酶法解离紫菜营养细胞育苗方法.pdf

内容：本发明属于经济海藻育苗技术。
    在已有的技术中，公知的紫菜人工育苗方法是，果孢子采集、丝状体培育和壳孢子采苗三个步骤〔註1〕，这一采苗方法，仅丝状体培育就需要5～6个月，需要专用的育苗室和培养设备，丝状体培养中时有病害发生，壳孢子释放易受环境条件的制约，育苗技术难度大，不易掌握，成本高。高产的坛紫菜在北方壳孢子采苗困难而不能推广养殖。

    为了克服已有的紫菜有性生殖育苗技术上的缺点，提高紫菜育苗技术和紫菜养殖的经济效益，根据酶法可以解离紫菜叶状体营养细胞再生植株的原理〔註2〕，设计了紫菜无性繁殖的营养细胞育苗方法。

    本发明的构思是，从食藻性海螺的软体部分制备含有多种消化酶的复合酶，并加入葡萄糖或蔗糖配成营养细胞解离液，将冷藏保存在-20℃的紫菜叶状体，剪碎放入解离液中，在25～30℃下使营养细胞解离。解离后，以清洁海水洗涤单细胞以清除多余的酶和糖，离心收集单细胞。将制备的营养细胞在育苗设备中加营养海水培养10～15天，然后置入采苗器具进行采苗1～2天，然后移至海上养殖。

    本发明的最佳实施例是：

    1、紫菜营养细胞解离液的制备：

    采集新鲜的粒嵘螺在海水中饥饿囚养2～3天，洗涤后将海螺壳破碎，加海螺重量2倍的蒸馏水搅拌提取10分钟，用纱布过滤除去渣滓，过滤液离心（10，000转/分）30分钟。上清液加入盐酸调pH沉淀去杂蛋白，离心（10000转/分）30分钟。上清液加入1.8克分子的葡萄糖配成解离液。（为了长期保持酶的活性，可按文献〔註3〕中所提供地方法制成酶干粉保存。）

    2、营养细胞的制备：

    置于-20℃的冷冰设备中保存的条斑紫菜叶状体在常温海水中培养2天，切成小块，放置于细胞解离液中25℃保温3小时，然后用300目筛绢过滤，滤液在10000转/分下离心3分钟。沉淀下来的细胞用海水洗涤三次，每次洗涤后，用同样离心方法去除洗涤液，收集单细胞。

    3、单细胞培养及采苗：

    将解离制备的单细胞置入育苗设备中，加入加营养盐海水含氮8ppm，磷1ppm，以及二价铁离子1ppm，光照培养（光强2000Lux左右）。温度16～22℃，培养14天后，便有大量可供采苗的孢子放散，放入采苗器具，充气采苗36小时后，移至海上养殖。

    〔註1〕：中国科学院海洋研究所藻类实验生态组、藻类分类组，1978，条斑紫菜的人工养殖，科学出版社。

    〔註2〕：唐延林，1982，紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养，山东海洋学院学报，第12卷第4期，37～50。

    〔註3〕：刘万顺，唐延林，刘学武，方宗熙，1983，海螺酶制备和性质的研究，第11届国际海藻学术讨论会论文集，319～320。