 抗体区重组地融合到 噬菌体基因 III 或者基因 VIII 蛋白质。示例性的方法已经提出， 例如参见 EP 368684B 1; 美国专利号 5,969,108,Hoogenboom,H.R. 和 Chames,Immunol.Today 21:371(2000);Nagy 等 Nat.Med.8:801(2002);Huie 等 ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:2682(2001);Lui 等 ,J. Mol.Biol.315:1063(2002), 每篇都以参考的方式并入本文。几种出版物 ( 例如 Marks 等 ,Bio/Technology 10:779-783(1992)) 曾经描述通过链改组、 组合感染和活体内重组来 制备所述高亲和性人类抗体 , 所述活体内重组是构建巨大噬菌体库的策略。在另一个实 施方案中， 核糖体展示可以用来替代细菌噬菌体作为展示平台 ( 参见例如 Hanes 等 ,Nat. Biotechnol.18:1287(2000);Wilson 等 ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:3750(2001); 或 者 Irving 等 ,J.Immunol.Methods 248:31(2001))。在又一个实施方案中， 细胞表面库可 以 被 抗 体 筛 选 (Boder 等 ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:10701(2000);Daugherty 等 ,J. Immunol.Methods 243:211(2000))。这种过程为传统杂交瘤技术提供了选择， 以分离和后续的克隆单克隆抗体。
     用以制备所述抗体的噬菌体展示方法的其它实施例在下述的文献中公开 ： 包 括 Brinkman 等 ,J.Immunol.Methods 182:41-50(1995);Ames 等 ,J.Immunol.Methods 184:177-186(1995);Kettleborough 等 ,Eur.J.Immunol.24:952-958(1994);Persic 等 ,Gene 187:9-18(1997);Burton 等 ,Advances in Immunology 57:191-280(1994);PCT 申 请 号 PCT/GB91/01134;PCT 出 版 WO 90/02809;WO 91/10737;WO 92/01047;WO 92/18619;WO 93/11236;WO 95/15982;WO 95/20401; 以及美国专利号 5,698,426;5,223,4 09;5,403,484;5,580,717;5,427,908;5,750,753;5,821,047;5,571,698;5,427,908;5,51 6,637;5,780,225;5,658,727;5,733,743 和 5,969,108。
     用 以 制 备 单 链 Fvs 和 抗 体 的 技 术 的 实 施 例 在 下 述 文 献 中 描 述 ： 美国专利号 4,946,778 和 5,258,498;Huston 等 ,Methods in Enzymology 203:46-88(1991);Shu 等 ,PNAS 90:7995-7999(1993); 以 及 Skerra 等 ,Science240:1038-1040(1988)。 对 于 某些用途， 包括在活体内使用人类的抗体和在活体外检测分析， 优选使用嵌合的、 人源化 的、 或者人类的抗体。嵌合的抗体是分子， 在其内不同部分的抗体来自于不同的动物种 类， 例如具有来自鼠单克隆抗体的可变区和人类免疫球蛋白不变区的抗体。制备嵌合的 抗体的方法在现有技术中是已知的。参见例如 Morrison,Science 229:1202(1985);Oi 等 ,BioTechniques 4:214(1986);Gillies 等 ,J.Immunol.Methods125:191-202(1989); 美 国专利号 5,807,715;4,816,567; 以及 4,816397, 其整体以参考的方式并入本文。人源化 的抗体是来自非人类物种的抗体的抗体分子， 所述非人类物种的抗体与预期的抗原结合， 所述抗原具有一个或多个来自非人类物种的互补决定区 (CDR)、 和来自人类免疫球蛋白分 子的框架区。通常， 人类框架区的框架残基被相应的残基 （来自 CDR 供体抗体） 取代而改 变、 优选的改进抗原结合。这些框架替代可以用已知技术识别， 例如构建所述 CDR 和框架 残基的相互作用模型来识别对抗原结合重要的框架残基 ； 采用序列比较来识别在特定位点 的异常框架残基。( 参见例如 ,Queen 等 , 美国专利号 5,585,089;Riechmann 等 ,Nature 332:323(1988), 其整体以参考的方式并入本文 ) 抗体可以采用多种已知技术进行人源 化， 所述已知技术包括例如 CDR 移植 （CDR-grafting） (EP 239,400;PCT publicationWO 91/09967; 美 国 专 利 号 5,225,539;5,530,101; 和 5,585,089)， 修 饰 或 者 表 面 重 塑 (EP 592,106;EP 519,596;Padlan,Molecular Immunology28(4/5):489-498(1991);Studnicka 等 ,Protein Engineering 7(6):805-814(1994);Roguska. 等 ,PNAS 91:969-973(1994)) 和链改组 ( 美国专利号 5,565,332)。
     完整的人类抗体对于人类病人的治疗处理尤其期待。人类抗体可以通过已知 的多种方法制备， 例如不限制地包括上文描述的噬菌体展示方法 （其采用来自人类免疫 球蛋白序列的抗体库） 。也参见美国专利号 4,444,887 和 4,716,111; 以及 PCT 出版 WO 98/46645,WO 98/50433,WO98/24893,WO 98/16654,WO 96/34096,WO 96/33735, 和 WO 91/10741。人类的抗体也可以采用转基因鼠制备， 所述转基因鼠不能表达功能性内原免疫 球蛋白， 但是其可以表达人类免疫球蛋白基因。参见例如 ,Lonberg 和 Huszar， Int.Rev. Immunol.13:65-93(1995);WO 98/24893;WO 96/34096;WO 96/33735; 美国专利号 5,413,9 23;5,625,126;5,633,425;5,569,825;5,661,016;5,545,806; 和 5,814,318。
     单克隆抗体技术考虑到单克隆抗体形式的特异性细胞结合试剂。 在现有技术中尤其熟悉的是建立单克隆抗体的技术， 所述单克隆抗体通过具有目标抗原的免疫小鼠、 大鼠、 仓鼠或任何其他哺乳动物， 例如完整的靶细胞、 从靶细胞中分离的抗原、 全病毒、 减毒的全 病毒和病毒蛋白质 （例如病毒膜蛋白） 。也可以使用敏感的人类细胞。建立单克隆抗体的另 一种方法是利用 sFv( 单链可变区 ) 的噬菌体库， 特别是人类的 sFv( 参见例如 ,Griffiths 等 , 美国专利号 5,885,793;McCafferty 等 ,WO 92/01047;Liming 等 ,WO 99/06587.)。
     合适的细胞结合试剂的选择取决于被靶向的特定的细胞群， 但是通常优选单克隆 抗体和其表位结合片段 （如果可以得到合适的一种） 。
     方法和技术的其它指导
     本发明的实践将会采用 （除 非 另 有 说 明）的 技 术 ： 传 统 的 细 胞 生 物 技 术、 细 胞 培 养 技 术、 分 子 生 物 技 术、 转 基 因 生 物 技 术、 微 生 物 技 术、 重 组 DNA 技 术 和 免 疫 技 术， 这 些 都 是 现 有 技 术 的 范 围。 这 些 技 术 在 文 献 中 有 完 整 的 解 释， 参见例 如 Molecular Cloning A Laboratory Manual,2nd Ed.,Sambrook 等 ,ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press:(1989);Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Sambrook 等 ,ed.,Cold Springs Harbor Laboratory， New York(1992),DNA Cloning,D.N.Glover ed.,Volumes I and II(1985);Oligonucleotide Synthesis,M.J.Gait ed.,(1984);Mullis 等， 美 国 专 利 号 :4,683,195;Nucleic Acid Hybridization,B.D.Hames&S.J.Higgin s eds.(1984);Transcription And Translation,B.D.Hames & S.J.Higgins eds.(1984);Culture Of Animal Cells,R. I.Freshney,Alan R.Liss,Inc.,(1987);Immobilized Cells And Enzymes,IRL Press,(1986);B.Perbal,A Practical Guide To Molecular Cloning(1984);the treatise,Methods In Enzymology,Academic Press,Inc.,N.Y.;Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells,J.H.Miller and M.P.Calos eds.,Cold Spring Harbor Laborator y(1987);Methods In Enzymology,Vols.154and 155(Wu 等 eds.);Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology,Mayer 和 Walker,eds.,Academic Press,London(1987);Handbook Of Experimental Immunology,Volumes I-IV， D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.,(1986);Manipulatin g the Mouse Embryo,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N. Y.,(1986); 以及在 Ausubel 等 ,Current Protocols in Molecular Biolo gy,John Wiley and Sons,Baltimore,Maryland(1989) 中。
     抗 体 工 程 的 一 般 原 理 已 经 提 出， 参 见 Antibody Engineering, 第 二 版 ,C. A.K.Borrebaeck， Ed.,Oxford Univ.Press(1995)。蛋白质工程的一般原理已经提出， 参 见 Protein Engineering,A Practical Approach,Rickwood,D., 等 ,Eds.,IRL Press at Oxford Univ.Press,Oxford,Eng.(1995)。抗体和抗体 - 抗原结合的一般原理已经提出， 参见 :Nisonoff， A.,MolecularImmunology， 2nd ed.,Sinauer Associates,Sunderland,MA (1984);and Steward,M.W.,Antibodies,Their Structure and Function,Chapman and Hall,New York,NY(1984)。此外， 免疫学中现有技术中已知的标准方法没有特殊描述， 通 常遵循 ： Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,New York;Stites 等 (eds),Basic and Clinical Immunology(8th ed.),Appleton & Lange,Norwalk,CT(1994) and Mishell and Shiigi(eds),Selected Methods in Cellular Immunolo gy,W.H.Freeman and Co.,New York(1980)。
     标准参考书提出免疫学的一般原理， 包括 ： Current Protocols in Immunology， John Wiley & Sons,New York;Klein,J.,Immunology:The Science of Self-Nonself Discrimination,John Wiley & Sons,New York(1982);Kennett,R., 等 ,eds.,Monoclonal Antibodies,Hybridoma:A New Dimension in Biological Analyses,Plenum Press,New York(1980);Campbell,A.,“Monoclonal Antibodies Technology” in Burden,R., 等 ,eds.,Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology,Vol.13 ,Elsevere,Amsterdam(1984),Kuby Immunology 4th ed.Ed.Richard A.Goldsby,Thomas J.Kindt and Barbara A.Osborne,H.Freemand & Co.(2000);Roitt,I.,Brostoff ， J.and Male D.,Immunology 6th ed.London:Mosby(2001);Abbas A.,Abul,A. and Lichtman,A.,Cellular and Molecular Immunology Ed.5,Elsevier Health Sciences Division(2005);Kontermann and Dubel,Antibody Engineering,Springer Verlan(2001);Sambrook and Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Press(2001);Lewin,Genes VIII,Prentice Hall(2003);Harlow and Lane,Antibodies:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Press(1988);Dieffenbach and Dveksler,PCR Primer Cold Spring Harbor Press(2003)。 实施例 本发明下文描述的实施例将作为参考， 而不作为限制。
     将人类卵巢癌细胞株接种到老鼠， 并允许其在治疗前建立 ( 平均约 100mm3 的肿瘤 大小 )。缀合物剂量是基于 DM1 浓度描述。功效的报道是根据治疗组 vs. 对照组 (%T/C) 的肿瘤生长的百分数和细胞对数杀灭 (log cell kil， LCK)， 所述细胞对数杀灭是根据由于 处理引起的肿瘤倍增时间和肿瘤生长延迟来测定的。百分比 T/C 值小于或者等于 42%， 和 / 或 0.5 或更大的 LCK 值被认为是具有活性的 ; 百分比 T/C 值少于 10% 被认为是高活性的 (Bissery 等 ,Cancer Res,51:4845-4852(1991)。
     实施例 1. 在 OVCAR-3 人类卵巢癌异种移植模型的治疗中 IMGN901 的抗肿瘤活性
     在建立的卵巢癌皮下异种移植模型中， 所述 IMGN901 的抗肿瘤活性被评估。SCID 7 小鼠被接种 OVCAR-3 卵巢癌细胞 (1x10 细胞 / 动物 )， 皮下注射到右侧腹。当所述肿瘤达 3 到约 100mm 大小 ( 肿瘤接种后 24 日 ), 所述小鼠被随机分成三组 ( 每组 6 只动物 )。小鼠 以 6.5mg/kg 和 13mg/kg 分别处理， 通过静脉施用每周一次， 进行 3 周 用单一试剂 IMGN901， ( 第 24,31,39 天 )。对照组动物按照相同的日程安排接受 PBS 静脉注射。肿瘤生长通过每 周两次测量肿瘤大小进行监测。肿瘤大小按下述通式计算 : 长度 × 宽度 × 高度 ×1/2。
     图 1.IMGN901 当以 13mg/kg 的剂量时， 对抗 OVCAR-3 肿瘤在肿瘤生长抑制 (T/ C=21%) 方面是有活性的。 根据 NCI 标准， 所述 21% 的 T/C 值被认为是有活性的。 所述 6.5mg/ kg 剂量是无活性的。
     实施例 2. 在 COLO 720E 人类卵巢癌异种移植模型的 IMGN901 治疗中， IMGN901 剂 量 - 应答的抗肿瘤活性
     在建立的卵巢癌皮下异种移植模型中， 所述 IMGN901 的抗肿瘤活性被评估。SCID 7 小鼠被接种 COLO 720E 卵巢癌细胞 (1x10 细胞 / 动物 )， 皮下注射到右侧腹。( 所述 COLO
     720E 人类的卵巢透明细胞癌细胞株是从欧洲细胞库 (ECACC, 目录号 93072111) 获得 )。当 所述肿瘤达到约 100mm3 的大小 ( 在肿瘤细胞接种后的第 10 日 )， 所述小鼠被随机分成四组 ( 每组 6 只动物 )。小鼠用单一试剂 IMGN901， 以 6、 12 和 24mg/kg 分别处理， 通过静脉施用 每周一次， 进行 3 周 ( 第 10、 17 和 24 天 )。对照组动物按照相同的日程安排接受 PBS 静脉 注射。肿瘤生长通过每周两次测量肿瘤大小进行监测。肿瘤大小按下述通式计算 : 长度 × 宽度 × 高度 ×1/2。
     IMGN901 的剂量依赖活性在所述 COLO 720E 异种移植模型中观察到。IMGN901 以 24mg/kg 的剂量每 3 周 1 次， 对 COLO 720E 肿瘤具有高活性。所述肿瘤生长抑制值 (T/C) 是 0%， 其根据 NCI 标准是高活性的。在所述组的所有 6 只小鼠表现肿瘤消退 ： 6 只部分消退 (PR， 被定义为大于 50% 的减小， 相对于起始的肿瘤体积 ) 和 6 只完全消退 (CR), 其中 4 只 小鼠在研究末期时 （119 日） 仍然是没有肿瘤。IMGN901 以 12mg/kg 的剂量 ,3 周中的每周 时， 也是有活性的。所述肿瘤生长抑制值 (T/C) 是 18%， 其按照 NCI 标准被认为有活性。6 只小鼠的 4 只表现消退 ： 4 只部分消退和 2 只完全消退， 其中一只在研究末期仍然是没有肿 瘤。所述 6mg/kg(3 周的每周一次 ) 的剂量无活性。
     实施例 3.COLO 720E 人类卵巢癌异种移植模型治疗中， 用 IMGN901 和紫杉醇加卡 铂的组合治疗的抗肿瘤活性
     huN901-DM1 和紫杉醇加卡铂的组合的抗肿瘤活性在已建立的卵巢癌皮下异种移 植模型中评估。无胸腺裸小鼠被接种 COLO 720E 人类卵巢癌细胞 (1x107 细胞 / 动物 )， 皮 3 下注射到右侧腹。当肿瘤达到约 80mm 大小 ( 在肿瘤细胞接种后 10 日 )， 所述小鼠被随机 分成 6 组 （每组 6 只） 。小鼠用单一试剂 IMGN901， 13mg/kg 的剂量处理 3 周， 每周 1 次 ( 肿 瘤细胞接种后， 第 10、 17 和 24 天 ) 静脉施用。两个其它组的小鼠用化学治疗组合 （以两个 剂量水平的紫杉醇 / 卡铂） 方案处理 ： 高剂量组合的紫杉醇 (20mg/kg iv,3 周的每周 )/ 卡铂 (100mg/kg ip, 单一注射 ) 和低剂量组合的紫杉醇 (10mg/kg iv,3 周的每周 )/ 卡铂 (100mg/kg ip, 单一注射 )。所述其它组组合使用 IMGN901 和高剂量组合的或者低剂量组 合的紫杉醇 / 卡铂， 对每种单独的处理采用相同的剂量和施药方式。肿瘤生长通过每周两 次测量肿瘤大小进行监测。肿瘤大小按下述通式计算 : 长度 × 宽度 × 高度 ×1/2。
     图 2. 单一试剂 IMGN901 对抗 COLO 720E 异种移植模型具有活性， 其具有 32% 的 T/ C 值 , 这按照 NCI 标准被认为有活性的。六只小鼠中的两只表现部分肿瘤消退 ； 六只小鼠 中的一只完全消退。化学治疗处理也是有活性的 ； 高剂量的紫杉醇 / 卡铂是高活性的 （T/ C=4%） ， 其 3/6 小鼠部分消退， 2/6 小鼠完全消退 ； 低剂量的紫杉醇 / 卡铂导致 15% 的 T/C 值 （按照 NCI 标准是有活性的） ， 没有观察到肿瘤消退。IMGN901 与高剂量组的或低剂量组的的 紫杉醇 / 卡铂化学治疗的组合根据 NCI 标准是高活性的 ( 分别为 0% 和 1%T/C) ； 所有的小鼠 表现完全的肿瘤消退， 并直到研究的末期 （第 123 天） 仍然是无癌。无论是单一试剂 MGN901 或者单一化学治疗处理组中， 都没有无癌幸存者。
     实施例 4. 低剂量 IMGN901 联合 IMGN901 紫杉醇 / 卡铂的组合使用对 COLO 720E 人类卵巢癌异种移植模型的抗肿瘤活性 .
     减少剂量的 IMGN901 和紫杉醇加卡铂的组合的抗肿瘤活性在已建立的皮下 COLO 720E 异种移植模型中评估。当所述肿瘤达到约 100mm3 大小 ( 在肿瘤细胞接种后的 14 日 )， 所述小鼠基于肿瘤体积被随机分成含 6 只动物的小组。小鼠用单一试剂 IMGN901 以11.4mg/kg(qw x 3) 的剂量处理， 或者紫杉醇 / 卡铂的化学治疗组合， 其以高剂量 ( 紫杉醇 20mg/kg,qw x 3/ 卡铂 ,100mg/kg ip, 单一注射 ) 或低剂量 ( 紫杉醇 10mg/kg,qw x 3/ 卡 铂 ,100mg/kg ip, 单一注射 )。IMGN901 作为单一试剂的治疗在这项研究中是无活性的， 其 具有 62% 的 T/C。高剂量紫杉醇 / 卡铂是高活性的， 其具有 8% 的 T/C， 然而低剂量紫杉醇 / 卡铂是无活性的， 其导致 44% 的 T/C。IMGN901 在与高剂量紫杉醇 / 卡铂组合使用， 或者 与低剂量紫杉醇 / 卡铂组合使用时都被评估 ； 所述 IMGN901 以相同的剂量， 作为单一试剂 (11.4mg/kg, 无活性 ) 和几种低剂量水平 (8.5、 5.7 和 2.8mg/kg) 按照相同的日程安排被测 试。
     图 3.IMGN901 在所有的剂量水平和高剂量紫杉醇 / 卡铂的组合是高活性的。与在 单一化学治疗组中 (1/4 的动物 ) 只有一个完全肿瘤消退， 相反， 在 IMGN901 （以 11.4,8.5 和 5.7mg/kg 的剂量水平） 联合使用的组合小组中所有动物 （6/6） 完全消退 ； 最低剂量 (2.8mg/ kg) 的联合小组中 3/6 的小鼠完全消退。
     表 1.IMGN901 和低剂量紫杉醇 / 卡铂作为单一治疗 （单治疗） 时， 都没有活性。 尽管 如此， 当 IMGN901 在 11.4、 8.5 和 5.7mg/kg 的剂量水平， 组合使用都是高活性的。尽管在单 治疗组中， 没有部分消退 (PR) 或者没有完全消退 (CR)， 剂量依赖的肿瘤消退在这些联合使 用的组合小组中有观察到。 高剂量组合 (IMGN901 以 11.4mg/kg 的剂量 ) 导致所有动物完全 消退 (6/6)。 所述 8.5mg/kg 剂量的 IMGN901 的组合使用导致部分动物消退 （5/6） 和 （3/6） 的 小鼠完全消退。所述 IMGN901 在 5.7mg/kg 的组合 , 其 IMGN901 从无活性最大剂量减少 50% 是高活性的， 其具有 4/5 的完全消退和 3% 动物部分消退。最低剂量组合 (IMGN9012.8mg/ kg) 是无活性的。
     表 1:
     附带条件
     容易理解， 详细说明部分 （而不是是概述和摘要部分） 是用于解释权利要求。概述 和摘要部分可以提供发明人考虑到的一个或多个示例性的本发明的实施方案， 但不是所有 的实施方案都受发明人重视， 因此其限制本发明和附加的权利要求。本发明典型实施都可 认为是发明人的设想， 因此， 不是为了限制本发明并以任何方式追加索赔。
     以上所描述的特定实施方案将充分揭示发明的一般性质， 其他人可以运用在现有 技术的知识， 对这些具体的实施方案进行容易地修改和 / 或适应各种应用， 没有不适当的 实验， 没有脱离本发明的一般概念。 因此， 这种适应和修改的目的是在此处教学和指导的基 础上， 等同于揭示实施方案的含义和范围内。这就可以理解此处的用语或术语的目的是用 于描述和不受限制， 这样由一个受过最密切相关学科教育和指导过的普通技能的人就可以 解释本规范的术语或用语。
     本发明的宽度和范围不受上文描述的任意示例性实施方案所限制。