免疫感染簇病毒感 染的治疗策略 本发明总的来说涉及生物化学和医学领域，尤其是，本发明涉及治疗免疫感染簇病毒感染的治疗策略。
在全身性风湿病(SRDs)中，疾病的表现具有几个由免疫感染簇病毒(ICVs)引起的感染所共有的特征。ICVs的例子有：人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)、单纯性疱疹病毒1型(HSV-1)和其它免疫感染的腺病毒、人嗜淋巴细胞逆转录病毒(human lymphotropic retro-viruses)(例如HTLV-1)、风疹病毒、巨细胞病毒(CMV)和Epstein-Barr病毒(EBV)。共有的免疫异常包括淋巴因子调节障碍、多克隆B-细胞激活、自身抗体的产生、无反应性、对特异性抗原应答的减弱、以及T淋巴细胞CD4+对CD8+比率的改变。共有的临床相似性包括：亚急性、症状加重和减轻的病程；炎症；肌骨骼病；以及淋巴结病。
阐明SRDs病毒病因学的努力到目前为止还未产生有说服力的结果[R.Fox“Epstein-Barr Virus and Human Autoimmune Diseases：Possibilities and Pitfalls”J.Virol.Methods 21，19-27(1988)]。有关SRD抗体和病毒之间交叉反应所积累的数据表明患有单一疾病的病人血清可与不同科的病毒反应[Fox，文献同上；A.M.Krieg et al.“Expression of an Endogenous Retroviral Tran-script is Associated with Murine Lupus”Arthritis Rheum.32，322-329(1989)]。两个例子其一是全身性红斑狼疮(SLE)，由高效价的抗U1、U2和U4至U6小核核糖核蛋白(snRNP)颗粒的自身抗体而被鉴定[M.R.Lerner et al.“Antibodies to Small NuclearRNAs Complexed with Proteins are Produced by Patients withSystemic Lupus Erythematosus”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76，5494-5499(1979)；E.H.Schumacher“Primer on the RheumaticDiseases”(Arthritis Found.，Atlanta)，9th Ed.(1988)]，其二是硬皮病，其中40-50％的病人有抗着丝粒地抗体，另外有25-30％的病人有抗Scl-70(硬皮病70-kDa抗原)/拓扑异构酶I的抗体[Schumacher，文献同上]。已发现SLE血清中的抗体可与逆转录病毒人嗜T淋巴细胞病毒I型和鼠白血病病毒，以及DNA病毒EBV和CMV交叉反应[A.Kurata et al.“Production of a Monoclonal Anti-body to a Membrane Antigen of Human T-cell Leukaemia Virus(HTLV1/ATLV)-infected Cell Lines from a Systemic LupusErythematosus(SLE)Patient：Serological Analyses forHTLV1 Infections in SLE Patients”Clin.Exp.Immunol.62，65-74(1985)； M.Rucheton et al.“Presence of CirculatingAntibodies Against Gag-Gene MuLV Proteins in Patients withAutoimmune Connective Tissue Disorders”Virology 144，468-480(1985)；T.Okamoto et al.“Evidence in Patients withSystemic Lupus Erythematosus of the Presence of AntibodiesAgainst RNA-Dependent DNA Polymerase of Baboon EndogenousVirus”Clin.Exp.Immunol.54，747-755(1983)]。硬皮病和SLE血清在体外都能抑制同一腺病毒株的复制，而且抗一种病毒(如EBV)的抗体会出现在几种疾病中，包括SLE，斯耶格伦综合征(SjogrenSyndrome)和类风湿性关节炎[R.I.Fox，et al.“Potential Roleof Epstein-Barr Virus in Sjogren′s Syndrome”Rheum.Dis.Clin.North Am.13，275-292(1987)；Fox，文献同上，G.J.Pruijin“Inhibition of Adenovirus DNA Replication in vitro byAutoimmune Sera”Eur.J.Biochem.154，363-370(1986)]。
建立病毒间关系的最新方法涉及主要核抗原和病毒蛋白质之间氨基酸序列同源性的研究。此方法的依据是细菌的/自身免疫范例，据信其中的分子拟态可产生损伤细胞和组织的抗自身抗体[M.B.Oldstone et al.“Concepts in Viral Pathogenesis”(Springer，N.Y.)Vol.2，195-202(1984)]。一个例子是鉴定出克雷白氏菌(Klebsiella)固氮酶还原酶和HLA B27.1之间共同的抗原决定簇，它使类风湿脊椎炎的风险增大[A.Calin et al.“Genetic Differ-ences Between B27 Positive Patients with Ankylosing Spon-dylitis and B27 Positive Healthy Controls”Arthritis Rheum.26，1460-1464(1983)；P.L.Schcuimmbeck et al.“Autoantibod-ies to HLA B27 in the Sera of HLA B27 Patients with Anky-losing spondylitis and Reiter′s Syndrome”J.Exp.Med.166，173-181 1987；P.J.Bjorkman et al.“The Foreign AntigenBinding Site and T Cell Recognition Regions of Class IHistocompatibility Antigens”Nature 329，512-518(1987)；C.Ewing et al.“Antibody Activity in Ankylosing SpondylitiesSera to Two Sites on HLA B27.1 at the MHC Groove Region(Within Sequence 65-85)，and to a Klebsiella PneumoniaeNitrogenase Reductase Peptide(Within Sequence 181-199)”J.Exp.Med.171，1635-1647(1990)]。最近已报道了两个主要核抗原之间的病毒同源性，它们是：Scl-70/拓扑异构酶I[G.G.Maulet al.“Determination of an Epitope of the Diffuse System-ic Sclerosis Marker Antigen DNA Topoisomerase I：SequenceSimilarity with Retroviral p30gag Protein Suggests a Pos-sible Cause for Autoimmunity in Systemic Sclerosis”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86，8492-8496(1989)]，和70-Kda抗原，它是U1 RNP颗粒的组分[C.C.Query et al.“A Common RNA Recogni-tion Motif Identified within a Defined U1 RNA Binding Domainof the 70K U1 snRNP Protein”Cell 51，211-220(1987)；H.H.Guldner et al.“Human Anti-P68 Autoantibodies Recognize aCommon Epitope of U1 RNA Containing Small Nuclear Ribonu-cleoprotein and Influenza B Virus”J.Exp.Med.171，819-829(1990)]。有趣的是由不同研究者鉴定出的79-Kda蛋白质的两个同源性每种与不同的病毒相关：即C型逆转录病毒[Query et al.，文献同上]和乙型流感病毒[Guldner et al.，文献同上]。
AIDS(获得性免疫缺陷综合症)由HIV-1同其它免疫感染性病毒，包括HSV-1、CMV和EBV明显的协同作用引起[J.M.Gimble et al.“Epitope Mapping with a Recombinant Human 68-Kda(U1)Ribonucleoprotein Antigen Reveals Heterogeneous Autoanti-body Profiles in Human Autoimmune Sera”J.Immunol.141，469-475(1988)；J.Kamine et al.“Sp1-Dependent Activation ofa Synthetic Promoter by Human Immunodeficiency Virus Type1 Tat Protein”Proc.Natl.Acad Sci.USA 88，8510-8514(1991)；M.A.Albrecht et al.“The Herpes Simplex Virus Immediate-Early Protein，ICP4，Is Required to Potentiate Replicationof Human Immunodeficiency Virus in CD4+Lymphocytes”J.Virol.63，1861-1868(1989)]。所有四种病毒的主要结构和调节蛋白质具有与人类疾病混合连接组织病(mixed connecive tissue-disease，MCTD)的自身抗体反应的核因子所共有的序列[A.Douvaset al.“Multiple Overlapping Homologies Between Two Rheu-matoid Antigens and Immunosuppressive Viruses”Porc.Natl.Acad.Sci.USA 88，6328-6332(1991)]。这些核因子的其中一个是U1 snRNP，它属于可剪接前体mRNA的那套小的核糖核蛋白复合物(也包括U2和U4-6 snRNP)[P.Bringmann et al.“Purificationof the Individual snRNPs U1，U2，U5 and U4/U6 from HeLaCells and Characterization of their Protein Constituents”EMBO J.5，3509-3516(1986)；S.M.Berget et al.“U1，U2，and U4/U6 Small Nuclear Ribonucleoproteins are Requiredfor in Vitro Splicing but not Polyadenylation”Cell 46，691-696(1986)]。在U1 snRNP中，与众不同的RNA核心与四种多肽相联，它们包括70K，在MCTD中具抗原性[R.Reuter et al.“Immu-nization of Mice with Purified U1 Small Nuclear Ribonucleo-protein(RNP)Induces a Pattern of Antibody SpecificitiesCharacteristic of the Anti-Sm and Anti-RNP Autoimmune Res-ponse of Patients with Lupus Erythematosus，as Measured byMonoclonal Antibodies”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83，8689-8693(1986)]。尽管U1 RNA自身的抗原性微弱，但它与该多肽结合可使之成为强有力的免疫沉淀复合物[A.S.Douvas et al.“Isola-tion and Characterization of Nuclear RibonucleoproteinComplexes Using Human Anti-Nuclear Ribonucleoprotein Ant-ibodies”J.Biol.Chem.254，3608-3616(1979)]。
70K蛋白质是复合物中与免疫感染性病毒有广泛同源性的唯一蛋白质，它与HIV-1的包膜序列共有六个、与HSV-1共有八个确切的≥5个氨基酸的同源序列[Douvas et al.，文献同上(1991)，(此处引入作为参考)]。
通过蛋白水解的裂解作用可从gp160前体得到HIV-1包膜糖蛋白复合物gp120/41[J.M.McClune et al.“Endoproteolytic Cleav-age of gp160 is Required for the Activation of Human Immu-nodeficiency Virus”Cell 53，55-67(1988)]。表面部分gp120具有五个结构区域[S.Modrow et al.“Computer-Assisted Analy-sis of Envelope Protein Sequences of Seven Human Immunode-ficiency Virus Isolates：Prediction of Antigenic Epitopesin Conserved and Variable Regions”J.Virol.61，570-578(1987)]。病毒吸附到CD4+T淋巴细胞所凭借的V4区域在动物中不是强免疫原，由杂交瘤技术产生的抗体缺乏能有效对抗病毒与T细胞结合的亲合力[J.A.Habeshaw et al.“AIDS Pathogenesis：HIVEnvelope and its Interaction with Cell Proteins”Immunol.Today 11，418-425(1991)]。与此相反，V3环(V3 loop)是强免疫原[Laman et al.，文献同上；P.A.Broliden et al.“Identifica-tion of Human Neutralization-Inducing Regions of the HumanImmunodeficiency Virus Type 1 Envelope Glycoprotenins”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89，461-465(1992)]。它在病毒诱导产生细胞培养试验中的抑制(中和)病毒的抗体时占主导地位，并且是开发免疫保护性疫苗努力的焦点[J.Goudsmit et al.“Human Immuno-deficiency Virus Type 1 Neutralization Epitope With Conserv-ed Architecture Elicits Early Type-Specific Antibodies inExperimentally Infected Chimpanzees”Proc.Natl.Acad.Sci.USA85，4478-4482(1988)；M.Girard et al.“Immunization ofChimpanzees Confers Protection Against Challenge withHuman Immunodeficiency Virus”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88，542-546(1991)；S.D.Putney et al.“HTLV-III/LAV-Neutrali-zing Antibodies to an E.coli-Produced Fragment of the VirusEnvelope”Science 234，1392-1395(1986)]。然而，虽然有在体外中和的抗-V3抗体，AIDS受害者病死的原因还不完全清楚，但可能包括抗体效价的不足[M.Robert-Guroff et al.“HTLV-III-Neu-tralizing Antibodies in Patients with AIDS and AIDS-Relat-ed Complex”Nature 316，72-74(1985)。
在被感染的个体中，多种病毒相互作用可产生免疫异常，并在SRDs中产生与自身抗体交叉反应的抗原决定簇[Douvas et al.，文献同上(1991)]。因此根据与这些同源性的氨基酸序列反应的自身抗体，开发新的治疗方法以治疗免疫感染簇病毒的感染是有利的。
本发明第一方面提供了治疗人免疫感染簇病毒感染的方法，包括给受所说病毒感染的病人施用从至少一个具有一种抗体的个体中分离到的血清或血浆，该种抗体的特征为受全身性风湿病侵袭的病人产生的自身抗体。
本发明另一方面提供了治疗人免疫感染簇病毒感染的方法，包括使用至少一个直接抗与受全身性风湿病侵袭的病人产生的自身抗体相同或相似的抗原决定簇的单克隆抗体或其片段。
本发明另一方面提供了治疗人免疫感染簇病毒感染的方法，包括给有此需要的病人施用U1 RNA或其片段。
本发明另一方面提供了治疗人免疫感染簇病毒感染的方法，包括给有此需要的病人施用RNA剪接抑制剂。
本发明又一方面提供了治疗人免疫感染簇病毒感染的方法，包括联合施用前述任一种治疗剂。
图的简要说明
图1是标明与U1 snRNP 70K同源性的HIV-1表面蛋白质复合物gp120/41的计算机辅助模型。
图2所示为与70K和U1共有结合序列的抗原决定簇区域相关的U1snRNP 70K和gp120/41之间氨基酸序列的同源性。
图3是gp120的V3环和70K的免疫学比较。
图4A和B所示为通过ELISA实验分析没有受HIV-1感染的血清与gp120/41抗原之间的交叉反应，将它与受HIV感染的血清相比。
图5所示为HIV-1自身免疫和对照血清对U1 snRNP 70K的West-ern印迹反应。
图6所示为抗-RNP和对照血清对受HSV-1感染细胞的ELISA反应。
图7A和B所示为抗-着丝粒、抗-Scl-70、抗-RNP和正常血清对合成肽类的ELISA反应。
图8A和B表示U1 RNA和茎-环I的模型。
图9表示gp160和gp120/41与U1 snRNA转录物的结合。
图10通过Western印迹表明在带有高效价抗-RNP抗体、受HIV-1感染的非AIDS病人中HIV抗体的发展。
本发明的详细描述
SRDs病人血清的用途
免疫感染簇病毒含有特异性的序列结构，被认为是对病毒感染性和因此在抗-病毒防护中很重要的抗原决定簇。另外，某些同时含有与前述ICV抗原决定簇相同或相似抗原决定簇的正常人蛋白质是强自身抗体的靶子。在受已知为全身性风湿病或SRDs的一类自身免疫综合症中任一种侵扰的病人中，存在高效价的这些自身抗体。这些自身免疫抗体与病毒抗原决定簇交叉反应。
本申请中首先关心的自身免疫病归为全身性风湿病(SRDs)，并列于表I。除了这些主要的疾病外，还有许多相关疾病也列于表I。通过主要与存在于细胞核内的分子反应的自身抗体的产生来鉴别SRDs，因此靶分子总称为核抗原，并有几种特异的类型(表I)。 尽管这些抗体都有其特定的表示方法，也总称为抗-核抗体。重要的是应注意每种核抗原含有一个或多个多肽链，也包括核酸，并有多个抗原决定簇。
列于表I的核蛋白质抗原是不对称的，带有集中于不同区域的高度亲水的序列，这些区域通常不对称地位于蛋白质的NH2末端或者COOH末端，在相对的末端带有非极性序列。亲水区域有三种类型，称为酸性/碱性交替型、纯酸性和纯碱性型。酸性/碱性交替型序列的特征为酸性氨基酸残基-天冬氨酸和/或谷氨酸(符号分别为D和E)，与碱性残基-精氨酸和/或赖氨酸(符号分别为R和K)相互交替。这种酸性/碱性交替序列的例子(不限于这些)是：RDRDRDR[SEQ ID NO.(序列识别编号)：1]，RERERERERERE[SEQ ID NO：2]及其变异如RREERREE...[SEQ ID NO：3]，RRERRE[SEQ ID NO：4]等等，和KEKEKEK[SEQ ID NO：5]序列。纯酸性序列的例子(不限于这些)是EEEEEE[SEQ ID NO：6]，EDDEEDEDE[SEQ ID NO：7]和DDDDDD[SEQ ID NO：8]序列。纯碱性序列的例子(不限于这些)是RRRRRR[SEQ ID NO：9]，RKRKRKK[SEQ ID NO：10]，和KKKKKKK[SEQ ID NO：11]序列。
除了如以上例子所示的可识别的高度亲水性或者具有规则的酸性残基或碱性残基交替模式外，本申请中所描述的与抗体反应的序列也存在称为“基元(motif)”的模式。基元是具有可辨别特征的序列(例如，谷氨酸和精氨酸的组合)，此模式是可辨认的，以相似，但不必相同的形式出现在其它分子中，或同一分子的其它部位中。序列RDRDRDR[SEQ ID NO：1]即是一例，它以不同的长度出现于70K的三个位置上，也以类似形式(ERDRDRD)[SEQ ID NO：12]出现于HIV-1的gp41中(见表II)。另一例子是RERRR[SEQ ID NO：13]基元，它在70K中也以RRERE[SEQ ID NO.：14]和EREEER[SEQ IDNO.：15]出现(Query et al.，文献同上)。在着丝粒蛋白质CENP-B的酸性区域也可见到另外的例子(见表III)，包括EDDEE[SEQ IDNO.：16]基元，在W.C.Earnshaw等所述的相同蛋白质的序列中也以DDDEED[SEQ ID NO.：17]，DEEEDDE[SEQ ID NO.：18]，EDEDDD[SEQ ID NO.：19]，和其它形式出现[W.C.Earnshaw et al.“Molecular cloning of cDNA for CENP-B，the major humancentromere autoantigen.”J.Cell.Biol.104：817-829(1987)])。这些基元的重要性在于它们为免疫簇病毒和自身抗原所共有(表II和III)，并且是SRDs中出现的自身抗体的抗原决定簇。
已知免疫感染簇病毒在感染免疫系统中是协同作用的。已鉴定出在病毒和核抗原中都存在的大量亲水区域。表I1(引自A.Douvaset al.[Douvas et al.，文献同上(1991)])描述了70K核抗原和HIV-1的gp120/41之间精确的同源性的存在以及70K和协同病毒HSV-1、CMV和EBV之间相似性的存在。
特别注意的是70K氨基酸序列和相应于HSV-1和CMV的立即早期(I.E.)和早期功能的氨基酸序列之间的一些同源性。据信这些功能不仅协同作用，对于激活HIV-1中的调节功能，如那些由长末端重复(LTR)编码的功能来说也是必需的[J.M.Gimble et al.“Activa-tion of the Human Immunodeficiency Virus Long TerminalRepeat by Herpes Simplex Virus Type 1 is Associated withInduction of a Nuclear Factor That Binds to the NF-KB/CoreEnhancer Sequence”J.Virol.62，4104-4112(1988)；Kamineet al.，文献同上；Albrecht et al.文献同上]。
包括那些属于HSV-1和HIV-1的ICV蛋白质与另一个SRDs主要抗原-与硬皮病自身抗体反应的着丝粒蛋白质CENP-B之间存在一些同源性[Douvas et al.，文献同上(1991)]。表III(引自A.Douvas[Douvas et al.，文献同上(1991)])描述了着丝粒蛋白质CENP-B和HIV-1的gp120/41之间存在的同源性以及CENP-B与协同病毒HSV-1、CMV和EBV之间存在的相似性。在大约45％的不考虑其它特性的硬皮病病人中出现高效价的抗-着丝粒抗体[Schumacher et al.，文献同上]。与HIV-1、HSV-1和CMV同源的部分簇集于CENP-B的两个高度亲水区域，几乎全部由谷氨酸(区域1)和天冬氨酸与谷氨酸(区域2)组成。这些区域不同寻常之处在于它们的长度。两个都含有硬皮病自身抗体的抗原决定簇[W.C.Earnshaw et al.“Molecular Clon-ing of CDNA for CENP-B，the Major Human Centromere Autoan-tigen.”J.Cell.Biol.104：817-829(1987)]。由此推测与CENP-B区域1和2抗原决定簇、与硬皮病抗原Scl-70及MCTD抗原70K的亲水区域反应的自身抗体也可与具有亲水区域的其它多肽反应。这一推测得到实施例1所提供的ELISA数据的支持(图7A和7B)。这些图表明了这些抗体对多聚-谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸和精氨酸的合成底物的反应性。根据这些数据，推测抗体与ICV感染中的类似序列有强烈交叉反应，因此这些抗体有治疗作用。此推测得到实施例2(和图6)所提供的ELISA数据的支持。其中抗-RNP血清表现出与受HSV-1感染的细胞溶解产物之间高度反应性。因此，SRD病人的血清对于治疗受ICV感染的病人是有用的。
HIV-1感染的治疗
HIV-1表面糖蛋白复合物是双分子的结构，gp120/41，通过蛋白质水解裂解前体gp160而得到。如图1所示，gp120部分突出于HIV-1的表面，而gp41主要是跨膜和细胞质成分。图1是通过现存化学数据的计算机模型构建出的此复合物的二维平面图。如图所示，病毒吸附于T“辅助”细胞的CD4结合位点位于gp120可变的V4区域。以下将进一步讨论的V3区域(见图3)是中和抗体的主要靶子，而令人失望的是已证实V4环和CD4结合位点是免疫沉默的。
图1中，HIV-1 DNA序列(K03455)得自GenBank，用VAX/VMS计算机将gp120和41翻译成氨基酸序列，通过酶裂解和HPLC可辨认出gp120中的二硫键[C.L.Leonard et al.“Assignment of IntrachainDisulfide Bonds and Characterization of Potential Glycosy-lation Sites of the Type 1 Recombinant Human Immunodefici-ency Virus Envelope Glycoprotein(gp120)Expressed inChinese Hamster Ovary Cells”J.Biol.Chem.265，10373-10382(1990)]。通过NMR可辨认出gp41残基598-604之间的二硫键[M.B.A.Oldstone et al.“Mapping the Anatomy of the ImmunodominantDomain of the Human Immunodeficiency Virus gp41 Transmemb-rane Protein：Peptide Conformation Analysis Using Monoclo-nal Antibodies and Proton Nuclear Magnetic Resonance Spec-troscopy”J.Virol.65，1727-1734(1991)]。
通过使用大小为19的窗口和Kyte/Doolittle规则系统进行疏水性作图可辨认出gp41的跨膜位点(氨基酸684-700)和与膜相关的位点(氨基酸525-535)[J.Kyte et al.“A Simple Method forDisplaying the Hydropathic Character of a Protein”J.Mol.Biol.157，105-132(1982)]。
通过Chou-Fasman法摸拟gp120/41的二级结构[P.Y.Chou et al.“Empirical Predictions of Protein Conformation”Ann.Rev.Biochem 47，251-276(1978)，它们是α-螺旋，β-片层，β-转角和无规线团结构。为了测定螺旋结构，P(bound)大于1.0和Pα大于Pβ的情况不能使用，为了测定β-片层，需要的最小长度为5个残基。
在构建模型时也考虑到表面概率和柔性，计算参数在缺乏背景的条件下被使用，将表面概率限制为5.0，柔性限制为1.040。在不同的已公开的HIV-1序列中，基本的二级结构是相似的[J.Devereuxet al.“A Comprehensive Set of Sequence Analysis Programsfor the VAX”Nuc.Acid Res.12，387-395(1984)；E.A.Eminiet al.“Induction of Hepatitis A Virus-Neutralizing Anti-body by a Virus-Specific Synthetic Peptide”J.Virol.55，836-839(1985)；P.A.Karplus et al.“Refined Structure ofGlutathione Reductase at 1·54 A Resolution”J.Mol.Biol.195，701-729(1987)；Modrow et al.，文献同上]。
三维模型的模拟根据的是二硫键结构和螺旋，片层，转角和无规线团结构，以及计算机计算结果。包膜蛋白质gp160被分为gp120：氨基酸1-511，和gp41：氨基酸512-856。在gp120中据认为有四个可能的基元：氨基酸1-107(1-29，33-107)，氨基酸108-211，氨基酸213-353，氨基酸358-511。图1中相应特征的符号如下：-gp120和gp41之间的断裂(氨基酸511)；-α-螺旋；和-β-折叠片。
可以看出gp120/41复合物的氨基酸序列有许多位点(跨越总共152个氨基酸)与正常蛋白质70K相似或相同(图1)。这些相似性示于图1中的阴影条(在图2中更明确地标示)，它包括HIV-1主要中和区域的大部分，即V3环(在下面图3中详细讨论)。70K是小核核糖蛋白质颗粒(snRNP)的成分，其功能是加工(剪接)mRNA前体[M.R.Lerner et al.“Are snRNPs Involved in Splicing？”Nature 283，220-224(1980)；Hamm et al.，“In VitroAssembly of U1 snRNPs”EMBOJ 6，3479-3485(1987)]；D.L.Black et al.“U2 as Well as U1 Small Nuclear Ribonucleo-protein Are Involved In Premessenger RNA Splicing”Cell 42，737-750(1985)]。该颗粒的核心是一RNA分子U1。两个其它蛋白质A和C是U1 snRNP的特异成分[Hamm et al.，文献同上(1987)]。在以U2-U6 RNAs作为其核心的snRNPs中还发现有其它的多肽成分，包括B、B′、D、E、F和G[Hamm et al.，文献同上(1987)]。
U1 snRNP是出现于SRD综合症的高效价，高亲合力自身抗体的靶子，SRD综合症有：混合连接组织病(MCTD)，硬皮病和全身性红斑狼疮(SLE)[W.N.Kelly et al.“Textbook of Rheumatology”(Saunders，Philadelphia)(1989)]。重要的是抗-U1 snRNP抗体经常出现于不掺杂其它抗体特性的MCTD中，仍不知道它的病理作用[Kelly et al.，文献同上；E.H.Schumacher et al.“Primer onthe Rheumatic Diseases”(Arthritis Foundation，Atlanta)9th Ed.(1988)]。在抗体相经常混乱的SLE中，抗-U1抗体的存在与良好的预后相关[Kelly et al.，文献同上；E.H.Schumacher etal.“Primer on the Rheumatic Diseases”(Arthritis Founda-tion，Atlanta)9th Ed.(1988)]。
图2和3阐明了共有结合序列(cbs)在建议的使用抗-RNP抗体中和HIV-1的策略中的重要性。MCTD是由血清抗-U1 snRNP抗体的存在来定义的综合症[Kelly et al.，文献同上；Schumacher et al.文献同上]。图2A[SEQ ID NOS.：20-51]扩展了图1所提供的分析，表明70K中与gp120/41相似的线性氨基酸序列(黑体形式)。相似性(有一个例外)被定义为其中≥50％的氨基酸是相同的位点。总的来说，70K的18个位点，其长度的26％与gp120/41是同源的。一个关键性的发现是8个氨基酸的共有结合序列(氨基酸322-329处的开放框)(它对于与U1 RNA结合的高度亲合力是必需的和充足的)它与gp120中的类似序列GRAFVTIG[SEQ ID NOS.：20-52]相对应。此位点不是精确序列，只是在与U1 RNA结合的蛋白质类中发现的共有序列。如图2A所示，cbs位于与100％ MCTD血清反应的70K主要抗原决定簇区域B中(划点处)[Guldner，etal.，“Epitope Map-ping with a Recombinant Humm an 68-kDa(U1)Ribonucleopro-tein Antigen Reveals Heterogeneous Autoantibody Profiles inHuman Autoimmune Sera”J.Immunol.Vol.141.469-475(1988)；D.S.Cram et al.“Mapping of Multiple B Cell Epitopes onthe 70-Kilodaton Autoantigen of the U1 RibonucleoproteinComplex”J.Immunol.145，630-635(1990)]。因此为治疗用途的血清筛选需鉴定出那些具有最高效价的血清。第二区域，A，也可被认为是重要的抗原决定簇，它可与＞50％的抗-U1 snRNP血清反应[Cram et al.，文献同上]。如图2所示，此抗原决定簇也有gp120的同源序列。
图2B表明的是在具剪接功能的复合物中，与U1 RNA相关的、包括70K的七个蛋白质的cbs[SEQ ID NOS.：53-59]。实线长方形标明的8个氨基酸对与U1 RNA的结合是必需的和充足的。[R.J.Bandz-iulis et al.“RNA-Binding Proteins as Developmental Regu-lators”Genes Devel.3，431-437(1989)；B.M.Merrill et al.“Phenylalanines That Are Conserved Among Several RNA-Bin-ding Proteins Form Part of a Nucleic Acid-Binding Pocketin the A1 Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein”J.Biol.Chem 263，3307-3313(1988)；B.M.Merrill et al.“Photochem-ical Cross-Linking of the Escherichia coli Single-StrandedDNA-Binding Protein to Oligodeoxynucleotlde”J.Biol.Chem259，10850-10856(1984)；A.Woppman et al.“Direct Cross-Linking of snRNP Protein F and 70K to snRNAs by Ultra-Violet Radiation In Situ”Nuc Acid Res.16，10985-11004(1988)；A.R.Krainer et al.“Functional Expression of Clon-ed Human Splicing Factor SF2：Homology to RNA-BindingProteins，U1 70K，and Drosophila Splicing Regulators”Cell66，383-394(1991)]。hn RNP A2和B1的cbs相同，在它们的上面是V3(HIV-1 III B株)的GRAFVTIG[SEQ ID NO.：20]序列和旁侧氨基酸。在V3和所有七个U1结合蛋白质中都出现了不变的G--F结构，在F的两侧加上几乎不变的A和V。很明显在8个氨基酸cbs中的其它保守序列也存在于V3 GRAFVTIG[SEQ ID NO.：20]序列中。这种同系物在gp120的免疫优势V3环中的重要位置将在以下讨论。
图2A也展示了70K和gp41亲水的COOH-末端之间广泛的同源性。这些包含有重复的RDRDR[SEQ ID NO.：60]基元，和一组分别开始于70K和gp41位置513和732的碱性和酸性交替的残基。在这一组中，70K的18个氨基酸中的11个与gp41相同，另外3个是谷氨酸和天冬氨酸的保守替换。碱性/酸性交替的氨基酸构型包括RDRDR[SEQ IDNO.：60]，RERRE[SEQ ID NO.：61]，ERKR[SEQ ID NO.：62]和共有序列ETPEEREERRR[SEQ ID NO.：63]，它们是抗-U1 RNP抗体的抗原[Douvas et al.，文献同上(1991)；Cram et al.，文献同上；C.C.Query et al.“A Common RNA Recognition Motif Identifi-ed within a Defined U1 RNA Binding Domain of the 70K U1snRNP Protein”Cell 57，89-101(1989)]。有趣的是，gp41的序列EEEGGE[SEQ ID NO.：64]也出现在着丝粒多肽CENP-B中，它是硬皮病自身抗体的主要靶子，是MCTD的临床组成之一。在CENP-B中出现两次的相关序列EEEGE[SEQ ID NO.：65]也出现在HSV-1的聚合酶(pol)蛋白质中[Douvas et al.，文献同上(1991)]。
如图3所示，cbs和区域A同系物都位于gp120的V3环，图3表明V3环在产生中和病毒感染性的抗体中的重要性。其它研究者对gp120/41整个长度的免疫分析揭示了V3环是中和抗原决定簇的主要位点[J.D.Laman et al.“Variant-Specific Monoclonal and Group-Specific Polyclonal Human Immunodeficiency Virus Type 1Neutralizing Antibodies Raised with Synthetic Peptidesfrom the gp120 Third Variable Domain”J.Virol.66，1823-1831(1992)]；Girard et al.，文献同上；Broliden et al.，文献同上；J.R.Rusche et al.“Antibodies that Inhibit Fu-sion of Human Immunodeficiency Virus-Infected Cells Bind a24-Amino Acid Sequence of theViral Envelope，gp120”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85，2198-2302(1988)；P.J.Durda et al.“HIV-1 Neutralizing Monoclonal Antibodies Induced by aSynthetic Peptide”AIDS Res.Res.Hum.Retro.6，(1990)；M.A.Skinner et al.“Characteristics of a Neutralizing Monoclo-nal Antibody to the HIV Envelope Glycoprotein”AIDS Res.Hum.Retro.4，(1988)；K.Javaherian et al.“Principal Neu-tralizing Domain of the Human Immunodeficiency Virus Type1 Envelope Protein”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86，6768-6722(1989)]。几乎所有能在体外(或对灵长类动物而言为活体内)中和病毒的抗体都能与V3环反应。这包括来自AIDS病人由单克隆技术产生的抗体，或在猴子中产生的抗体。因此病毒中最强的免疫原是V3环。
图3[SEQ ID NOS.：66-70]是从已出版的文献中编制出的，提供了对V3环(在氨基酸303和338之间带有二硫键的36个氨基酸)的详细免疫学分析。在氨基酸序列周围以实心线圈住以表示中和区域。RKSIRIQRGPGRAFV部分(线1)[SEQ ID NO.：71]覆盖70K的部分cbs和区域A抗原决定簇上，它是来自AIDS病人的受HIV-1感染的血清中所存在的＞80％中和抗体的靶子[Laman，et al.，文献同上]。线1-4描述了合胞体形成抑制试验(SFI)中中和力最强的抗-gp120单克隆抗体的靶序列[Laman et al.，文献同上；Girard et al.，文献同上]；Brolinden et al.，文献同上]；Rusche et al.，文献同上]。如线5和5′所示，使用V3环分开的半个作为免疫原揭示了GPGRAFVT-IG[SEQ ID NO.：72]序列是中和单克隆抗体最强有力的诱导物[Durda et al.，文献同上]。当将线6所示序列注射给黑猩猩时，可给予抗HIV-1攻击的部分保护[Skinner et al.，文献同上]，另外，序列IRIQRGPGRAFVTIG(线7)[SEQ ID NO.：73]是注射了gp120的黑猩猩产生的抗血清的主要抗原决定簇[Javaherian et al.，文献同上]。
线1-7的重叠标记出环的大约为11个氨基酸的片段，RGPGRAF-VTIG[SEQ ID NO.：74]，它含有cbs，被当作中和抗体最强有力的焦点。另外，线1、3、5和6都表示中和抗原决定簇，它们覆盖在70K区域A抗原决定簇的上面。不幸的是在AIDS中，这些抗体的效价太低以致不能抑制该疾病。然而70K中的同源序列(图2)是MCTD自身抗体占免疫优势的靶子，在某些情况下其效价超过107。占免疫优势的V3和70抗原决定簇显著的一致性强有力地预示了抗-U1 snRNP抗体可与HIV-1抗原决定簇交叉反应，反之亦然。同样的分析表明gp41同源性也很重要。这些预测受到以下图4和5所提供的实验数据的支持。
图4A和B提供了一组末受HIV感染的血清和gp120/41抗原之间交叉反应性的ELISA实验分析，将它们与经HIV感染、并通过Western印迹分析预先筛选出血清阳性的、总数为12的人血清之反应性相比较。通过4℃下将饱和浓度的抗原吸收到塑料微量滴定板上(FlowLaboratories)使ELISAs进行12小时。重组抗原gp120，V3和gp41(分别为A、B和C组)购自ABT(Cambridge)、Sigma(St.Louis)和du Pont(Boston)。使用Organon Teknika试剂盒，通过Western印迹法预先筛选受HIV-1感染的血清(HIV)中的血清阳性。使用针对标准化细胞抽提物的双向扩散试验，筛选得自具有抗-RNP抗体(RNP)的MCTD病人和斯耶格伦病人(SS)的血清中抗-RNP和抗-Ro/SSA抗体的存在，使用已知的阳性原型血清鉴定沉淀素线。甲状腺炎血清得自具有临床甲状腺炎的病人。Th-U和Th-T分别表示未经治疗的和经治疗的。正常血清(NL)收集自志愿者，通过免疫荧光测定出其抗-核抗体为阴性。所有血清在pH 7.5的磷酸盐缓冲液(PBS)，0.1％牛血清白蛋白(BSA)中以1∶100稀释。使用与辣根过氧化物酶结合的羊抗-人IgG(稀释度为1∶1000)作为第二抗体(Zymed Inc.)，O-苯肼二盐酸(Sigma)作为底物，使用自动化ELISA读数器记录光密度(于O.D.490nm处的任意单位)。水平线表示每一血清组的平均值。
图4A的A组将HIV血清与抗-RNP血清(RNP)，正常血清(NL)和斯耶格伦综合症(SS)病人的风湿病对照组血清与gp120的反应性相比较。RNP和SS的平均反应性是0.137和0.143，相对地HIV和NL分别为0.673和0.033。B组中的底物是38个氨基酸的V3链。这一系列中所见的最高反应性为RNP组(平均为0.285，分别相对于HIV为0.261，SS为0.160和NL为0.099)。相对于对gp120，HIV血清对V3的低2.6倍的反应性与V3中不同抗原决定簇的数目较少相一致。然而，鉴于V3中只有两个与70K(70K中总的27个氨基酸)同源的序列，而gp120其余部分与70K(70K中总共有47个非-V3氨基酸)，有6个同源性，因而相对于对gp120，RNP对V3的高＞2倍的反应性十分显著。此模式与抗-RNP抗体对V3中高亲合力抗原决定簇的序列特异性识别是一致的。我们假定图4A中报道的抗原特异性反应是由抗体而不是其它血清成分引起。作为此假说的证据，我们使用纯化的来自三种抗-RNP血清的IgG，并使用与辣根结合的抗-IgG而不是抗-Ig重复一些这类实验，这些实验产生了与图4A报道的那些相同的特性和相等的亲合力。而且热处理血清(56℃，30分钟)不会破坏反应。SS血清没有显示出与gp120和V3反应性有明显的差别。
正如从图2A亲水同源性中所预料的，对RNP来说，gp41是比gp120更好的底物(平均值为0.266，相对于0.137)，而SS组没有显示出明显的优势(平均反应性为0.150，相对于0.143)。然而，RNP血清与V3的反应性相对于与gp41而言相同或略高一些值得注意，因为与V3和70K之间有两个同源性相比，gp41和70K(70K的93个氨基酸)之间有11个同源性序列，这些同源序列中至少9个是亲水的[Douvaset al.，文献同上](1991)]。图4B将图4A中的分析扩展至两个甲状腺炎病人的血清，一个是治疗前的血清(Th-U)，一个是治疗超过一年后的血清(Th-T)。也显示了阳性对照(HIV(+))和正常血清。很明显，未经治疗的甲状腺炎病人的血清可与HIV gp-120，gp41和V3环反应。这与显示出在甲状腺过氧化物酶(TPO)和球蛋白这两者中的、与CENP-B和70K亲水序列相类似的亲水序列这一计算机辅助分析结果是一致的(见表I)。
图5通过Western印迹法显示AIDS血清可特异地与RNP抗原的70K部分反应。图5中，通过差异离心和亲合柱层析(于抗-RNP IgG-Sepharose)可从大鼠肝细胞核中分离出部分纯化的70K，聚丙烯酰胺凝胶电泳(10％)和Western印迹可按A.S.Douvas et al.[A.S.Douvas“Autoantibodies Occurring in Two Dif ferent Rheuma-tic Diseases React with the Same Nuclear RibonucleoproteinParticle”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79，5401-5405(1982)]和M.C.Crow et al.[M.C.Crow et al.“Human Peripheral Blood THelper Cell-Induced B Cell Activation Results in B CellSurface Expression of the CD23(BLAST-2)Antigen”Cell.Immunol.121，99-112(1989)]，所分别描述的方法进行。按前述得到经HIV感染的血清，抗-RNP血清和正常的血清，按1∶250稀释以进行Western印迹。使用与辣根过氧化物酶结合的羊抗-人IgG(1：3000稀释)，作为第二抗体(Tago)显示印迹。图5中，泳道1：部分纯化的U1 snRNP 70K抗原的聚丙烯酰胺凝胶，所示为70K和60K断裂产物；泳道2-11：与HIV-1-阳性人血清反应的Western印迹带；泳道12-14：与MCTD病人的抗-RNP血清反应的Western印迹带；泳道15：用同上方法处理但没有第一抗体的带；和泳道16-18：与对照人血清反应的Western印迹带。在所检测的10个AIDS血清中，8个与70K反应，其中一个血清(泳道7)一直比MCTD病人的3个抗-U1 RNP血清(泳道12-14)反应更强烈。
因此，联合ELISA和Western印迹的数据(图4和5)表明了抗-U1 RNP血清和HIV-1抗原之间，AIDS血清和U1 RNP，特别是U1 RNP的70K部分之间的交叉反应性。在HIV-1 ELISAs中，抗-U1 RNP血清与AIDS血清相比，其反应性较弱并不出乎预料，因为HIV血清可与非同源以及同源抗原决定簇反应。另外，ELISA并不能衡量血清的中和能力。我们将在用于临床试验的供体抗-RNP血浆的预先筛选中测量该中和因子。
从这些分析中可得出结论：gp120/41和70K之间的结构同源性是抗-RNP抗体和该最终复合物之间交叉反应性的主要基础。另外，抗-RNP抗体对V3的亲合力好象涉及抗原决定簇相互之间序列特异性的识别。V3环与70K有50％同源，并包括70K的两个免疫优势区域的片段。单独的V3亲水片段不能成为这一亲合力的基础，这表明(如上所讨论)gp41中亲水同源性的数量优势并不能带来超越V3的优点。因此在序列特异性的相互作用中，GRAFVTIG[SEQ ID NO.：20]序列会起到重要作用。
上述分析也表明高效价的抗-RNP抗体(＞107的效价是普遍的)可以类似于被感染的血清中出现的抗体的方式来中和HIV-1的感染性。然而，也带来了问题，即这种相互作用的潜在用途是否会被病毒株的特异性所限制。
表IV表明了用选择出的含有自身免疫抗体的血清来中和HIV-1的IIIB和MN株。所使用的中和(病毒抑制)试验是合胞体形成抑制试验。此试验系统详细描述于P.L.Nara，et al.“Simple，Rapid，Quantitative，Syncytium-Forming Microassay for the Detec-tion of Human Immunodeficiency Virus Neutralizing Antibody”AIDS Res.Hum.Retro.3：283-302(1987)(此处引入作为参考)。简单地说，病毒的合胞体敏感细胞系CEM-SS被HIV-1的MN或IIIB株感染，并平铺于带有或不带有检验血清的微量滴定孔中(每孔50,000个细胞)。感染导致单个细胞融合形成大的聚合物，或合胞体。在显微镜下对所形成的合胞体单位(SFu)的数目计数。在没有抑制抗体时所形成的总数称为Vo，有检验抗体存在时所形成的数目称为Vn。所用检测抗体的稀释度为1∶8至1∶64，Vn/Vo的比率表示对抗体抑制效力的衡量。完全抑制的Vn/Vo比值几乎为零。Vn/Vo值为0.5表示50％抑制，或者是所看见的SFu少于50％，而值为1+则表示检验抗体不能抑制。从表IV中可看出抗-RNP血清对IIIB和MN株都是强抑制剂，而抗-着丝粒血清只对IIIB有效。
决定抗体识别的主要是功能单位，而不是精确的序列。而且V3主要的中和决定簇中保守的残基是cbs中不变的G-AF--模式[G.J.LaRosa et al.“Conserved Sequence and Structural Elementsin the HIV-1 Principal Neutralizing Determinant”Science249，932-935(1990)；G.J.LaRosa et al.“Conserved Sequenceand Structural Elements in the HIV-1 Principal Neutrali-zing Determinant：Corrections and Clarifications”Science251，811(1991)；G.J.LaRosa et al.“Conserved Sequence andStructural Elements in the HIV-1 Principal NeutralizingDeterminant：Further Clarifications”Science 253，1146(1991)]。图1和2以及实施例4的资料提示，与gp120/41复合物结合后具有RNA剪接的功能。在MCTD病人中出现的抗-U1 snRNP抗体是RNA剪接强抑制剂[M.R.Lerner et al.“Antibodies to SmallNuclear RNAs Complexed with Proteins are Produced by Pa-tients with Systemic Lupus Erythematosus”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76，5495-5499(1979)]。另外，有许多剪接的药物抑制剂，包括那些抑制RNA自身-剪接的抑制剂[M.Harbers et al.“Sup-pression of c-fos Precursor RNA Splicing by the ProteinKinase C Inhibitor H76[1-(5-isoquinolinesulphonyl)-2-methylpiperazine]”Biochem J.278，305-308(1991)；U.VonAhsen et al.“Antibiotic Inhibition of Group I RibozymeFunction”Nature 353，368-370(1991)；H.F.Noller“Drugsand the RNA World”Nature 353，302-303(1991)；S.Pinol-Roma et al.“Shuttling of pre-mRNA Binding Proteins Be-tween Nucleus and Cytoplasm”Nature 355 730-732(1992)]。实施本发明实用的RNA剪接抑制剂的例子(但不限于这些)是H7[1-(5-异喹啉磺基)-2-甲基哌嗪酮]，2-氨基嘌呤和氨基糖苷抗生素，它包括但不局限于庆大霉素、卡那霉素和新霉素。
U1与HIV-1 gp120/41的结合
通过活体注入U1可将抗原性的RNP颗粒的RNA部分，U1，与gp120/41结合。如实施例3和4中所进一步说明的这一策略具有双重目的。首先，根据对核RNP抗原的亲合力研究，它应能增加抗-RNP抗体对gp120/41的亲合力[A.S.Douvas et al.“Isolation andCharacterization of Nuclear Ribonucleoprotein ComplexesUsing Human Anti-Nuclear Ribonucleoprotein Antibodies”J.Biol.Chem.254 3608-3616(1979)(在此引入作为参考)]。第二，使用紫外光应能使U1与gp120的V3环不可逆地交叉连接，此处理不仅会损伤V3环的功能，也会如下文所讨论的可封闭相邻的V4环中的CD4结合位点。此方法的可行性基于U1-cbs相互作用的几个已知特性。图8A[SEQ ID NO.：75]所示为得自Hamm等的完整U1分子[J.Hamm et al.“Loop I of U1 Small Nuclear RNA is the OnlyEssential RNA Sequence for Binding of Specific U1 SmallNuclear Ribonucleoprotein Particle Proteins”Mol.Cell Biol.8，4187-4791(1988)]。如图8B所示，与U1结合的分子的cbs(示于图2)可与U1分子的特殊部位，茎-环I反应。
U1 RNA的结合和交叉连接，以及gp120/41的V3区域的衍生物被期望位于V4的CD4结合位点之上并封闭之。此推测的根据是U1和gp120的相对大小。通过电子显微镜估计出U1 snRNP的大小为11-15nm(长)，11-12nm(宽)[B.Kastner et al.“Electron Mic-roscopy of U1 Small Nuclear Ribonucleoprotein Particles：Shape of the Particle and Position of the 5′RNA Terminus”EMBOJ.8，227-286(1989)]。假定这一体积中只有一半是由RNA骨架带来的，估计U1的直径大约为6nm，与之相比完整的球状gp120的直径为8-10nm。[D.J.Thomas et al.“gp160，the EnvelopeGlycoprotein of Human Immunodeficiency Virus Type 1，Is aDimer of 125-Kilodalton Subunits Stabilized Through Inter-actions Between Their gp41 Domains”J.Virol.65，3797-3803(1991)]。因此根据上述数据可以预测U1跨越了V3和V4之间短得多的距离(见图1)；
同样，与V3结合的抗-RNP抗体可能遮掩了CD4结合位点。二价IgG的抗原结合位点之间的距离是14-15nm。另外，尽管推测抗-RNP抗体只与gp120/41结合(图4和5)，当存在RNA部分时，该抗体不仅与多复合物结合，还会与之交叉连接。因此在活体内用U1-gp120/41复合物比只用gp120/41可能会更有效地进行中和。
除了对gp120/41吸附和融合作用的负影响外，U1的共价结合可能会中和gp120/41的任何吸附后的功能。尽管体外研究已有力阐明了gp120/41的吸附后功能[Habeshaw et al.，文献同上]，但到目前为止它的确切作用仍未阐明。本文所提供的数据表明此功能涉及RNA剪接，它对病毒增殖的重要性就如同对宿主细胞一样，因此RNA剪接抑制剂也可用作抗-病毒剂。
治疗HIV-1感染的治疗策略
有五种基本的策略可单独使用或联合使用以治疗HIV-1的感染者。第一种可使用的免疫疗法涉及自身免疫人抗-RNP抗体、其它种类(如抗-着丝粒)或几种混合的人自身抗体、或者通过技术手段得到的针对与RNP同源的抗原决定簇或与RNP相关的机理和功能(例如剪接)的抗体。第二种可使用的疗法涉及U1 RNA，及其片段或设计用来模拟或改善U1和蛋白质之间相互作用的类似物的应用。第三种可用来减少病毒感染性的疗法涉及联合使用抗-RNP抗体和RNA部分，目的是封闭、交叉连接，并因此取消gp120/41对宿主结构的吸附和融合。第四种涉及使用由光泳、激光源等释放的紫外光或其它交叉-连接策略的疗法，目的在于稳定抗体和/或RNA类似物与病毒之间的复合物。第五种可使用的疗法涉及利用RNA剪接的药物抑制剂以干扰病毒的功能。
免疫疗法--除了使用SRD自身抗体(从经筛选的供体中取出血浆)外，也可制备出RNP抗原决定簇的合成或鼠单克隆抗体(使用天然免疫原或者被制成融合蛋白质的免疫原肽类)[C.S.Surowy etal.“Direct，Sequence-Specific Binding of the Human U1-70KRibonucleoprotein Antigen Protein to Loop I of U1 SmallNuclear RNA”Mol.Cell.Biol.9，4179-4186(1989)； Query etal.，文献同上(1989)；C.C.Query et al.“A Specific 31-Nucleotide Domain of U1 RNA Directly Interacts with the70K Small Nuclear Ribonucleoprotein Component”Mol.Cell Biol.9，4872-4881(1989)；Reuter et al.，文献同上(1986)；(所有这些引入本文作为参考)]。可以将鼠单克隆抗体方法作一些修改，目的是最大程度地破坏病毒的感染性，增加治疗相互作用的专一性，并减少由引入非自身抗体而引起的过敏性和其它并发症。
这些修改包括使用催化抗体。其潜在的用途包括(但不局限于)：催化与V3环的共价(不可逆)键的形成；将多聚核苷酸，尤其是U1与V3连接，目的是加强它被抗体的识别或削弱其功能；水解V3环或gp120/41复合物的其它部分；引入可与亲水抗原决定簇最大程度地反应的亲电子基团；以及释放剪接抑制剂[K.M.Shoat et al.“Catalytic Antibodies”Methods Enzymol.203，327-351(1991)；D.Hilvert et al.“Antibody Catalysis of Concerted，Carbon-Carbon Bond-Forming Reactions”Methods Enzymol.203，352-369(1991)；S.K.Dower et al.“Phosphorus-31 NuclearMagnetic Resonance Probes for the Combining Site of theMyeloma Protein M315”Biochem 18，3668-3674(1979)；K.D.Janda et al.“Bait and Switch Strategy for Obtaining Cata-lytic Antibodies with Acyl-Transfer Capabilities”J.Am.Chem.Sco.112，1274-1277(1990)(所有这些引入本文作为参考)]。通过已建立的方法将催化基团引入抗体，包括选择性化学修饰，位点特异性诱变或遗传选择或筛选[Shoat et al.，文献同上；Hilvertet al.，文献同上(引入本文作为参考)]。
另一种有用的修改包括使用高亲合力的Fv片段和sFv。通过重组和单克隆技术可产生只有抗体可变区域的杂二聚体(VH-VL)，以减少人与鼠同型之间的反应[J.S.Huston et al.“Protein Engi-neering of Antibody Binding Sites：Recovery of SpecificActivity in an Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Pro-duced in Escherichia coli”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85，5879-5883(1988)；M.S.Tai et al.“A Bifunctional Fusion ProteinContaining Fc-Binding Fragment B of Staphyloccocal ProteinA Amino Terminal to Antidigoxin Single-Chain Fv”Biochem29，8024-8030(1990)]。片段(Fv)具有经改良的生物分布动力学的优点[J.S.Huston et al.“Protein Engineering of Single-Chain Fv Analogs and Fusion Proteins”Methods Enzymol.203，46-88(1991)]。轻链和可变区域也可作为一个单链SFv而产生，并在细菌载体中表达[S.Johnson et al.“Construction of single-Chain Fv Derivatives of Monoclonal Antibodies and TheirProduction in Escherichia coli”Methods Enzymol.203，88-98(1991)]。除了有构建高亲合力抗原结合位点的潜能外，此技术还能使SFv与其它效应器功能相联合[R.Glockshuber et al.“AComparison of Strategies To Stabilize Immunoglobulin Fv-Fragments”Biochem.29，1362-1367(1990)]。
另一种有用的修改包括用人同型替换鼠。为了减少对鼠同型的过敏反应，可能需制备嵌合抗体[D.Gussow et al.“Humanizationof Monoclonal Antibodies”Method Enzymol 203，99-120(1991)]，或将鼠的互补性决定区域(CDRs)插入人的构架序列(frameworksequence)[P.T.Jones et al.“Replacing the Complementarity-Determining Regions in a Human Antibody with Those From aMouse”Nature 321，522-525(1986)；L.Riechmann et al.“Reshaping Human Antibodies For Therapy”Nature 332，323-327(1988)]。然而由于它们与特异抗原反应的能力有所降低，故在治疗受HIV-1感染的病人时，过敏反应不会成为严重的问题。
另一种有用的修改包括使用带有配体的抗体以共价连接于gp120/41的表面。共价配体(包括被光激活的交叉连接物)可使用以上所讨论的化学修饰或遗传学方法已建立的技术来引入，然后使用如下文所讨论的紫外光在活体内进行光化学的交叉连接。
U1 RNA，其片段和类似物--使用重组的U1 DNA，在其5′末端侧冀有T7或SP6 RNA聚合酶的启动子，在其3′末端侧冀有限制性内切酶的位点，就有可能产生可用于治疗的量以克计的U1[Merrillet al.，文献同上(1988)；Hamm et al.文献同上(1988)；Sur-owy et al.，文献同上；Query et al.，文献同上(1989)；Queryet al.，文献同上(1989)；J.R.Patton et al.“Reconstitutionof the U1 Small Nuclear Ribonucleoprotein Particle”Mol.Cell.Biol.7，4030-4037(1987)；C.Lutz-Freyermuth et al.“Quan-titative Determination that One of Two Potential RNA-BindingDomains of the A Protein Component of the U1 Small NuclearRibonucleoprotein Complex Binds with High Affinity to Stem-Loop II of U1 RNA”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87，6393-6397(1990)；W.Boelens et al.“Analysis of In Vitro Binding ofU1-A Protein Mutants to U1 snRNA”Nuc.Acid Res.19，4611-4618(1991)]。
另外，通过选择性使用限制性酶和/或位点特异性诱变，有可能除去分子中不必需的区域[Merrill et al.，文献同上(1984)；Hamm et al.，文献同上(1988)；Surowy et al.，文献同上；Queryet al.，文献同上(1989)；Query et al.，文献同上(1989)；Patton et al.，文献同上；Lutz-Freyermuth et al.，文献同上]。
U1的I环对V3环中存在的cbs的高度亲合力可能会使结合发生在血清中。另外，如上文所述，此亲合力部分是由cbs中的苯丙氨酸基团所引起，它可促使cbs和I环之间快速和特异性的交叉连接(见实施例4)。通过包括在合成过程中将反应性的化学基团引入RNA配体和/或使用紫外光的已建立的技术可得到交叉连接。
抗体和RNA的联合--上文已讨论了同时使用抗-RNP抗体和RNA所带来的优点。这些涉及到人抗-RNP抗体对RNA和蛋白质复合物的高度亲合力，以及有所增加的交叉连接的可能性和已经灭活的病毒表面基团形成大的团聚物的可能性。另外，由此策略提供了三个交叉-连接的靶子：抗体对RNA，RNA对gp120/41，以及抗体对gp120/41。
紫外光交叉连接--通过不可逆的交叉连接上述靶子可得到感染病毒表面基团的不可逆失活。除了化学交叉连接外，也可使用常规紫外光源，以254nm的相对低的水平照射来得到不可逆的失活(见实施例4)[Merrill et al.，文献同上(1988)；Merrill etal.，文献同上(1984)；Woppman et al.，文献同上]。
有可能通过光泳现象对人发出足够的射线，此治疗方式适于淋巴瘤，并已被用于治疗硬皮病病人。常规的方式使用药物甲氧补骨脂素(methoxsalen)作为交叉连接剂。其它可能使用的是来自激光源的单色紫外光[J.W.Hockensmith et al.“Laser Cross-Linkingof Nucleic Acids to Proteins”J.Biol.Chem.261，3512-3518(1986)]。对血液(其中已注入治疗剂)的紫外光照射在体外进行。光泳现象的共同的副作用已经确定。
PNA剪接抑制剂--上文已提到与gp120/41复合物相关的可能的剪接功能。U1 RNA在体外与gp160/120/41的结合提示这种相互作用可能存在于细胞内病毒和宿主细胞RNA之间。使用剪接抑制剂可取消这种相互作用对宿主细胞剪接机理的相反作用。优化这些药剂的传送，以及它们与病毒成分相互作用的策略与以上讨论的那些相似，包括利用抗体作为传送系统，以及交叉连接使相互作用具有不可逆性。治疗ICV感染的治疗策略
从天然抗原中制备免疫原--天然抗原包括U1 snRNP和CENP-B，可如A.S.Douvas et al.所述，从哺乳动物组织中分离得到[A.S.Douvas et al.“Isolation and Characterization of NuclearRibonucleoprotein Complexes Using Human Anti-Nuclear Ribo-nucleoprotein Antibodies”J.Biol.Chem.254，3608-3616(1979)]；也可按照Earnshaw et al.文献同上。为了分离出包括CENP-B的酸性区域和70K交替的RDRDRDR[SRQ ID NO.：1]区域的单个抗原的亲水区域，[H.Theissen et al.“Cloning of the HumancDNA for the U1 RNA-Associated 70K Protein”EMBOJ.5，3209，3217(1986)]，可使用的策略是：通过聚合酶链式反应(PCR)产生相应的cDNAs，再将它们插入过量表达的载体pDIP19中以在大肠杆菌中表达[B.Singer et al.“Phage T4 Expression Vector：Pro-tection From Proteolysis”Gene 106，1-6(1991)]。通过ELISA，将由此制备出的CENP-B区域1与抗-着丝粒抗体反应。
免疫治疗的抗体--如在HIV-1感染的特异性免疫治疗的情况下(上述)，通过血浆透入可得到能与，与HIV-1、HSV-1、CMV、EB-V和其它相关的协同病毒同源的、抗原决定簇反应的SRD自身抗体，它可被单独使用或混合使用。使用如上所述的天然和重组抗原可制备单克隆抗体和技术构建的抗体。对于与亲水抗原决定簇相互作用特别重要的修饰包括在抗原结合位点引入亲电子基团。
参见附带的实施例可更好地理解本发明，目的为阐明本发明，而不应在任何意义上看作限制了本发明的范围，在权利要求书中将限定本发明范围。
实施例
实施例1：抗-着丝粒和对照血清与多聚-天冬氨酸、多聚谷氨酸和多聚精氨酸交叉反应性的ELISA比较
与HIV-1、HSV-1和CMV同源的部分簇集于CENP-B的两个高度亲水区域和70K和Scl-70的亲水序列中。图7A所示的ELISA数据支持这样的预测：可与这些亲水区域反应的自身抗体也可与其它多肽中出现的类似亲水序列交叉反应。图7A中，通过如前述的间接免疫荧光可预筛硬皮病病人抗-着丝粒血清(CN-1、2和3)的血清阳性[A.S.Douvas et al.“Isolation and Characterization of NuclearRibonucleoprotein Complexes Using Human Anti-Nuclear Ribo-nucleoprotein Antibodies”J.Biol.Chem.254，3608-3616(1979)]。正常血清(NL1和2)为抗-核抗体阴性。所有血清都以1：1000的倍数稀释。在10mM Tris-HCl缓冲液，0.15 M NaCl，pH7.4中将多聚氨基酸(Sigma)溶解至浓度为1μg/μl。按上文中与实施例1有关的描述进行ELISAs。符号P-Asp，P-Glu，P-Arg和P-Lys分别表示多聚氨基酸底物天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸和赖氨酸。尽管一个对照实际上也可与多聚Arg反应，但所有三个抗-着丝粒血清和两个抗-Scl-70血清与两个正常对照相比，对多聚Glu，多聚Asp和多聚Lys具有较高的反应性。此结果正如所料，它说明SRD自身抗体系列中出现的对亲水抗原多种多样的反应性。图7B所示为四个抗-U1 snRNP血清(RNP-1至4)对P-Asp，P-Glu，P-Arg和P-Lys的反应性。尽管RNP血清对所有四个底物的反应性要比对照高一些，但这些血清与图7A中抗-着丝粒和抗-Scl-70血清相比，表现出优选对精氨酸反应。鉴于70K亲水基元中精氨酸占优势(见表II和III)，这一结果是合适的。图7A和B中所示的反应的多样性在建议的疗法中是一优点，它说明病毒亲水抗原决定簇可以是纯酸性的或者为酸性与碱性相混合的。[A.Douvas et al.“Multiple OverlappingHomologies Between Two Rheumatoid Antigens and Immunosupp-ressive Viruses”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88，6328-6332(1991)]。因此可从SRD血清中筛选出所需的反应性范围，接着可筛选出适宜的混合物以针对感兴趣的抗原决定簇。此方法不仅对攻击单种病毒感染有效，对攻击协同作用的多种病毒也有效。实施例2：抗-RNP和对照血清与受HSV-1感染的细胞交叉反应性的ELISA比较
鉴于天然抗原和HSV-1之间存在序列同源性的区域，检测含有抗-RNP抗体的血清与受HSV-1感染的细胞交叉反应的能力，并将它们的反应性与预先选择出的对HSV-1有高反应性和低反应性的血清(分别为HSV(+)和HSV(-))相比较。被称为NL的血清来自未经选择的实验室工作人员。图6所示为当通过ELISA检测受感染的Vero细胞抽提物时，抗-U1 RNP血清和HSV-1抗原之间高水平的交叉反应性。所有血清以1∶1000稀释于磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.5，0.1％牛血清白蛋白(BSA)中。可按照M.K.Crow et al的方法进行ELISAs[M.K.Crow et al.，文献同上]，使用与辣根过氧化物酶结合的羊抗-人IgG(稀释度为1∶3000)作为第二抗体(Tago)和O-苯二胺二盐酸(Sigma)作为底物。使用自动化ELISA读数器在490nm下读出光密度。在未受感染的Vero细胞抽提物中未看到类似的高反应性。这证明与核自身抗原有同源性的病毒可与相应的自身抗体交叉反应。
实施例3：U1 RNA和茎-环I
图8A所示为完整的U1分子，图8B所示为U1的茎-环I区域。数字表示用来评价70K结合亲合力的诱变核苷酸所在位置。结合是序列特异性的，需要少于环自身的15个碱基。此特性是建议使用U1片段以及完整分子作为治疗剂的基础。此相互作用的亲合力很强，可使用低能量水平的紫外光，很特异地将cbs与顶部交叉连接[Merri-ll et al.，文献同上(1988)；Merrill et al.，文献同上(1984)；Woppman et al.，文献同上(此处引入作为参考)]。实施例4：gp160和gp120/41与U1 snRNA转录物的结合
鉴于gp120有cbs，使用和不使用紫外交叉连接情况下，进行了一系列gp120/41和U1的结合实验，使用琼脂糖凝胶电泳从未反应的U1中分离出紧密相联的复合物(图9)。
图9所示为重组质粒pGEM-3Ef(+)(Promega)，它含有T7启动子和U1 DNA，经限制性内切酶RsaI切割，然后如J.V.Maizel et al所述进行转录[J.V.Maizel et al.“Enhanced Graphic Matrix Aha-lysis of Nucleic Acid and Protein Sequences”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78，7665-7669(1981)]，产生三个RNA转录物，即1.8K碱基对(Kb)，0.9Kb和0.75Kb。对底物片段的分析揭示了只有较大的、产生1.8Kb转录物的才含有U1序列。可购得高度纯化的gp160，部分水解成gp120/41。在总体积为30μl TE缓冲液pH8.0(Tris-EDTA，如参考文献53中所述)中将约为1μg的RNA转录物与3μl gp160/120/41混合，在37℃下温育12分钟。将需照射的样品置于已成模的石蜡膜中，再使用Stratalinker 1800紫外交叉连接物(Stratagene，CA)在冰上使样品经受20mJ/mm2的紫外光(254nm)。如J.Shamrock et al所述进行琼脂糖凝胶电泳(1.5％)[J.Sham-brook et al.“Molecular Cloning”(Cold Spring Harbor Labora-tory Press 2nd Ed.(1989)]。
图9的A组表示未经照射的RNA转录物与gp160/120/41的滴定。泳道1：1Kb DNA梯度标记物；泳道2：1.8，0.9和0.75Kb的RNA转录物；泳道3-6：与泳道2中相同的三个转录物分别与0.5、1.0、2.5和3.5μl gp160/120/41一起温育。
图10的B组表示紫外照射RNA和gp160/120/41混合物。泳道1：Kb标记物；泳道2和3：分别为未经照射和经照射的RNA转录物；泳道4：与3.5μl gp160/120/41一起温育的转录混合物，再经如上照射。
已与gp120/41形成复合物的U1迁移较慢，因此出现在靠近凝胶顶部。图9A中泳道2表示重组载体的三种RNA转录物。只有最大的那个(1.8Kb)含有U1。此制品与gp120/41的前体gp160的滴定会引起此转录物迁移率大的改变(泳道3-6)，但不会影响到0.90和0.75Kb的转录物。图9B进一步表明了该相互作用的特异性，其中紫外光被用来共价交叉连接混合物。泳道2和3(分别为未使用紫外光和使用了紫外光)的比较表明，只用紫外光不会交叉连接从而影响转录物的迁移率。泳道4表示加入gp160和用紫外光照射的效果，如同A组的泳道5和6，较大的转录物(仅有此转录物)可与gp160形成共价复合物。用和不用紫外光，gp160在体外均可与U1 RNA序列形成复合物的这一证明成为活体内使用此方法的基础。实施例5：受HIV-1感染，带有高效价抗-RNP抗体的病人对AIDS的抗性
通过下述病例(下文的“Mr.M”)对利用抗-RNP抗体治疗免疫感染簇病毒提供进一步的支持。此病人被诊断为硬皮病，血液中带有高效价的抗-RNP抗体，并于1986年前后，暴露出血清转变为HIV(+)状态。
1982年，从Mr.M得到标出日期为1981年9月10日的血库样品，以评价抗-RNP抗体(数据示于下文)。以后他很少被跟踪调查，并显示出感染了HIV-1。描述了他的临床病例(紧接下文)后，接着讨论他的HIV病与他感染年代的关系。
(1)临床病例
Mr.M是41岁的生活方式为同性恋的白种男性。Mr.M 12岁时被诊断为JRA(青少年风湿性关节炎)和硬皮病同时发作。在Mayo诊所，经高剂量的ASA(阿斯匹林)治疗。16岁时JRA明显好转，但尤其是手上的硬皮病变化一直持续为他的最近临床病程的一部分。
1981年9月收集血清样品，1982年8月分析此样品，发现含有高效价的抗-RNP抗体。Mr.M大约于1986年开始与HIV接触。1986年7月他的病历表中注明了扩散的腺病病情，并建议进行HIV试验。病人报告说他于1987年6月接受HIV试验并发现为阳性。一年后重复试验，被确证为HIV(+)。以往病史：儿童时的流行性腮腺炎、麻疹、水痘。家族病史：5个同胞(4兄弟)都健康。母亲死于多发性骨髓瘤(1990)。
父亲、祖父母仍健在。社会史：生活方式为同性恋，在明尼苏达长大并上大学。1978年迁
至加利福利亚。滥用药物，但否认静脉内用药。
(2)临床病程
(a)连接组织病--硬皮病的诊断表现为手脚雷诺病，硬皮畸形、小口、限制性肺病(由肺功能试验诊断)和食管/GI症状(食管侧压法，1983)。1981年前还有斯耶格伦综合征和淋巴结病。
(i)1981年样品的实验室分析，ANA(+)，病程不连续(免疫荧
光法测出抗核抗体为阳性，模式为抗-RNP抗体一致)。抗
-RNP(+)，1981，由对U1 snRNP底物以1∶10的稀释度双向
扩散测出。由放射免疫测定测出抗-Scl-70(-)，1981。
(ii)1992血液样品的实验室分析，由免疫荧光法测出ANA(+)；
抗70K反应性Western印迹(+)。
(b)HIV病--扩散的淋巴结病与1986年指出的ARC(AIDS-相关综合症)一致。HIV(+)，1987；于1988年确诊。在过去6年内没有AIDS相关症状。在一年半的时间内，为了预防，他接受了100mgZDV、TID和100mg无环鸟苷、TID。相关的实验记录如下：1987，1988 1988，10月HIV-1(+) WBC 7.0
CD4+T细胞545(细胞/mm3)
CD4/CD8 0.291987WBC 6.1 1989CD4+T细胞504(细胞/mm3) WBC 8.4(25％，正常范围低值) CD4+T细胞543(细胞/mm3)CD4/CD8 0.8(正常范围低值) CD4/CD8 0.3总淋巴细胞计数，2015(正常)；总T，62％(正常) 1991HSV I IgG-阴性 WBC 7.3HSV II IgG-阴性 CD4+T细胞565(细胞/mm3)CMV IgG-阴性 CD4/CD8 0.27
P24核心抗原(-)1988，4月WBC 6.8CD4+T细胞396(细胞/mm3)CD4/CD8 0.38(低)
图10表明相对于对照HIV(+)和HIV(-)血清，Mr.M的1981和1992血清样品的Western印迹。图10所示的Western印迹是使用OrganonTeknika试剂盒进行的。按供应商的建议，所有检测样品按1∶50稀释。泳道1-12，HIV(+)血清，用来作参考。泳道13-15，高和低HIV的血清以及阴性对照，来自Organon Teknika，用来作参考。泳道16和17，分别为Mr.M的1981和1992样品。泳道18-20，阴性对照(实验室工作人员)。
图10表明HIV Western印迹中Mr.M 1981和1992样品的反应性(泳道16和17)。尽管1981样品抗-RNP反应性高(上文)，Mr.M被证实为HIV阴性，进一步说明通过ELISA，抗-RNP血清给出了错误的阳性结果，但Western印迹不是这样。从Mr.M的1992样品看，很明显他肯定已感染了HIV-1。
(3)分析
根据Mr.M缺乏机会性感染、卡波济氏肉瘤或淋巴结病可限定他为非-AIDS。至少7年内他为血清阳性。在他为HIV(+)状态的前3.5年，没有进行预防性治疗使对正在发展的AIDS的预后不容乐观。然而，除了缺乏AIDS的诊断标准外，他报告说感觉良好，除了与他硬皮病相关的僵硬和疼痛外。他的实验室试验与下述风险评估一致：
(a)机会性感染的风险：小，根据CD4+T细胞数＞500。
(b)对上升为AIDS风险的分析根据的是关于同性恋、血清阴性组所限定的相对危险的指数。与这组相等的相对危险值为1。在此项研究中最值得信赖的预测因子是CD4(+)T细胞计数。根据此项标准的Mr.M的相对危险如下：
CD4(+)T细胞数目 1.0
总淋巴细胞％ 2.8
CD8(+)T细胞数目 1.1
CD4/CD8 3.6
P24 1.0
应指出血清阴性的SRD病人也有异常的T细胞计数和CD4/CD8比率。因此，在Mr.M的病例中，与淋巴细胞％和CD4/CD8比率相关的相对高的风险不是对AIDS风险的预测。
根据此分析，又根据机会性病原体的阴性筛选试验和阴性P24抗原，Mr.M的病例在血清阳性5年之后应是可被防护的乐观主义者。在过去7年内他实验参数的稳定性令人鼓舞，尤其是因为他在最初的3.5年内未经治疗。尽管我们已表明和描述了本发明的最主要的新特征，还应看到，所阐明的形式和细节上的各种省略、替换和变化都可以由本技术领域熟练人员在不脱离本发明精神的情况下做到。本发明只由下述权利要求书所指出的范围所限定。
表I：可产生用以治疗的自身抗体的SRDs和相关的自身免疫病*
主要的SRD 相关抗体的特性 相关抗原的组成混合连接组织病 抗-U1 snRNP(抗-RNP) U1 RNA和相关的多肽70K硬皮病 抗-着丝粒 CENP-B
Scl-70/拓扑异构酶 单链多肽全身性红斑狼疮 抗-U1 snRNP 同上甲状腺病：淋巴瘤性甲状腺 抗-甲状腺球蛋白 甲状腺球蛋白-h肿；突眼性甲状 抗-TPO(微粒体的) 甲状腺过氧化物酶(TPO)腺肿*此表中所包括的疾病中个体并未表现为SRDs，但实际上可产生具有此表中所描述的任何特性的抗体。
表II：病毒蛋白质和70-kDa蛋白质N和C末端之间的序列同源性
在70-kDa蛋白序列 质中的位置 氨基酸数目 病毒(蛋白质) 氨基酸数目 Seq.ID No.N末端 SGGGGS 5-10 6 HSV-1(IE) 6 76 SGGGG 5-9 5 HSV-1(pol) 5 77GERLD 64-68 5 HSV-1(TK) 5 78PAARP 94-98 5 HSV-1(DNA结合) 5 79AASSA 101-105 5 HSV-1(IE) 5 80VEAEAG 143-148 6 HSV-1(IE) 6 81AEAGVS 145-149 5 SRV-1(p27) 5 82APRDP 190-194 5 HSV-1(DNA结合) 5 83RRQQE 253-257 5 HSV-1(TK) 5 84GERLD 64-68 5 HSV-2(TK) 5 85GRAAS 99-103 5 HSV-2(TK) 5 86AEAGV 145-149 5 SRV-1(p27) 5 87VAEGL 151-155 5 EBV(被膜) 5 88 PQPPRA 156-161 6 Rubella 6 89HNQPY 210-214 5 SV40(large T) 5 90PSPLP 401-405 5 CMV(早期) 5 91C末端RDRDRDR 407-413 7 HIV-1(gp41) 5 1GGGDM 488-492 5 HIV-1(gp120) 5 92RDRDR 524-528 5 HIV-1(gp41) 5 60RDRDRDRDRDR 542-552 11 HIV-1(gp41) 5 93ERGRD 562-566 5 HIV-1(gp41) 5 94GLEGL 578-582 5 HIV-1(3′orf) 5 95
表II：(续)
在70-kDa蛋白 序列 质中的位置 氨基酸数目 病毒(蛋白质) 氨基酸数目 Seq.ID No.RSSRS 467-471 5 SRV-1(被膜) 5 96SRERAR 471-476 6 EBV(na) 6 97DSRDM 585-589 5 EBV(93K) 5 98DSRDM 585-589 5 EBV(140K reduc.) 5 98GYLAP 598-602 5 HSV-1(exo) 5 99RERRE 415-419 5 p30 5 61序列是从NBRF，GENBank或EMBL banks中取得的，并进行了同源性比较。将N和C末端分别限定为aa 1-106和407-631。表I中列出了20种病毒。gp.糖蛋白质；pol.聚合酶；TK.胸苷激酶；SV40，猿猴病毒40；orf：开放阅读框；reduc.还原酶；exo，核酸外切酶。氨基酸数目分别与核抗原和病毒相对应。所有的对应被已出版的序列证实。
表III：病毒蛋白质和CENP-B N和C末端之间的序列同源性
在CENP-B蛋白质序列 的位置 氨基酸数目 病毒(蛋白质) 氨基酸数目 Seq.ID No.N末端 DQAAG 201-205 5 HSV-1(DNA结合) 5 100QAGLP 249-253 5 HSV-1(gp-D) 5 101LPVKG 88-92 5 SRV-1(gag p27) 5 102ETSLW 191-195 5 SRV-1(protease) 5 103ASQDV 182-186 5 HIV-1(gag) 5 104RTPAA 144-148 5 FeLV(12p) 5 105LLLAG 288-292 5 FeLV(30p) 5 106EGSGGS 158-163 6 EB-V(na) 6 107LAGRL 290-294 5 EB-V(93k) 5 108C末端EEEGE 412-416 5 HSV-1(pol) 5 109EEEGE 421-425 5 HSV-1(pol) 5 109QGVVE 473-477 5 HSV-1(IE) 5 110DEDDDD 521-526 6 HSV-1(IE) 6 111EDGDE 528-532 5 HSV-2(pol) 5 112EEEEE 401-414 14 MC29(v-myc) 5 113EEEEEE 418-423 6 MC29(v-myc) 5 6EEEEEE 425-430 6 MC29(v-myc) 5 6EEEEE 453-457 5 MC29(v-myc) 5 113EEDEE 456-460 5 MC29(v-myc) 5 114SDSEEE 507-513 6 MC29(v-myc) 6 115DSDEEE 450-455 6 CMV(gp-B) 6 116
表III：(续)
在CENP-B中蛋白质序列 的位置 氨基酸数目 病毒(蛋白质) 氨基酸数目 Seq.ID No.DSDEE 450-454 5 CMV(LM-P) 5 117DEDDDD 521-526 6 CMV(30K) 6 118EEEGGE 428-433 6 HIV-1(gp41) 6 64EEEEV 439-443 5 HIV-1(3′orf) 5 119FAMVK 546-550 5 SRV-1(pol) 5 120DDDDE 524-528 5 SV40(large T) 5 121如表I所述从蛋白质和基因banks中取得病毒序列并与CENP-B相对应。N和C末端分别被限定为aa 1-400和401-594。缩写与表2中相同。
表IV：用选择出的含有自身免疫抗体的血清中和HIV-1的III B和MN株
IIIB株 MN株
血清 Vn/VoVn/Vo
1、受HIV-1感染 1∶8 0.004 1.受HIV感染的0.002
1∶16 0.004 0.002
1∶32 0.004 0.002
1∶64 0.004 0.002
2、抗-着丝粒 1∶8 0.40 2.抗着丝粒1+
1∶16 0.54 1+
1∶32 0.68 1+
1∶64 0.77 1+
3、抗-RNP 1∶8 0.004 3.抗-RNP0.002
1∶16 0.004 0.002
1∶32 0.004 0.002
1∶64 0.004 0.002
4、含有其它自身免 1∶8 0.03 4.其它含自身抗体的1∶80.04
1∶16 0.08 1∶160.06
疫抗体的血清* 血清
1∶32 0.14 1∶320.07
1∶64 0.43 1∶640.22*此表中所包括的疾病中个体并未被证实为SRDs，但实际上可产生具有此表中所描述的任何特性的抗体。
序列表
(1)一般资料
(i)申请人：Douvas，Angeline
Takehana，Yoshi
Ehresmann，Glenn
(ii)发明名称：免疫感染簇病毒感染的治疗策略
(iii)序列数目：121
(iv)联系地址：
(A)ADDRESSEE：Robbins，Berliner & Carson
(B)STREET：201 North Figueroa Street，Suite 500
(C)CITY：Los Angeles
(D)STATE：California
(E)COUNTRY：U.S.A.
(F)ZIP：90012
(v)计算机可读形式
(A)介质类型：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容机
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：PatentIn Release #1.0，Version #1.25
(vi)本申请资料：
(A)申请号：US 08/029850
(B)申请日：1993年3月11日
(C)分类号：
(viii)代理/代理人资料：
(A)姓名：Spitals，John P.
(B)登记号：29215
(C)档案号：1920-331
(ix)电子通讯资料：
(A)电话：(213)977-1001
(B)传真：(213)977-1003(2)SEQ ID NO：1的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：
Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg
1 5(2)SEQ ID NO：2的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQID NO：2：
Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu Arg Glu
1 5 10(2)SEQ ID NO：3的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：
Arg Arg Glu Glu Arg Arg Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：4的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：
Arg Arg Glu Arg Arg Glu
1 5(2)SEQ ID NO：5的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：
Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys
1 5(2)SEQ ID NO：6的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：
Glu Glu Glu Glu Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：7的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：
Glu Asp Asp Glu Glu Asp Glu Asp Glu
1 5(2)SEQ ID NO：8的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：
Asp Asp Asp Asp Asp Asp
1 5(2)SEQ ID NO：9的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：9：
Arg Arg Arg Arg Arg Arg
1 5(2)SEQ ID NO：10的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：
Arg Lys Arg Lys Arg Lys Lys
1 5(2)SEQ ID NO：11的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5(2)SEQ ID NO：12的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：12：
Glu Arg Asp Arg Asp Arg Asp
1 5(2)SEQ ID NO：13的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：
Arg Glu Arg Arg Arg
1 5(2)SEQ ID NO：14的资料
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：14
Arg Arg Glu Arg Glu
1 5(2)SEQ ID NO：15的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：15：
Glu Arg Glu Glu Glu Arg
1 5(2)SEQ ID NO：16的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：16：
Glu Asp Asp Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：17的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：17：
Asp Asp Asp Glu Glu Asp
1 5(2)SEQ ID NO：18的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：18：
Asp Glu Glu Glu Asp Asp Glu
1 5(2)SEQ ID NO：19的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：19：
Glu Asp Glu Asp Asp Asp
1 5(2)SEQ ID NO：20的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：20：
Ser Ser Ser Gly Arg
1 5(2)SEQ ID NO：21的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：13个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：21：
Arg Leu Gly Gly Gly Leu Arg Arg Thr Arg Asp Gly Gly
1 5 10(2)SEQ ID NO：22的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：22：
Glu Leu Leu Gly Arg Arg Gly Trp Glu Ala
1 5 10(2)SEQ ID NO：23的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：24个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：23：
Gly Glu Arg Leu Asp Arg Arg Lys Glu Arg Arg Arg Gln Glu
1 5 10
Ala Leu Ile Glu Asp Gln Gln Gln Arg Gln
15 20(2)SEQ ID NO：24的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：17个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：24：
Pro Gly Arg Ala Ala Ser Ser Ala Gly Ile Gly Gly Arg Gln
1 5 10
Gly Leu Leu
15(2)SEQ ID NO：25的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：25：
Ser Gly Leu Val Arg Ser Ser Ser Gly Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：26的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：26：
Pro Arg Ala Ser Gly Gln Thr Pro Glu Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：27的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：27：
Thr Arg Glu Glu Arg Met Glu Arg Lys Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：28的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：21个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：28：
Ser Lys Leu Arg Arg Glu Phe Glu Val Tyr Gly Pro Ile Lys
1 5 10
Arg Ile His Met Val Tyr Ser
15 20(2)SEQ ID NO：29的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：29：
Gly Tyr Ala Phe Ile Glu Tyr Glu His
1 5(2)SEQ ID NO：30的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：22个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：30：
Pro Arg Arg Leu Gly Gly Gly Leu Gly Gly Thr Arg Arg Gly
1 5 10
Gly Ala Asp Val Asn Ile Arg His
15 20(2)SEQ ID NO：31的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：31：
Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg
1 5(2)SEQ ID NO：32的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：32：
Glu Leu Arg Gly Gly Gly Gly Asp Met Ala
1 5 10(2)SEQ ID NO：33的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：18个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：33：
Gly Pro Asp Gly Pro Asp Gly Pro Glu Glu Lys Gly Arg Asp
1 5 10
Arg Asp Arg Glu
15(2)SEQ ID NO：34的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：34：
Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：35的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：35：
Glu Gly Gly Gly Gly Gln Asp Asn
1 5(2)SEQ ID NO：36的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：36：
Gly Ile Glu Glu Glu Gly Glu Arg Asp Arg Asp Arg Ser Ile
1 5 10
Arg
15(2)SEQ ID NO：37的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：37：
Leu Ile Glu Glu Ser Gln Asn Gln Gln
1 5(2)SEQ ID NO：38的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：38：
Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly
1 5(2)SEQ ID NO：39的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：39：
Gln Leu Leu Gly
1(2)SEQ ID NO：40的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：40：
Ser Gly Gln Ile Arg Cys Ser Ser
1 5(2)SEQ ID NO：41的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：41：
Pro Arg Arg Ile Arg Gln Gly Leu Glu Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：42的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：42：
Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：43的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：7个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：43：
Ser Lys Leu Arg Glu Gln Phe
1 5(2)SEQ ID NO：44的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：44：
Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys
1 5(2)SEQ ID NO：45的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：45：
Pro Arg Arg Ile Arg Gln Gly Leu
1 5(2)SEQ ID NO：46的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：46：
Gly Ala Cys Arg Ala Ile Arg His
1 5(2)SEQ ID NO：47的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：47：
Glu Arg Asp Arg Asp Arg
1 5(2)SEQ ID NO：48的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：9个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：48：
Glu Phe Leu Arg Gly Gly Gly Asp Met
1 5(2)SEQ ID NO：49的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：19个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：49：
Gly Pro Asp Arg Pro Glu Gly Ile Glu Glu Glu Gly Gly Glu
1 5 10
Arg Asp Arg Asp Arg
15(2)SEQ ID NO：50的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：50：
Glu Arg Asp Arg Asp
1 5(2)SEQ ID NO：51的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：51：
Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly
1 5(2)SEQ ID NO：52的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：52：
Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys
1 5 10(2)SEQ ID NO：53的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：53：
Lys Lys Arg Gly Phe Gln Phe Val Thr Phe Asp Asp
1 5 10(2)SEQ ID NO：54的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：54：
Lys Lys Arg Gly Phe Ala Phe Val Thr Phe Asp Asp
1 5 10(2)SEQ ID NO：55的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：55：
Lys Pro Arg Gly Tyr ALa Phe Ile Glu Tyr Glu His
1 5 10(2)SEQ ID NO：56的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：56：
Lys Ala Arg Gly Gln Ala Phe Val Ile Phe Lys Glu
1 5 10(2)SEQ ID NO：57的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：57：
Lys Met Arg Gly Gln Ala Phe Val Ile Phe Lys Glu
1 5 10(2)SEQ ID NO：58的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：12个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：58：
Arg Pro Arg Gly Val Ala Phe Val Arg Tyr Asn Lys
1 5 10(2)SEQ ID NO：59的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：59：
Arg Asp Arg Asp Arg
1 5(2)SEQ ID NO：60的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：60：
Arg Glu Arg Arg Glu
1 5(2)SEQ ID NO：61的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：4个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：61：
Glu Arg Lys Arg
1(2)SEQ ID NO：62的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：62：
Glu Thr Pro Glu Glu Arg Glu Glu Arg Arg Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：63的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：63：
Glu Glu Glu Gly Gly Glu
1 5(2)SEQ ID NO：64的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：64：
Glu Glu Glu Gly Glu
1 5(2)SEQ ID NO：65的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：36个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：65：
Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Arg Ile Arg Ile
1 5 10
Gln Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile
15 20 25
Gly Asn Met Arg Gln Ala His Cys
30 35(2)SEQ ID NO：66的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：66：
Thr Arg Glu Glu Arg Met Glu Arg Lys Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：67的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：67：
Arg Gly Phe Ala Phe Val Thr Phe
1 5(2)SEQ ID NO：68的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：68：
Arg Gly Gln Ala Phe Val Ile Phe
1 5(2)SEQ ID NO：69的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：8个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：69：
Arg Gly Tyr Ala Phe Ile Glu Tyr
1 5(2)SEQ ID NO：70的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：70：
Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Ala
1 5 10
Phe Val(2)SEQ ID NO：71的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：10个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：71：
Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly
1 5 10(2)SEQ ID NO：72的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：15个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：72：
Ile Arg Ile Gln Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile
1 5 10
Gly
15(2)SEQ ID NO：73的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：73：
Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly
1 5 10(2)SEQ ID NO：74的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：74：
Arg Gly Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly
1 5 10(2)SEQ ID NO：75的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：164个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链型：单链
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：RNA(基因组)
(xi)序列描述：SEQ ID NO：75：
AUACUUACCU GGCAGGGGAG AUACCAUGAU CAUGAAGGUG GUUCUCCCAG GGCGAGGCUC 60
AGCCAUUGCA CUCCGGUUGU GCUGACCCCU GCGAUUUCCC CAAAUGCGGG AAACUCGACU 120
GCAUAAUUUC UGGUAGUGGG GGACUGCGUU CGCGCUUUCC CCUG 164(2)SEQ ID NO：76的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：76：
Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5(2)SEQ ID NO：77的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：77：
Ser Gly Gly Gly Gly
1 5(2)SEQ ID NO：78的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：78：
Gly Glu Arg Leu Asp
1 5(2)SEQ ID NO：79的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：79：
Pro Ala Ala Arg Pro
1 5(2)SEQ ID NO：80的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：80：
Ala Ala Ser Ser ALa
1 5(2)SEQ ID NO：81的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：81：
Val Glu Ala Glu Ala Gly
1 5(2)SEQ ID NO：82的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：82：
Ala Glu Ala Gly Val Ser
1 5(2)SEQ ID NO：83的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：83：
Ala Pro Arg Asp Pro
1 5(2)SEQ ID NO：84的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：84：
Arg Arg Gln Gln Glu
1 5(2)SEQ ID NO：85的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：85：
Gly Glu Arg Leu Asp
1 5(2)SEQ ID NO：86的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：86：
Gly Arg Ala Ala Ser
1 5(2)SEQ ID NO：87的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：87：
Ala Glu Ala Gly Val
1 5(2)SEQ ID NO：88的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：88：
Val Ala Glu Gly Leu
1 5(2)SEQ ID NO：89的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：89：
Pro Gln Pro Pro Arg Ala
1 5(2)SEQ ID NO：90的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：90：
His Asn Gln Pro Tyr
1 5(2)SEQ ID NO：91的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：91：
Pro Ser Pro Leu Pro
1 5(2)SEQ ID NO：92的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：92：
Gly Gly Gly Asp Met
1 5(2)SEQ ID NO：93的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：93：
Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg Asp Arg
1 5 10(2)SEQ ID NO：94的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：94：
Glu Arg Gly Arg Asp
1 5(2)SEQ ID NO：95的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：95：
Gly Leu Glu Gly Leu
1 5(2)SEQ ID NO：96的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：96：
Arg Ser Ser Arg Ser
1 5(2)SEQ ID NO：97的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：97：
Ser Arg Glu Arg Ala Arg
1 5(2)SEQ ID NO：98的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：98：
Asp Ser Arg Asp Met
1 5(2)SEQ ID NO：99的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：99：
Gly Tyr Leu Ala Pro
1 5(2)SEQ ID NO：100的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：100：
Asp Gln Ala Ala Gly
1 5(2)SEQ ID NO：101的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：101：
Gln Ala Gly Leu Pro
1 5(2)SEQ ID NO：102的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：102：
Leu Pro Val Lys Gly
1 5(2)SEQ ID NO：103的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：103：
Glu Thr Ser Leu Trp
1 5(2)SEQ ID NO：104的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：104：
Ala Ser Gln Asp Val
1 5(2)SEQ ID NO：105的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：105：
Arg Thr Pro ALa Ala
1 5(2)SEQ ID NO：106的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：106：
Leu Leu Leu ALa Gly
1 5(2)SEQ ID NO：107的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：107：
Glu Gly Ser Gly Gly Ser
1 5(2)SEQ ID NO：108的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：108：
Leu Ala Gly Arg Leu
1 5(2)SEQ ID NO：109的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：109：
Glu Glu Glu Gly Glu
1 5(2)SEQ ID NO：110的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：110：
Gln Gly Val Val Glu
1 5(2)SEQ ID NO：111的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：111：
Asp Glu Asp Asp Asp Asp
1 5(2)SEQ ID NO：112的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：112：
Glu Asp Gly Asp Glu
1 5(2)SEQ ID NO：113的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：113：
Glu Glu Glu Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：114的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：114：
Glu Glu Asp Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：115的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：115：
Ser Asp Ser Glu Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：116的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：116：
Asp Ser Asp Glu Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：117的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：117：
Asp Ser Asp Glu Glu
1 5(2)SEQ ID NO：118的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：6个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：118：
Asp Glu Asp Asp Asp Asp
1 5(2)SEQ ID NO：119的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：119：
Glu Glu Glu Glu Val
1 5(2)SEQ ID NO：120的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：120：
Phe Ala Met Val Lys
1 5(2)SEQ ID NO：121的资料：
(i)序列特征：
(A)长度：5个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(D)拓扑结构：线形
(ii)分子类型：肽
(xi)序列描述：SEQ ID NO：121：
Asp Asp Asp Asp Glu
1 5