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1、(10)申请公布号 CN 102899303 A (43)申请公布日 2013.01.30 CN 102899303 A *CN102899303A* (21)申请号 201210378193.5 (22)申请日 2012.10.08 C12N 9/50(2006.01) (71)申请人 华南理工大学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381 号 (72)发明人 李冰 李琳 余旭聪 付全意 陈玲 李晓玺 苏健裕 徐振波 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 宫爱鹏 (54) 发明名称 一种木瓜蛋白酶溶液的微波真空浓缩方法 (57) 摘要 本发明。
2、公开了一种木瓜蛋白酶溶液的微波真 空浓缩方法， 包括以下步骤 ： 1） 调节木瓜蛋白酶 溶液的 pH 值在 6.5 7.5 之间 ； 2） 加入 EDTA 二 钠盐作为保护剂， 使木瓜蛋白酶溶液中含 EDTA 二 钠盐的浓度为 1 20mmol/L ； 3） 抽真空维持浓缩 腔体内的真空度高于 85kPa， 再将木瓜蛋白酶溶 液抽入腔体中， 启动搅拌电机， 使用 1 4kW 的微 波加热， 即得到木瓜蛋白酶浓缩液。 本发明方法的 浓缩过程温度低， 浓缩速度快， 得到的木瓜蛋白酶 浓缩液酶活回收率高。同时， 本发明的方法， 设备 不易结垢， 能耗低。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 。
3、说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种木瓜蛋白酶溶液的微波真空浓缩方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 1） 调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值在 6.5 7.5 之间 ； 2） 加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， 使木瓜蛋白酶溶液中含 EDTA 二钠盐的浓度为 1 20mmol/L ； 3） 抽真空维持浓缩腔体内的真空度高于 85kPa， 再将木瓜蛋白酶溶液抽入腔体中， 启动 搅拌电机， 使用 1 4kw 的微波加热， 即得到木瓜蛋白酶浓缩液。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于，。
4、 步骤 1） 所述木瓜蛋白酶溶液使用氢氧化 钠溶液和 / 或盐酸调节 pH 值。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 步骤 3） 所述搅拌电机转速为 50 500 转 / 分钟。 4. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 步骤 3） 所述微波加热时间为 1550min。 权 利 要 求 书 CN 102899303 A 2 1/3 页 3 一种木瓜蛋白酶溶液的微波真空浓缩方法 技术领域 0001 本发明涉及一种木瓜蛋白酶溶液的浓缩方法， 特别涉及一种微波真空浓缩木瓜蛋 白酶溶液的方法。 背景技术 0002 木瓜蛋白酶是一种大量存在于未成熟番木瓜的汁液中的巯基蛋白酶， 。
5、具有一定的 热稳定性， 在90仍有一定的活性， 在工业上应用十分广泛。 木瓜蛋白酶在精制过程中需经 过浓缩工艺。 0003 由于酶是一种具有高度催化活性的特殊蛋白质， 在浓缩操作中， 必须严格防止酶 的变性失活， 以最大限度地提高产品收率。目前， 酶液的浓缩方法主要有试剂浓缩、 减压浓 缩法和超滤浓缩法。试剂浓缩工艺可用聚乙二醇吸收酶液中的水分， 该法简便、 效率高， 但 试剂价格较贵， 作为工业化生产因成本问题则不予考虑。而减压蒸发浓缩和超滤浓缩各有 利弊， 皆可用于工业化生产。超滤浓缩法是在常温下的浓缩过程， 在加压条件下， 将浓缩液 通过一层只允许水分子等小分子选择性透过的微孔超滤膜， 。
6、而酶大分子被滞留， 从而达到 酶液浓缩的目的。 但在浓缩过程中存在膜污染， 浓差极化， 膜使用寿命不长， 成本高等问题。 减压蒸发浓缩法则采用减压装置使料液的浓缩过程在一定的真空度和温度下进行， 通过抽 真空的方法降低水的沸点， 在较低温度条件下实现溶剂的快速蒸发， 适用于酶溶液等热敏 性物质的浓缩过程。 0004 减压浓缩工艺一般是以热水 / 蒸汽作为加热介质， 为浓缩物料提供热源， 而整体 热效率不高， 能耗大成为阻碍其进一步推广应用的主要原因之一。 发明内容 0005 本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷， 提供一种木瓜蛋白酶溶液的微波真 空浓缩方法。 0006 本发明所采取的技术方案。
7、如下 ： 0007 一种木瓜蛋白酶溶液的微波真空浓缩方法， 包括以下步骤 ： 0008 1） 调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值在 6.5 7.5 之间 ； 0009 2） 加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， 使木瓜蛋白酶溶液中含 EDTA 二钠盐的浓度为 1 20mmol/L ； 0010 3） 抽真空维持浓缩腔体内的真空度高于 85kPa， 再将木瓜蛋白酶溶液抽入腔体中， 启动搅拌电机， 使用 1 4kw 的微波加热， 即得到木瓜蛋白酶浓缩液。在浓缩后期可适当降 低微波功率。 0011 优选地， 步骤 1） 所述木瓜蛋白酶溶液使用氢氧化钠溶液和 / 或盐酸调节 pH 值。 0012 优选地， 。
8、步骤 3） 微波加热过程中， 为使物料受热均匀， 搅拌电机转速为 50 500 转 / 分钟。 0013 优选地， 步骤 3） 所述微波加热时间为 1550min。 说 明 书 CN 102899303 A 3 2/3 页 4 0014 本发明与现有技术相比， 具有如下优点 ： 0015 （1） 本发明用微波加热取代传统的热水 / 蒸汽加热方式， 具有加热速率快、 加热均 匀、 节能高效、 热惯性小、 易于控制、 安全无害且绿色环保。 0016 （2） 本发明浓缩过程温度低， 浓缩速度快， 制得的木瓜蛋白酶浓缩液具有较高的酶 活回收率， 达到 95%。同时， 本发明的方法， 设备不易结垢， 能。
9、耗低。 具体实施方式 0017 实施例 1 0018 使用广州科威微波能有限公司生产的微波真空浓缩设备进行浓缩， 使用氢氧化钠 溶液和盐酸调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值至 7.0， 并加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， EDTA 二钠 盐浓度为 10mmol/L。开启真空泵， 待浓缩腔体内的真空度达到 85kPa 后， 打开进料阀门， 抽 入 2L 木瓜蛋白酶溶液 （初始浓度为 0.2mg/mL） 。关闭进料阀， 启动搅拌电机， 转速为 300 转 / 分钟。打开微波开关， 开启四个磁控管， 设置每个磁控管输出功率为 800w， 总输出功率为 3.2kw。加热 25 分钟后， 停止微波输出， 。
10、关闭搅拌电机， 放真空， 放出物料， 收集到木瓜蛋白 酶浓缩液体积约 400mL。将所得到的酶浓缩液加水重新定容至 2L， 以酪蛋白作为底物测定 该稀释液与未经浓缩处理的木瓜蛋白酶溶液活性， 两者之比定义为酶活回收率。经测定所 得酶浓缩液酶活回收率达到 95%。 0019 实施例 2 0020 使用广州科威微波能有限公司生产的微波真空浓缩设备进行浓缩， 使用氢氧化钠 溶液和盐酸调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值至 7.0， 并加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， EDTA 二钠 盐浓度为 10mmol/L。开启真空泵， 待浓缩腔体内的真空度达到 85kPa 后， 打开进料阀门， 抽 入 2L 木瓜蛋。
11、白酶溶液 （初始浓度为 0.2mg/mL） 。关闭进料阀， 启动搅拌电机， 转速为 300 转 / 分钟。打开微波开关， 开启四个磁控管， 设置每个磁控管输出功率为 600w， 总输出功率为 2.4kw。加热 30 分钟后， 停止微波输出， 关闭搅拌电机， 放真空， 放出物料， 收集到木瓜蛋白 酶浓缩液体积约 600mL， 酶活回收率达到 95%。 0021 实施例 3 0022 使用广州科威微波能有限公司生产的微波真空浓缩设备进行浓缩， 使用氢氧化钠 溶液和盐酸调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值至 6.5， 并加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， EDTA 二钠 盐浓度为 20mmol/L。开启真。
12、空泵， 待浓缩腔体内的真空度达到 85kPa 后， 打开进料阀门， 抽 入 2L 木瓜蛋白酶溶液 （初始浓度为 0.2mg/mL） 。关闭进料阀， 启动搅拌电机， 转速为 500 转 / 分钟。打开微波开关， 开启四个磁控管， 设置每个磁控管输出功率为 250w， 总输出功率为 1.0kw。加热 50 分钟后， 停止微波输出， 关闭搅拌电机， 放真空， 放出物料， 收集到木瓜蛋白 酶浓缩液体积约 600mL， 酶活回收率达到 95%。 0023 实施例 4 0024 使用广州科威微波能有限公司生产的微波真空浓缩设备进行浓缩， 使用氢氧化钠 溶液和盐酸调节木瓜蛋白酶溶液的 pH 值至 7.5， 。
13、并加入 EDTA 二钠盐作为保护剂， EDTA 二钠 盐浓度为 1mmol/L。开启真空泵， 待浓缩腔体内的真空度达到 85kPa 后， 打开进料阀门， 抽 入 2L 木瓜蛋白酶溶液 （初始浓度为 0.2mg/mL） 。关闭进料阀， 启动搅拌电机， 转速为 50 转 / 分钟。打开微波开关， 开启四个磁控管， 设置每个磁控管输出功率为 1000w， 总输出功率为 说 明 书 CN 102899303 A 4 3/3 页 5 4.0kw。加热 15 分钟后， 停止微波输出， 关闭搅拌电机， 放真空， 放出物料， 收集到木瓜蛋白 酶浓缩液体积约 450mL， 酶活回收率达到 95%。 说 明 书 CN 102899303 A 5 。