一种齐尔白鲑精子激活液及制备方法技术领域
本发明属于精子激活液技术领域,具体涉及一种齐尔白鲑精子激活液及制备方
法。
背景技术
齐尔白鲑(Coregonus nasus)属鲑科,白鲑属,自然分布于俄罗斯的伯绍拉河至阿
纳德河等河流,以及加拿大和美国的北美洲水域。是国际市场上名贵的高档水产品。齐尔白
鲑具有生长快、个体大、肉质细腻、味道鲜美、营养价值高等优点,深受国内外消费者喜爱,
养殖推广效益十分可观。
在齐尔白鲑受精过程中,精液从雄鱼性腺排出进入水体中时,即激活获得运动能
力,运动能力分为快速运动、中速运动、慢速运动、原地颤动四种,当70%精子从快速运动转
入中速运动,即认为精子快速运动时间结束;当95%以上的精子停止颤抖,视为精子快速运
动结束,鱼类精子的快速运动过程是鱼类的最佳受精时间。得出正常水体中鱼类精子激活
后运动时间为40s左右,然而在对齐尔白鲑精液检测中发现其精子运动时间仅为24s左右。
目前齐尔白鲑养殖推广的最大技术瓶颈是齐尔白鲑雄鱼精液量少、精子活力偏
低、受精率低的问题,导致齐尔白鲑鱼苗鱼种的生产效率低下,无法满足市场对齐尔白鲑鱼
苗鱼种的需求。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题,本发明提供了一种齐尔白鲑精子激活液及制
备方法。所述精子激活液中含有的分子与离子物质对齐尔白鲑精子活力有着一定作用,除
了能减少渗透压差带来能量损耗外,还能起到提高精子活力的作用,葡萄糖可以参与精子
的三羧酸循环,为精子提供能量同时也起到调节渗透压的作用;Na+对齐尔白鲑精子活力有
着促进作用。
申请人发现,齐尔白鲑精子活力主要受渗透压、糖类、离子成分的影响。齐尔白鲑
精子一般为体外受精,在水环境中运动的大部分能量消耗在渗透压的调节当中。当精子排
入水中时,受到于外界不等渗的水环境中,从而要消耗大量的能量抵抗水分子的渗入与渗
出,使得加速了精子的死亡。齐尔白鲑精液中含有大量的Na+、K+、Ca2+、Mg2+等离子,这些离子
同时也是维系精浆渗透压的主要成分,因此离子对鱼类精子的影响体现在渗透压与离子本
质两方面。齐尔白鲑精液中含有着大量的葡萄糖、半乳糖、果糖、氨基酸和卵磷脂等营养物
质。这些成分起到保护精子与提供能量的作用。
齐尔白鲑精子运动主要由其线粒体呼吸作用产生能量提供,但产生的能量只有少
部分用在鞭毛运动中,大部分能量消耗于精子对外界渗透压的调节当中,不难发现在精子
本身原质极少的情况下,如何减少其在渗透压调节消耗的能量,为精子鞭毛运动提供充足
的能量,延长齐尔白鲑精子的运动时间,将大大提高其精子与卵的结合机会,从而提高受精
率。
解决的方法是使用具有一定渗透压的溶液代替原水体对齐尔白鲑精子进行激活,
以减少精子内外渗透压差异所带来的能量损耗,延长精子的运动时间,提升其受精率。
本发明所采用的技术方案为:一种齐尔白鲑精子激活液,包括的组分及组分浓度
为:葡萄糖87.9-102.05mmol/L,氯化钠11.7-68.25mmol/L,所述精子激活液的温度为2-5
℃。
优选地,所述精子激活液包括的组分及组分浓度为:葡萄糖90-95mmol/L,氯化钠
11.7-60mmol/L。
优选地,所述精子激活液包括的组分及组分浓度为:葡萄糖90-95mmol/L,氯化钠
20-68.25mmol/L。
进一步地,所述精子激活液包括的组分及组分浓度为:葡萄糖102.05mmol/L,氯化
钠40mmol/L。
本发明还提供了一种所述精子激活液的制备方法,包括以下步骤:
A、按照所述组分浓度,称取葡萄糖和氯化钠;
B、将称取好的葡萄糖和氯化钠置于容器中,加水至组分浓度,即得到常温精子激
活液;
C、在使用前,将溶液降温至2-5℃,即得所述精子激活液。
步骤A中,使用电子天平称取分析纯葡萄糖和分析纯氯化钠。
步骤B中,使用一部分水将所述葡萄糖和氯化钠在烧杯中溶解,并将溶解液转移至
容量瓶中,再使用水洗涤烧杯二至三次,并将洗涤液转移至容量瓶中,定容后摇晃均匀,即
得到常温精子激活液;所述水为去离子水或蒸馏水。
本发明的有益效果为:
1、本发明提供了一种齐尔白鲑精子激活液,所述精子激活液中含有的分子与离子
物质对齐尔白鲑精子活力有着一定作用,除了能减少渗透压差带来能量损耗外,还能起到
提高精子活力的作用,葡萄糖可以参与精子的三羧酸循环,为精子提供能量同时也起到调
节渗透压的作用;Na+对齐尔白鲑精子活力有着促进作用。不使用激活液激活的精液,其精
子快速运动激活比例为80%,精子快速运动时间持续24s左右;使用所述精子激活液激活的
精液,其精子快速运动激活比例为95%以上,精子快速运动时间持续77s左右,最高达到
102s。
2、本发明还提供了一种所述精子激活液的制备方法,所述制备方法操作简单,易
于推广。
具体实施方式
下面结合实施例,更具体地说明本发明的内容。应当理解,本发明的实施并不局限
于下面的实施例,对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中,若非特指,所有的份、百分比均为重量单位,所有的设备和原料等均
可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规
方法。
实施例1
本实施例为齐尔白鲑精子激活液不同配比用量和制备方法的实施例。
一种齐尔白鲑精子激活液,包括的组分及组分浓度如表1所示:
表1:精子激活液不同配比用量表
上述精子激活液的制备方法,包括以下步骤:
A、按照所述组分浓度及最终精子激活液的体积,计算出葡萄糖和氯化钠的用量,
并使用电子天平称取分析纯葡萄糖和分析纯氯化钠;
B、使用一部分水将所述葡萄糖和氯化钠在烧杯中溶解,并将溶解液转移至容量瓶
中,再使用水洗涤烧杯二至三次,并将洗涤液转移至容量瓶中,定容后摇晃均匀,即得到常
温精子激活液;所述水为去离子水或蒸馏水;
C、在使用前,将溶液降温至2-5℃,即得所述精子激活液。
实施例2
本实施例是实施例1中精子激活液的精子激活实验。
一、亲鱼选择
本次试验所选用的亲鱼共10条,平均体重为3.5kg,年龄均为5+以上。亲鱼体质健
壮,无外伤,性腺发育成熟,轻压腹部精液可自动流出。
二、精液采集
使用亲鱼夹或两人各抓住亲鱼头尾,保定亲鱼后,一人先用毛巾轻轻抹去亲鱼生
殖孔周围的体表水分,然后沿鱼腹两侧轻微压迫,使精液流入量杯中。
三、精子活力观察及检测方法
观察时,先于载玻片上加一滴试剂(河流水或所述精子激活液),用洁净牙签尖端
挑取少许精液与其混合,即刻移至10×40倍显微镜下,依次完成同一条鱼精液在河流水与
所述精子激活液中的快速运动观测。观察以一个视野为准。当精液与试剂相混时,立即用秒
表开始计时。当有70%以上的精子从快速运动转为中速运动时,立即掐表,即得快速运动时
间。本实施例中,选用实施例1中序号为1、3和5的精子激活液,与河流水进行对比。
四、实验结果
本实施例,对每条亲鱼的精液分别使用河流水和实施例1中3种精子激活液处理,
结果如表2所示:
表2实验结果对比表
实验组别
试验次数/次
快速运动时间/s
河流水组
10
24±3
序号1组
10
61±4
序号3组
10
73±3
序号4组
10
98±4
使用河流水激活的精液,其精子快速运动激活比例为80%;使用所述精子激活液
激活的精液,其精子快速运动激活比例为95%以上。
实验结果表明,使用所述精子激活液激活后的齐尔白鲑精子可获得较高的精子快
速运动时间,能够有效提高齐尔白鲑精子的活力,这对提高受精率至关重要。
最后所应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参
照较佳实施例对本发明进行了详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施
方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修
改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。